快速篩查小活絡(luò)丸內(nèi)10種非法添加化學(xué)藥品的方法
【專利摘要】一種快速篩查小活絡(luò)丸內(nèi)10種非法添加化學(xué)藥品的方法。首先制備對(duì)照品和供試品溶液，然后分別吸取對(duì)照品溶液，供試品溶液，點(diǎn)于同一塊硅膠薄層板上，以展開劑上行展開，取出晾干，分別置紫外光燈下觀察薄層色譜，再噴上硫酸乙醇溶液，并置于烘箱中恒溫加熱至薄層板上的斑點(diǎn)顯色清晰，再分別置日光及紫外光燈下觀察薄層色譜，若與對(duì)照品相同比移值處有相同顏色的熒光淬滅斑點(diǎn)、熒光斑點(diǎn)或斑點(diǎn)同時(shí)出現(xiàn)，則可判定樣品結(jié)果為陽性。顯然，本發(fā)明操作簡便，快速，成本低，既解決了其中的假“陽性”干擾的問題，也避免了傳統(tǒng)采用紅外光譜、HPLC-MS等測(cè)定所產(chǎn)生的昂貴費(fèi)用和大量時(shí)間，使有效監(jiān)控中成藥小活絡(luò)丸內(nèi)是否非法添加化學(xué)藥品成為可能。
【專利說明】快速篩查小活絡(luò)丸內(nèi)10種非法添加化學(xué)藥品的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及中藥質(zhì)量檢測(cè)領(lǐng)域，具體涉及一種快速篩查小活絡(luò)丸內(nèi)10種非法添加化學(xué)藥品的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]小活絡(luò)丸是由膽南星、制川烏、制草烏、地龍、乳香(制)、沒藥(制)共6味中藥飲片組成的中藥制劑。主要功效是祛風(fēng)散寒，化痰除濕，活血止痛。用于風(fēng)寒濕邪閉阻、痰瘀阻絡(luò)所致的痹病，癥見肢體關(guān)節(jié)疼痛，或冷痛，或刺痛，或疼痛夜甚、關(guān)節(jié)屈伸不利、麻木拘攣。其制備方法是將膽南星、制川烏、制草烏、地龍、乳香(制)、沒藥(制)分別粉碎成細(xì)粉，過篩，混勻，每IOOg細(xì)粉加煉蜜120?130g制成大蜜丸。該中藥制劑成分復(fù)雜，臨床用于治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎及骨質(zhì)增生所致的腰痛、腿痛、頸痛、上肢痛等痹證，坐骨神經(jīng)痛，十二指腸壅積癥等。屬抗風(fēng)濕類中成藥。為了追求經(jīng)濟(jì)利益，一些不法分子在小活絡(luò)丸中非法添加具有解熱、抗炎、止痛作用的廉價(jià)化學(xué)藥品，以達(dá)到快速顯效的效果。而患者在不知情的情況下過多攝入這些化學(xué)藥品后，會(huì)對(duì)身體造成極大的危害。
[0003]抗風(fēng)濕類中成藥內(nèi)非法添加化學(xué)藥品主要有兩大類:解熱鎮(zhèn)痛類和糖皮質(zhì)激素類。目前，檢測(cè)抗風(fēng)濕類中成藥內(nèi)非法添加化學(xué)藥品的方法均為不限定中成藥具體種類的通用方法。該通用方法涉及所有抗風(fēng)濕類中成藥，范圍廣，但抗風(fēng)濕類中成藥種類繁多，而每一種中成藥的組方都各不相同，極易產(chǎn)生假“陽性”干擾，無法明確地判定結(jié)果，因此通用方法僅能做到粗篩。而且由于假“陽性”的干擾，所檢測(cè)的化學(xué)藥品僅限于解熱鎮(zhèn)痛類或糖皮質(zhì)激素類中有限的幾種。如張鶴等“關(guān)于抗風(fēng)濕類中藥制劑中非法添加化學(xué)藥品的檢測(cè)方法研究”(亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥.2010.6 (6):31-32)先采用薄層色譜法進(jìn)行粗篩，而后必須再進(jìn)一步對(duì)其中的陽性樣品采用紅外光譜或高效液相色譜法進(jìn)行驗(yàn)證。但由于紅外光譜儀、HPLC-MS、GC-MS儀器昂貴，且必須由專業(yè)的技術(shù)人員操控，維護(hù)費(fèi)用也極高，無法實(shí)現(xiàn)快速篩查達(dá)到監(jiān)控的目的。顯然，完全針對(duì)小活絡(luò)丸內(nèi)非法添加多種化學(xué)藥品構(gòu)建起能進(jìn)行快速篩查的方法是非常必要的。因此，為了使在小活絡(luò)丸內(nèi)非法添加化學(xué)藥品的違法行為得到有效扼制，保障人民群眾用藥安全有效，亟需建立小活絡(luò)丸內(nèi)非法添加化學(xué)藥品的快速篩查方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是提供一種快速篩查小活絡(luò)丸內(nèi)10種非法添加化學(xué)藥品的方法，以克服現(xiàn)有技術(shù)的不足。
[0005]本發(fā)明的另一目的是排除小活絡(luò)丸和非法添加化學(xué)藥品的假“陽性”干擾，實(shí)現(xiàn)多種非法添加化學(xué)藥品的快速篩查，達(dá)到監(jiān)控的普及可行。
[0006]小活絡(luò)丸是一個(gè)中藥制劑，雖然組方藥味不多，但化學(xué)成分十分復(fù)雜，加之非法添加化學(xué)藥品，測(cè)定時(shí)極易出現(xiàn)假“陽性”干擾。通常假“陽性”干擾必須采用紅外光譜儀、HPLC-MS,GC-MS進(jìn)行成分確證。研究發(fā)現(xiàn)，由于小活絡(luò)丸中所需篩查的10種化學(xué)藥品成分均有溶于甲醇的性質(zhì)，且甲醇對(duì)大蜜丸中的煉蜜溶解度低，因此利用該性質(zhì)，選用甲醇作為提取溶劑。考慮到小活絡(luò)丸是大蜜丸，如不進(jìn)行分散，該提取溶劑無法滲入到樣品中，不能充分提取待測(cè)的化學(xué)藥品。因此取小活絡(luò)丸一丸(3g)，剪碎后，加硅藻土研磨，即可將大蜜丸充分分散。再加入甲醇，將樣品全部浸泡，并采用超聲處理，以有效地將這10種成分提取出來。既可避免小活絡(luò)丸中煉蜜的溶出，便于點(diǎn)樣，又可大大減少小活絡(luò)丸中其他成分對(duì)測(cè)定的干擾。又因非法添加的化學(xué)藥品在薄層板上吸附能力上的不同，再分別以展開劑篩查出中成藥小活絡(luò)丸中是否非法添加了 10種分為2組的化學(xué)藥品。
[0007]本發(fā)明的快速篩查方法如下
[0008](I)對(duì)照品溶液的制備:分別取醋酸潑尼松、醋酸地塞米松、吲哚美辛、萘普生和雙氯芬酸鈉對(duì)照品各10mg，用甲醇IOml溶解，制成對(duì)照品溶液A ;另分別取潑尼松龍、氫化可的松、潑尼松、曲安奈德和醋酸氫化可的松對(duì)照品各10mg，用甲醇IOml溶解，制成對(duì)照品溶液B。
[0009](2)供試品溶液的制備:取小活絡(luò)丸3g，剪碎，加硅藻土 2g，研勻，加甲醇，超聲處理，濾過，取濾液作為供試品溶液。
[0010](3)進(jìn)行篩查測(cè)定:分別吸取對(duì)照品溶液Al μ 1，供試品溶液5 μ 1，點(diǎn)于同一塊硅膠GF254薄層板上，以展開劑I上行展開，取出，晾干，分別置紫外光燈(波長254nm)和紫外光燈(波長365nm)下觀察薄層色譜，然后再噴上10%硫酸乙醇溶液，并置于105°C烘箱中恒溫加熱至薄層板上的斑點(diǎn)顯色清晰，再置日光下觀察薄層色譜。上述三種觀察方式的色譜中，與對(duì)照品相同比移值處如有相同顏色的熒光淬滅斑點(diǎn)、熒光斑點(diǎn)或斑點(diǎn)同時(shí)出現(xiàn)，則可判定樣品結(jié)果為陽性。
[0011]另分別吸取對(duì)照品溶液BI μ I,供試品溶液5 μ I,點(diǎn)于同一塊娃膠GF254薄層板上，以展開劑II上行展開，取出，晾干，置紫外光燈(波長254nm)下觀察薄層色譜，然后再噴上10%硫酸乙醇溶液，并置于105°C烘箱中恒溫加熱至薄層板上的斑點(diǎn)顯色清晰，再置日光下觀察薄層色譜。上述二種觀察方式的色譜中，與對(duì)照品相同比移值處如有相同顏色的熒光淬滅斑點(diǎn)或斑點(diǎn)同時(shí)出現(xiàn)，則可判定樣品結(jié)果為陽性。
[0012]上述的展開劑I為正己烷-乙酸乙酯-冰醋酸=15: 5: I (體積比)。
[0013]上述的展開劑II為三氯甲烷-丙酮-甲醇-濃氨試液=18: 6: 2: 0.1 (體積比)。
[0014]上述超聲處理的條件為30分鐘，功率250W，頻率50kHz。
[0015]該方法從對(duì)照品溶液的制備到對(duì)樣品結(jié)果進(jìn)行判定，全過程僅需I小時(shí)，而且能在同一塊硅膠GF254薄層板上篩查多個(gè)廠家的產(chǎn)品。顯然，本發(fā)明方法操作簡便，快速，成本低，既解決了小活絡(luò)丸成藥因成分復(fù)雜所導(dǎo)致的假“陽性”干擾的問題，也避免了采用紅外光譜、HPLC-MS、GC-MS測(cè)定所產(chǎn)生的昂貴費(fèi)用和大量時(shí)間，因此是有效監(jiān)控中成藥小活絡(luò)丸內(nèi)是否非法添加化學(xué)藥品成為可能。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0016]圖1:本發(fā)明的小活絡(luò)丸和醋酸潑尼松、醋酸地塞米松、吲哚美辛、萘普生、雙氯芬酸鈉對(duì)照品在展開劑I及紫外光燈(波長254nm)條件下的TLC色譜圖；其中的，1:小活絡(luò)丸陰性樣品的供試品溶液；2:小活絡(luò)丸陽性樣品的供試品溶液；3:對(duì)照品溶液A (斑點(diǎn)a:醋酸潑尼松；斑點(diǎn)b:醋酸地塞米松；斑點(diǎn)c:D引哚美辛；斑點(diǎn)d:萘普生；斑點(diǎn)e:雙氯芬酸鈉)。
[0017]圖2:本發(fā)明的小活絡(luò)丸和醋酸潑尼松、醋酸地塞米松、吲哚美辛、萘普生、雙氯芬酸鈉對(duì)照品在展開劑I及紫外光燈(波長365nm)條件下的TLC色譜圖；其中的，1:小活絡(luò)丸陰性樣品的供試品溶液；2:小活絡(luò)丸陽性樣品的供試品溶液；3:對(duì)照品溶液A (斑點(diǎn)d:萘普生)。
[0018]圖3:本發(fā)明的小活絡(luò)丸和醋酸潑尼松、醋酸地塞米松、吲哚美辛、萘普生、雙氯芬酸鈉對(duì)照品在展開劑I及日光條件下的TLC色譜圖；其中的，1:小活絡(luò)丸陰性樣品的供試品溶液；2:小活絡(luò)丸陽性樣品的供試品溶液；3:對(duì)照品溶液A(斑點(diǎn)a:醋酸潑尼松；斑點(diǎn)b:醋酸地塞米松；斑點(diǎn)c 引哚美辛；斑點(diǎn)d:萘普生；斑點(diǎn)e:雙氯芬酸鈉)。
[0019]上述的圖1、圖2、圖3中的小活絡(luò)丸陰性樣品的供試品溶液為不含醋酸潑尼松、醋酸地塞米松、吲哚美辛、萘普生、雙氯芬酸鈉的小活絡(luò)丸樣品按照供試品溶液的制備方法制備的供試品溶液。小活絡(luò)丸陽性樣品的供試品溶液為含有醋酸潑尼松、醋酸地塞米松、吲哚美辛、萘普生、雙氯芬酸鈉的小活絡(luò)丸樣品按照供試品溶液的制備方法制備的供試品溶液。
[0020]圖4:本發(fā)明的小活絡(luò)丸和潑尼松龍、氫化可的松、潑尼松、曲安奈德、醋酸氫化可的松在展開劑II及紫外光燈(波長254nm)條件下的TLC色譜圖；其中的，1:小活絡(luò)丸陰性樣品的供試品溶液；2:小活絡(luò)丸陽性樣品的供試品溶液；3:對(duì)照品溶液B (斑點(diǎn)a:潑尼松龍；斑點(diǎn)b:氫化可的松；斑點(diǎn)c:潑尼松；斑點(diǎn)d:曲安奈德；斑點(diǎn)e:醋酸氫化可的松)。
[0021]圖5:本發(fā)明的小活絡(luò)丸和潑尼松龍、氫化可的松、潑尼松、曲安奈德、醋酸氫化可的松在展開劑II及日光條件下的TLC色譜圖；其中的，1:小活絡(luò)丸陰性樣品的供試品溶液；
2:小活絡(luò)丸陽性樣品的供試品溶液；3:對(duì)照品溶液B (斑點(diǎn)a:潑尼松龍；斑點(diǎn)b:氫化可的松；斑點(diǎn)c:潑尼松；斑點(diǎn)d:曲安奈德；斑點(diǎn)e:醋酸氫化可的松)。
[0022]上述的圖4、圖5中的小活絡(luò)丸陰性樣品的供試品溶液為不含潑尼松龍、氫化可的松、潑尼松、曲安奈德、醋酸氫化可的松的小活絡(luò)丸樣品按照供試品溶液的制備方法制備的供試品溶液。小活絡(luò)丸陽性樣品的供試品溶液為含有潑尼松龍、氫化可的松、潑尼松、曲安奈德、醋酸氫化可的松的小活絡(luò)丸樣品按照供試品溶液的制備方法制備的供試品溶液。
【具體實(shí)施方式】
[0023]下面給出詳細(xì)的實(shí)施例。
[0024]本發(fā)明采用:儀器與試藥:SartorisBP211D 電子天平；AUT0 SCIENCE AS10200BT型超聲波清洗器；P/G2007型恒溫烘箱；薄層板:硅膠GF254薄層板(德國MERCK批號(hào):HX929689規(guī)格:20X20cm);試劑均為分析純；醋酸潑尼松對(duì)照品(批號(hào):100012-200706)、醋酸地塞米松對(duì)照品(批號(hào):100122-201206)、吲哚美辛對(duì)照品(批號(hào):100258-200904)、萘普生對(duì)照品(批號(hào):100198-201205)、雙氯芬酸鈉對(duì)照品(批號(hào):100334_200302)、潑尼松龍對(duì)照品(批號(hào):100153-201004)、氫化可的松對(duì)照品(批號(hào):100152-200206)、潑尼松對(duì)照品(批號(hào):100199-201002)、曲安奈德對(duì)照品(批號(hào):100055-201103)、醋酸氫化可的松對(duì)照品(批號(hào):100013-200607),以上對(duì)照品均由中國食品藥品檢定研究院提供；小活絡(luò)丸(標(biāo)不批號(hào):130110、20130715、130401、120801、20121201、120012、2111105)。
[0025]色譜條件:展開劑1:正己烷-乙酸乙酯-冰醋酸=15: 5: 1(體積比)；展開劑I1:三氯甲烷-丙酮-甲醇-濃氨試液=18: 6: 2: 0.1 (體積比)；展開條件:溫度:230C ;相對(duì)濕度:59% ;展距:10cm。
[0026]對(duì)照品溶液的制備:分別取醋酸潑尼松、醋酸地塞米松、吲哚美辛、萘普生和雙氯芬酸鈉對(duì)照品各10mg，用甲醇IOml溶解，制成對(duì)照品溶液A ;另分別取潑尼松龍、氫化可的松、潑尼松、曲安奈德和醋酸氫化可的松對(duì)照品各10mg，用甲醇IOml溶解，制成對(duì)照品溶液B0
[0027]供試品溶液的制備:取小活絡(luò)丸成品3g，剪碎，加硅藻土 2g，研勻，加甲醇10ml，進(jìn)行超聲處理，濾過，取濾液作為供試品溶液。
[0028]上述的超聲處理?xiàng)l件為30分鐘，功率250W，頻率50kHz。
[0029]進(jìn)行篩查測(cè)定:分別吸取對(duì)照品溶液Al μ 1，供試品溶液5 μ 1，點(diǎn)于同一塊硅膠GF254薄層板上，以展開劑I上行展開，取出，晾干，分別置紫外光燈(波長254nm)和紫外光燈(波長365nm)下觀察薄層色譜，然后再噴上10%硫酸乙醇溶液，并置于105°C烘箱中恒溫加熱至薄層板上的斑點(diǎn)顯色清晰，再置日光下觀察薄層色譜。上述三種觀察方式的色譜中，與對(duì)照品相同比移值處如有相同顏色的熒光淬滅斑點(diǎn)、熒光斑點(diǎn)或斑點(diǎn)同時(shí)出現(xiàn)，則可判定樣品結(jié)果為陽性。檢出了 5種化學(xué)藥品是醋酸潑尼松、醋酸地塞米松、吲哚美辛、萘普生和雙氯芬酸鈉。對(duì)應(yīng)的色譜圖如圖1、圖2、圖3。
[0030]另分別吸取對(duì)照品溶液BI μ I,供試品溶液5 μ I,點(diǎn)于同一塊娃膠GF254薄層板上，以展開劑II上行展開，取出，晾干，置紫外光燈(波長254nm)下觀察薄層色譜，然后再噴上10%硫酸乙醇溶液，并置于105°C烘箱中恒溫加熱至薄層板上的斑點(diǎn)顯色清晰，再置日光下觀察薄層色譜。上述二種觀察方式的色譜中，與對(duì)照品相同比移值處如有相同顏色的熒光淬滅斑點(diǎn)或斑點(diǎn)同時(shí)出現(xiàn)，則可判定樣品結(jié)果為陽性。又檢出了 5種化學(xué)藥品是潑尼松龍、氫化可的松、潑尼松、曲安奈德和醋酸氫化可的松。對(duì)應(yīng)的色譜圖如圖4、圖5。
[0031]結(jié)果表明，2組混合對(duì)照品分離效果良好，小活絡(luò)丸自身的所有成分對(duì)測(cè)定無干擾，即供試品在對(duì)照品相同比移值處無干擾成分存在。
[0032]綜上，本發(fā)明所建立的薄層色譜法可快速檢測(cè)小活絡(luò)丸中是否非法添加了醋酸潑尼松、醋酸地塞米松、吲哚美辛、萘普生、雙氯芬酸鈉、潑尼松龍、氫化可的松、潑尼松、曲安奈德和醋酸氫化可的松這10種化學(xué)藥品，具有操作簡便，快速，低成本的特點(diǎn)，可以作為小活絡(luò)丸中成藥質(zhì)量監(jiān)控的普及方法。
【權(quán)利要求】
1.一種快速篩查小活絡(luò)丸內(nèi)10種非法添加化學(xué)藥品的方法，其特征是首先分別制備各對(duì)照品溶液(I)和供試品溶液(2 )，然后進(jìn)行篩查測(cè)定(3 ): (1)對(duì)照品溶液的制備:分別取醋酸潑尼松、醋酸地塞米松、吲哚美辛、萘普生和雙氯芬酸鈉對(duì)照品各10mg，用甲醇IOml溶解，制成對(duì)照品溶液A ;另分別取潑尼松龍、氫化可的松、潑尼松、曲安奈德和醋酸氫化可的松對(duì)照品各10mg，用甲醇IOml溶解，制成對(duì)照品溶液B ; (2)供試品溶液的制備:取小活絡(luò)丸一丸，剪碎，加硅藻土，研勻，加甲醇，超聲處理，濾過，取濾液作為供試品溶液； (3)進(jìn)行篩查測(cè)定:分別吸取對(duì)照品溶液A，供試品溶液，點(diǎn)樣于同一塊硅膠GF254薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯-冰醋酸作為展開劑上行展開，取出，晾干，分別置紫外光燈254nm和365nm下觀察薄層色譜，然后再噴上10%硫酸乙醇溶液，并置于105°C烘箱中恒溫加熱至薄層板上的斑點(diǎn)顯色清晰，再置日光下觀察薄層色譜；若上述三種觀察方式的色譜中，與對(duì)照品相同比移值處有相同顏色的熒光淬滅斑點(diǎn)、熒光斑點(diǎn)或斑點(diǎn)同時(shí)出現(xiàn)，則可判定樣品結(jié)果為陽性，檢出了 5種化學(xué)藥品是醋酸潑尼松、醋酸地塞米松、吲哚美辛、萘普生和雙氯芬酸鈉； 另，分別吸取對(duì)照品溶液B，供試品溶液，點(diǎn)樣于同一塊硅膠GF254薄層板上，以三氯甲烷-丙酮-甲醇-濃氨試液作為展開劑上行展開，取出，晾干，置紫外光燈254nm下觀察薄層色譜，再噴以10%硫酸乙醇溶液，并置于105°C烘箱中恒溫加熱至薄層板上的斑點(diǎn)顯色清晰，再置日光下觀察薄層色譜；若上述二種觀察方式的色譜中，與對(duì)照品相同比移值處有相同顏色的熒光淬滅斑點(diǎn)或斑點(diǎn)同時(shí)出現(xiàn)，則可判定樣品結(jié)果為陽性，又檢出了 5種化學(xué)藥品是潑尼松龍、氫化可的松、潑尼松、曲安奈德和醋酸氫化可的松。
2.如權(quán)利要求1所述的快速篩查方法，其特征是上述展開劑正己烷-乙酸乙酯-冰醋酸的體積比為15: 5:1。
3.如權(quán)利要求1所述的快速篩查方法，其特征是上述展開劑三氯甲烷-丙酮-甲醇-濃氨試液的體積比為18: 6: 2: 0.1。
4.如權(quán)利要求1所述的快速篩查方法，其特征是上述硅藻土重量為2g。
5.如權(quán)利要求1所述的快速篩查方法，其特征是上述權(quán)利要求1中的(2)的甲醇體積為 IOmlo
6.如權(quán)利要求1所述的快速篩查方法，其特征是上述各對(duì)照品溶液的點(diǎn)樣體積為I μ I。
7.如權(quán)利要求1所述的快速篩查方法，其特征是上述供試品溶液的點(diǎn)樣體積為5μ I。
8.如權(quán)利要求1所述的快速篩查方法，其特征是上述超聲處理的條件為30分鐘，功率250W，頻率 50kHz。
【文檔編號(hào)】G01N1/28GK103760293SQ201410042299
【公開日】2014年4月30日 申請(qǐng)日期:2014年1月28日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月28日
【發(fā)明者】焦琦, 吳愛英, 張春輝 申請(qǐng)人:焦琦