患有疑似慢性心力衰竭的患者中不良事件的預(yù)后的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于臨床診斷領(lǐng)域。特別地，本發(fā)明涉及通過測定降鈣素原(PCT)水平而對患有穩(wěn)定性慢性心力衰竭或疑似患有穩(wěn)定性慢性心力衰竭的患者中的不良事件的預(yù)后。
【專利說明】患有疑似慢性心力衰竭的患者中不良事件的預(yù)后 發(fā)明領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明術(shù)語臨床診斷領(lǐng)域。具體而言，本發(fā)明涉及通過測定降鈣素原（PCT)水平 而對患有穩(wěn)定性慢性心力衰竭或疑似患有穩(wěn)定性慢性心力衰竭的患者中的不良事件（如 死亡）的預(yù)后。
[0002] 發(fā)明背景
[0003] 降鈣素原（PCT)已成為診斷敗血癥的廣為接受的生物標記。PCT反映細菌感染的 嚴重程度，且特別是用于監(jiān)測感染發(fā)展為敗血癥、嚴重敗血癥或敗血癥性休克?？墒褂肞CT 來測量感染相關(guān)的全身炎癥反應(yīng)的活性，以控制抗菌治療的成功，并估計預(yù)后((Assicot 等 1993.Lancet341:515-8 :Clec'h C 等 2004. Crit Care Med 32:1166-9 :Lee 等 2004. Yonsei Med T 45:29-37 :Meisner 等 2005. Curr Op in Crit Care 11:473-480 ：ffunder 等2004. Inflamm Res 53:158-163))?；加袛⊙Y的患者中PCT水平的升高與死亡有關(guān) (Oberhoffer 等 1999. Clin Chem Lab Med37:363-368)。
[0004] 在細菌感染期間，血漿PCT濃度通常高于0.25ng/mL。最近，在幾種非感染性疾 病中，如冠狀動脈病或急性冠狀動脈綜合征中，已發(fā)現(xiàn)PCT濃度可以升至高于正常范圍但 卻低于該濃度，迄今為止已知這與需要抗菌治療的細菌感染有關(guān)，且這些PCT濃度與這 些患者中不良事件的預(yù)后有關(guān)(Sinnig等2011. Circ T 75:1184-1191 :Kellv等2010. Biomarkers 15:325-331)。
[0005] 專利申請EP 07015271. 5和EP 09719129. 0分別公開了 PCT在對經(jīng)受穩(wěn)定性冠狀 動脈?。–AD)和急性冠狀動脈綜合征（ACS)的患者進行風險評級中的用途。
[0006] 心力衰竭（HF)也稱為充血性心力衰竭（CHF)，是一種當心臟結(jié)構(gòu)或功能問題損害 了其提供充足血流以滿足身體需求的能力時產(chǎn)生的一種心臟病況。其可以引起多種癥狀， 特別是在休息時或者勞累和/或疲乏期間的呼吸急促（S0B)、液體潴留的體征，如肺充血或 踝關(guān)節(jié)腫脹，以及在休息時心臟結(jié)構(gòu)或功能異常的客觀憑證。然而，一些患者可完全無癥 狀，且心臟的無癥狀性的結(jié)構(gòu)或功能異常被認為是癥狀性心力衰竭的預(yù)兆，并與高死亡率 有關(guān)(Wang等2003. Circulation 108:977-82)。心力衰竭是一種常見疾?。憾嘤?%的美 國人口或幾乎五百萬的人受到影響，并且在接受診斷后一年內(nèi)有30% -40%的患者死于心 力衰竭(McMurrav T. T. , Pfeffer Μ. A. 2005. Lancet 365:1877-89)。特別是在早期,由于在 確診中缺乏普遍公認的定義和批判分析，心力衰竭通常是未確診的。采用合適的療法，多數(shù) 患者中的心力衰竭可以得到治療，但它是潛在的威脅生命的病況，并且進行性疾病與10% 的年度總死亡有關(guān)。這是超過65歲的人住院治療的主要原因 (Haldemann G. A.等1999. Am Heart T 137:352-60)。因此，在歐洲國家，心力衰竭的治療會消耗總的衛(wèi)生保健支出的 1-2% (Berrv 等 2001. Eur T Heart Fail 3:749-53)。
[0007] 慢性心力衰竭（慢性HF)是一種伴有通常穩(wěn)定的治療癥狀的數(shù)月和數(shù)年發(fā)展起來 的長期病況。該病況與心臟經(jīng)受適應(yīng)性反應(yīng)有關(guān)，然而該適應(yīng)性反應(yīng)在長期來看可能是有 害的且會導(dǎo)致病況惡化。急性心力衰竭（AHF)是一個用于描述惡化性的或代償失調(diào)的心力 衰竭的術(shù)語，指這樣的發(fā)作，其中患者特征可為具有心力衰竭體征和癥狀的變化，導(dǎo)致需要 緊急治療或住院治療。AHF在幾小時或幾天之內(nèi)迅速發(fā)展并可直接危及生命，因為心臟沒有 時間來經(jīng)歷代償性調(diào)整。慢性HF也可以是失代償?shù)?，其最常見的是由并發(fā)?。ㄈ绶窝祝⑿?肌梗死、心律失常、失控的高血壓而引起，或者是患者未能保持液量限制、飲食或藥物治療 而引起。
[0008] Miller等檢查了因 HF代償失調(diào)而住院治療的患有慢性HF的一組患者，將PCT用 于出院后心血管病死亡的中期預(yù)后（平均追蹤觀察10個月）(Miller等2009. T Cardiovasc Trans Res 2:526-535)。然而,非存活者和存活者之間的降鈣素原水平?jīng)]有差異。相反，存 活者比非存活者中的PCT水平趨于更高。
[0009] Maisel等報道了 PCT水平與診斷為急性心力衰竭患者中的短期（90天）全因死亡 的預(yù)后明顯相關(guān)（(Maisel 等 2012. Eur T Heart Fail, 14:278-286)。
[0010] EP 07817601. 3中描述了一種診斷呼吸道和肺部感染伴有有關(guān)心力衰竭的方法。 [0011] 然而，患有穩(wěn)定性慢性心力衰竭的患者或疑似患有穩(wěn)定性慢性心力衰竭的患者中 相對升高的PCT濃度是否可以與不良事件（如死亡）的預(yù)后有關(guān)還是未知的?；颊呔驮\時 預(yù)測不良事件的可能性是重要的，因為早期識別風險是啟動措施以幫助防止不良事件發(fā)展 的先決條件。
[0012] 因此本發(fā)明的任務(wù)是研究患有穩(wěn)定性慢性心力衰竭的患者或疑似患有穩(wěn)定性慢 性心力衰竭的患者中的PCT水平是否與不良事件（如死亡）的預(yù)后有關(guān)。
[0013] 發(fā)明概述
[0014] 本發(fā)明涉及一種體外預(yù)后患有穩(wěn)定性慢性心力衰竭的患者或疑似患有穩(wěn)定性慢 性心力衰竭的患者中的不良事件（如死亡）的方法，包括測定來自所述患者的樣本中的降 鈣素原（PCT)或其片段的水平，以及將所述PCT或其片段的水平與發(fā)生不良事件（如死亡） 的風險關(guān)聯(lián)起來。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0015] 圖1 :患有穩(wěn)定性慢性心力衰竭的患者或疑似患有穩(wěn)定性慢性心力衰竭的患者的 PCT五分位數(shù)的卡普蘭-邁耶存活曲線（死亡預(yù)測）。
[0016] 圖2:根據(jù)PCT的四分位數(shù)，用于預(yù)后患有_患者的卡普蘭-邁耶存活曲線（全 因死亡）。
[0017] 圖3 :根據(jù)PCT的四分位數(shù)，用于預(yù)后患有_患者的卡普蘭-邁耶存活曲線（心 血管死亡）。
[0018] 圖4:根據(jù)PCT的四分位數(shù)，用于預(yù)后患有堅通患者的卡普蘭-邁耶存活曲線（全 因死亡）。
[0019] 圖5 :根據(jù)PCT的四分位數(shù)，用于預(yù)后患有堅通患者的卡普蘭-邁耶存活曲線（心 血管死亡）。
[0020] 圖6 :根據(jù)PCT的四分位數(shù)，用于預(yù)后無堅皿但具有心房顫動或NT-BNP原MOOng/ L的患者的卡普蘭-邁耶存活曲線（全因死亡）。
[0021] 圖7 :根據(jù)PCT的四分位數(shù)，用于預(yù)后無堅通但具有心房顫動或NT-BNP原MOOng/ L的患者的卡普蘭-邁耶存活曲線（心血管死亡）。
[0022] 圖8 :根據(jù)PCT的四分位數(shù)，用于預(yù)后處于竇性心律且NT-pr〇BNP〈400ng/L的患者 的卡普蘭-邁耶存活曲線（全因死亡）。
[0023] 圖9 :根據(jù)PCT的四分位數(shù)，用于預(yù)后處于竇性心律且NT_proBNP〈400ng/L的患者 的卡普蘭-邁耶存活曲線（心血管死亡）。
[0024] 發(fā)明詳述
[0025] 本發(fā)明涉及一種體外預(yù)后患有穩(wěn)定性慢性心力衰竭的患者或疑似患有穩(wěn)定性慢 性心力衰竭的患者中的不良事件（如死亡）的方法，包括測定來自所述患者樣本中的降鈣 素原（PCT)或其片段的水平，以及將所述PCT或其片段的水平與發(fā)生不良事件（如死亡） 的風險關(guān)聯(lián)起來。
[0026] 在本發(fā)明一個優(yōu)選的實施方案中，測定了由SEQ ID N0:1的氨基酸1-116或2-116 或3-116組成的PCT的水平。
[0027] 本發(fā)明另一實施方案包括測定由所述患者獲得的樣本中的一種或多種另外的預(yù) 后標記物的水平，并將所述降鈣素原或其片段的水平和所述一種或多種另外的預(yù)后標記物 水平與所述發(fā)生不良事件的傾向組合，由此所述降鈣素原或其片段的水平和所述一種或多 種另外的預(yù)后標記物水平的組合提高了所述降鈣素原或其片段的水平對于不良事件預(yù)后 的預(yù)測值。
[0028] 可用作另外的預(yù)后標記物的其他標記物可以選自：肌鈣蛋白、髓過氧物酶、CRP、新 蝶呤、GDF-15、ST2、胱抑素 C，及以下肽的成熟肽、前體、原激素和相關(guān)激素原片段形式：心 房利鈉肽、腎上腺髓質(zhì)素、內(nèi)皮縮血管肽、后葉加壓素。
[0029] 在另一優(yōu)選實施方案中，所述另外的預(yù)后標記物中的一種是從所述患者獲得的樣 本中的proBNP前體（pre-proBNP)或其片段（如上所述，這些可以是proBNP或其衍生物， 即 BNP 或 NT-proBNP)。
[0030] 在另一更優(yōu)選的實施方案中，所述proBNP前體片段是NT proBNP (SEQ ID N0:2)。
[0031] 在另一更優(yōu)選的實施方案中，所述proBNP前體片段是BNP (SEQ ID NO: 3)。
[0032] 在另一實施方案中，用于預(yù)后患有穩(wěn)定性慢性心力衰竭的患者或疑似患有穩(wěn)定性 慢性心力衰竭的患者中的不良事件的方法還包括：將所述降鈣素原或其片段的水平與一種 或多種另外的預(yù)后標記物的水平數(shù)學組合，由此所述降鈣素原或其片段的水平與所述另外 的預(yù)后標記物的水平組合，提高了所述降鈣素原或其片段的水平或者所述有關(guān)標記物的水 平對于發(fā)生不良事件的的預(yù)測值。例如，數(shù)學組合可以是對患者分類的算法，其根據(jù)他們的 降鈣素原水平是否高于或低于某一閾值以及他們的標記物X(和Y、Z···)是否高于或低于某 一閾值。
[0033] 本發(fā)明的另一主題是具有〈0. 045(+/-0. 010)ng/mL的檢測下限的超靈敏降鈣素 原檢測在確定患有穩(wěn)定性慢性心力衰竭或疑似患有穩(wěn)定性慢性心力衰竭的患者中的不良 事件傾向中的用途。
[0034] "預(yù)后"涉及患有穩(wěn)定性慢性心力衰竭或疑似患有穩(wěn)定性慢性心力衰竭的患者中 的不良事件（如死亡）的預(yù)測。這可包括所述患者的恢復(fù)幾率或死亡幾率的評估。
[0035] 不良事件定義為心力衰竭的惡化或代償失調(diào)、腦血管事件、心血管事件和死亡。
[0036] 腦血管事件定義為缺血性中風、出血性卒中或短暫性缺血發(fā)作（TIA)。
[0037] 心血管事件定義為包括心肌梗死的急性冠狀動脈綜合征。
[0038] 死亡定義為心血管死亡（可歸因于，例如心肌缺血和梗塞、心力衰竭、心跳停止或 腦血管意外）和非心血管死亡（包括所有其他的死亡原因，例如感染、惡性腫瘤）。
[0039] 心力衰竭（HF)，也稱為充血性心力衰竭（CHF)，是一種當心臟結(jié)構(gòu)或功能問題損 害了其提供充足血流以滿足身體需求的能力時產(chǎn)生的一種心臟病況。慢性心力衰竭是一種 通常伴有穩(wěn)定性治療癥狀的長期病況（數(shù)月/數(shù)年），與心臟經(jīng)歷的對突發(fā)原因作出的適應(yīng) 性反應(yīng)（如擴張、肥大）有關(guān)。然而，這些適應(yīng)性反應(yīng)在長期來看可能是有害的且會導(dǎo)致病 況惡化。
[0040] 患有慢性HF的患者可以分為穩(wěn)定的、惡化的和代償失調(diào)的慢性HF患者（參見表 1，根據(jù) ESC 指南 2008「Dickstein 等 2008. Eur Heart T29:2388-24421 進行了調(diào)整）。急性 心力衰竭（AHF)定義為繼發(fā)于異常心臟功能的癥狀和體征的快速發(fā)作。AHF自身可呈現(xiàn)為 新創(chuàng)急性（無先前已知的心功能不全的患者中急性心力衰竭的新的發(fā)病）或慢性心力衰竭 的急性代償失調(diào)。慢性HF患者中的代償失調(diào)最常見的是由并發(fā)?。ㄈ绶窝祝?、心肌梗死、 心律失常、失控的高血壓而引起，或者是患者未能保持液量限制、飲食或藥物治療而引起。 惡化的或代償失調(diào)的慢性心力衰竭以及AHF的特征在于HF體征和癥狀有變化，導(dǎo)致需要 緊急治療或治療調(diào)整以及需要住院治療((Tessup等2009. Circulation! 19:1977-2016))。 三種臨床概況描述了這些患者：1)由肺和/或系統(tǒng)充血表現(xiàn)出的容量超負荷，常常由 慢性高血壓的急劇增加而促成；2)由低血壓、腎功能不全和/或休克綜合癥表現(xiàn)出 的心輸出量的極度降低；和3)體液過剩和休克兩者的體征和癥狀(.Tessup等2009. Circulations 1977-2016)。治療后，患有AHG或急性代償失調(diào)性慢性HF的患者可以回 復(fù)至慢性穩(wěn)定性補償狀態(tài)。急性和慢性穩(wěn)定性心力衰竭的特征的比較示于表2中。
[0041] 患有慢性穩(wěn)定性心力衰竭或疑似患有慢性穩(wěn)定性心力衰竭的患者，其特征在于：
[0042] -存在心臟的結(jié)構(gòu)或功能的衰竭，損害了其提供充足血流以滿足身體需求的能力， [0043]-無容量超負荷（由肺和/或系統(tǒng)充血表現(xiàn)出）和/或心輸出量的極大降低（由 低血壓、腎功能不全和/或休克綜合癥表現(xiàn)出），
[0044] 并且，其中患者不需要緊急治療或治療調(diào)整且不需要住院治療。
[0045] 促成心力衰竭的住院治療的常見因素是例如急性心肌缺血、不遵守醫(yī)療攝生法 (鈉和/或液量限制）、未矯正的高血壓、心房顫動和其他心律失常、肺栓塞或并發(fā)感染 (Tessup 等 2009. Circulations 1977-2016)。
[0046] 在本發(fā)明一個優(yōu)選的實施方案中，預(yù)測了 7年內(nèi)，優(yōu)選5年內(nèi)，更優(yōu)選4年內(nèi)，最優(yōu) 選2年內(nèi)發(fā)生的不良事件。
[0047] 在本發(fā)明另一優(yōu)選的實施方案中，降鈣素原或其片段的水平與一種或多種臨床變 量相關(guān)聯(lián)，該變量選自：年齡、性別、糖尿病、C0PD、癥狀、生活質(zhì)量、NYHA、BMI、心率和心律、 收縮壓和舒張壓、水腫和心室功能不全的嚴重程度。
[0048] 本文所用術(shù)語"患者"是指由于疾病正在接受醫(yī)療護理或應(yīng)當接受醫(yī)療護理的活 著的人或非人的生物。這包括正在被探查病理體征的沒有明確疾病的人。因此本文所述的 方法和檢驗可同時適用于人和動物的疾病。
[0049] 本文所用術(shù)語"相關(guān)聯(lián)"是關(guān)于將PCT用作預(yù)后標記物，指將患者中標記物的存在 或量與其在已知患有給定病況或已知存在患給定病況風險的人中的存在或量相比較?；颊?樣本中的標記物水平可以與已知與特定預(yù)后有關(guān)的水平相比較。據(jù)說樣本的標記物水平與 預(yù)后相關(guān)；也就是說，技術(shù)人員可以利用標記物水平來確定患者是否會有經(jīng)受不良事件的 特定風險以及相應(yīng)的響應(yīng)?？蛇x地，樣本的標記物水平可以與已知與良好結(jié)果（例如經(jīng)受 不良事件的低風險）有關(guān)的標記物水平相比較。
[0050] 本文所用術(shù)語"樣本"指出于診斷、預(yù)后或評價目標受試者（如患者）的目的而獲 得的體液樣本。優(yōu)選的測試樣本包括血液、血清、血漿、腦脊髓液、尿、唾液、痰液和胸膜積 液。此外，本領(lǐng)域技術(shù)人員將認識到一些測試樣本在分級分離或純化步驟后會更易分析，例 如將全血分離為血清或血漿組分。
[0051] 因此,在本發(fā)明優(yōu)選的實施方案中，樣本選自血液樣本、血清樣本、血漿樣本、腦脊 髓液樣本、唾液樣本和尿樣本或任意上述樣本的提取物。優(yōu)選地，樣本是血液樣本，更優(yōu)選 的是血清樣本或血漿樣本。
[0052] 根據(jù)方法，當所述測定的PCT水平高于預(yù)定的閾值水平時，患有穩(wěn)定性慢性心力 衰竭或疑似患有穩(wěn)定性慢性心力衰竭的患者具有增加的發(fā)生不良事件（如死亡）的風險。 優(yōu)選地，預(yù)定的閾值水平為0. 015-0. 05ng/mL，更優(yōu)選0. 015ng/mL_0. 035ng/mL，甚至更優(yōu) 選在 0· 015ng/mL_0· 03ng/mL，甚至更優(yōu)選 0· 015ng/mL_0· 025ng/mL，最優(yōu)選 0· 02ng/mL 至 (低于）〇. 〇15ng/mL。在優(yōu)選的實施方案中，當所述測定的PCT水平高于0. 05ng/mL時，優(yōu) 選高于〇. 〇35ng/mL時，更優(yōu)選高于0. 03ng/mL時，甚至更優(yōu)選高于0. 025ng/mL時，甚至更 優(yōu)選高于〇. 〇2ng/mL時，最優(yōu)選高于0. 015ng/mL時，患有穩(wěn)定性慢性心力衰竭或疑似患有 穩(wěn)定性慢性心力衰竭的患者具有增加的發(fā)生不良事件（如死亡）的風險。
[0053] 本發(fā)明的PCT水平已通過PCT測試形式（BRAHMS KRYPTOR PCT敏感性）確 定，所述PCT測試形式在定量測量范圍內(nèi)與更敏感的PCT檢測（BRAHMS PCT LIA敏感 性）具有相同的標度（calibration)，后者能夠定量測定正常人群中的PCT水平，給出 如 EP09011073. 5 ( ''Procalcitonin for the prognosis of adverse events in the asymptomatic population(用于預(yù)后無癥狀人群中的不良事件的降I丐素原）"）中所述的 中值PCT水平。如果上述值在標度上與BRAHMS KRYPTOR PCT敏感性有所不同的話，上述值 在其它PCT檢測中可能會不同。因此，將標度的差異考慮在內(nèi)，則上述值將適用于這類標 度不同的PCT檢測。量化標度差異的一種可能性是通過使用兩種方法來測量樣本中的PCT 的、目標PCT分析與BRAHMS KRYPTOR PCT敏感性的方法比較分析（相關(guān)性）。另一種可能 性是使用目標PCT檢測測定（只要這一測試具有足夠的分析敏感度）代表性正常人群的中 值 PCT 水平，將結(jié)果與 EP 09011073.5( "Procalcitonin for the prognosis of adverse events in the asymptomatic population(用于無癥狀人群中的不良事件預(yù)后的降I丐素 原）中所述的中值PCT水平進行比較，并基于通過這一比較所得出的差異來重新計算定 標。
[0054] 診斷和/或預(yù)后測試的敏感性和特異性不僅只取決于測試的分析"質(zhì)量"，它們也 取決于對于什么組成了反常結(jié)果的定義。實踐中，接收者操作特征曲線（R0C曲線）通常通 過將"正常"（即表觀健康）和"患病"人群（即經(jīng)受糖尿病、胰島素耐受性和/或代謝綜合 征的患者）中的變量對其相關(guān)頻率作圖來計算。對于任何的特定標記物，有或沒有疾病的 受試者的標記物水平分布可能會重疊。在這種情況下，測試并不能以100%的精確度絕對區(qū) 分正常和疾病，且重疊的區(qū)域表明測試不能區(qū)分正常和疾病的部分。選擇閾值，在閾值之上 (或在閾值之下，取決于標記物如何隨疾病變化）則認為測試是反常的，并且在閾值之下則 認為測試是正常的。位于R0C曲線以下的面積是所認知的測量能夠正確識別一種病況的可 能性的度量。即使當測試結(jié)果不需要給出一個精確的數(shù)字時，也可以使用ROC曲線。只要能 夠排列出結(jié)果，就可以創(chuàng)建R0C曲線。例如，關(guān)于"疾病"樣本的測試結(jié)果可以根據(jù)程度排列 (如1 =低，2 =正常，以及3 =高）。該排列可以與"正常"人群中的結(jié)果相關(guān)聯(lián)，并創(chuàng)建出 R0C曲線。這些方法在本領(lǐng)域是公知的(參見，如Hanlev等1982. Radiology 143:29-36)。 優(yōu)選地，選擇閾值來提供大于約0. 5,更優(yōu)選大于約0. 7,甚至更優(yōu)選大于約0. 8,甚至更優(yōu) 選大于約0. 85,且最優(yōu)選大于約0. 9的R0C曲線面積。本語境中術(shù)語"約"指給定測量的 +/_5 *% 〇
[0055] R0C曲線的水平軸代表（1-特異性），其隨著假陽性率增加。曲線的垂直軸代表敏 感性，其隨著真陽性率增加。因此，對于選擇的特定閾值，可以確定（1-特異性）的值，并可 以獲得相應(yīng)的敏感度。R0C曲線下的面積是測量的標記物水平能夠正確識別一種疾病或病 況（如預(yù)后）的可能性的度量。因此，R0C曲線下的面積可以用來確定測試的有效性。
[0056] 在一些實施方案中，選擇標記物和/或標記板來展現(xiàn)出至少約70%的敏感度，更 優(yōu)選至少約80 %的敏感度，甚至更優(yōu)選至少約85 %的敏感度，甚至更優(yōu)選至少約90 %的敏 感度，且最優(yōu)選至少約95的敏感度，并伴隨有至少約70%的特異性，更優(yōu)選至少約80%的 特異性，甚至更優(yōu)選至少約85 %的特異性，甚至更優(yōu)選至少約90 %的特異性，且最優(yōu)選至 少約95 %的特異性。該語境中所用的術(shù)語"約"指給定測量的+/-5 %。
[0057] 閾值水平可以從例如Kaplan-Meier分析中獲得，其中疾病的發(fā)生或不良后果和/ 或死亡的可能性與例如人群中各個標記物的五分位數(shù)相關(guān)聯(lián)。根據(jù)該分析，標記物水平在 80百分位數(shù)以上的受試者具有明顯增加的發(fā)生根據(jù)本發(fā)明的不良事件的風險。該結(jié)果得到 了對傳統(tǒng)風險因素進行了調(diào)整的Cox回歸分析的進一步支持。根據(jù)本發(fā)明，相對所有其他 受試者的最高的四分位數(shù)與得病風險或不良結(jié)果和/或死亡可能性的增加極顯著相關(guān)。
[0058] 其他優(yōu)選的閾值為例如參考人群的第90、95或99百分位數(shù)。通過使用高于第80 百分位數(shù)的百分位數(shù)，降低了識別的受試者中假陽性的數(shù)目，但是可能會錯過識別處于中 等卻仍有增加的風險的受試者。因此，可以根據(jù)是否認為更適合在損失也識別為"假陽性" 的情況下識別大多數(shù)處于風險中的受試者來調(diào)整閾值，或根據(jù)是否認為更適合在錯過一些 處于中等風險的受試者的情況下主要識別處于高風險的受試者來調(diào)整閾值。
[0059] 通過使用個體標記物水平值以及其他預(yù)后實驗室和臨床參數(shù)來計算個體風險 的其他數(shù)學可能性，為例如NRI(凈重新分類指數(shù)）或IDI(綜合鑒別指數(shù)）?？梢愿?據(jù) Pencina(Pencina MT.等:Evaluating the added predictive ability of a new marker: from area under the ROC curve to reclassification and beyond. Stat Med. 2008 ：27:157-172)來計算指數(shù)。
[0060] 優(yōu)選的檢測方法包括多種形式的免疫測定，例如放射免疫測定法（RIA)、發(fā)光化學 和熒光免疫檢測、美聯(lián)免疫測定（ELISA)、基于Luminex的磁珠陣列、蛋白質(zhì)微陣列檢測，以 及快速測試形式如免疫層析試條測試。
[0061] 分析可以是同質(zhì)或異質(zhì)分析、競爭性和非競爭性分析。在特別優(yōu)選的實施方案中， 分析是夾心式分析的形式，這是非競爭性的免疫分析，其中將待檢測和/或定量的分子結(jié) 合至第一抗體和第二抗體。第一抗體可以結(jié)合至固相如珠、孔或其他容器的表面、芯片或 條帶，并且第二抗體是用染料、放射性同位素或者反應(yīng)性或催化活性基團標記的抗體。然 后通過合適的方法測量與分析物結(jié)合的標記抗體的量。與"夾心式分析"相關(guān)的常規(guī)組合 物和程序是已為大家接受的，且是技術(shù)人員已知的(The Immunoassay Handbook, Ed. David ffild.Elsevier LTD. Oxford ：3rd ed. (May 2005). ISBN-13:978-0080445267 ：Hultschig C 等，Curr Opin Chem Biol. 2006 Feb :10(1) :4-10. PMID: 16376134,通過引用并入本文）。
[0062] 在特別優(yōu)選的實施方案中，所述分析包括兩種捕獲分子，優(yōu)選二者都作為液體反 應(yīng)混合物中的分散相存在的抗體，其中將第一標記組分附著在第一捕獲分子上，其中所述 第一標記組分是基于熒光-或化學發(fā)光-猝滅或放大的標記系統(tǒng)的一部分，并將所述標記 系統(tǒng)的第二標記組分附著在第二捕獲分子上，以便在兩種捕獲分子都與分析物結(jié)合后產(chǎn)生 可測量的信號，其允許對含有樣本的溶液中形成的夾心式復(fù)合物進行檢測。
[0063] 甚至更優(yōu)選地，所述標記系統(tǒng)包含與熒光染料或化學發(fā)光染料，尤其是菁類染料 組合的稀土穴狀化合物或稀土螯合物。
[0064] 在本發(fā)明的上下文中，基于熒光的分析包括染料的使用，所述染料可例如選自： FAM(5-或6-羧基熒光素）、VIC、NED、熒光素、異硫氰酸熒光素（FITC)、IRD-700/800、 花青染料如CY3、CY5、CY3. 5、CY5. 5、CY7、咕噸、6-羧基-2'，4'，7'，4, 7-六氯熒光素 (hexachlorofluorescein) (HEX)、TET、6_ 竣基 _4'，5' -二氣 _2'，7' -二甲氧基突光 素（dimethodyfluorescein) (JOE)、N, N, Ν'，Ν' -四甲基-6-羧基若丹明（TAMRA)、6_ 羧 基-X-若丹明（R〇X)、5_羧基若丹明-6G(R6G5)、6-羧基若丹明-6G(RG6)、若丹明、若丹明 綠、若丹明紅、若丹明110、B0DIPY染料如B0DIPY TMR、俄勒岡綠、香豆素如傘形酮、苯酰胺 如赫希斯特（Hoechst) 33258 ;菲陡如德克薩斯紅、Yakima黃、Alexa Fluor、PET、溴化乙錠、 吖啶染料、咔唑染料、吩惡嗪染料、嚇啉（Porphyrine)染料、多次甲基染料等。
[0065] 在本發(fā)明的上下文中，基于化學發(fā)光的分析包括染料的使用，其基于在如下 文獻中描述的用于化學發(fā)光材料的物理原理:Kirk-〇thmer,《化工技術(shù)百科全書》 (Encyclopedia of chemical technology),第 4 版，執(zhí),斗丁編輯，.Τ· I. Kroschwitz :編輯，Μ· Howe-Grant, John ffiley&Sons, 1993,第 15 卷，d. 518-562,該文獻通過引用并入本文，包括 551-562頁的引述。優(yōu)選的化學發(fā)光染料是吖啶酯。
[0066] 如本文所提到的，"分析"或"診斷分析"可以是診斷領(lǐng)域應(yīng)用的任何類型。該分析 可以是基于待檢測分析物與一種或多種具有一定親和力的捕獲探針的結(jié)合。關(guān)于捕獲分子 與靶分子或目標分子之間的相互作用，親和常數(shù)優(yōu)選大于io 8m'
[0067] 在本發(fā)明的上下文中，"捕獲分子"是可用于結(jié)合來自樣本的靶分子或目標分子， 即分析物（在本發(fā)明的上下文中即為PCT及其片段）的分子。因此捕獲分子必須要在空間 上并且根據(jù)表面特征如表面電荷、疏水性、親水性、lewis供體和/或受體的存在或缺乏來 進行充分的塑造，以特異性地與靶分子或目標分子結(jié)合。據(jù)此，所述結(jié)合可以例如通過如下 進行調(diào)節(jié)：捕獲分子與靶分子或目標分子之間的離子的、范德瓦爾斯的（van-der-Waals)、 JI-JI、σ - JI、疏水鍵或氫鍵的相互作用，或上述相互作用中兩種或更多種的組合。在本發(fā) 明的上下文中，捕獲分子可例如選自：核酸分子、碳水化合物分子、PNA分子、蛋白質(zhì)、抗體、 肽或糖蛋白。優(yōu)選地，捕獲分子是對靶分子或目標分子具有足夠親和力的抗體，包括其片 段；且包括重組抗體或重組抗體片段，以及所述抗體以化學和/或生化方法修飾的衍生物 或其長度為至少12個氨基酸的變異鏈衍生的片段。
[0068] 在本發(fā)明優(yōu)選的實施方案中，將降鈣素原或其至少12個氨基酸長度的片段，用于 患有穩(wěn)定性慢性心力衰竭或疑似患有穩(wěn)定性慢性心力衰竭的、具有增加的發(fā)生不良事件的 風險的患者中的抗生素指導(dǎo)。
[0069] 甚至更優(yōu)選的是，當患有穩(wěn)定性慢性心力衰竭的患者或疑似患有穩(wěn)定性慢性 心力衰竭的患者的體液樣本中降鈣素原或其至少12個氨基酸長度的片段的水平為 0· 015-0. 05ng/ml 時，更優(yōu)選為 0· 015ng/mL-0. 035ng/mL 時，甚至更優(yōu)選為 0· 015ng/ mL-〇· 03ng/mL 時，甚至更優(yōu)選為 0· 015ng/mL_0· 025ng/mL 時，最優(yōu)選為 0· 02ng/mL 至（低 于）0. 015ng/mL時，給予抗生素。
[0070] 甚至更優(yōu)選的是，當患有穩(wěn)定性慢性心力衰竭的患者或疑似患有穩(wěn)定性慢性心力 衰竭的患者的體液樣本中，降鈣素原或其至少12個氨基酸長度的片段的水平高于0. 05ng/ mL時，優(yōu)選高于0. 035ng/mL時，更優(yōu)選高于0. 03ng/mL時，甚至更優(yōu)選高于0. 025ng/mL時， 甚至更優(yōu)選高于0. 02ng/mL時，最優(yōu)選高于0. 015ng/mL時，給予抗生素。 實施例
[0071] 實施例1
[0072] 研究人群和稈序
[0073] 將登記的患者順序轉(zhuǎn)診至英國約克郡赫爾河畔的金斯頓（Kingston-upon-Hull) 和東瑞?。‥ast Riding)的基于社區(qū)的CHF計劃，其在2001年8月至2009年6月共計為 600000人。從當?shù)厣鐓^(qū)將疑似患有穩(wěn)定性慢性心力衰竭的患者交給?？崎T診以診斷和管 理可能的穩(wěn)定性慢性心力衰竭，并邀請他們參與。同意的患者接受了系統(tǒng)評價，包括既往病 史、藥療、癥狀、體征、電和超聲心動圖、標準血液學和生化概況（profile)，以及測量PCT和 氨基端前腦利鈉肽（NT-proBNP)。
[0074] 結(jié)果
[0075] 登記的1891名患者，年齡中值為72歲（四分位間距[IQR] :64-78)，669名為 婦女，807人有左心室收縮功能不全（LVSD)，400人除LVSD以外無嚴重的超聲心動圖異 常，192人無嚴重的回聲異常，但ΝΤ-proBNPMOOng/L(其中65人有心房顫動且15人具有 eGFR〈30ml/min)，且 492 人以上都無?？傮w中值（IQR)PCT 為 0· 022(0. 017-0. 047)ng/mL 且四個亞組分別為 0· 023 (0· 018-0. 032)、0· 022 (0· 017-0. 031)、0· 024 (0· 019-0. 035)和 0. 020(0. 016-0. 025)ng/mL。在隨訪的中值 5.0 (IQR: 3. 4-7.1)年里，783 名（41.8%)患 者死亡，447名為心血管原因。在單因素分析中，log(PCT)與全因、心血管和非心血管死亡 密切相關(guān)（風險比分別為：[HR] 1.91，95 % Cl: (L 73-2. 11)，HR: L 94(1.71-2.21)和 HR: 1. 89 (1. 61-2. 22)，所有p〈0. 001)。由PCT五分位數(shù)的單變量Cox回歸分析表示的全因死 亡的HR(未調(diào)整的和針對年齡和性別調(diào)整的）示于下表3。在多變量Cox回歸模型中， PCT為全因死亡的17個標準臨床變量（年齡、性別、病原學、糖尿病、C0PD、癥狀、生活質(zhì)量、 NYHA、BMI、心率和心律、收縮壓、水腫、心室功能不全的嚴重程度、血紅蛋白和肌酸肝以及 NT-proBNP)提供了另外的預(yù)后信息。
[0076] 實施例2
[0077] 研究人群和稈序
[0078] 繼實施例1登記的患者后，另外651名疑似患有穩(wěn)定性慢性心力衰竭的患者被 納入研究中。而且，使這些簽署同意參與研究的患者進行系統(tǒng)評價，包括既往病史、藥療、 癥狀、體征、電和超聲心動圖、標準血液學和生化概況，以及測量PCT和氨基端前腦利鈉肽 (NT-proBNP)〇
[0079] 結(jié)果
[0080] 共登記有2542名患者，1100名有左心室收縮功能不全（LVSD)。1442名無 LVSD的 患者中，η = 415名患者有嚴重的結(jié)構(gòu)性心臟?。∕SHD)?；颊叩奶卣魍ㄟ^血漿PCT(表4) 的四分位數(shù)和頂部和底部的十分位數(shù)來描述，以顯示極值的影響。變量示為百分比或中值 和四分位數(shù)間距。將簡單和多元線性回歸模型用于識別與PCT逆轉(zhuǎn)變有關(guān)的自變量（表 5)。全因死亡的預(yù)測（包括和不包括PCT)示于表6。患者事件、PCT的最高相對最低四分 位數(shù)的風險比以及C統(tǒng)計總結(jié)于表7。使用卡普蘭-邁耶曲線通過表型（分別為患有LVSD、 MSHD的患者、無 MSHD但有心房顫動或NT-proBNP>400ng/L的患者，以及處于竇性心律和 NT-proBNP〈400ng/L的患者）來比較存活可能性的具體結(jié)果（全因死亡、心血管死亡）（圖 2-9)。
[0081] 再次地，PCT與全因和心血管死亡密切相關(guān)（未調(diào)節(jié)的風險比分別為：[HR] :3. 46， 95% CI : (2. 63-4. 56)和 HR :3. 72(2. 58-5. 35)，兩者 ρ〈0· 001)。多變量分析中，較高的血 漿PCT濃度與較差的腎功能、較大的年齡、缺血性心臟疾病有關(guān)，并與較嚴重的心力衰竭的 標記物有關(guān)而不是其他諸如hsCRP或白細胞計數(shù)的感染或炎癥的標記物。在患有LVSD的 患者中，PCT預(yù)測全因和心血管死亡，尤其是心力衰竭死亡，其與包括NT-proBNP的其他預(yù) 后標記物無關(guān)。PCT也預(yù)測無 LVSD的患者的死亡，包括心力衰竭的診斷已被駁倒的患者，但 這似乎主要是非心血管。
[0082] 表1 :心力衰竭的分類（根據(jù)ESC指南，2008)
[0083]

【權(quán)利要求】
1. 一種預(yù)測患者中發(fā)生不良事件的風險的方法，所述患者患有穩(wěn)定性慢性心力衰竭或 疑似患有穩(wěn)定性慢性心力衰竭，所述方法包括： -測定所述患者的體液樣本中降鈣素原或其至少12個氨基酸長度的片段的水平， -將所述患者中所述降鈣素原或其片段的水平與發(fā)生不良事件的風險相關(guān)聯(lián)。
2. 如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述關(guān)聯(lián)步驟包括：將所述降鈣素原或其片段的水 平與閾值水平進行比較，由此當所述降鈣素原或其片段的水平超過所述水平時，所述患者 具有增加的發(fā)生不良事件的風險。
3. 如權(quán)利要求1和2所述的方法，其中所述不良事件選自心力衰竭的惡化或代償失調(diào)、 腦血管事件、心血管事件和死亡。
4. 如權(quán)利要求2所述的方法，其中所述閾值水平為0. 015-0. 05ng/mL，更優(yōu)選0. 015ng/ ml035ng/mL，甚至更優(yōu)選 0· 015ng/mL_0· 03ng/mL，甚至更優(yōu)選 0· 015ng/mL_0· 025ng/ mL，最優(yōu)選 0· 02ng/mL 至（低于）0· 015ng/mL。
5. 如前述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其中所述患者無急性或代償失調(diào)的心力衰 竭。
6. 如權(quán)利要求1-5所述的方法，其中所述預(yù)測涉及對7年內(nèi)，更優(yōu)選5年內(nèi)，甚至更優(yōu) 選4年內(nèi)，最優(yōu)選2年內(nèi)發(fā)生不良事件的預(yù)測。
7. 如前述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其中所述樣本選自血液樣本、血清樣本和血 漿樣本。
8. 如前述權(quán)利要求中任一項所述的方法，還包括將所述降鈣素原或其片段的水平與一 種或多種另外的預(yù)后標記物的水平相關(guān)聯(lián)，由此所述降鈣素原或其片段的水平與所述一種 或多種另外的預(yù)后標記物的水平的組合，增加了所述降鈣素原或其片段的水平或所述相關(guān) 標記物的水平對于發(fā)生不良事件的預(yù)測值。
9. 如權(quán)利要求8所述的方法，其中所述另外的預(yù)后標記物選自：肌鈣蛋白、髓過氧物 酶、CRP、新蝶呤、⑶F-15、ST2、胱抑素 C、血紅蛋白和肌酸肝，及以下肽的成熟肽、前體、原激 素和相關(guān)激素原片段形式：心房利鈉肽、腎上腺髓質(zhì)素、內(nèi)皮縮血管肽、后葉加壓素。
10. 如權(quán)利要求9所述的方法，其中所述預(yù)后標記物中的一種是從所述患者獲得的樣 本中的proBNP前體或其片段。
11. 如前述權(quán)利要求中任一項所述的方法，還包括將所述降鈣素原或其片段的水平與 一種或多種臨床變量相關(guān)聯(lián)，所述臨床變量選自：年齡、性別、糖尿病、C0PD、癥狀、生活質(zhì) 量、NYHA、BMI、心率和心律、收縮壓和舒張壓、水腫和心室功能不全的嚴重程度。
12. 如前述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其中PCT檢測以低于0. 05ng/mL的檢測下限 應(yīng)用。 13. PCT在具有增加的發(fā)生不良事件的風險的患者的抗生素指導(dǎo)中的應(yīng)用，所述患者患 有穩(wěn)定性慢性心力衰竭或疑似患有穩(wěn)定性慢性心力衰竭，其方法包括： -測定所述患者的體液樣本中降鈣素原或其至少12個氨基酸長度的片段的水平， -將所述患者中所述降鈣素原或其片段的水平與發(fā)生不良事件的風險相關(guān)聯(lián)。
14. 如權(quán)利要求13所述的用途，還包括當患有穩(wěn)定性慢性心力衰竭的患者或疑似患有 穩(wěn)定性慢性心力衰竭的患者的體液樣本中降鈣素原或其至少12個氨基酸長度的片段的水 平為0. 015-0. 05ng/ml時，給予抗生素。
【文檔編號】G01N33/68GK104303061SQ201380019816
【公開日】2015年1月21日 申請日期:2013年4月11日 優(yōu)先權(quán)日:2012年4月12日
【發(fā)明者】約阿希姆·斯特拉克, 約翰·Gf·科利蘭 申請人:B.R.A.H.M.S有限公司