太赫茲波譜結(jié)合生物傳感技術(shù)的毒死蜱檢測方法和裝置制造方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及太赫茲波譜結(jié)合生物傳感技術(shù)的毒死蜱檢測方法和裝置。目的是提供的方法和裝置應(yīng)具有準確性高、檢測快速方便的特點。技術(shù)方案是：太赫茲波譜結(jié)合生物傳感技術(shù)的毒死蜱檢測方法，包括以下步驟：（1）石英玻片清洗；（2）石英玻片表面修飾；（3）石英玻片表面活化；該檢測方法還包括以下步驟：（4）抗體固定；（5）石英玻片表面多余位點封閉；（6）固定毒死蜱；（7）采集石英玻片上待測點與參比點的太赫茲時域波譜；（8）比較石英玻片待測點與參比點的太赫茲時域波譜。太赫茲波譜結(jié)合生物傳感技術(shù)的毒死蜱檢測裝置，檢測裝置包括太赫茲時域波譜系統(tǒng)、電機及石英玻片。
【專利說明】太赫茲波譜結(jié)合生物傳感技術(shù)的毒死蜱檢測方法和裝置
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種毒死蜱檢測方法和裝置，尤其涉及一種太赫茲波譜結(jié)合生物傳感技術(shù)的毒死蜱檢測方法和裝置。
【背景技術(shù)】
[0002]毒死蜱(Chlorpyrifos)是一種具有中等毒性的有機磷殺蟲劑，具有觸殺、胃毒和熏蒸作用，能較好地防治多種作物的地上和地下害蟲。作為取代高毒有機磷殺蟲劑的理想品種之一，毒死蜱大量應(yīng)用于我國農(nóng)業(yè)生產(chǎn)實踐中。雖然毒死蜱對人沒有太大的毒性，但對水生生物有極高毒性，可能對水體環(huán)境產(chǎn)生長期不良影響，因此有必要對毒死蜱進行檢測。傳統(tǒng)的毒死蜱檢測方法一酶聯(lián)免疫法是以抗原與抗體的特異性、可逆性結(jié)合反應(yīng)為基礎(chǔ)的農(nóng)藥殘留檢測方法，該方法具有專一性強、靈敏度高等優(yōu)點。但是，酶聯(lián)免疫檢測在固定抗原后還需要第二次固定抗體，操作相對復(fù)雜，速度慢，難以適應(yīng)日益增長的快速檢測需求。因此，尋找新的毒死蜱殘留檢測方法并設(shè)計合理的裝置具有重要意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是克服上述【背景技術(shù)】的不足，提供一種太赫茲波譜結(jié)合生物傳感技術(shù)的毒死蜱檢測方法和裝置，該方法和裝置應(yīng)具有準確性高、檢測快速方便的特點。
[0004]本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下:
[0005]太赫茲波譜結(jié)合生物傳感技術(shù)的毒死蜱檢測方法，包括以下步驟:(1)石英玻片清洗；(2)石英玻片表面修飾；(3)石英玻片表面活化；其特征在于:該檢測方法還包括以下步驟:
[0006](4)抗體固定；
[0007]取Pluronic F-127、海藻糖，并用PBS緩沖液溶解，取溶解后的混合溶液與抗體溶液混勻，在經(jīng)過表面活化的石英玻片的標(biāo)記面上抗體點樣N次，分別是N-1個待測點與一個參比點，保持濕潤環(huán)境并過夜；
[0008](5)石英玻片表面多余位點封閉；
[0009]配制酪蛋白/PBS溶液，充分溶解，在離心管中加入經(jīng)過抗體固定的石英玻片和上述酪蛋白/PBS溶液混勻并靜置；之后依次取出石英玻片，先后用去離子水、PBS緩沖液清洗石英玻片，最后在NaN3/PBS緩沖液中保存；
[0010](6)固定毒死蜱；
[0011]將毒死蜱溶解在PBS緩沖液中，稀釋成不同待測濃度，并將待測毒死蜱溶液滴加在已封閉好的石英玻片上的待測點，濕潤環(huán)境下孵育，之后清洗并用氮氣吹干；
[0012](7)采集石英玻片上待測點與參比點的太赫茲時域波譜；
[0013]將石英玻片與電機固定，通過旋轉(zhuǎn)電機，利用太赫茲時域波譜系統(tǒng)分別采集同一石英玻片上待測點與參比點的太赫茲時域波譜；[0014](8)比較石英玻片待測點與參比點的太赫茲時域波譜；
[0015]畫出樣品上待測點與參比點的太赫茲時域波譜圖形，若待測點時域譜的最高峰峰值小于參比點最高峰峰值的X值，表明該石英玻片上待測點上有毒死蜱；若待測點時域譜的最高峰峰值占參比點最高峰峰值的X值及以上，表明該石英玻片不含毒死蜱或毒死蜱濃度過低無法檢測出。
[0016]所述步驟(I)包括:在石英玻片的一面上做標(biāo)記，并在石英玻片中心打一個孔，先后使用去離子水、Hellmanex II溶液、去離子水、濃鹽酸/甲醇溶液、去離子水、濃硫酸和去離子水清洗，并用氮氣吹干。
[0017]所述步驟(2)包括:取3-縮水甘油醚氧基丙基三甲氧基硅烷置于經(jīng)過清洗的石英玻片的標(biāo)記面上，取另一經(jīng)過清洗且標(biāo)記面朝下的石英玻片蓋上，在濕潤環(huán)境下修飾后分開石英玻片，之后用乙醇、甲醇、乙醇超聲清洗石英玻片，氮氣吹干；在石英玻片加熔融的
0,0' -二(2-氨基丙基)聚丙二醇-嵌段-聚乙二醇-嵌段-聚丙二醇，烘箱內(nèi)過夜后用去離子水清洗并烘干保存。
[0018]所述步驟(3)包括:稱取N，N' -二琥珀酰亞胺基碳酸酯、二甲氨基吡啶，量取三乙基胺及無水二甲基甲酰胺，配置上述物質(zhì)的混合液；取上述混合液置于經(jīng)過表面修飾的石英玻片的標(biāo)記面上，取另一經(jīng)過表面修飾且標(biāo)記面朝下的石英玻片蓋上，活化后分開石英玻片，用甲醇超聲清洗并用氮氣吹干。
[0019]所述步驟(1)、(2)、(3)、(5)中石英玻片的清洗均在染色缸和染色架中進行；所述步驟(3)中混合液為粉紅色。
[0020]所述X值為90%。
[0021]所述步驟(4)中Pluronic F-127質(zhì)量與PBS緩沖液質(zhì)量的比值為0.01%，海藻糖質(zhì)量與PBS緩沖液質(zhì)量的比值為20%，混合液與抗體溶液的混合比例均為1:1。
[0022]所述太赫茲時域波譜系統(tǒng)，在充氮氣的情況下采集樣本的太赫茲時域波譜；測量環(huán)境濕度要求〈0.2%。
[0023]太赫茲波譜結(jié)合生物傳感技術(shù)的毒死蜱檢測裝置，其特征在于:所述檢測裝置包括太赫茲時域波譜系統(tǒng)、安裝在該太赫茲時域波譜系統(tǒng)的檢測內(nèi)腔中的電機以及水平固定在電機轉(zhuǎn)軸上的石英玻片；石英玻片上通過抗體點樣形成至少一個待測點以及至少一個參比點，石英玻片的一側(cè)為太赫茲時域波譜系統(tǒng)的太赫茲波發(fā)生器，石英玻片的另一側(cè)為太赫茲時域波譜系統(tǒng)的檢測器。
[0024]所述電機配有電機控制器，電機的轉(zhuǎn)軸設(shè)置在石英玻片的中心位置并與石英玻片垂直，各待測點與轉(zhuǎn)軸之間的距離等于參比點與轉(zhuǎn)軸之間的距離。
[0025]本發(fā)明具有的有益效果是:本發(fā)明基于太赫茲波譜結(jié)合生物傳感技術(shù)，利用已固定毒死蜱與未固定毒死蜱的檢測點的太赫茲時域波譜差異來檢測毒死蜱；因太赫茲波對大分子(DNA、蛋白質(zhì))敏感，故該方法準確性高；與酶聯(lián)免疫法相比，該方法能避免后續(xù)的熒光顯色步驟，節(jié)約時間，并且能做到免標(biāo)記；本發(fā)明能夠同時檢測多點，檢測效率高；由于固定毒死蜱之前的所有步驟均能事先完成，僅固定毒死蜱與獲取相應(yīng)太赫茲波譜占用時間很短。因此該檢測方法能滿足日益增長的快速檢測需求。
【專利附圖】

【附圖說明】[0026]圖1為石英玻片俯視示意圖。
[0027]圖2為獲取太赫茲波譜的原理圖。
[0028]圖中，石英玻片A、待測點B、參比點C、孔D、電機E、太赫茲波發(fā)生器F、檢測器G、數(shù)字標(biāo)記面H。
【具體實施方式】
[0029]太赫茲波一般認為是頻率在0.1-1OTHz的電磁波，其波長介于微波與紅外輻射之間。太赫茲波能量非常低，不會引起對人體或檢測材料有害的電離反應(yīng)。一般情況下，有機分子內(nèi)化學(xué)鍵的振動吸收頻率主要表現(xiàn)在普通紅外波段。但是對于分子與分子之間的相對弱的相互作用(如氫鍵等)以及偶極子的旋轉(zhuǎn)與振動躍遷、大分子的骨架振動、晶體中晶格的低頻振動吸收頻率等，一般表現(xiàn)在太赫茲紅外波段。因此，盡管太赫茲輻射的能量很低，但是大量的分子，尤其是許多有機大分子(DNA、蛋白質(zhì)等)在這一頻段內(nèi)，表現(xiàn)出強烈的吸收和色散。太赫茲時域波譜技術(shù)(Terahertz time-domain spectroscopy, THz-TDS)是國際上近年來發(fā)展起來的一項新的研究與檢測技術(shù)。至今，太赫茲時域波譜技術(shù)已經(jīng)在爆炸物檢測、藥物檢測、醫(yī)學(xué)診斷，國防以及安檢等方面有著許多的應(yīng)用。由于毒死蜱抗體屬于蛋白質(zhì)，并且毒死蜱抗體與毒死蜱結(jié)合后會影響分子間的鍵，而太赫茲波對分子間的作用較為敏感，因此使用太赫茲時域波譜手段檢測毒死蜱蛋白具有非常大的潛力。
[0030]所述太赫茲時域波譜系統(tǒng)推薦采用Z-omega公司生產(chǎn)的型號為Z3的太赫茲時域波譜系統(tǒng)。
[0031]所述的毒死蝶購自Sigma公司，產(chǎn)品編號為45395,但不限于此。
[0032]所述的毒死蜱抗體來源于浙江大學(xué)農(nóng)藥與環(huán)境毒理研究所，但不限于此。
`[0033]下面結(jié)合實施實例對本發(fā)明作進一步說明，但本發(fā)明并不限于以下實施例。
[0034]太赫茲波譜結(jié)合生物傳感技術(shù)的毒死蜱檢測方法和裝置，包括如下步驟:
[0035](I)石英玻片清洗；
[0036]在若干片石英玻片A (1-100個)的一面用鉆頭做好數(shù)字標(biāo)記(1、2、3……)，并在石英玻片中心鉆孔；將鉆好孔的石英玻片依次放在染色架中，再把染色架放入配套的染色缸中；首先使用去離子水清洗5遍，然后在200ml體積分數(shù)為2%的Hellmanex II溶液(MUllheim，德國)中超聲清洗I小時,置于搖床上振蕩過夜；過夜后再次使用去離子水清洗5遍，并在通風(fēng)櫥中加入200ml的濃鹽酸/甲醇溶液(濃鹽酸與甲醇體積比為1:1)，搖床振蕩I小時；振蕩結(jié)束后使用去離子水清洗5遍，再在通風(fēng)櫥中加入200ml質(zhì)量分數(shù)為98%濃硫酸，搖床振蕩I小時；最后使用去離子水清洗石英玻片5遍，氮氣吹干；
[0037](2)石英玻片表面修飾；
[0038]換上干凈手套，取若干個培養(yǎng)皿，每個培養(yǎng)皿中放置兩個離心管的蓋子作為支架，再將清洗后的石英玻片放置在離心管蓋上，數(shù)字標(biāo)記面H朝上，與培養(yǎng)皿底面保持一定距離；再用移液槍取600 μ I的3-縮水甘油醚氧基丙基三甲氧基硅烷(GOPTS，Sigma，德國)置于石英玻片上，取另一清洗后的石英玻片(數(shù)字標(biāo)記面朝下)覆蓋在該石英玻片上；在培養(yǎng)皿中加幾滴水保持濕潤環(huán)境，蓋上培養(yǎng)皿蓋，靜置I小時進行修飾；修飾完成后將石英玻片分開，依次放置于染色架上；加入200ml乙醇超聲清洗I小時，再在200ml甲醇中超聲清洗I小時，最后在200ml乙醇中超聲清洗I小時；通風(fēng)櫥內(nèi)氮氣吹干石英玻片，并將石英玻片裝入培養(yǎng)皿中；
[0039]取IOg (可以用在20個石英玻片上)0，0' -二(2-氨基丙基)聚丙二醇-嵌段-聚乙二醇-嵌段-聚丙二醇(JEFFAMINE ED-2003，Sigma，德國)，在98°C環(huán)境下融化；取600 μ I融化的JEFFAMINE ED-2003加在石英玻片上，再取另一塊玻片將已經(jīng)修飾好的一面朝下覆蓋在該石英玻片上；在培養(yǎng)皿中滴加幾滴水保持濕潤環(huán)境，蓋上培養(yǎng)皿蓋，在98°C的烘箱內(nèi)過夜；
[0040]將過夜的石英玻片取出放入染色缸中，用200ml去離子水超聲清洗15分鐘，再用去離子水清洗5次，氮氣吹干；此時石英玻片可以室溫下保存在充好氮氣的干燥器中；
[0041](3)石英玻片表面活化；
[0042]用電子天平在放有磁力攪拌子的干凈的稱量瓶中稱取160mg的N，K - 二琥珀酰亞胺基碳酸酯(DSC)，清零天平，再稱取8mg 二甲氨基吡啶(DMAP);用移液槍先后量取250 μ I的三乙基胺及3.2ml無水二甲基甲酰胺(DMF)并加在稱量瓶中；迅速將瓶口用封口膜封好，置于磁力攪拌器上，磁力攪拌10分鐘，至溶液顯示粉紅色即可；取若干個培養(yǎng)皿，每個培養(yǎng)皿中放置兩個支架，再將經(jīng)表面修飾后的石英玻片放置在支架上面，有數(shù)字標(biāo)記的一面朝上，用移液槍取600 μ I上述粉紅色溶液置于石英玻片上，并取另一經(jīng)表面修飾后的石英玻片(有數(shù)字標(biāo)記的一面朝下)覆蓋在該石英玻片上，蓋上培養(yǎng)皿蓋靜置4小時進行活化；活化過程完畢后將玻片分開，加入200ml甲醇超聲清洗15分鐘，清洗兩次，最后在通風(fēng)櫥內(nèi)用氮氣吹干；
[0043]所述DSC、DMAP、三乙基胺及DMF的混合液不能含水，混合液呈粉紅色則證明無水，符合要求，否則該混合液需重新配制；
[0044](4)抗體固定；
[0045]取出毒死蜱抗體20 μ 1，解凍30分鐘；將離心管蓋子放入分析天平中，稱取0.0Olg的Pluronic F-127，并倒入離心管中；再稱取2g海藻糖(Trehalose)置于稱量紙上，將稱量好的粉末倒入上述離心管中；向離心管中加入IOml的pH值為7.6的PBS緩沖液，充分混勻；取以上混合液20μ I與20μ I抗體溶液混勻；再取若干個培養(yǎng)皿，每個培養(yǎng)皿中放置兩個支架，再將石英玻片放置在支架上面，有數(shù)字標(biāo)記的一面朝上，用移液槍進行抗體點樣，以圖1、圖2為例，每個石英玻片上分開點4次(Ν=4)，每次2 μ 1，其中遠離標(biāo)記的點作為參比點C，其余三個點作為待測點B ;四個點距中心的孔D的距離相等；在培養(yǎng)皿中滴加I滴水保持濕潤環(huán)境，蓋上培養(yǎng)皿蓋，過夜；；
[0046]所述的Pluronic F-127其作用為防止抗體間相互吸附；
[0047]所述的Trehalose其作用為防止液體蒸發(fā)，保持抗體活性；
[0048]所述的Pluronic F-127質(zhì)量與PBS緩沖液質(zhì)量的比值為0.01%, Trehalose質(zhì)量與PBS緩沖液質(zhì)量的比值為20%，PBS緩沖液的密度可記為lg/ml ；
[0049]所述的混合液與抗體溶液，無論抗體有沒有稀釋過，混合比例均為1:1;
[0050](5)石英玻片表面多余位點封閉；
[0051]稱取3g酪蛋白(Casein)，量取150ml PBS溶液配制2%的Casein/PBS溶液，加熱混勻至完全溶解(溫度可以選擇為50°C)，恢復(fù)至室溫；取若干50ml規(guī)格離心管，依次將石英玻片放入其中，每個離心管內(nèi)一片，加入50ml以上Casein/PBS溶液，振蕩混勻1.5分鐘，取出放置在染色缸中；染色缸中加入2%的Casein/PBS溶液，振蕩4小時；然后加入200ml去離子水，清洗2次，加入200ml PBS溶液清洗I次，并在含l%NaN3的PBS溶液中保存(溫度為4°C)；
[0052](6)固定毒死蜱；
[0053]取出已封閉好的石英玻片，有數(shù)字標(biāo)記的一面朝上放置于培養(yǎng)皿中；取已解凍的Img毒死蜱標(biāo)樣，溶解在PBS緩沖液中，稀釋成不同待測濃度，將不同濃度的待測溶液分別放置在不同石英玻片的待測點上，在培養(yǎng)皿中滴加I滴水保持濕潤環(huán)境，蓋上培養(yǎng)皿蓋，孵育I小時后清洗用氮氣吹干；
[0054](7)采集石英玻片上待測點與參比點的太赫茲時域波譜；
[0055]將石英玻片的上的孔與電機E相連并固定；打開太赫茲時域波譜系統(tǒng)的太赫茲波發(fā)生器、電腦、鎖相放大器以及氮氣閥門(太赫茲時域波譜系統(tǒng)自帶有氮氣的供氣管路)，此時太赫茲時域波譜系統(tǒng)的檢測內(nèi)腔開始充進氮氣，濕度下降，預(yù)熱半小時后方可進行測量;
[0056]隨后打開太赫茲時域波譜系統(tǒng)的檢測內(nèi)腔的蓋子，并將石英玻片及電機放入檢測內(nèi)腔中，其中石英玻片在太赫茲波光路中；在充氮氣的情況下，電機帶動石英玻片旋轉(zhuǎn)，在太赫茲時域波譜系統(tǒng)的波譜頻寬為0.1-3.5THz區(qū)間分別采集同一石英玻片待測點與參比點的太赫茲時域波譜；其中測量環(huán)境濕度要求〈0.2%，溫度為室溫；用以上方法逐個測量樣本的太赫茲透射時域波譜并保存，獲得所有石英玻樣片本各自獨立的波譜數(shù)據(jù)組；
[0057]電機配備有電機控制器，能夠?qū)﹄姍C進行控制，進而控制石英玻片進行精確地旋轉(zhuǎn)；通過旋轉(zhuǎn)電機，不同的與中心相同距離的檢測點可以接受檢測；在太赫茲波譜檢測中，每次樣品測完后開啟時域波譜系統(tǒng)會導(dǎo)致部分氮氣逃逸，并且更換樣品也需要一定的時間；使用電機可以減少開啟太赫茲時域波譜系統(tǒng)的次數(shù)，實現(xiàn)多位點檢測的同時節(jié)約了時間，提聞了檢測效率；
[0058](8)比較石英玻片待測點與參比點的太赫茲時域波譜；
[0059]用繪圖軟件在同一圖中逐個畫出各個樣品上待測點與參比點太赫茲時域波譜圖形，若待測點的最高峰峰值小于參比點脈沖峰峰值的X值(X值根據(jù)需要確定，優(yōu)選90%)，表明該石英玻片上待測點上有毒死蜱；若待測點的最高峰峰值占參比點脈沖峰峰值的X值及以上(X值根據(jù)需要確定，優(yōu)選90%)，表明該石英玻片不含毒死蜱或毒死蜱濃度過低無法檢測出；
[0060]所述的繪圖軟件可選擇origin,但不限于此。
[0061]所述的N值為2?12，但N的值可以是無窮多個。
[0062]所述步驟(8)中待測點時域譜的最高峰峰值與參比點最高峰峰值的90%相比較，這僅為一個參考的標(biāo)準，具體實施過程中可以變動。
[0063]本發(fā)明還提供一種太赫茲波譜結(jié)合生物傳感技術(shù)的毒死蜱檢測裝置，包括太赫茲時域波譜系統(tǒng)、安裝在該太赫茲時域波譜系統(tǒng)的檢測內(nèi)腔中的電機E以及水平固定在電機轉(zhuǎn)軸上的石英玻片A ;石英玻片上通過抗體點樣形成至少一個待測點B以及至少一個參比點C，石英玻片的上側(cè)為太赫茲時域波譜系統(tǒng)的太赫茲波發(fā)生器F，石英玻片的下側(cè)為太赫茲時域波譜系統(tǒng)的檢測器G。
[0064]所述電機配有電機控制器(外購獲得)，電機的轉(zhuǎn)軸設(shè)置在石英玻片中心位置的孔D內(nèi)，并與石英玻片垂直，各待測點B與轉(zhuǎn)軸之間的距離等于參比點C與轉(zhuǎn)軸之間的距離。在安裝過程中，可以先確定石英玻片的初始位置，然后電機控制器控制電機每隔一段時間轉(zhuǎn)動一定角度，將石英玻片上的待測點和參比點依次送到太赫茲波發(fā)生器和檢測器之間等待檢測，當(dāng)待測點或參比點到達準確的位置后，可以啟動太赫茲時域波譜系統(tǒng)進行檢測。檢測完成后，打開檢測內(nèi)腔的蓋子，取出電機和石英玻片，在電機上更換新的石英玻片后，再將電機和新的石英玻片整體裝入檢測內(nèi)腔中，進行下一次的檢測。
[0065]上述【具體實施方式】用來解釋說明本發(fā)明，而不是對本發(fā)明進行限制，在本發(fā)明的精神和權(quán)利要求的保護范圍內(nèi)，對本發(fā)明做出的任何修改和改變，都落入本發(fā)明的保護范圍。
【權(quán)利要求】
1.太赫茲波譜結(jié)合生物傳感技術(shù)的毒死蜱檢測方法，包括以下步驟:(1)石英玻片(A)清洗；(2)石英玻片表面修飾；(3)石英玻片表面活化；其特征在于:該檢測方法還包括以下步驟: (4)抗體固定； 取Pluronic F-127、海藻糖，并用PBS緩沖液溶解，取溶解后的混合溶液與抗體溶液混勻，在經(jīng)過表面活化的石英玻片的標(biāo)記面(H)上抗體點樣N次，分別是N-1個待測點(B)與一個參比點(C)，保持濕潤環(huán)境并過夜； (5)石英玻片表面多余位點封閉； 配制酪蛋白/PBS溶液，充分溶解，在離心管中加入經(jīng)過抗體固定的石英玻片和上述酪蛋白/PBS溶液混勻并靜置；之后依次取出石英玻片，先后用去離子水、PBS緩沖液清洗石英玻片，最后在NaN3/PBS緩沖液中保存； (6)固定毒死蜱； 將毒死蜱溶解在PBS緩沖液中，稀釋成不同待測濃度，并將待測毒死蜱溶液滴加在已封閉好的石英玻片上的待測點，濕潤環(huán)境下孵育，之后清洗并用氮氣吹干； (7)采集石英玻片上待測點與參比點的太赫茲時域波譜； 將石英玻片與電機(E)固定，通過旋轉(zhuǎn)電機，利用太赫茲時域波譜系統(tǒng)分別采集同一石英玻片上待測點與參比點的太赫茲時域波譜； (8)比較石英玻片待測點與參比點的太赫茲時域波譜； 畫出樣品上待測點與參比點的太赫茲時域波譜圖形，若待測點時域譜的最高峰峰值小于參比點最高峰峰值的X值，表明該石英玻片上待測點上有毒死蜱；若待測點時域譜的最高峰峰值占參比點最高峰峰值的X值及以上，表明該石英玻片不含毒死蜱或毒死蜱濃度過低無法檢測出。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的太赫茲波譜結(jié)合生物傳感技術(shù)的毒死蜱檢測方法，其特征在于所述步驟(1)包括:在石英玻片的一面上做標(biāo)記，并在石英玻片中心打一個孔(D)，先后使用去離子水、Hellmanex II溶液、去離子水、濃鹽酸/甲醇溶液、去離子水、濃硫酸和去離子水清洗，并用氮氣吹干。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的太赫茲波譜結(jié)合生物傳感技術(shù)的毒死蜱檢測方法，其特征在于所述步驟(2)包括:取3-縮水甘油醚氧基丙基三甲氧基硅烷置于經(jīng)過清洗的石英玻片的標(biāo)記面上，取另一經(jīng)過清洗且標(biāo)記面朝下的石英玻片蓋上，在濕潤環(huán)境下修飾后分開石英玻片，之后用乙醇、甲醇、乙醇超聲清洗石英玻片，氮氣吹干；在石英玻片加熔融的0,0' -二(2-氨基丙基)聚丙二醇-嵌段-聚乙二醇-嵌段-聚丙二醇，烘箱內(nèi)過夜后用去離子水清洗并烘干保存。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的太赫茲波譜結(jié)合生物傳感技術(shù)的毒死蜱檢測方法，其特征在于所述步驟(3)包括:稱取N，N' -二琥珀酰亞胺基碳酸酯、二甲氨基吡啶，量取三乙基胺及無水二甲基甲酰胺，配置上述物質(zhì)的混合液；取上述混合液置于經(jīng)過表面修飾的石英玻片的標(biāo)記面上，取另一經(jīng)過表面修飾且標(biāo)記面朝下的石英玻片蓋上，活化后分開石英玻片，用甲醇超聲清洗并用氮氣吹干。
5.根據(jù)權(quán)利要求1~4任一項所述的太赫茲波譜結(jié)合生物傳感技術(shù)的毒死蜱檢測方法，其特征在于所述步驟(1)、(2)、(3)、(5)中石英玻片的清洗均在染色缸和染色架中進行；所述步驟(3)中混合液為粉紅色。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的太赫茲波譜結(jié)合生物傳感技術(shù)的毒死蜱檢測方法，其特征在于所述X值為90%。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的太赫茲波譜結(jié)合生物傳感技術(shù)的毒死蜱檢測方法，其特征在于所述步驟(4)中Pluronic F-127質(zhì)量與PBS緩沖液質(zhì)量的比值為0.01%，海藻糖質(zhì)量與PBS緩沖液質(zhì)量的比值為20%，混合液與抗體溶液的混合比例均為1:1。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的太赫茲波譜結(jié)合生物傳感技術(shù)的毒死蜱檢測方法，其特征在于所述太赫茲時域波譜系統(tǒng)，在充氮氣的情況下采集樣本的太赫茲時域波譜；測量環(huán)境濕度要求〈0.2%。
9.太赫茲波譜結(jié)合生物傳感技術(shù)的毒死蜱檢測裝置，其特征在于:所述檢測裝置包括太赫茲時域波譜系統(tǒng)、安裝在該太赫茲時域波譜系統(tǒng)的檢測內(nèi)腔中的電機以及水平固定在電機轉(zhuǎn)軸上的石英玻片；石英玻片上通過抗體點樣形成至少一個待測點(B)以及至少一個參比點(C)，石英玻片的一側(cè)為太赫茲時域波譜系統(tǒng)的太赫茲波發(fā)生器(F)，石英玻片的另一側(cè)為太赫茲時域波譜系統(tǒng)的檢測器(G)。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的太赫茲波譜結(jié)合生物傳感技術(shù)的毒死蜱檢測裝置，其特征在于:所述電機配有電機控制器，電機的轉(zhuǎn)軸設(shè)置在石英玻片的中心位置并與石英玻片垂直，各待測點與轉(zhuǎn)軸之間的距離等于參比點與轉(zhuǎn)軸之間的距離。
【文檔編號】G01N21/3577GK103558178SQ201310513428
【公開日】2014年2月5日 申請日期:2013年10月25日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月25日
【發(fā)明者】應(yīng)義斌, 徐文道, 謝麗娟, 劉湘江 申請人:浙江大學(xué)