一種檢測Anti-IgG濃度的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種檢測Anti-IgG濃度的方法。以3,5-二溴水楊醛縮二乙烯三胺雙席夫堿鎳配合物為電活性物質(zhì)，通過涂滴法制備Anti-IgG電化學(xué)免疫傳感器，Anti-IgG濃度在0.01~260μg/L范圍內(nèi)與還原峰電流具有良好的線性關(guān)系，求得線性回歸方程y（μA）=154.3-0.353c(μg/L),R=0.993，據(jù)此利用循環(huán)伏安方法，測定Anti-IgG濃度。本發(fā)明的檢測方法具有操作簡單、分析快速、靈敏度高、體系穩(wěn)定和重現(xiàn)性好等優(yōu)點(diǎn)。
【專利說明】—種檢測Ant 1-1 gG濃度的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種利用電化學(xué)免疫傳感器快速檢測Ant1-1gG濃度的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]IgG是機(jī)體抗感染免疫的主力抗體，在結(jié)合補(bǔ)體、增強(qiáng)免疫細(xì)胞吞噬病原微生物和 中和細(xì)菌毒素的能力方面，具有重要作用，能有效地抗感染。因此發(fā)展快速可靠的檢測IgG 含量的方法是急需解決的問題。席夫堿化合物用于分析測試已有許多報(bào)道，但是雙席夫堿 做為電活性物質(zhì)在分析化學(xué)中的應(yīng)用研究則相對(duì)地較少，考慮到雙席夫堿配合物中較多的 配位點(diǎn)，有望成為良好的修飾電極中配合物修飾劑。利用石墨烯和氧化石墨烯獨(dú)特的電學(xué) 性質(zhì)與一些材料進(jìn)行修飾以及制備性能更好的復(fù)合新材料是當(dāng)前的研究熱點(diǎn)，采用石墨烯 和氧化石墨烯與一些材料進(jìn)行復(fù)合，復(fù)合后具有很好的導(dǎo)電性及生物相容性，在化學(xué)傳感 器的制備及應(yīng)用中有著廣泛的前景。本發(fā)明制備了 3，5-二溴水楊醛雙席夫堿鎳配合物， 將此雙席夫堿鎳配合物與氧化石墨烯結(jié)合研制了電化學(xué)免疫傳感器，利用循環(huán)伏安法和交 流阻抗法對(duì)免疫傳感器制備過程進(jìn)行電化學(xué)性表征，結(jié)果表明該傳感器適合檢測Ant1-1gG 濃度。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的是提供一種用電化學(xué)免疫傳感器快速檢測Ant1-1gG濃度的方法。
[0004]本發(fā)明方法檢測Ant1-1gG濃度的原理:以3，5_ 二溴水楊醛縮二乙烯三胺雙席夫 堿鎳配合物為電活性物質(zhì)，通過涂滴法制備Ant1-1gG電化學(xué)免疫傳感器，Ant1-1gG濃度在
0.0f260呢/1范圍內(nèi)與還原峰電流具有良好的線性關(guān)系，求得線性回歸方程，據(jù)此利用循 環(huán)伏安方法，測定Ant1-1gG濃度。
[0005]具體步驟為:
(I)制備3，5- 二溴水楊醛席夫堿鎳配合物-氧化石墨烯電化學(xué)免疫傳感器
a.取10毫克氧化石墨烯和0.05毫摩爾3，5- 二溴水楊醛席夫堿鎳配合物溶于DMF即 N，N- 二甲基甲酰胺中，超聲分散2小時(shí)制得3，5- 二溴水楊醛席夫堿鎳配合物-氧化石墨烯 懸浮液。
[0006]b.將金電極在放有Al2O3粉末的麂皮上拋光后用二次水淋洗，再依次在無水乙醇 和二次水中分別超聲清洗3分鐘，紅外烘干，然后在金電極上滴加步驟(I)第a步制得的 3，5- 二溴水楊醛席夫堿鎳配合物-氧化石墨烯懸浮液，經(jīng)紅外烘干，制得3，5- 二溴水楊醛 席夫堿鎳配合物-氧化石墨烯修飾金電極，記為LI電極。
[0007]c.滴加10微升濃度為1.0毫克/毫升的EDAC即1- (3_ 二甲氨基丙烷)_3_乙 基碳二亞胺與NHS即羥基琥珀酰亞胺的混合溶液到步驟(I)第b步制得的LI電極上，水平 放置2小時(shí)，得到活化的3，5- 二溴水楊醛席夫堿鎳配合物-氧化石墨烯修飾金電極，記為 L2電極，置于4°C的冰箱中保存待用。
[0008]d.用10微升濃度為1.0毫克/毫升的h-1gG溶液滴涂在步驟(I)第c步制得的L2電極上，制得固定了 h-1gG的3，5- 二溴水楊醛席夫堿鎳配合物-氧化石墨烯修飾金電極，記為L3電極，置于4°C的冰箱中保存待用。
[0009]e.在步驟⑴第d步制得的L3電極表面滴加10微升濃度為I毫克/毫升的BSA 即牛血清白蛋白溶液，對(duì)L3電極表面的活性位點(diǎn)進(jìn)行封閉，紅外烘干，記為L4電極，置于 4°C的冰箱中保存待用，L4電極即為3，5- 二溴水楊醛席夫堿鎳配合物-氧化石墨烯電化學(xué)免疫傳感器。
[0010](2)取5只步驟⑴制得的3，5- 二溴水楊醛席夫堿鎳配合物-氧化石墨烯電化學(xué)免疫傳感器，在室溫下，分別滴涂不同濃度的Ant1-1gG進(jìn)行特異性結(jié)合，所滴涂的 Ant1-1gG的質(zhì)量與固定在3，5- 二溴水楊醛席夫堿鎳配合物-氧化石墨烯電化學(xué)免疫傳感器上的h-1gG質(zhì)量比為0~1: 1，用二次水洗滌晾干備用。
[0011](3)以步驟⑵處理過的傳感器為工作電極，并以飽和甘汞電極為參比電極、鉬金電極為輔助電極，在PH值為6.0的PBS緩沖溶液中進(jìn)行循環(huán)伏安掃描，記錄不同濃度 Ant1-1gG的循環(huán)伏安圖中對(duì)應(yīng)的還原峰電流，結(jié)果表明Ant1-1gG濃度在0.0f260微克/ 升的范圍內(nèi)，還原峰電流與Ant1-1gG濃度具有良好的線性關(guān)系，隨著Ant1-1gG濃度增加， 電流逐漸減小，以Ant1-1gG濃度為橫縱標(biāo)，以還原峰電流為縱坐標(biāo)，繪制工作曲線，其線性回歸方程為 y (MA) =154.3-0.353c (l^g/L)，R=0.993，檢出限為 0.006Pg/L (S/N=3)。[0012](4)另取一定量的Ant1-1gG待測溶液，同步驟(3)中的方法測定還原峰電流，再根據(jù)步驟(3)所得的線性回歸方程計(jì)算待測溶液中Ant1-1gG的濃度。
[0013]本發(fā)明方法檢測Ant1-1gG濃度具有操作簡單、分析快速、靈敏度高、體系穩(wěn)定和重現(xiàn)性好的優(yōu)點(diǎn)。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0014]圖1為本發(fā)明實(shí)施例中以Ant1-1gG濃度為橫縱標(biāo)和以還原峰電流為縱坐標(biāo)繪制的工作曲線圖。
【具體實(shí)施方式】
[0015]實(shí)施例:
(I)制備3，5- 二溴水楊醛席夫堿鎳配合物-氧化石墨烯電化學(xué)免疫傳感器
a.取10毫克氧化石墨烯和0.05毫摩爾3，5- 二溴水楊醛席夫堿鎳配合物溶于DMF即 N，N- 二甲基甲酰胺中，超聲分散2小時(shí)制得3，5- 二溴水楊醛席夫堿鎳配合物-氧化石墨烯懸浮液。
[0016]b.將金電極在放有Al2O3粉末的麂皮上拋光后用二次水淋洗，再依次在無水乙醇和二次水中分別超聲清洗3分鐘，紅外烘干，然后在金電極上滴加步驟(1)第a步制得的 3，5- 二溴水楊醛席夫堿鎳配合物-氧化石墨烯懸浮液，經(jīng)紅外烘干，制得3，5- 二溴水楊醛席夫堿鎳配合物-氧化石墨烯修飾金電極，記為LI電極。
[0017]c.滴加10微升濃度為1.0毫克/毫升的EDAC即1- (3_ 二甲氨基丙烷)_3_乙基碳二亞胺與NHS即羥基琥珀酰亞胺的混合溶液到步驟(1)第b步制得的LI電極上，水平放置2小時(shí)，得到活化的3，5- 二溴水楊醛席夫堿鎳配合物-氧化石墨烯修飾金電極，記為 L2電極，置于4°C的冰箱中保存待用。[0018]d.用10微升濃度為1.0毫克/毫升的h-1gG溶液滴涂在步驟(1)第c步制得的 L2電極上，制得固定了 h-1gG的3，5- 二溴水楊醛席夫堿鎳配合物-氧化石墨烯修飾金電極，記為L3電極，置于4°C的冰箱中保存待用。
[0019]e.在步驟⑴第d步制得的L3電極表面滴加10微升濃度為I毫克/毫升的BSA 即牛血清白蛋白溶液，對(duì)L3電極表面的活性位點(diǎn)進(jìn)行封閉，紅外烘干，記為L4電極，置于 4°C的冰箱中保存待用，L4電極即為3，5- 二溴水楊醛席夫堿鎳配合物-氧化石墨烯電化學(xué)免疫傳感器。
[0020](2)取5只步驟(1)制得的3，5- 二溴水楊醛席夫堿鎳配合物-氧化石墨烯電化學(xué)免疫傳感器，在室溫下，分別滴涂10微升濃度分別為I微克/升、37.5微克/升、105微克 /升、175微克/升、260微克/升的Ant1-1gG進(jìn)行特異性結(jié)合，用二次水洗滌晾干備用。
[0021](3)以步驟⑵處理過的傳感器為工作電極，并以飽和甘汞電極為參比電極、鉬金電極為輔助電極，在PH值為6.0的PBS緩沖溶液中進(jìn)行循環(huán)伏安掃描，記錄不同濃度 Ant1-1gG的循環(huán)伏安圖中對(duì)應(yīng)的還原峰電流，結(jié)果表明Ant1-1gG濃度在0.0f260微克/ 升的范圍內(nèi)，還原峰電流與Ant1-1gG濃度具有良好的線性關(guān)系，隨著Ant1-1gG濃度增加， 電流逐漸減小，以Ant1-1gG濃度為橫縱標(biāo)，以還原峰電流為縱坐標(biāo)，繪制工作曲線，其線性回歸方程為 y (MA) =154.3-0.353c (l^g/L)，R=0.993，檢出限為 0.006Pg/L (S/N=3)。
[0022](4)另取一定量的Ant1-1gG待測溶液，同步驟(3)中的方法測定還原峰電流，再根據(jù)步驟(3)所得的線性回歸方程計(jì)算待測溶液中Ant1-1gG的濃度為87.63 5微克/升。
【權(quán)利要求】
1.一種檢測Ant1-1gG濃度的方法，其特征在于具體步驟為:(1)制備3，5-二溴水楊醛席夫堿鎳配合物-氧化石墨烯電化學(xué)免疫傳感器a.取10毫克氧化石墨烯和0.05毫摩爾3，5- 二溴水楊醛席夫堿鎳配合物溶于DMF即 N，N- 二甲基甲酰胺中，超聲分散2小時(shí)制得3，5- 二溴水楊醛席夫堿鎳配合物-氧化石墨烯懸浮液；b.將金電極在放有Al2O3粉末的麂皮上拋光后用二次水淋洗，再依次在無水乙醇和二次水中分別超聲清洗3分鐘，紅外烘干，然后在金電極上滴加步驟(1)第a步制得的3，5-二溴水楊醛席夫堿鎳配合物-氧化石墨烯懸浮液，經(jīng)紅外烘干，制得3，5- 二溴水楊醛席夫堿鎳配合物-氧化石墨烯修飾金電極，記為LI電極；c.滴加10微升濃度為1.0毫克/毫升的EDAC即1- (3- 二甲氨基丙烷)-3-乙基碳二亞胺與NHS即羥基琥珀酰亞胺的混合溶液到步驟(1)第b步制得的LI電極上，水平放置 2小時(shí)，得到活化的3，5- 二溴水楊醛席夫堿鎳配合物-氧化石墨烯修飾金電極，記為L2電極，置于4°C的冰箱中保存待用；d.用10微升濃度為1.0毫克/毫升的h-1gG溶液滴涂在步驟(1)第c步制得的L2電極上，制得固定了 h-1gG的3，5- 二溴水楊醛席夫堿鎳配合物-氧化石墨烯修飾金電極，記為L3電極，置于4°C的冰箱中保存待用；e.在步驟(1)第d步制得的L3電極表面滴加10微升濃度為I毫克/毫升的BSA即牛血清白蛋白溶液，對(duì)L3電極表面的活性位點(diǎn)進(jìn)行封閉，紅外烘干，記為L4電極，置于4°C 的冰箱中保存待用，L4電極即為3，5- 二溴水楊醛席夫堿鎳配合物-氧化石墨烯電化學(xué)免疫傳感器；(2)取5只步驟(1)制得的3，5-二溴水楊醛席夫堿鎳配合物-氧化石墨烯電化學(xué)免疫傳感器，在室溫下，分別滴涂不同濃度的Ant1-1gG進(jìn)行特異性結(jié)合，所滴涂的Ant1-1gG的質(zhì)量與固定在3，5- 二溴水楊醛席夫堿鎳配合物-氧化石墨烯電化學(xué)免疫傳感器上的h-1gG 質(zhì)量比為(Tl:l，用二次水洗滌晾干備用；(3)以步驟⑵處理過的傳感器為工作電極，并以飽和甘汞電極為參比電極、鉬金電極為輔助電極，在PH值為6.0的PBS緩沖溶液中進(jìn)行循環(huán)伏安掃描，記錄不同濃度Ant1-1gG 的循環(huán)伏安圖中對(duì)應(yīng)的還原峰電流，結(jié)果表明Ant1-1gG濃度在0.0f260微克/升的范圍內(nèi)，還原峰電流與Ant1-1gG濃度具有良好的線性關(guān)系，隨著Ant1-1gG濃度增加，電流逐漸減小，以Ant1-1gG濃度為橫縱標(biāo)，以還原峰電流為縱坐標(biāo)，繪制工作曲線，其線性回歸方程為 y (似)=154.3-0.353。(吒/1)，1?=0.993，檢出限為 0.006吒/1 (S/N=3)；(4)另取一定量的Ant1-1gG待測溶液，同步驟(3)中的方法測定還原峰電流，再根據(jù)步驟(3)所得的線性回歸方程計(jì)算待測溶液中Ant1-1gG的濃度。
【文檔編號(hào)】G01N27/48GK103499630SQ201310478363
【公開日】2014年1月8日 申請(qǐng)日期:2013年10月14日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月14日
【發(fā)明者】劉崢, 賴麗燕, 李巍 申請(qǐng)人:桂林理工大學(xué)