一種解吸附方法及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種解吸附方法及其應(yīng)用，本發(fā)明特別涉及的解吸附方法可以排除佐劑吸附對(duì)產(chǎn)品檢驗(yàn)造成的影響，用于吸附劑型產(chǎn)品的檢定，所述方法包括以下步驟：步驟1、用堿溶液溶解含有佐劑的疫苗；步驟2、用含金屬螯合劑的酸性試劑中和上述溶液。
【專利說(shuō)明】一種解吸附方法及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】:
[0001]本發(fā)明涉及一種解吸附方法，用于佐劑吸附劑型產(chǎn)品的解吸附。本發(fā)明特別涉及的解吸附方法可以排除佐劑吸附對(duì)產(chǎn)品檢驗(yàn)造成的影響，用于吸附劑型產(chǎn)品的檢定。
【背景技術(shù)】:
[0002]佐劑可以有效增強(qiáng)抗原的免疫原性，起到減少抗原用量，增強(qiáng)免疫反應(yīng)的作用。鋁佐劑是目前使用最廣的佐劑之一，也是國(guó)內(nèi)目前唯一批準(zhǔn)使用于人體的佐劑，廣泛使用于人用疫苗產(chǎn)品。國(guó)內(nèi)使用的乙型肝炎疫苗、無(wú)細(xì)胞百白破疫苗、吸附破傷風(fēng)疫苗、吸附白喉疫苗等都是含鋁佐劑的吸附疫苗。鋁佐劑也廣泛應(yīng)用于一些新興的疫苗，如目前國(guó)際上銷售額最大的多價(jià)肺炎球菌結(jié)合疫苗就采用磷酸鋁作為佐劑，國(guó)內(nèi)新批準(zhǔn)的戊型肝炎疫苗也是佐劑吸附劑型。
[0003]由于佐劑的存在，一些疫苗質(zhì)量檢定項(xiàng)目的檢測(cè)會(huì)受到干擾，甚至無(wú)法開展。因此，有些本應(yīng)在終產(chǎn)品檢定的項(xiàng)目被前置到半成品或原液中開展，導(dǎo)致產(chǎn)品的最終質(zhì)量控制存在風(fēng)險(xiǎn)。解吸附可以將吸附于佐劑上的抗原游離下來(lái)，用于檢測(cè)和 分 析。Katz (Desorption of porcine parvovirus from aluminum hydroxideadjuvant with subsequent viral immunoassay or hemagglutination assay, VetRes Commun.1987; 11 (I):83-92.)曾采用1.2M的磷酸鉀洗脫氫氧化鋁佐劑吸附的豬細(xì)小病毒抗原，將洗脫液濃縮后對(duì)病毒進(jìn)行檢測(cè)，這種方式是利用磷酸根對(duì)氫氧化鋁佐劑等電點(diǎn)的影響，進(jìn)而影響了對(duì)抗原的吸附(Rinella等.Effect of anions on modelaluminum-adjuvant-containing vaccines.J Colloid Interface Sc1.1995;172:121 -30.)。還有采用表面活性劑進(jìn)行洗脫解吸附的，如采用SDS、Triton X-100等。Sizer等在其專利中，對(duì)上述類似解吸附條件進(jìn)行了深入研究(Assays for adsorbed influenzavaccines, Pub.N0.:US2011/0045457A1)，獲得了較佳的吸附流感疫苗解吸附條件。但以上方法都基于將抗原和佐劑顆粒分開，存在分離不徹底的缺陷，造成對(duì)檢測(cè)結(jié)果的低估，而且方法更適合于氫氧化鋁佐劑?！吨腥A人民共和國(guó)藥典》(2010年版三部)中采用枸櫞酸鈉或碳酸鈉溶解佐劑的方法也只適用于氫氧化鋁佐劑。
[0004]本發(fā)明采用一種全新的方法，以堿溶液將含有佐劑的疫苗溶解，再采用含金屬絡(luò)合劑的酸性化學(xué)試劑中和，被中和溶液不再形成佐劑顆粒，從而不會(huì)對(duì)產(chǎn)品檢定產(chǎn)生影響。本方法尤其適用于含磷酸鋁佐劑的疫苗產(chǎn)品的處理。

【發(fā)明內(nèi)容】
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[0005]本發(fā)明提供一種含有佐劑的疫苗產(chǎn)品的解吸附方法，所述方法包括以下步驟:
[0006]步驟1、用堿溶液溶解含有佐劑的疫苗；
[0007]步驟2、用含金屬螯合劑的酸性試劑中和上述溶液；
[0008]其中步驟I所述堿溶液為堿性物質(zhì)配制的溶液，所述堿性物質(zhì)選自無(wú)機(jī)堿或有機(jī)堿，可以采用一種，也可以是多種堿的混合物。無(wú)機(jī)堿是指堿金屬及堿土金屬的氫氧化物(包括氫氧化銨)，優(yōu)選氫氧化鉀和氫氧化鈉，有機(jī)堿是指分子中含有氨基的有機(jī)化合物，如乙二胺，三乙胺等。所述氫氧化鉀，氫氧化鈉，使用時(shí)配制成0.0OlM?26M的水溶液，優(yōu)選
0.1M?IOM的水溶液。
[0009]所述含有佐劑的疫苗選自含有鋁佐劑的疫苗，如含有磷酸鋁、硫酸鋁、氫氧化鋁、以及含有鋁鹽成分的其它復(fù)合佐劑的疫苗。優(yōu)選含有磷酸鋁佐劑的疫苗，所述疫苗包括人用和獸用疫苗，尤其是人用疫苗。所述疫苗選自:乙型肝炎疫苗、無(wú)細(xì)胞百白破疫苗、吸附破傷風(fēng)疫苗、吸附白喉疫苗、多價(jià)肺炎球菌結(jié)合疫苗、多價(jià)流腦結(jié)合疫苗、b型流感嗜血桿菌結(jié)合疫苗等。
[0010]所述堿溶液的用量是疫苗用量的0.001-100倍。
[0011]所述堿溶液的配制方法如下:
[0012]稱取一定量的堿性物質(zhì)，用適當(dāng)溶劑溶解至特定濃度。
[0013]其中步驟2所述含金屬螯合劑的酸性試劑選自:含有EDTA、檸檬酸、氨基乙酸、氟離子、氯離子的酸溶液，優(yōu)選含有EDTA和檸檬酸的酸溶液，最優(yōu)選的是含有檸檬酸的溶液。
[0014]其中EDTA可以是EDTA或其二鈉鹽，使用時(shí)用酸配制成濃度在IM以下的EDTA或其二鈉鹽的酸溶液。所述含有檸檬酸的溶液是將檸檬酸直接用水或其它含鹽溶液配制成溶液，濃度為0.0OlM?7M，優(yōu)選0.1M?5M。
[0015]所述檸檬酸水溶液的配制方法如下:
[0016]稱取一定量的檸檬酸，用水溶解至特定濃度。
[0017]所述中和是用含金屬螯合劑的酸性試劑中和步驟I得到的用堿溶液溶解的含有佐劑的疫苗溶液，所述中和是調(diào)節(jié)酸堿混合溶液的pH值到6-8。
[0018]本發(fā)明的主要工藝包括以堿溶液溶解含佐劑產(chǎn)品，以含金屬螯合劑的酸性試劑中和產(chǎn)品，使之不再形成佐劑顆粒，將吸附的抗原完全釋放出來(lái)，以開展進(jìn)一步的檢測(cè)。本發(fā)明可應(yīng)用于含佐劑產(chǎn)品的抗原定性、定量以及抗原有效成分的分析。
[0019]本發(fā)明可應(yīng)用于含佐劑產(chǎn)品的鑒別，如吸附類毒素產(chǎn)品的絮狀試驗(yàn)，吸附亞單位疫苗、吸附結(jié)合疫苗的免疫擴(kuò)散試驗(yàn)和(或)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)。本發(fā)明還可應(yīng)用于含佐劑產(chǎn)品的抗原定量，如吸附亞單位疫苗和吸附結(jié)合疫苗的有效抗原成分定量測(cè)定。本發(fā)明還可以應(yīng)用于含佐劑產(chǎn)品的分析，如吸附結(jié)合疫苗的游離多糖、游離蛋白含量分析。本發(fā)明還可以應(yīng)用于其它因佐劑吸附影響而不能測(cè)定項(xiàng)目的檢測(cè)。
[0020]為此，本發(fā)明還包括，含有佐劑疫苗的測(cè)定，所述測(cè)定包括使用本發(fā)明的方法對(duì)疫苗進(jìn)行處理，所述處理，步驟如下:
[0021]步驟1、用堿溶液溶解含有佐劑的疫苗；
[0022]步驟2、用含金屬螯合劑的酸性試劑中和上述溶液；
[0023]用本發(fā)明方法處理過(guò)的pH值在6-8的溶液可進(jìn)一步用現(xiàn)有技術(shù)的方法進(jìn)性測(cè)定，所述測(cè)定包括疫苗標(biāo)準(zhǔn)中所規(guī)定的任何一種項(xiàng)目的檢測(cè)，如產(chǎn)品鑒別，含量測(cè)定，活性測(cè)定
坐寸ο
[0024]用本發(fā)明方法處理過(guò)的疫苗，經(jīng)過(guò)上述測(cè)定所得的數(shù)據(jù)準(zhǔn)確可靠，不會(huì)造成干擾。
[0025]以下通過(guò)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明。
[0026]對(duì)經(jīng)過(guò)本發(fā)明方法處理過(guò)的b型流感嗜血桿菌結(jié)合疫苗和未經(jīng)過(guò)本發(fā)明方法處理過(guò)的b型流感嗜血桿菌結(jié)合疫苗(磷酸鋁吸附劑型)有關(guān)項(xiàng)目進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果如下:
【權(quán)利要求】
1.一種含有佐劑的疫苗產(chǎn)品的解吸附方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟: 步驟1、用堿溶液溶解含有佐劑的疫苗； 步驟2、用含金屬螯合劑的酸性試劑中和上述溶液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其特征在于，其中步驟I所述堿溶液為堿性物質(zhì)配制的溶液，所述堿性物質(zhì)選自無(wú)機(jī)堿或有機(jī)堿，可以采用一種，也可以是多種堿的混合物，無(wú)機(jī)堿是指堿金屬及堿土金屬的氫氧化物，有機(jī)堿是指分子中含有氨基的有機(jī)化合物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其特征在于，其中步驟I所述堿溶液為氫氧化鉀，氫氧化鈉溶液，使用時(shí)配制成0.0OlM?26M的水溶液。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其特征在于，其中步驟I所述堿溶液為氫氧化鉀，氫氧化鈉溶液，使用時(shí)配制成0.1M?IOM的水溶液。
5.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其特征在于，其中所述含有佐劑的疫苗選自含有鋁佐劑的疫苗，如含有磷酸鋁、硫酸鋁、氫氧化鋁、以及含有鋁鹽成分的其它復(fù)合佐劑的疫苗。
6.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其特征在于，其中所述含有佐劑的疫苗選自含有鋁佐劑的疫苗，為含有磷酸鋁佐劑的疫苗。
7.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其特征在于，所述疫苗包括人用和獸用疫苗，尤其是人用疫苗，所述疫苗選自:乙型肝炎疫苗、無(wú)細(xì)胞百白破疫苗、吸附破傷風(fēng)疫苗、吸附白喉疫苗、多價(jià)肺炎球菌結(jié)合疫苗、多價(jià)流腦結(jié)合疫苗、b型流感嗜血桿菌結(jié)合疫苗。
8.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其特征在于，其中步驟2所述含金屬螯合劑的酸性試劑選自:含有EDTA、檸檬酸、氨基乙酸、氟離子、氯離子的酸溶液。
9.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其特征在于，步驟2所述含金屬螯合劑的酸性試劑是檸檬酸溶液，濃度為0.0OlM?7M。
10.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其特征在于，步驟2所述含金屬螯合劑的酸性試劑是檸檬酸溶液，濃度為0.1M?5M。
11.一種含有佐劑疫苗的測(cè)定方法，所述測(cè)定包括使用權(quán)利要求1的方法對(duì)疫苗進(jìn)行處理，所述處理，步驟如下: 步驟1、用堿溶液溶解含有佐劑的疫苗； 步驟2、用含金屬螯合劑的酸性試劑中和上述溶液； 處理過(guò)的PH值在6-8的疫苗溶液，進(jìn)一步用現(xiàn)有技術(shù)的方法進(jìn)性測(cè)定，所述測(cè)定包括疫苗標(biāo)準(zhǔn)中所規(guī)定的任何一種項(xiàng)目的檢測(cè)，包括鑒別，含量測(cè)定。
【文檔編號(hào)】G01N1/34GK103471902SQ201310432106
【公開日】2013年12月25日 申請(qǐng)日期:2013年9月22日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月22日
【發(fā)明者】杜琳, 朱衛(wèi)華 申請(qǐng)人:北京智飛綠竹生物制藥有限公司