一種注射用益氣復(fù)脈中糖苷類大分子物質(zhì)的檢測(cè)方法
【專利摘要】本申請(qǐng)公開了一種注射用益氣復(fù)脈(凍干）中糖苷類大分子物質(zhì)的檢測(cè)方法，具體為：采用高效凝膠色譜法及ELSD檢測(cè)器進(jìn)行測(cè)定，即Ultrahydrogel250色譜柱（7.8mmX300mm)并已甲酸-水（1:5000)為流動(dòng)相進(jìn)行檢測(cè)，建立了大分子物質(zhì)(雜質(zhì)）的液相測(cè)定方法，該方法操作簡便、結(jié)果準(zhǔn)備可靠且靈敏度高。
【專利說明】一種注射用益氣復(fù)脈中糖苷類大分子物質(zhì)的檢測(cè)方法

【技術(shù)領(lǐng)域】：
[0001] 本發(fā)明涉及一種中藥組合物的檢測(cè)方法，特別涉及一種注射用益氣復(fù)脈中糖苷類 大分子物質(zhì)的檢測(cè)方法。

【背景技術(shù)】：
[0002] 注射用益氣復(fù)脈(凍干）是由紅參、麥冬、五味子制成的用于靜脈滴注的中藥復(fù)方 制劑，具有益氣復(fù)脈，養(yǎng)陰生津的療效。主要用于冠心病勞累性心絞痛氣陰兩虛證，癥見胸 痹心痛，心悸氣短、倦怠懶言、頭暈?zāi)垦?、面色少華、舌淡、少苔或剝苔，脈細(xì)弱或結(jié)代；冠心 病所致慢性左心功能不全Π 、III級(jí)氣陰兩虛證，癥見心悸、氣短甚則氣急喘促，胸悶隱痛， 時(shí)作時(shí)止，倦怠乏力，面色蒼白，動(dòng)則汗出，舌淡、少苔或剝苔，脈細(xì)弱或結(jié)代。
[0003] 注射用益氣復(fù)脈(凍干)性狀：本品為淺黃色的疏松塊狀物；有引濕性。取1瓶內(nèi)容 物，加水2?3ml溶解后，為棕紅色澄明液體。用法用量：靜脈滴注。每日1次，每次8瓶， 用250ml?500ml5%葡萄糖注射液或生理鹽水稀釋后靜脈滴注。每分鐘約40滴。療程2 周。
[0004] 注射用益氣復(fù)脈(凍干）中主要成分為糖類、皂苷類、木脂素類等；其中主要活性成 分為皂苷類和木脂素類，其分子量大多數(shù)不超過1000。而處方藥材中相對(duì)分子量較大的物 質(zhì)如蛋白質(zhì)、多肽、多糖等在提取和制劑工藝過程中是作為雜質(zhì)而去除的物質(zhì)。成品中不應(yīng) 存在，為保證成品的質(zhì)量，有必要對(duì)這些大分子物質(zhì)進(jìn)行定性和定量的檢測(cè)，本研究正是基 于上述情況，建立了高效凝膠滲透液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)法并對(duì)注射用益氣復(fù)脈（凍 干）中可能存在的大分子量物質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)，此方法簡便、快捷和靈敏，可用于注射用益氣復(fù) 脈（凍干）中大分子物質(zhì)的檢查，具有實(shí)用意義。


【發(fā)明內(nèi)容】
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[0005] 本發(fā)明提供一種注射用益氣復(fù)脈中糖苷類大分子物質(zhì)的檢測(cè)方法，所述方法為用 高效凝膠滲透液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)法對(duì)注射用益氣復(fù)脈樣品進(jìn)行檢測(cè)，其中，進(jìn)樣 檢測(cè)參數(shù)為：
[0006] 色譜柱為Waters Ultrahydrogel?250凝膠色譜柱；柱溫25-35°C ;流動(dòng)相為甲 酸-水1:2500-7500,流動(dòng)相pH值為2-7 ;流速0. 25-0. 75ml · min-1 ;檢測(cè)器：飄移管溫度 85-100°C，氣壓 0· 1-0. 2MPa。
[0007] 其中進(jìn)樣檢測(cè)流動(dòng)相優(yōu)選為甲酸-水1:5000,流速0. 5ml · min'流動(dòng)相pH值為 3 ;檢測(cè)器參數(shù)優(yōu)選：飄移管溫度90°C，氣壓0. 17MPa ;
[0008] 上述注射用益氣復(fù)脈中糖苷類大分子物質(zhì)的檢測(cè)方法，優(yōu)選檢測(cè)參數(shù)為：柱溫 30°C ;流動(dòng)相為甲酸-水1:5000,流動(dòng)相pH值為3 ;流速0.5ml ;檢測(cè)器參數(shù)：飄移 管溫度90°C，氣壓0. 17MPa。
[0009] 上述用高效凝膠滲透液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)法對(duì)注射用益氣復(fù)脈（凍干）樣 品的檢測(cè)方法包括：
[0010] 被檢測(cè)樣品的配制，方法如下：
[0011] 取注射用益氣復(fù)脈（凍干）用超純水配制成濃度約為50-200mg · ml/1的溶液，搖 勻，經(jīng)0. 25-0. 65 μ m微孔濾膜過濾，得到被檢測(cè)樣品。
[0012] 進(jìn)樣檢測(cè)，方法如下：
[0013] 取續(xù)濾液，注入色譜儀，進(jìn)樣量10-40 μ L，
[0014] 所述色譜儀的色譜條件如下：
[0015] 色譜柱為 Waters Ultrahydrogel?250 凝膠色譜柱（7. 8X300mm);
[0016] 柱溫（25-35) °C ;
[0017] 流動(dòng)相為甲酸-水（1:2500-7500),流動(dòng)相pH值為2-7 ;
[0018] 流速 0· 25-0. 75ml · mirT1。
[0019] 檢測(cè)器參數(shù)：飄移管溫度85-KKTC，氣壓0. 1-0. 2MPa ;進(jìn)樣量10-40μ L。
[0020] 保留時(shí)間大于16min的均為小分子量物質(zhì)，保留時(shí)間在16min內(nèi)的為大分子物質(zhì)。
[0021] 本發(fā)明最優(yōu)選的技術(shù)方案如下：
[0022] 其中，樣品的配制方法：
[0023] 取1注射用益氣復(fù)脈（凍干）用超純水配制成濃度約為100mg · ml/1的溶液，搖 勻，經(jīng)0. 45 μ m微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，進(jìn)樣20 μ L，
[0024] 色譜條件：
[0025] 色譜柱為 Waters Ultrahydrogel?250 凝膠色譜柱（7. 8X300mm);
[0026] 柱溫 30°C;
[0027] 流動(dòng)相為甲酸-水1:5000,流動(dòng)相pH值為3 ;
[0028] 流速 0· 5ml · mirT1。
[0029] 檢測(cè)器參數(shù)：飄移管溫度90°C，氣壓0. 17MPa ;進(jìn)樣量20 μ L。
[0030] 本發(fā)明的檢測(cè)方法，是經(jīng)過篩選獲得的，篩選過程如下：
[0031] 1儀器和試藥
[0032] Waters2695高效液相色譜儀，Waters2420型蒸發(fā)光散射檢測(cè)器，Waters Ultrahydrogel?250凝膠色譜柱（7. 8 X 300mm ; L d)，XWK-3A空氣泵（天津市華生分析儀器 廠），XS105梅特勒精密電子分析天平(上海梅特勒-托利多儀器上海有限公司）；右旋糖苷 分子量標(biāo)準(zhǔn)品由中國藥品生物制品鑒定所提供(批號(hào)140640-201002相對(duì)分子量分180, 25 00, 4600, 7100, 10000, 21400, 41100, 84400)，
[0033] 注射用益氣復(fù)脈(凍干）由天津天士力之驕藥業(yè)有限公司提供，超純水自制。
[0034] 2方法與結(jié)果
[0035] 2. 1 色譜條件色譜柱為 Waters Ultrahydrogel?250 凝膠色譜柱（7. 8X300mm);柱 溫30°C;流動(dòng)相為甲酸-水；流動(dòng)相PH3流速0. 5ml 檢測(cè)器參數(shù)：飄移管溫度90°C， 氣壓0. 17MPa ;進(jìn)樣量20yL。
[0036] 2. 2分子量標(biāo)記物保留時(shí)間考察精密稱取8份相對(duì)分子量為180, 2500, 4600, 7100 ，10000, 21400, 41100, 84400的右旋糖苷分子量標(biāo)準(zhǔn)品適量，用超純水配制成各約lmg 的溶液，同時(shí)水作空白對(duì)照溶液，按上述色譜方法，分別進(jìn)樣，測(cè)定，圖譜見圖1。圖1是8種 不同分子量右旋糖酐對(duì)照品及空白對(duì)照的HPGPC圖
[0037] 表18種不同分子量右旋糖酐對(duì)照品的保留時(shí)間
[0038]

【權(quán)利要求】
1. 一種注射用益氣復(fù)脈中糖苷類大分子物質(zhì)的檢測(cè)方法，所述方法為用高效凝膠滲透 液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)法對(duì)注射用益氣復(fù)脈樣品進(jìn)行檢測(cè)，其特征在于，進(jìn)樣檢測(cè)參 數(shù)為： 色譜柱為Waters Ultrahydrogel?250凝膠色譜柱； 柱溫 25-35 °C ; 流動(dòng)相為甲酸-水1:2500-7500,流動(dòng)相pH值為2-7 ; 流速 0· 25-0. 75ml · mirT1 ; 檢測(cè)器：飄移管溫度85-KKTC，氣壓0. 1-0. 2MPa。
2. 如權(quán)利要求1的檢測(cè)方法，其特征在于，進(jìn)樣檢測(cè)流動(dòng)相為甲酸-水1:5000,流速 0. 5ml · mirT1、流動(dòng)相 pH 值為 3。
3. 如權(quán)利要求1的檢測(cè)方法，其特征在于，檢測(cè)器參數(shù)：飄移管溫度90°C，氣壓 0·17MPa。
4. 如權(quán)利要求1的檢測(cè)方法，其特征在于，進(jìn)樣檢測(cè)參數(shù)為： 柱溫30°C ; 流動(dòng)相為甲酸-水1:5000,流動(dòng)相pH值為3 ; 流速 〇· 5ml · mirT1 ; 檢測(cè)器參數(shù)：飄移管溫度90°C，氣壓0. 17MPa。
5. 如權(quán)利要求1的檢測(cè)方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟： 用高效凝膠滲透液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)法對(duì)注射用益氣復(fù)脈（凍干）樣品進(jìn)行檢 測(cè)，檢測(cè)方法包括： 被檢測(cè)樣品的配制，方法如下： 取注射用益氣復(fù)脈（凍干）用超純水配制成濃度約為50-200mg ?πιΓ1的溶液，搖勻，經(jīng) 0. 25-0. 65 μ m微孔濾膜過濾，得到被檢測(cè)樣品； 所述色譜儀的色譜條件如下： 色譜柱為 Waters Ultrahydrogel?250 凝膠色譜柱（7. 8X300mm); 柱溫 25-35 °C ; 流動(dòng)相為甲酸-水1:2500-7500,流動(dòng)相pH值為2-7 ; 流速 0· 25-0. 75ml · mirT1 ; 檢測(cè)器參數(shù)：飄移管溫度85-KKTC，氣壓0. 1-0. 2MPa。
6. 如權(quán)利要求5的檢測(cè)方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟： 用高效凝膠滲透液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)法對(duì)注射用益氣復(fù)脈（凍干）樣品進(jìn)行檢 測(cè)，檢測(cè)方法包括： 被檢測(cè)樣品的配制，方法如下： 取注射用益氣復(fù)脈（凍干）用超純水配制成濃度約為l〇〇mg · ml/1的溶液，搖勻，經(jīng) 0. 45 μ m微孔濾膜過濾，得到被檢測(cè)樣品； 所述色譜儀的色譜條件如下： 色譜柱為Waters Ultrahydrogel?250凝膠色譜柱； 柱溫30°C ; 流動(dòng)相為甲酸-水1:5000,流動(dòng)相pH值為3 ; 流速 〇· 5ml · min-1 ; 檢測(cè)器參數(shù)：飄移管溫度90°C，氣壓0. 17MPa。
【文檔編號(hào)】G01N30/26GK104215703SQ201310219306
【公開日】2014年12月17日 申請(qǐng)日期:2013年6月4日 優(yōu)先權(quán)日:2013年6月4日
【發(fā)明者】葉正良, 彭菲, 李德坤, 周大錚 申請(qǐng)人:天津天士力之驕藥業(yè)有限公司