用于形成和檢測斑塊的斑塊陣列方法和組合物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供用于體外形成斑塊顆粒陣列的方法和組合物，以用于生物學(xué)試驗、診斷、藥物發(fā)現(xiàn)和藥物開發(fā)。更具體地，本文所描述的實施方式涉及當(dāng)用生物流體處理時斑塊顆粒的體外合成，以及通過多種檢測系統(tǒng)識別這些斑塊顆粒。特別地，所產(chǎn)生的體外斑塊顆粒類似于動脈粥樣硬化斑塊和淀粉樣斑塊。所描述的斑塊實施方式可被用來實現(xiàn)快速、靈敏和/或有效的藥物發(fā)現(xiàn)、醫(yī)學(xué)診斷和患者分類。
【專利說明】用于形成和檢測斑塊的斑塊陣列方法和組合物
發(fā)明領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明描述的方法和組合物能夠?qū)崿F(xiàn)斑塊相關(guān)疾病的快速、靈敏和/或有效的體外診斷、能夠作為生物技術(shù)工具、以及用于藥物發(fā)現(xiàn)和開發(fā)。
[0002]背景
動脈粥樣硬化是由動脈中動脈粥樣硬化斑塊的聚集和發(fā)展引起的一種復(fù)雜的、進(jìn)行性和慢性的炎癥性心血管疾病(LippyP ei a7 2011)。根據(jù)美國心臟協(xié)會，約有4千萬美國人被認(rèn)為患有無顯著臨床癥狀的動脈粥樣硬化，僅6百萬人是有癥狀的。許多分析方法和工具被用來診斷有癥狀和無癥狀的動脈粥樣硬化對象(Naghavi etal, 2003).。
[0003]表1.通常用于診斷動脈粥樣硬化的分析工具/方法
【權(quán)利要求】
1.一種檢測對象中的斑塊顆粒形成的方法，所述方法包括: a.在體外制備至少一個斑塊聚集體或自行形成的斑塊顆粒，其中所述斑塊聚集體或自行形成的斑塊顆粒連接有可檢測的標(biāo)記物； b.將來自所述對象的生物學(xué)樣品與所述至少一個斑塊聚集體或自行形成的斑塊顆粒接觸；以及 c.在步驟b之后，使用裝置來檢測所述可檢測的標(biāo)記物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述生物學(xué)樣品是生物學(xué)流體。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中所述生物學(xué)流體選自血液、血漿、血清、腦脊液、尿液和唾液。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中步驟b所述的接觸導(dǎo)致向所述至少一個斑塊聚集體或自行形成的斑塊顆粒中加入了成分，因而形成了至少一個斑塊顆粒。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其中所形成的所述至少一個斑塊顆粒被與多個自行形成的斑塊顆粒進(jìn)行比較。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中如果所述至少一個斑塊顆粒實質(zhì)上類似于所述多個自行形成的斑塊顆粒中的一個自行形成的斑塊顆粒，那么所述對象被識別為患有或有風(fēng)險患有斑塊相關(guān)疾病。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其中所述斑塊相關(guān)疾病是動脈粥樣硬化或淀粉樣變性。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中使用了所述至少一個斑塊聚集體或多個斑塊聚集體。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述標(biāo)記物是熒光標(biāo)記物或發(fā)光標(biāo)記物或染料。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述裝置是流式細(xì)胞儀或熒光檢測器或亮光檢測器或色度儀。
11.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述對象患有、有風(fēng)險患有、或被懷疑患有，動脈粥樣硬化或包括艾爾茲海默癥在內(nèi)的淀粉樣變性。
12.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述至少一個斑塊聚集體或自行形成的斑塊顆粒包含一種或多種以下物質(zhì):蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)衍生物、膽固醇、膽固醇衍生物、脂質(zhì)、脂質(zhì)衍生物、Abeta-42、Abeta衍生物、突觸核蛋白、朊蛋白、淀粉不溶素、Tau蛋白、磷脂質(zhì)、膽固醇晶體、血清淀粉樣蛋白Α、β微球蛋白、溶菌酶、胰島素、或超氧化物歧化酶、和磷酸鈣(CP)。
13.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，所述方法進(jìn)一步包括使用以產(chǎn)生熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)的不同熒光團(tuán)標(biāo)記的多個斑塊聚集體或一對斑塊聚集體，或以產(chǎn)生熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)的不同熒光團(tuán)標(biāo)記的多個自行形成的斑塊顆?；蛞粚ψ孕行纬傻陌邏K顆粒，來篩選生物學(xué)樣品。
14.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，所述方法進(jìn)一步包括通過在不同時間點重復(fù)步驟a到c來監(jiān)測所述對象。
15.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其中所述斑塊顆粒類似于與以下疾病相關(guān)的斑塊:動脈粥樣硬化、艾爾茲海默癥、孤獨癥、帕金森癥、多發(fā)性硬化、骨關(guān)節(jié)炎、瘋牛病海綿狀組織、II型糖尿病、癡呆、全身性淀粉樣變性、透析相關(guān)淀粉樣變性、溶菌酶淀粉樣變性、胰島素相關(guān)性淀粉樣變性、和/或肌萎縮性脊髓側(cè)索硬化癥。
16.—種檢測對象中斑塊顆粒形成的方法，所述方法包括: a.制備至少一個斑塊聚集體或自行形成的斑塊顆粒； b.將來自所述對象的生物學(xué)樣品與所述至少一個斑塊顆?；蜃孕行纬傻陌邏K顆粒接觸； c.將步驟b的產(chǎn)物與可檢測標(biāo)記物接觸或與連有抗體的可檢測標(biāo)記物接觸；以及 d.在步驟C之后，使用裝置來檢測所述可檢測的標(biāo)記物。
17.—種篩選測試試劑的方法,包括: a.在體外制備至少一個斑塊聚集體或自行形成的斑塊顆粒，其中所述斑塊聚集體或自行形成的斑塊顆粒連接有可檢測的標(biāo)記物； b.將連接至可檢測的標(biāo)記物的所述至少一個斑塊聚集體或自行形成的斑塊顆粒與至少一種測試試劑接觸； c.在步驟b后，使用裝置檢測所述可檢測的標(biāo)記物。
18.—種篩選測試 試劑的方法,包括: a.在體外制備至少一個斑塊聚集體或自行形成的斑塊顆粒，其中所述斑塊聚集體或自行形成的斑塊顆粒連接至可檢測的標(biāo)記物； b.將哺乳動物細(xì)胞與連接至可檢測的標(biāo)記物的斑塊聚集體或自行形成的斑塊顆粒一起培養(yǎng)，其中所述哺乳動物細(xì)胞表現(xiàn)出形態(tài)學(xué)變化、病理學(xué)癥狀、表達(dá)細(xì)胞粘附分子、細(xì)胞因子和或表現(xiàn)出細(xì)胞凋亡、炎癥； c.將所述哺乳動物細(xì)胞與至少一種測試試劑接觸；以及 d.識別出阻止或減輕細(xì)胞中的病理學(xué)癥狀形成或形態(tài)學(xué)變化的測試試劑。
19.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中在用人和其他動物的生物學(xué)流體處理時靶定加速斑塊顆粒形成或斑塊顆粒集合的機制，以用于藥物發(fā)現(xiàn)。
20.一種在對象中識別生物標(biāo)記物的方法，所述方法包括: a.在體外制備至少一個斑塊聚集體或自行形成的斑塊顆粒，其中斑塊聚集體或自行形成的斑塊顆粒連接至可檢測的標(biāo)記物； b.將來自所述對象的生物學(xué)樣品與所述至少一個斑塊聚集體或自行形成的斑塊顆粒接觸；以及 c.在步驟b之后，利用蛋白質(zhì)組學(xué)或質(zhì)樸分析法或類似技術(shù)，從生物學(xué)樣品中識別出促成加速的斑塊顆粒形成的蛋白質(zhì)或抗體或代謝物或物質(zhì)。
21.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其中所述至少一種測試試劑是小分子或蛋白質(zhì)或測試試劑的抗體庫。
22.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其中所述測試試劑的作用在于加速斑塊顆粒的形成。
23.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其中所述至少一種測試試劑的作用在于減少或減慢或破壞斑塊顆粒形成。
24.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，所述方法進(jìn)一步包括利用多種測試試劑識別出阻止或破壞或減少斑塊顆粒形成的測試試劑。
25.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，所述方法進(jìn)一步包括測試一種或多種所述測試試劑在破壞斑塊顆?；驕p少斑塊顆粒形成方面的功效，或進(jìn)一步包括測試所述測試試劑的安全性。
26.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其中所述測試試劑是納米顆?；蛴杉{米顆粒配制而成。
27.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，所述方法進(jìn)一步包括基于斑塊顆粒形成、斑塊顆粒亞型、斑塊顆粒圖像、斑塊顆粒計數(shù)或斑塊顆粒模式來診斷或分類對象。
28.根據(jù)權(quán)利要求25所述的方法，所述方法進(jìn)一步包括在對象中監(jiān)測所述測試試劑的功效。
29.一種方法，包括利用權(quán)利要求1-28的任一項所述的方法篩選血液或血液制品的斑塊顆粒形成。
30.根據(jù)權(quán)利要求29所述的方法，其中所述血液或血液制品在所述篩選或測試后被施用給受體對象，其中陰性結(jié)果是在將所述血液或血液制品與斑塊聚集體或自行形成的斑塊顆粒接觸后發(fā)現(xiàn)很少或沒有發(fā)現(xiàn)新的斑塊。
【文檔編號】G01N33/52GK103998930SQ201280062811
【公開日】2014年8月20日 申請日期:2012年11月21日 優(yōu)先權(quán)日:2011年12月2日
【發(fā)明者】山姆嘉偉·馬達(dá)薩米 申請人:普拉希京公司