通過質(zhì)譜測定法檢測反式三碘甲狀腺原氨酸的方法
【專利摘要】提供了使用質(zhì)譜測定法測定樣品中的反式T3的量的方法。該方法一般地包括電離樣品中的反式T3并且檢測和量化離子的量以測定樣品中反式T3的量。
【專利說明】通過質(zhì)譜測定法檢測反式三碘甲狀腺原氨酸的方法
[0001]相關(guān)申請的交叉引用
[0002]本申請根據(jù)35U.S.C.§ 120要求于2011年12月5日提交的美國申請系列號13/311，412的權(quán)益，該申請的全部內(nèi)容通過引用并入本公開。
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0003]本發(fā)明涉及反式三碘甲狀腺原氨酸的檢測。在具體的方面，本發(fā)明涉及通過質(zhì)譜測定法檢測反式三碘甲狀腺原氨酸的方法。
【背景技術(shù)】
[0004]下面對本發(fā)明背景的描述僅簡單地提供以幫助理解本發(fā)明并且不是承認描述或構(gòu)成本發(fā)明的現(xiàn)有技術(shù)。
[0005]反式三碘甲狀腺原氨酸((2S) -2-氨基-3- [4- (4_羥基_3，5_ 二碘苯氧基)_3_碘苯基]丙酸)(rT3)是三碘甲狀腺原氨酸(T3)的無活性異構(gòu)體。T3和rT3兩者都通過如下脫碘酶的作用來源于甲狀腺素(四碘甲狀腺原氨酸，T4):
[0006]
【權(quán)利要求】
1.一種通過質(zhì)譜測定法測定體液樣品中的反式T3(rT3)的量的方法，所述方法包括: a.電離來自所述體液樣品的rT3以生成可通過質(zhì)譜測定法檢測到的一種或多種反式T3離子； b.通過質(zhì)譜測定法測定所述一種或多種rT3離子的量；以及 c.使用所述rT3離子的量來測定所述體液樣品中的rT3的量， 其中來自所述體液樣品的rT3在電離前不經(jīng)歷固相提取。
2.權(quán)利要求1所述的方法，還包括使來自所述體液樣品的rT3在電離之前經(jīng)歷液相色譜法。
3.權(quán)利要求2所述的方法，其中所述液相色譜法包括高效液相色譜法(HPLC)。
4.權(quán)利要求2所 述的方法，還包括在液相色譜法之前通過蛋白沉淀富集所述體液樣品中的rT3。
5.權(quán)利要 求4所述的方法，其中所述蛋白沉淀包括使所述體液樣品與足以沉淀可能存在于所述樣品中的蛋白的至少一部分的量的甲醇接觸。
6.權(quán)利要求1所述的方法，還包括在電離之前通過蛋白沉淀富集所述體液樣品中的rT3。
7.權(quán)利要求6所述的方法，其中所述蛋白沉淀包括使所述體液樣品與足以沉淀可能存在于所述樣品中的蛋白的至少一部分的量的甲醇接觸。
8.權(quán)利要求1-7中任一項所述的方法，其中可通過質(zhì)譜測定法檢測到的所述一種或多種rT3尚子包括選自質(zhì)/荷比為649.9±0.5、605.2±0.5和127.1±0.5的尚子的一種或多種。
9.權(quán)利要求1-7中任一項所述的方法，其中可通過質(zhì)譜測定法檢測到的所述一種或多種rT3離子包括選自質(zhì)/荷比為649.9±0.5和605.2±0.5的離子的一種或多種。
10.權(quán)利要求1-9中任一項所述的方法，其中所述質(zhì)譜測定法是串聯(lián)質(zhì)譜測定法。
11.權(quán)利要求10所述的方法，其中可通過質(zhì)譜測定法檢測到的所述一種或多種rT3離子包括質(zhì)/荷比為649.9±0.5的前體離子，和選自質(zhì)/荷比為605.2±0.5和127.1±0.5的離子的碎片離子。
12.權(quán)利要求11所述的方法，其中所述碎片離子是質(zhì)/荷比為605.2±0.5的離子。
13.權(quán)利要求1-12中任一項所述的方法，其中所述體液樣品包括血漿或血清。
14.一種通過質(zhì)譜測定法測定體液樣品中的反式T3(rT3)的量的方法，所述方法包括: a.處理體液樣品以生成經(jīng)處理的樣品，所述經(jīng)處理的樣品包含來自所述體液樣品的rT3 ;所述處理包括:a.用有機溶劑沉淀來自所述體液樣品的蛋白，使得得到的上清液包含所述有機溶劑和來自所述體液樣品的rT3 ； i.通過使所 述上清液經(jīng)歷反相高效液相色譜(RP-HPLC)柱來純化所述上清液中的rT3 ;其中所述純化包括在引入所述上清液前將水性溶液引入至所述柱；iii.從所述RP-HPLC柱洗脫rT3以生成包含rT3的經(jīng)處理的樣品； b.電離所述經(jīng)處理的樣品中的rT3以生成可通過質(zhì)譜測定法檢測到的一種或多種反式T3離子； c.通過質(zhì)譜測定法測定一種或多種rT3離子的量；以及d.使用所述rT3離子的量來測定所述體液樣品中的rT3的量。
15.權(quán)利要求14所述的方法，其中經(jīng)歷所述柱的所述上清液體積與之前引入至所述柱的所述水性溶液的比率在約10:1至1:10的范圍內(nèi)。
16.權(quán)利要求14所述的方法，其中經(jīng)歷所述柱的所述上清液體積與之前引入至所述柱的所述水性溶液的比率在約5:1至1:5的范圍內(nèi)。
17.權(quán)利要求14所述的方法，其中經(jīng)歷所述柱的所述上清液體積與就在之前引入至所述柱的所述水性溶液的比率為約1:1。
18.權(quán)利要求14-17中任一項所述的方法，其中所述水性溶液基本上不含有機溶劑。
19.權(quán)利要求14-18中任一項所述的方法，其中來自所述體液樣品的rT3在電離之前不經(jīng)歷固相提取。
20.權(quán)利要求14-19中任一項所述的方法，其中所述有機溶劑包括甲醇。
21.權(quán)利要求20所述的方法，其中所述上清液包括至少10%的甲醇。
22.權(quán)利要求14-21中任一項所述的方法，其中可通過質(zhì)譜測定法檢測到的所述一種或多種rT3尚子包括選自質(zhì)/荷比為649.9±0.5、605.2±0.5和127.1 ±0.5的尚子的一種或多種。
23.權(quán)利要求14-21中任一項所述的方法，其中可通過質(zhì)譜測定法檢測到的所述一種或多種rT3離子包括選 自質(zhì)/荷比為649.9±0.5和605.2±0.5的離子的一種或多種。
24.權(quán)利要求14-23中任一項所述的方法，其中所述質(zhì)譜測定法是串聯(lián)質(zhì)譜測定法。
25.權(quán)利要求24所述的方法，其中可通過質(zhì)譜測定法檢測到的所述一種或多種rT3離子包括質(zhì)/荷比為649.9±0.5的前體離子，和選自質(zhì)/荷比為605.2±0.5和127.1±0.5的離子的碎片離子。
26.權(quán)利要求25所述的方法，其中所述碎片離子是質(zhì)/荷比為605.2±0.5的離子。
27.權(quán)利要求14-26中任一項所述的方法，其中所述體液樣品包括血漿或血清。
【文檔編號】G01N27/62GK104040338SQ201280059697
【公開日】2014年9月10日 申請日期:2012年11月30日 優(yōu)先權(quán)日:2011年12月5日
【發(fā)明者】J·F·班克斯, P·P·周, N·M·馬特 申請人:奎斯特診斷投資公司