具有增強(qiáng)的ms信號的聚糖和其它生物分子的快速熒光標(biāo)記的制作方法
【專利摘要】教導(dǎo)和描述了可用于標(biāo)記生物分子如N-聚糖的包含具有與胺反應(yīng)的活化官能團(tuán)的MS活性的熒光分子的試劑及其用途。
【專利說明】具有增強(qiáng)的MS信號的聚糖和其它生物分子的快速熒光標(biāo)記
[0001]相關(guān)申請的交叉引用
本申請要求美國專利申請N0.61/540, 306的優(yōu)先權(quán)，其并入本文中作為參考。
[0002]關(guān)于聯(lián)邦政府資助的研究或開發(fā)的聲明
無。
[0003]合作研究協(xié)議各方的名稱
無。
[0004]光盤中因引用被并入的遞交材料
無。
[0005]發(fā)明背景
N-聚糖的熒光標(biāo)記有益于檢測聚糖，因?yàn)槠涓倪M(jìn)檢測的靈敏性和選擇性以及聚糖的色譜性能。氨基酸分析是蛋白質(zhì)研究中的基本過程并且在必須監(jiān)測蛋白質(zhì)的糖基化特征以確保治療產(chǎn)品的一致性時對臨床化學(xué)家和制藥商特別重要。在用具有熒光部分的試劑衍生時，只能評估該化合物的官能團(tuán)。然后需要質(zhì)譜法(“MS”)識別特定化合物。
[0006]MS分析在聚糖與氨基酸分析和蛋白質(zhì)組學(xué)方面已經(jīng)達(dá)到高發(fā)展程度。但是，將大多數(shù)胺官能化所需的反應(yīng)時間緩慢?，F(xiàn)有技術(shù)狀況利用(I)快速反應(yīng)并具有良好熒光信號但差MS信號，或(2)極慢反應(yīng)并產(chǎn)生良好MS/熒光信號的標(biāo)記分子。但是，由于熒光檢測是測定在數(shù)量上存在多少的非常有用的工具，MS和熒光檢測的組合是合意的。另一方面，MS用于測定分子構(gòu)成如何。
[0007]因此需要與生物分子快速反應(yīng)并提供強(qiáng)質(zhì)譜和熒光信號的分子。
[0008]發(fā)明概述
在本文中描述了可用于聚糖，如N-連接聚糖和其它生物分子，如蛋白質(zhì)和肽和氨基酸的快速熒光標(biāo)記的MS活性分子。這些MS活性的熒光分子可具有三種功能組分:(a)叔氨基或其它MS活性原子；(b)高熒光部分，和(c)與胺快速反應(yīng)的官能團(tuán)，如異氰酸酯或琥拍酰亞胺基氨基甲酸酯(succidimidylcarbamate)。該反應(yīng)性官能團(tuán)提供所需生物分子的快速標(biāo)記，熒光部分提供強(qiáng)熒光信號。叔氨基取代基提供強(qiáng)MS信號。另一方面，在本文中提供沒有熒光部分的快速標(biāo)記的MS活性化合物。
[0009]本發(fā)明特別涉及如下文即將所示的式I和式II的化合物及其在具有增強(qiáng)的MS信號的聚糖快速熒光標(biāo)記中的用途。
[0010]式1:
【權(quán)利要求】
1.式I的化合物
2.式II的化合物
3.下列結(jié)構(gòu)式的化合物
4.聚糖的快速標(biāo)記方法，其包括如下步驟: 使前體聚糖或前體氨基酸與式I的化合物反應(yīng)
5.聚糖的快速標(biāo)記方法，其包括如下步驟:使前體聚糖或前體氨基酸與式II的化合物反應(yīng)
6.借助液相色譜法和質(zhì)譜法分析含有至少一種聚糖的樣品中的聚糖的方法，其包括通過以適合促進(jìn)標(biāo)記的時間和條件使所述聚糖與根據(jù)權(quán)利要求1、2或3的化合物反應(yīng)而標(biāo)記所述樣品中的聚糖；提供含有用所述化合物標(biāo)記的聚糖的樣品；和對標(biāo)記的化合物施以液相色譜法和質(zhì)譜法。
7.借助液相色譜法和質(zhì)譜法分析含有至少一種聚糖的樣品中的聚糖的方法，其包括通過以適合促進(jìn)標(biāo)記的時間和條件使所述聚糖與根據(jù)式III的化合物反應(yīng)而標(biāo)記所述樣品中的聚糖；提供含有用所述化合物標(biāo)記的聚糖的樣品；和對標(biāo)記的化合物施以液相色譜法和質(zhì)譜法，其中式III的化合物是:
【文檔編號】G01N33/533GK103842818SQ201280047599
【公開日】2014年6月4日 申請日期:2012年9月28日 優(yōu)先權(quán)日:2011年9月28日
【發(fā)明者】D.W.布勞斯米歇, Y.于 申請人:沃特世科技公司