專利名稱：人類免疫缺陷病毒抗體和抗原檢測試劑盒的制作方法
技術領域：
人類免疫缺陷病毒抗體和抗原檢測試劑盒技術領域[0001]本實用新型涉及生物應用技術領域，特別是一種人類免疫缺陷病毒抗體和抗原檢測試劑盒。
背景技術：
[0002]人類免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus,HIV),顧名思義它會造成人類免疫系統(tǒng)的缺陷。1981年，人類免疫缺陷病毒在美國首次發(fā)現(xiàn)。它是一種感染人類免疫系統(tǒng)細胞的慢病毒(Lentivirus)，屬反轉錄病毒的一種。至今無有效療法的致命性傳染病。該病毒破壞人體的免疫能力，導致免疫系統(tǒng)失去抵抗力，從而各種疾病及癌癥得以在人體內生存，發(fā)展到最后，導致艾滋病(獲得性免疫缺陷綜合癥)。[0003]自美國1981年診斷出首例艾滋病患者以來，至2009年全球新增艾滋病感染者260萬人，180萬人死于艾滋病，截止到2009年底，全球共有艾滋病感染者3330萬人。截至2010年10月底，中國累計報告艾滋病病毒感染者和病人37萬余例，其中死亡6.8萬余例。局部地區(qū)和特定人群疫情嚴重，云南、廣西、河南、四川、新疆和廣東6省區(qū)累計報告感染者和病人數(shù)占全國77.1%[0004]人類免疫缺陷病毒有I型和II型，即HIV-1和HIV-2兩種類型，其生物學特征很相似，HIV-1是引起全球艾滋病流行的病原，HIV-2是后來在西非發(fā)現(xiàn)的，最初只在西非流行，現(xiàn)已擴散到世界很多地區(qū)。由于HIV的易變性，目前控制HIV傳播最有效的手段就是盡早發(fā)現(xiàn)病毒攜帶者，盡早隔絕傳染源。[0005]現(xiàn)有檢測HIV的方法有聚合酶鏈式反應、HIV抗體檢測和P24抗原檢測。HIV抗體檢測最常用的試劑為酶聯(lián)免疫試劑盒免疫層析類試劑，一般靈敏度和特異性都很高，最短在HIV感染后十余天即可檢測出來。但由于部分HIV感染在5-8個月才開始出現(xiàn)抗體，世界衛(wèi)生組織將HIV感染的窗口期定為6個月。HIV在窗口期內已經具有傳染性，為了進一步減少窗口期傳染情況的發(fā)生，目前已出現(xiàn)可同時檢測HIV抗體和抗原的方法，能較HIV感染后抗體轉陽前4-7天檢測出HIV感染。HIV感染后最早出現(xiàn)的是P24抗原，然后才出現(xiàn)相應的特異性HIV抗體，隨抗體滴度的升高P24逐漸下降至檢測不出。在病情發(fā)展后期P24抗原在血液中又可檢測出。發(fā)明內容[0006]本實用新型的目的是為了解決上述問題，設計了一種人類免疫缺陷病毒抗體和抗原檢測試劑盒。[0007]實現(xiàn)上述目的本實用新型的技術方案為，一種人類免疫缺陷病毒抗體和抗原檢測試劑盒，包括設有加樣孔和檢測窗的塑卡，塑卡內插裝HIV試紙條，且所述HIV試紙條的結構為底板上粘貼上樣墊、標記物墊、硝酸纖維膜和吸水紙，且標記物墊和吸水紙分別搭接在硝酸纖維素膜的兩端，上樣墊搭接在標記物墊的另一端上，同時硝酸纖維膜上包被有I號檢測線、2號檢測線和3號檢測線及質控線。[0008]所述I號檢測線是由HIVgp41抗原和gpl20抗原包被在硝酸纖維膜上構成的。[0009]所述2號檢測線是由HIV gp36型抗原包被在硝酸纖維膜上構成的。[0010]所述3號檢測線是由HIV P24抗體包被在硝酸纖維膜上構成的。[0011]所述質控線是由羊抗鼠IgG抗體包被在硝酸纖維膜上構成的。[0012]所述標記物墊上標記有HIVgp41抗原、HIVgpl20抗原和HIVgp36抗原以及P24抗體構成的。[0013]利用本實用新型的技術方案制作的人類免疫缺陷病毒抗體和抗原檢測試劑盒，進一步縮短了檢測窗口期，提高檢測靈敏度和特異性，操作簡單、省時、判斷直觀，適用于血清、血漿、全血樣本中HIV病毒抗體和P24抗原的快速檢測。


[0014]圖1是本實用新型所述人類免疫缺陷病毒抗體和抗原檢測試劑盒的結構示意圖；[0015]圖2是本實用新型所述HIV試紙條的結構示意圖；[0016]圖中，1、加樣孔；2、檢測窗；3、塑卡；4、底板；5、上樣墊；6、標記物墊；7、硝酸纖維膜；8、吸水紙；9、1號檢測線；10、2號檢測線；11、3號檢測線；12、質控線。
具體實施方式
[0017]
以下結合附圖對本實用新型進行具體描述，圖1是本實用新型所述人類免疫缺陷病毒抗體和抗原檢測試劑盒的結構示意圖，圖2是本實用新型所述HIV試紙條的結構示意圖，如圖1所示，一種人類免疫缺陷病毒抗體和抗原檢測試劑盒，包括設有加樣孔I和檢測窗2的塑卡3，塑卡內插裝HIV試紙條；如圖2所示，所述HIV試紙條結構為底板4上粘貼上樣墊5、標記物墊6、硝酸纖維膜7和吸水紙8，且標記物墊和吸水紙分別搭接在硝酸纖維素膜的兩端，上樣墊搭接在標記物墊的另一端上，同時硝酸纖維膜上包被有I號檢測線9、2號檢測線10、3號檢測線11和質控線12。其中，所述I號檢測線是由HIVgp41抗原和gpl20抗原包被在硝酸纖維膜上構成的；所述2號檢測線是由HIVgp36型抗原包被在硝酸纖維膜上構成的；所述3號檢測線是由HIVP24抗體包被在硝酸纖維膜上構成的。所述質控線是由羊抗鼠IgG抗體包被在硝酸纖維膜上構成的；所述標記物墊是由無紡布上標記HIVgp41抗原、HIVgpl20抗原和HIVgp36抗原以及P24抗體構成的。[0018]標記物墊的制備:用氯金酸-檸檬酸三鈉還原法制備直徑為40nm的膠體金溶液，制備完成后取IOOml膠體金溶液，用0.2MK2C03將溶液pH調到pH9.0,然后將溶液置于磁力攪拌器上緩慢攪拌，按每IOOml溶液加入0.5mg、l.0mg、l.5mg重組抗原或抗體緩慢滴加到膠體金溶液中，繼續(xù)攪拌I小、時，再加入終濃度為0.2% BSA,0.1%聚乙二醇20000進行封閉30分鐘，12000轉離心30分鐘，棄上清，用膠體金工作液復溶至76.5ml，按Iml溶液鋪16cm2的比例均勻地鋪在無紡布上，再置于溫度20 25°C、濕度小于30%的干燥間干燥2 4小時，制成標記物墊。[0019]HIVgp41抗原和HIVgp 120抗原、HIVgp36抗原和P24抗體的包被:用0.0lMpH9.0CBS 將 HIVgp41 抗原、HIVgpl20 抗原、HIVgp36 抗原分別稀釋成 0.5mg/ml、l.0mg/ml、1.5mg/ml，然后將稀釋后的HIVgp41抗原和HIVgpl20抗原包被液用噴膜儀在硝酸纖維膜上按1.0ul/cm劃線包被，構成I號檢測線；將稀釋后的HIVgp36抗原包被液用噴膜儀在硝酸纖維膜上按1.0ul/cm劃線包被，構成2號檢測線；用0.0lM pH7.2PBS將HIVP24抗體分別稀釋成1.0mg/ml> 1.5mg/ml、2.0mg/ml,然后用噴膜儀將包被液在NC膜上按1.0ul/cm劃線包被，構成3號檢測線，最后包被羊抗鼠IgG抗體在硝酸纖維膜上作為質控線，包被完成后將硝酸纖維膜置于干燥間干燥3 4小時。[0020]HIV試紙條的裝配:在溫度20 25°C、濕度小于30%的干燥室內，取底板，將已包被的硝酸纖維膜放置在底板的中部粘貼，在硝酸纖維膜I號檢測線一側搭接標記物墊，在標記物墊另一側搭接粘貼上樣墊，在硝酸纖維膜質控線一側距邊緣搭接吸樣墊；然后用裁剪機將貼好的底板切成適當寬度的試紙條。[0021]本實用新型在實際檢測時，首先撕開鋁箔袋取出試劑卡平放，取2-3滴樣本滴加至加樣孔中，靜止20-30分鐘觀察結果。若出現(xiàn)兩條紅線，其中一條為質控線，另一條為I號檢測線時，說明待檢樣本中含有HIV-1型抗體；若也出現(xiàn)兩條紅線，其中一條為質控線，另一條為2號檢測線時，說明待檢樣本中含有HIV-2型抗體；若出現(xiàn)兩條紅線，其中一條為質控線，另一條為3號檢測線時，說明待檢樣本中含有P24抗原；若出現(xiàn)三條紅線，即一條為質控線，一條為I號檢測線，另一條為2號檢測線時，說明待檢樣本中既含有HIV-1抗體又有HIV-2抗體；若出現(xiàn)三條紅線，即一條為質控線，一條為I號檢測線，另一條為3號檢測線時，說明待檢樣本中既含有HIV-1抗體又有P24抗原；若出現(xiàn)三條紅線，即一條為質控線，一條為2號檢測線，另一條為3號檢測線時，說明待檢樣本中既含有HIV-2抗體又有P24抗原；若出現(xiàn)四條紅線，即一條為質控線，一條為I號檢測線，一條為2號檢測線，另一條為3號檢測線時，說明待檢樣本中既含有HIV-1抗體又有含有HIV-2抗體和P24抗原；若只出現(xiàn)一條紅色質控線，說明檢樣本無HIV抗體和P24抗原。若無紅色質控線出現(xiàn)。說明實驗無效。本技術領域的技術人員對其中某些部分所可能做出的一些變動均體現(xiàn)了本實用新型的原理，屬于本實用新型的保護范圍之內。[0022]上述技術方案僅體現(xiàn)了本實用新型技術方案的優(yōu)選技術方案，現(xiàn)了本實用新型的原理，屬于本實用新型的保護范圍之內。
權利要求1.一種人類免疫缺陷病毒抗體和抗原檢測試劑盒，包括設有加樣孔(I)和檢測窗(2)的塑卡(3)，其特征在于，塑卡內插裝HIV試紙條，且所述HIV試紙條的結構為底板(4)上粘貼上樣墊(5)、標記物墊￠)、硝酸纖維膜(7)和吸水紙(8)，且標記物墊和吸水紙分別搭接在硝酸纖維素膜的兩端，上樣墊搭接在標記物墊的另一端上，同時硝酸纖維膜上包被有I號檢測線(9)、2號檢測線(10)、3號檢測線(11)和質控線(12)。
2.根據(jù)權利要求1所述的人類免疫缺陷病毒抗體和抗原檢測試劑盒，其特征在于，所述I號檢測線是由HIVgp41抗原和gpl20抗原包被在硝酸纖維膜上構成的。
3.根據(jù)權利要求1所述的人類免疫缺陷病毒抗體和抗原檢測試劑盒，其特征在于，所述2號檢測線是由HIVgp36型抗原包被在硝酸纖維膜上構成的。
4.根據(jù)權利要求1所述的人類免疫缺陷病毒抗體和抗原檢測試劑盒，其特征在于，所述3號檢測線是由HIV P24抗體包被在硝酸纖維膜上構成的。
5.根據(jù)權利要求1所述的人類免疫缺陷病毒抗體和抗原檢測試劑盒，其特征在于，所述質控線是由羊抗鼠IgG抗體包被在硝酸纖維膜上構成的。
6.根據(jù)權利要求1所述的人類免疫缺陷病毒抗體和抗原檢測試劑盒，其特征在于，所述標記物墊是由無紡布上標記HIVgp41抗原、HIVgpl20抗原和HIVgp36抗原以及P24抗體構成 的。
專利摘要本實用新型公開了一種人類免疫缺陷病毒抗體和抗原檢測試劑盒，包括設有加樣孔和檢測窗的塑卡，塑卡內插裝HIV試紙條，且所述HIV試紙條結構為底板上粘貼上樣墊、標記物墊、硝酸纖維膜和吸水紙，同時硝酸纖維膜上包被有1號檢測線、2號檢測線、3號檢測線和質控線。本實用新型的有益效果是，可同時檢測并分型HIV病毒抗體I型或II型，同時檢測出P24抗原，進一步縮短了檢測窗口期，提高了檢測靈敏度和特異性。
文檔編號G01N33/569GK202975019SQ20122035281
公開日2013年6月5日 申請日期2012年7月20日 優(yōu)先權日2012年7月20日
發(fā)明者李洲, 許俊艷 申請人:天津中新科炬生物制藥有限公司