專利名稱：一種煙用香精香料中合成酚類抗氧化劑的檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于液相色譜分析化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種煙用香精香料中合成酚類抗氧化劑的檢測(cè)方法，具體說是涉及一種有效的新型濁點(diǎn)萃取體系分離富集煙用香精香料中酚類抗氧化劑的檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
香精香料在人們的日常生活中起到不可忽視的作用，人們使用香精香料不僅僅是賦予產(chǎn)品各式各樣的香氣，有些產(chǎn)品則是必須使用香精香料來掩蓋產(chǎn)品本身帶有的不良?xì)庀?。因此廣泛應(yīng)用于日化產(chǎn)品，卷煙生產(chǎn)等領(lǐng)域。隨著卷煙工業(yè)的大跨步發(fā)展，煙用香精香料的研發(fā)和生產(chǎn)發(fā)展迅速，其質(zhì)量控制尤為重要。為了保持煙用香精香料的品質(zhì)常在其中加入酚類抗氧化劑以延長(zhǎng)保質(zhì)期，如丁基羥基茴香醚BHA，二丁基羥基甲苯BHT，沒食子酸丙酯PG，特丁基對(duì)苯二酚TBHQ等酚類抗氧化劑。煙用香精香料中加入適量抗氧化劑，可抑制微生物生長(zhǎng)繁殖，從而有效防止香精香料因空氣中的氧化作用而引起變色變味變質(zhì)，保持卷煙的品質(zhì)。但過量使用抗氧化劑對(duì)人體有一定毒性。如叔丁基對(duì)羥基茴香醚(BHA)大劑量使用有致癌作用，二丁基羥基甲苯(BHT)有可能抑制人體呼吸酶活性。人們吸入含抗氧化劑超標(biāo)的卷煙之后，會(huì)對(duì)人體的健康造成危害。聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織和世界衛(wèi)生組織(FA0/WHO)規(guī)定，叔丁基對(duì)苯二酚(TBHQ)單用或合用不能超過油脂量的0.02%。中國(guó)食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GB2760-1996規(guī)定，BHA、BHT、TBHQ在食用油脂、油炸食品、干魚制品、餅干、方便面、干果罐頭、腌制肉制品中殘留不得超過0.2g/kg。日本食品衛(wèi)生法規(guī)定，禁止在任何食品中使用TBHQ。目前較經(jīng)典的分析檢測(cè)酚類抗氧化劑含量的前處理方法主要是超臨界二氧化碳萃取，固相萃取法。超臨界二氧化碳萃取具有環(huán)保，萃取率高等優(yōu)點(diǎn)但是設(shè)備和維修成本昂貴，操作不方便。固相萃取法萃取效率高但需使用大量有機(jī)溶劑，容易對(duì)環(huán)境造成損害。濁點(diǎn)萃取法使用表面活性劑來對(duì)樣品中的分析物進(jìn)行提取，不使用或只使用少量的有機(jī)溶劑，是一種對(duì)環(huán)境友好的樣品前處理方法。這種方法現(xiàn)在已廣泛的應(yīng)用于金屬離子的分析，較少應(yīng)用于有機(jī)物的分析，也取得了一些成功的范例，有廣闊的工業(yè)應(yīng)用前景。目前濁點(diǎn)萃取主要用非離子表面活性劑Triton系列作濁點(diǎn)萃取劑，用非離子表面活性劑TMN-6及混合非離子表面活性劑對(duì)NP-7、NP-9作抗氧化劑濁點(diǎn)萃取劑未見報(bào)道。支鏈仲醇聚氧乙烯醚TMN-6具有無紫外吸收的優(yōu)點(diǎn)，不會(huì)干擾目標(biāo)物質(zhì)的測(cè)定；兩種非離子表面活性劑壬基酚聚氧乙烯醚NP-7、NP-9混合濁點(diǎn)萃取檢測(cè)煙用香精香料中的酚類抗氧化劑，與單獨(dú)表面活性劑萃取相比有更溫和的操作條件和較高檢測(cè)靈敏度、快速、準(zhǔn)確等特點(diǎn)；兩種濁點(diǎn)萃取方法與通常使用的非離子表面活性劑Triton系列濁點(diǎn)萃取相比，具有萃取率高，操作更溫和等優(yōu)點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種有效的新型濁點(diǎn)萃取體系分離富集煙用香精香料中合成酚類抗氧化劑BHA，BHT, PG, TBHQ的方法。為質(zhì)檢部門提供一種準(zhǔn)確，直觀的定性和定量的檢測(cè)方法。本發(fā)明采用的技術(shù)方案為:(I)工作曲線的制作①濁點(diǎn)體系的形成:配制一系列一定濃度的合成酚類抗氧化劑標(biāo)準(zhǔn)溶液，加入適量到5mL離心管中，加入一定量的非離子表面活性劑，用去離子水定容至刻度，放置在恒溫水浴鍋中平衡一段時(shí)間，溶液變?yōu)槿闈嵋褐?，離心至分相完全；②高效液相色譜測(cè)定:將步驟①得到的一系列濁點(diǎn)萃取體系棄去上層水相，底部表面活性劑相用甲醇或乙腈稀釋之后進(jìn)高效液相在選定波長(zhǎng)下進(jìn)行測(cè)定；③工作曲線的繪制:以溶液濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)繪制工作曲線，并確定線性范圍，同時(shí)計(jì)算方法的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差、回收率、檢測(cè)限；(2)樣品處理:①水溶性香精香料:取0.5-2g水溶性香精香料于5mL離心管中，加入ImL甲醇稀釋，搖勻，加入一定濃度的非離子表面活性劑，用去離子水定容至刻度，放置在恒溫水浴鍋中平衡一段時(shí)間，溶液變?yōu)槿闈嵋褐?，離心分相，表面活性劑相沉在離心管底部，按步驟
(I)中②③部分處理；②脂溶性香精香料:取0.5-2g脂溶性香精香料，用ImL甲醇提取其中抗氧化劑兩次，合并提取液，轉(zhuǎn)移至5mL離心管中，加入一定濃度的非離子表面活性劑，用去離子水定容至刻度，放置在恒溫水浴鍋中平衡一段時(shí)間，溶液變?yōu)槿闈嵋褐?，離心分相，表面活性劑相沉在離心管底部，按步驟(I)中②③部分處理；步驟I中檢測(cè)的合成酚類抗氧化劑包括丁基羥基茴香醚BHA，二丁基羥基甲苯BHT,沒食子酸丙酯PG，特丁基對(duì)苯二酚TBHQ ;標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為Ι-lOOOg/mL，表面活性劑為支鏈仲醇聚氧乙烯醚TMN-6或壬基酚聚氧乙烯醚NP-7和NP-9混合表面活性劑，NP-7和NP-9比例為I: 1-1: 4，用量為0.3-0.8mL ;離心轉(zhuǎn)速為2000-5000rpm，離心時(shí)間為
3-10min ;平衡溫度為40-60°C，平衡時(shí)間為20_60min ;高效液相檢測(cè)器為紫外檢測(cè)器，色譜柱為C18反相色譜柱，檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm，流動(dòng)相為甲醇和0.5-1.5%乙酸梯度洗脫。本發(fā)明采用非離子表面活性劑TMN-6為濁點(diǎn)萃取劑，一是其無紫外吸收，不影響目標(biāo)物的測(cè)定；二是萃取體系條件溫和，富集后所得的富集因子較大，與高效液相色譜法結(jié)合后有效地提高了儀器的檢測(cè)靈敏度。本發(fā)明的濁點(diǎn)萃取法是一種針對(duì)煙用香精香料中合成酚類抗氧化劑的檢測(cè)方法，為質(zhì)檢部門和生產(chǎn)企業(yè)提供快速、簡(jiǎn)便、直觀的定性和定量測(cè)定。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明方法的有益效果在于:本發(fā)明提供了一種新型的濁點(diǎn)萃取體系，能有效地分離、富集煙用香精香料中的酚類抗氧化劑，大部分基體干擾能被消除，同時(shí)檢測(cè)限大大降低，方法安全、簡(jiǎn)便、靈敏和高效。


圖1是本發(fā)明經(jīng)過濁點(diǎn)萃取之后與萃取之前四種抗氧化劑富集效果對(duì)比圖(依次為 PG、TBHQ、BHA、BHT)。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1利用本發(fā)明檢測(cè)水溶性香精香料中合成酚類抗氧化劑的含量。1、工作曲線制作:分別取PG、TBHQ, BHA, BHT 濃度為 1.0,20.0,40.0,60.0,80.0,100.0 μ g/mL 的標(biāo)準(zhǔn)溶液lmL，加入0.75mL非離子表面活性劑TMN-6，用去離子水定容至5mL，放置在45°C水浴鍋中平衡25min, 3000rpm離心IOmin,棄去上層水相，下層表面活性劑相用甲醇稀釋到lmL，在280nm波長(zhǎng)處測(cè)定峰面積；流動(dòng)相流速為:1.0mL/min，流動(dòng)相為:0.1 %的乙酸水溶液(A)，甲醇(B) ;0-5min，B 為 40%，A 為 60%，5-lOmin，B 由 40%線性升至 70%,A 由 60%降至30%，10-25min，B升至90%，A降至10%，不需后運(yùn)行。其中PG保留時(shí)間為6.0min,TBHQ保留時(shí)間為8.5min，BHA保留時(shí)間為12.6min，BHT保留時(shí)間為19min?；貧w方程、相關(guān)系數(shù)、線性范圍、回收率、檢出限等見表I。表I方法回歸方程、相關(guān)系數(shù)、線性范圍、回收率、檢出限
權(quán)利要求
1.一種煙用香精香料中合成酚類抗氧化劑的檢測(cè)方法，其特征在于:該方法包括以下步驟: (1)工作曲線的制作: ①濁點(diǎn)體系的形成:配制一系列一定濃度的合成酚類抗氧化劑標(biāo)準(zhǔn)溶液，加入適量到5mL離心管中，加入一定濃度的非離子表面活性劑，用去離子水定容至刻度，放置在恒溫水浴鍋中平衡一段時(shí)間，溶液變?yōu)槿闈嵋褐螅x心至分相完全； ②高效液相色譜測(cè)定:將步驟①得到的一系列濁點(diǎn)萃取體系棄去上層水相，底部表面活性劑相用甲醇或乙腈稀釋之后進(jìn)高效液相在選定波長(zhǎng)下進(jìn)行測(cè)定； ③工作曲線的繪制:以溶液濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)繪制工作曲線，并確定線性范圍，同時(shí)計(jì)算方法的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差、回收率、檢測(cè)限； (2)樣品處理: ①水溶性香精香料:取0.5-2g水溶性香精香料于5mL離心管中，加入ImL甲醇稀釋，搖勻，加入一定濃度的非離子表面活性劑，用去離子水定容至刻度，放置在恒溫水浴鍋中平衡一段時(shí)間，溶液變?yōu)槿闈嵋褐?，離心分相，表面活性劑相沉在離心管底部，按步驟(I)中②③部分處理； ②脂溶性香精香料:取0.5-2g脂溶性香精香料，用ImL甲醇提取其中抗氧化劑兩次，合并提取液，轉(zhuǎn)移至5mL離心管中，加入一定濃度的非離子表面活性劑，用去離子水定容至刻度，放置在恒溫水浴鍋中平衡一段時(shí)間，溶液變?yōu)槿闈嵋褐?，離心分相，表面活性劑相沉在離心管底部，按步驟(I)中②③部分處理。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種煙用香精香料中合成酚類抗氧化劑的檢測(cè)方法，其特征在于:所述合成酚類抗氧化劑包括丁基羥基茴香醚BHA，二丁基羥基甲苯BHT，沒食子酸丙酯PG，特丁基對(duì)苯二酚TBHQ。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種煙用香精香料中合成酚類抗氧化劑的檢測(cè)方法，其特征在于:所述合成酚類抗氧化劑標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為1-1000 μ g/mL。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種煙用香精香料中合成酚類抗氧化劑的檢測(cè)方法，其特征在于:所述非離子表面活性劑為支鏈仲醇聚氧乙烯醚TMN-6或壬基酚聚氧乙烯醚NP-7和NP-9混合表面活性劑，NP-7和NP-9比例為I: 1-1: 4，用量為0.3-0.8mL。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種煙用香精香料中合成酚類抗氧化劑的檢測(cè)方法，其特征在于:進(jìn)行離心分離的轉(zhuǎn)速為2000-5000rpm，離心時(shí)間為3_15min。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種煙用香精香料中合成酚類抗氧化劑的檢測(cè)方法，其特征在于:水浴鍋溫度為40-60°C，平衡時(shí)間為10-60min。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種煙用香精香料中合成酚類抗氧化劑的檢測(cè)方法，其特征在于:高效液相檢測(cè)器為紫外檢測(cè)器，色譜柱為C18反相色譜柱，檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm，流動(dòng)相為甲醇和0.5-1.5%乙酸，梯度洗脫。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種煙用香精香料中合成酚類抗氧化劑的檢測(cè)方法，屬于液相色譜分析化學(xué)領(lǐng)域。本發(fā)明利用支鏈仲醇聚氧乙烯醚TMN-6或壬基酚聚氧乙烯醚NP-7、NP-9混合非離子表面活性劑來富集分離四種抗氧化劑，結(jié)合高效液相色譜法進(jìn)行測(cè)定，方法檢測(cè)限為0.001ppm。本發(fā)明方法能有效富集煙用香精香料中的抗氧化劑，且安全、簡(jiǎn)便、快捷、高效和靈敏。
文檔編號(hào)G01N30/02GK103115971SQ20121050454
公開日2013年5月22日 申請(qǐng)日期2012年11月27日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月27日
發(fā)明者孟冬玲, 黃泰松, 李小蘭, 陳志燕, 周蕓, 陸冰琳, 周奕 申請(qǐng)人:廣西中煙工業(yè)有限責(zé)任公司