專利名稱：一種dpph-hplc法檢測(cè)黑果枸杞果汁中抗氧化成分的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種果汁抗氧化成分的檢測(cè)方法，尤其涉及一種DPPH-HPLC法檢測(cè)黑果枸杞果汁中抗氧化成分的方法。
背景技術(shù)：
黑果枸杞是以爺科枸杞屬植物黑果枸杞(Lycium ruthenicum Murr.)的果實(shí),呈紫紅色，無毒，具有健胃補(bǔ)脾、滋陰潤肺、活血消食等功效?，F(xiàn)代科學(xué)研究證明黑果枸杞果實(shí)具有抗氧化、抗疲勞、抗缺氧、降血脂、防治動(dòng)脈硬化等作用，廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品及化妝品O黑果枸杞果汁中主要含有花色苷類物質(zhì)、總多酚等抗氧化成分。但是，目前抗氧化
實(shí)驗(yàn)操作步驟繁瑣、精密度差，并不能對(duì)抗氧化的成分進(jìn)行歸屬。黑果枸杞果汁抗氧化成分還沒有完整的檢測(cè)方法，不利于保證黑果枸杞果汁的品質(zhì)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種簡單、快速、準(zhǔn)確的DPPH-HPLC法檢測(cè)黑果枸杞果汁中抗氧化成分的方法。為解決上述問題，本發(fā)明所述的一種DPPH-HPLC法檢測(cè)黑果枸杞果汁中抗氧化成分的方法，其特征在于該方法首先將質(zhì)量濃度為O. 0Γ5%的抗氧化劑1，I-二苯基-2三硝基苯肼(DPPH)與黑果枸杞果汁按100: f250:1的體積比在溫度為25 30°C的條件下避光反應(yīng)15mirT30min，得到反應(yīng)后黑果枸杞果汁；然后分別將未反應(yīng)黑果枸杞果汁與所述反應(yīng)后黑果枸杞果汁注入高效液相色譜(HPLC)中檢測(cè)，分別得到未反應(yīng)黑果枸杞果汁的色譜圖與反應(yīng)后黑果枸杞果汁的色譜圖；最后，比較所述未反應(yīng)黑果枸杞果汁的色譜圖與所述反應(yīng)后黑果枸杞果汁的色譜圖中相應(yīng)的各個(gè)峰的峰面積；若峰面積減少的峰，即說明黑果枸杞果汁中具有抗氧化成分。所述黑果枸杞果汁為原果汁或5000道爾頓有機(jī)膜過濾后的果汁。所述高效液相色譜(HPLC)檢測(cè)方法是指流動(dòng)相A為甲醇，流動(dòng)相B為純凈水；流速為O. 8 I. 5mL/min，檢測(cè)波長為210 nm 390 nm ;流動(dòng)相條件為0 min 15min，5%A 5%A，95%B"95%B ；15 min 25 min,5 %A 15 %A，95%B 85%B ;25 mirT40 min,15% A 25% A,85%B 75%B。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下優(yōu)點(diǎn)
I、由于本發(fā)明采用DPPH-HPLC法測(cè)定黑果枸杞果汁中抗氧化成分，而該法具有所用試劑量少、操作簡單方便、靈敏度高、精密度高穩(wěn)定性好等特點(diǎn)，因此，適宜測(cè)定黑果枸杞果汁抗氧化成分，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)黑果枸杞果汁進(jìn)行保健功能的有效性評(píng)價(jià)。2、由于本發(fā)明采用DPPH-HPLC法測(cè)定黑果枸杞果汁中抗氧化成分，而該法只需比較對(duì)應(yīng)峰的峰面積即可判斷抗氧化成分。如圖I為黑果枸杞果汁的色譜圖，即未加入DPPH溶液的黑果枸杞果汁色譜圖。圖2為加入DPPH后的黑果枸杞果汁的色譜圖。比較色譜圖中各個(gè)色譜峰，其中色譜圖中色譜峰A、B、C、D、E、F的峰面積減少，說明化合物A、B、C、D、E、F為抗氧化成分。3、本發(fā)明簡單、快速，易于推廣。


下面結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施方式
作進(jìn)一步詳細(xì)的說明。圖I為未加入抗氧化劑DPPH色譜圖。圖2為加入抗氧化劑DPPH色譜圖。
具體實(shí)施方式
·實(shí)施例I 一種DPPH-HPLC法檢測(cè)黑果枸杞果汁中抗氧化成分的方法，該方法首先將質(zhì)量濃度為O. 01%的抗氧化劑1，I- 二苯基-2三硝基苯肼(DPPH)與黑果枸杞原果汁按100:1的體積比(mL/mL)在溫度為30°C的條件下避光反應(yīng)15min，得到反應(yīng)后黑果枸杞果汁；然后分別將未反應(yīng)黑果枸杞果汁與反應(yīng)后黑果枸杞果汁注入高效液相色譜(HPLC)中檢測(cè)，分別得到未反應(yīng)黑果枸杞果汁的色譜圖與反應(yīng)后黑果枸杞果汁的色譜圖；最后，比較未反應(yīng)黑果枸杞果汁的色譜圖與反應(yīng)后黑果枸杞果汁的色譜圖中相應(yīng)的各個(gè)峰的峰面積；若峰面積減少的峰，即說明黑果枸杞果汁中具有抗氧化成分。其中高效液相色譜(HPLC)檢測(cè)方法是指流動(dòng)相A為甲醇，流動(dòng)相B為純凈水；流速為O. 8mL/min,檢測(cè)波長為210 nm nm ;流動(dòng)相條件為0 min 15min, 5%A 5%A,95%B"95%B ；15 min 25 min,5 %A"l5 %A,95%B^85%B ；25 mirT40 min,15% A 25% A,85%B 75%B。實(shí)施例2 —種DPPH-HPLC法檢測(cè)黑果枸杞果汁中抗氧化成分的方法，該方法首先將質(zhì)量濃度為5%的抗氧化劑1，I-二苯基-2三硝基苯肼(DPPH)與5000道爾頓有機(jī)膜過濾后的黑果枸杞果汁按250 1的體積比(mL/mL)在溫度為25°C的條件下避光反應(yīng)30min，得到反應(yīng)后黑果枸杞果汁；然后分別將未反應(yīng)黑果枸杞果汁與反應(yīng)后黑果枸杞果汁注入高效液相色譜(HPLC)中檢測(cè)，分別得到未反應(yīng)黑果枸杞果汁的色譜圖與反應(yīng)后黑果枸杞果汁的色譜圖；最后，比較未反應(yīng)黑果枸杞果汁的色譜圖與反應(yīng)后黑果枸杞果汁的色譜圖中相應(yīng)的各個(gè)峰的峰面積；若峰面積減少的峰，即說明黑果枸杞果汁中具有抗氧化成分。其中高效液相色譜(HPLC)檢測(cè)方法是指流動(dòng)相A為甲醇，流動(dòng)相B為純凈水；流速為O. 8mL/min，檢測(cè)波長為360 nm ;流動(dòng)相條件為0 min 15min，5%A 5%A，95%B 95%B ；15 min 25 min,5 %A"l5 %A,95%B^85%B ；25 mirT40 min,15% A 25% A，85%B 75%B。實(shí)施例3 —種DPPH-HPLC法檢測(cè)黑果枸杞果汁中抗氧化成分的方法，該方法首先將質(zhì)量濃度為O. 1%的抗氧化劑1，I-二苯基-2三硝基苯肼(DPPH)與黑果枸杞原果汁按150 1的體積比(mL/mL)在溫度為25°C的條件下避光反應(yīng)20min，得到反應(yīng)后黑果枸杞果汁；然后分別將未反應(yīng)黑果枸杞果汁與反應(yīng)后黑果枸杞果汁注入高效液相色譜(HPLC)中檢測(cè)，分別得到未反應(yīng)黑果枸杞果汁的色譜圖與反應(yīng)后黑果枸杞果汁的色譜圖；最后，比較未反應(yīng)黑果枸杞果汁的色譜圖與反應(yīng)后黑果枸杞果汁的色譜圖中相應(yīng)的各個(gè)峰的峰面積；若峰面積減少的峰，即說明黑果枸杞果汁中具有抗氧化成分。其中高效液相色譜(HPLC)檢測(cè)方法是指流動(dòng)相A為甲醇，流動(dòng)相B為純凈水；流速為I. 2mL/min，檢測(cè)波長為254 nm ;流動(dòng)相條件為0 min 15min，5%A 5%A，95%B 95%B ；15 min 25 min,5 %A"l5 %A,95%B^85%B ；25 mirT40 min,15% A 25% A，85%B 75%B。實(shí)施例4 一種DPPH-HPLC法檢測(cè)黑果枸杞果汁中抗氧化成分的方法，該方法首先將質(zhì)量濃度為1%的抗氧化劑1，I-二苯基-2三硝基苯肼(DPPH)與5000道爾頓有機(jī)膜過濾后的黑果枸杞果汁按180:1的體積比(mL/mL)在溫度為32°C的條件下避光反應(yīng)25min，得到反應(yīng)后黑果枸杞果汁；然后分別將未反應(yīng)黑果枸杞果汁與反應(yīng)后黑果枸杞果汁注入高效液相色譜(HPLC)中檢測(cè)，分別得到未反應(yīng)黑果枸杞果汁的色譜圖與反應(yīng)后黑果枸杞果汁的色譜圖；最后，比較未反應(yīng)黑果枸杞果汁的色譜圖與反應(yīng)后黑果枸杞果汁的色譜圖中相應(yīng)的各個(gè)峰的峰面積；若峰面積減少的峰，即說明黑果枸杞果汁中具有抗氧化成分。 其中高效液相色譜(HPLC)檢測(cè)方法是指流動(dòng)相A為甲醇，流動(dòng)相B為純凈水；流速為lmL/min，檢測(cè)波長為390 nm ;流動(dòng)相條件為0 min 15min，5%A 5%A，95%B 95%B ; 15min 25 min,5 %A"l5 %A,95%B^85%B ；25 mirT40 min,15% A 25% A，85%B 75%B。
實(shí)施例5 —種DPPH-HPLC法檢測(cè)黑果枸杞果汁中抗氧化成分的方法，該方法首先將質(zhì)量濃度為2%的抗氧化劑1，I-二苯基-2三硝基苯肼(DPPH)與5000道爾頓有機(jī)膜過濾后的黑果枸杞果汁按200:1的體積比(mL/mL)在溫度為35°C的條件下避光反應(yīng)24min，得到反應(yīng)后黑果枸杞果汁；然后分別將未反應(yīng)黑果枸杞果汁與反應(yīng)后黑果枸杞果汁注入高效液相色譜(HPLC)中檢測(cè)，分別得到未反應(yīng)黑果枸杞果汁的色譜圖與反應(yīng)后黑果枸杞果汁的色譜圖；最后，比較未反應(yīng)黑果枸杞果汁的色譜圖與反應(yīng)后黑果枸杞果汁的色譜圖中相應(yīng)的各個(gè)峰的峰面積；若峰面積減少的峰，即說明黑果枸杞果汁中具有抗氧化成分。其中高效液相色譜(HPLC)檢測(cè)方法是指流動(dòng)相A為甲醇，流動(dòng)相B為純凈水；流速為I. 5mL/min，檢測(cè)波長為290 nm ;流動(dòng)相條件為0 min 15min，5%A 5%A，95%B 95%B ；15 min 25 min,5 %A"l5 %A,95%B^85%B ；25 mirT40 min,15% A 25% A，85%B 75%B。
權(quán)利要求
1.一種DPPH-HPLC法檢測(cè)黑果枸杞果汁中抗氧化成分的方法，其特征在于該方法首先將質(zhì)量濃度為O. 0Γ5%的抗氧化劑1，I- 二苯基-2三硝基苯肼與黑果枸杞果汁按100: f250:1的體積比在溫度為25 30°C的條件下避光反應(yīng)15mirT30min，得到反應(yīng)后黑果枸杞果汁；然后分別將未反應(yīng)黑果枸杞果汁與所述反應(yīng)后黑果枸杞果汁注入高效液相色譜中檢測(cè)，分別得到未反應(yīng)黑果枸杞果汁的色譜圖與反應(yīng)后黑果枸杞果汁的色譜圖；最后，比較所述未反應(yīng)黑果枸杞果汁的色譜圖與所述反應(yīng)后黑果枸杞果汁的色譜圖中相應(yīng)的各個(gè)峰的峰面積；若峰面積減少的峰，即說明黑果枸杞果汁中具有抗氧化成分。
2.如權(quán)利要求I所述的一種DPPH-HPLC法檢測(cè)黑果枸杞果汁中抗氧化成分的方法，其特征在于所述黑果枸杞果汁為原果汁或5000道爾頓有機(jī)膜過濾后的果汁。
3.如權(quán)利要求I所述的一種DPPH-HPLC法檢測(cè)黑果枸杞果汁中抗氧化成分的方法，其特征在于所述高效液相色譜檢測(cè)方法是指流動(dòng)相A為甲醇，流動(dòng)相B為純凈水；流速為O. 8 I. 5mL/min，檢測(cè)波長為210 nm 390 nm ;流動(dòng)相條件為0 min 15min，5%A 5%A，95%B"95%B ；15 min 25 min,5 %A"l5 %A,95%B^85%B ；25 mirT40 min,15% A "25% A,85%B 75%B。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種DPPH-HPLC法檢測(cè)黑果枸杞果汁中抗氧化成分的方法，該方法首先將抗氧化劑1,1-二苯基-2三硝基苯肼與黑果枸杞果汁避光反應(yīng)，得到反應(yīng)后黑果枸杞果汁；然后分別將未反應(yīng)黑果枸杞果汁與所述反應(yīng)后黑果枸杞果汁注入高效液相色譜中檢測(cè)，分別得到未反應(yīng)黑果枸杞果汁的色譜圖與反應(yīng)后黑果枸杞果汁的色譜圖；最后，比較所述未反應(yīng)黑果枸杞果汁的色譜圖與所述反應(yīng)后黑果枸杞果汁的色譜圖中相應(yīng)的各個(gè)峰的峰面積；若峰面積減少的峰，即說明黑果枸杞果汁中具有抗氧化成分。本發(fā)明具有所用試劑量少、操作簡單方便、靈敏度高、精密度高穩(wěn)定性好等特點(diǎn)，可以實(shí)現(xiàn)對(duì)黑果枸杞果汁中抗氧化成分進(jìn)行有效性的評(píng)價(jià)。
文檔編號(hào)G01N30/02GK102879500SQ20121038184
公開日2013年1月16日 申請(qǐng)日期2012年10月11日 優(yōu)先權(quán)日2012年10月11日
發(fā)明者陳晨, 邵赟, 陶燕鐸, 李玉林, 趙曉輝, 梅麗娟, 岳會(huì)蘭, 陳濤 申請(qǐng)人:中國科學(xué)院西北高原生物研究所