專利名稱：一種檢測乳腺癌her2基因表達(dá)量的方法及其試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物技術(shù)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，涉及一種用于檢測乳腺癌HER2基因表達(dá)量的方法及其試劑盒。
背景技術(shù)：
乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，是威脅女性健康的“頭號殺手”。隨著人們生活方式的改變，乳腺癌的發(fā)病率也呈逐年遞增之勢。每年全球約有140萬女性罹患乳腺癌，更有40萬女性死于乳腺癌。根據(jù)美國癌癥協(xié)會2012發(fā)布的美國癌癥統(tǒng)計(jì)預(yù)期數(shù)據(jù)來看，乳腺癌高居女性惡性腫瘤發(fā)病率第一位，占所有新發(fā)女性惡性腫瘤的29%。在我國，近年來乳腺癌發(fā)病率也呈逐年遞增的趨勢。從1982年到2001年，女性乳腺癌發(fā)病率增加了 91%。近期北京、上海、天津等大城市的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示，乳腺癌已成為我國女性最常見的惡性腫瘤，且發(fā)病率呈逐年上升趨勢，每年新增打3% -4%，超過世界水平1-2%，每年有20余萬婦女患乳腺癌，發(fā)病率為女性易患腫瘤第一位。目前，乳腺癌的預(yù)警和早期診斷技術(shù)主要有以下幾種第一種為定期接受臨床體格檢查，但是乳腺癌的普查耗資較大，成本高，在我國乳腺癌的早期發(fā)現(xiàn)主要著眼于自我檢查，當(dāng)患者發(fā)現(xiàn)腫塊而就診時(shí)，常常為時(shí)已晚；第二種為影像學(xué)診斷法，以鑰靶X射線攝片為主要手段，以超聲波掃描和MRI掃描為輔助，一般可檢測表現(xiàn)為腫瘤病變的微小鈣化，但是對于不典型的病變，如致密型乳腺內(nèi)的病變及近胸壁的病變易發(fā)生漏診，且對檢測儀器的要求高，耗時(shí)，費(fèi)用高；第三種為生物靶標(biāo)早期檢測，如乳腺癌相關(guān)基因的突變分析，血清中腫瘤標(biāo)志物的測定，由于基因的突變或異常表達(dá)通常早于病變的發(fā)生，可實(shí)現(xiàn)早期預(yù)警，且檢測方法簡單，快速，價(jià)格較低。因此，發(fā)展生物靶標(biāo)檢測，尋找新的乳腺癌檢測靶標(biāo)作為臨床檢測且簡單實(shí)用的技術(shù)對于乳腺癌患者提前預(yù)警及采用有效的治療手段意義重大。HER2基因(人表皮生長因子受體2基因)又稱neu或c_rbB_2基因，是一種原癌基因，位于17號染色體長臂上，編碼185KD跨膜蛋白，具有酪氨酸激酶活性，屬于人類表皮生長因子受體(EGFR)家族。研究表明，HER2在20% -30%的原發(fā)性乳腺浸潤性導(dǎo)管癌中有基因的擴(kuò)增和蛋白的過度表達(dá)。乳腺腫瘤患者J1ER2陽性意味著乳腺腫瘤細(xì)胞表面的HER2蛋白數(shù)量增多，過度傳遞信號，刺激癌細(xì)胞瘋狂增殖。J1ER2陽性的患者同其他乳腺癌病人相t匕，腫瘤惡性程度更高，進(jìn)展更快，更容易復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，且此類病人通常對內(nèi)分泌治療不敏感，預(yù)后較差。因此，精確檢測HER2的表達(dá)對于乳腺癌的早期診斷、預(yù)后及個(gè)性化治療等方面具有重要的意義。量子點(diǎn)(Quantum dots, DQs)是一類大小在l-lOnm,半徑小于或接近于激子玻爾半徑的新型半導(dǎo)體納米晶體，作為一種應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的新型納米熒光材料探針，能克服傳統(tǒng)有機(jī)熒光染料的不足，具有激發(fā)光譜窄、連續(xù)，檢測靈敏度高，抗漂白能力強(qiáng)，熒光強(qiáng)度高而穩(wěn)定，生物相容性好，不易受組織自發(fā)熒光干擾等優(yōu)點(diǎn)?，F(xiàn)有技術(shù)中采用的量子點(diǎn)檢測方法一般為用量子點(diǎn)直接與抗體結(jié)合制作成探針，實(shí)現(xiàn)多抗原同時(shí)標(biāo)記，此方法成本較高，探針保存時(shí)間短，需對量子點(diǎn)進(jìn)行標(biāo)記，不適合常規(guī)臨床檢測。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種檢測乳腺癌HER2基因表達(dá)量的方法及其試劑盒，實(shí)現(xiàn)對HER2基因表達(dá)量經(jīng)濟(jì)、快速、靈敏的檢測。為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)措施一種檢測乳腺癌HER2基因表達(dá)量的量子點(diǎn)免疫熒光試劑盒，所述的試劑盒中包括(I)抗體稀釋緩沖液；(2)孵育緩沖液；(3)聯(lián)吡啶釕標(biāo)記的HER2單克隆抗體的溶液； (4)無鎘量子點(diǎn)的水溶液；所述的抗體稀釋緩沖液為磷酸與NaCl混合配置的磷酸-NaCl緩沖液；所述的孵育緩沖液為磷酸、NaCl和胎牛血清混合配置的磷酸-NaCl-胎牛血清溶液。優(yōu)選地，所述的無鎘量子點(diǎn)為ZnSe/ZnS核/殼量子點(diǎn)，激發(fā)波長為365nm。優(yōu)選地，所述的抗體稀釋緩沖液中磷酸與NaCl的摩爾比為I : I。優(yōu)選地，所述的抗體稀釋緩沖液中磷酸與NaCl的濃度相同，且為0. 0. 1-0. 03mol/L0優(yōu)選地，所述的孵育緩沖液含有5% -20%的胎牛血清。優(yōu)選地，所述的聯(lián)吡啶釕標(biāo)記的HER2單克隆抗體溶液濃度為I X IO-6Hiol/L-2Xl(T6mol/L。本發(fā)明還提供了一種用所述的試劑盒檢測乳腺癌HER2基因表達(dá)量方法，具體步驟如下(I)用抗體稀釋緩沖液稀釋聯(lián)吡啶釕標(biāo)記的HER2單克隆抗體的溶液；(2)將待測細(xì)胞加入步驟(I)得到的溶液中，再加入孵育緩沖液，室溫條件下聯(lián)吡啶釕標(biāo)記的HER2單克隆抗體與待測細(xì)胞表面的HER2基因表達(dá)蛋白發(fā)生特異性的結(jié)合反應(yīng)，將特異性結(jié)合反應(yīng)完畢的溶液低速離心，離心后收集上清液；(3)將步驟(2)所得上清液加入無鎘量子點(diǎn)的水溶液中，在365nm下觀察無鎘量子點(diǎn)熒光，并用熒光光譜儀測定無鎘量子點(diǎn)熒光強(qiáng)度或在620-650nm下觀察聯(lián)吡啶釕熒光，并用熒光光譜儀測定聯(lián)吡啶釕熒光強(qiáng)度。優(yōu)選地，所述的聯(lián)吡啶釕標(biāo)記的HER2單克隆抗體與所述的無鎘量子點(diǎn)摩爾比為I 20-1 7.5。優(yōu)選地，步驟⑵中特異性的結(jié)合反應(yīng)的時(shí)間為30_60min。優(yōu)選地，步驟(2)中低速離心的離心力為500_800g。本發(fā)明的有益效果在于，第一，本發(fā)明中使用的量子點(diǎn)為無鎘量子點(diǎn)，減少了對環(huán)境的污染；第二，本發(fā)明無需對量子點(diǎn)進(jìn)行修飾，簡化了操作步驟；第三，本發(fā)明的檢測方法及試劑盒實(shí)現(xiàn)了對乳腺癌HER2基因表達(dá)量的檢測，靈敏度好，精確度高。


圖I是乳腺癌HER2基因表達(dá)量檢測方法流程圖。圖2是實(shí)施例I中HER2基因表達(dá)量無鎘量子點(diǎn)熒光圖。圖3是實(shí)施例2中HER2基因表達(dá)量聯(lián)吡啶釕熒光圖。圖4是實(shí)施例3中HER2基因表達(dá)量無鎘量子點(diǎn)熒光圖。圖5是實(shí)施例3中HER2基因表達(dá)量無鎘量子點(diǎn)熒光強(qiáng)度變化圖。圖6是實(shí)施例3中細(xì)胞數(shù)量與無鎘量子點(diǎn)熒光強(qiáng)度線性圖。
具體實(shí)施例方式下述實(shí)施例中所使用的實(shí)驗(yàn)方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。 下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。本發(fā)明提供的乳腺癌HER2基因表達(dá)量檢測方法步驟如下，流程圖見圖I :(I)用抗體稀釋緩沖液稀釋聯(lián)吡啶釕標(biāo)記的HER2單克隆抗體的溶液；(2)將待測細(xì)胞和孵育緩沖液加入到(I)所得溶液，聯(lián)吡啶釕標(biāo)記的HER2單克隆抗體與待測細(xì)胞表面的J1ER2基因表達(dá)蛋白發(fā)生特異性的結(jié)合反應(yīng)，將特異性結(jié)合反應(yīng)完畢的溶液低速離心，離心后收集上清液；形成抗原抗體結(jié)合物，HER基因表達(dá)蛋白位于細(xì)胞表面，抗體被結(jié)合到了細(xì)胞表面，結(jié)合了抗體的細(xì)胞的粒徑和質(zhì)量均比HER2單克隆抗體大，用離心的方法可將二者分離，低速離心時(shí)，結(jié)合了抗體的細(xì)胞會形成沉淀，沒有與HER2基因表達(dá)蛋白結(jié)合的單克隆抗體不會沉淀；(3)將(2)所得上清液加入無鎘量子點(diǎn)的水溶液中，在365nm下觀察無鎘量子點(diǎn)熒光，并用熒光光譜儀測定無鎘量子點(diǎn)熒光強(qiáng)度或在620-650nm下觀察聯(lián)吡啶釕熒光，并用熒光光譜儀測定聯(lián)吡啶釕熒光強(qiáng)度；聯(lián)吡啶釕標(biāo)記的HER2單克隆抗體與無鎘量子點(diǎn)共同存在時(shí)，由于無鎘量子點(diǎn)與聯(lián)吡啶釕之間發(fā)生光誘導(dǎo)電子轉(zhuǎn)移，無鎘量子點(diǎn)與聯(lián)吡啶釕形成絡(luò)合物，形成絡(luò)合物的無鎘量子點(diǎn)的熒光發(fā)生淬滅，而聯(lián)吡啶釕的紅色熒光不受影響，因此，聯(lián)吡啶釕標(biāo)記的J1ER2單克隆抗體存在時(shí)，無鎘量子點(diǎn)的熒光強(qiáng)度減弱，聯(lián)吡啶釕標(biāo)記的J1ER2單克隆抗體與無鎘量子點(diǎn)比例關(guān)系決定了無鎘量子點(diǎn)熒光的信號強(qiáng)度；HER2基因表達(dá)量越多，結(jié)合的聯(lián)吡啶釕標(biāo)記的HER2單克隆抗體越多，離心后上清液中的聯(lián)吡啶釕標(biāo)記的J1ER2單克隆抗體越少，發(fā)生熒光淬滅的無鎘量子點(diǎn)就越少，無鎘量子點(diǎn)熒光強(qiáng)度越大，聯(lián)吡啶釕的熒光強(qiáng)度就越小，兩種熒光均可表征J1ER2基因表達(dá)量。下面結(jié)合附圖與實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步闡述。實(shí)施例I一、所述的試劑盒中包括(I)抗體稀釋緩沖液磷酸與NaCl的混合溶液，其中磷酸和NaCl的濃度均為0.01mol/L ；(2)孵育緩沖液磷酸、NaCl、胎牛血清配置的混合溶液，磷酸、NaCl的濃度為0. Olmol/L，胎牛血清濃度為5% ；(3)聯(lián)吡啶釕標(biāo)記的HER2單克隆抗體的溶液濃度為I X 10_6mOl/L ；(4) ZnSe/ZnS核/殼量子點(diǎn)的水溶液濃度為2. 0 X 10_6mol/L ；
二、所述的試劑盒的制備I、聯(lián)吡啶釕標(biāo)記HER2單克隆抗體的制備將50 ii g的HER2單克隆抗體干粉溶解在500 U L的磷酸鹽緩沖溶液中(pH = 8.0),加入NHS(N-Hydroxysuccinimide, N-輕基琥拍酰亞胺)活化的聯(lián)卩比唳釕固體粉末Img,室溫條件下結(jié)合反應(yīng)lh，然后用將結(jié)合反應(yīng)后的溶液轉(zhuǎn)移至50KD的超濾離心管，在離心力為8000g下離心IOmin,收集離心后上清液,即得到連卩比唳釕標(biāo)記的抗體溶液。2、ZnSe/ZnS核/殼量子點(diǎn)的制備50mL 超純水中，依次加入 148mg(0. 5mmol) Zn (NO3) 2 *6H20, 276mg (0. 9mmol)GSH(谷胱甘肽)，9mg (0. 05mmol) Na2SeO3,0. 2g 的 NaBH4 (過量)，室溫下攪拌 15min,調(diào)節(jié) pH = 9. 5，在120°C油浴條件下混合反應(yīng)70min，即得到ZnSe/ZnS核/殼量 子點(diǎn)水溶液。三、試劑盒的應(yīng)用用一中的試劑盒對人乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞進(jìn)行檢測(I)用抗體稀釋緩沖液稀釋聯(lián)吡啶釕標(biāo)記的HER2單克隆抗體溶液，使聯(lián)吡啶釕標(biāo)記的HER2單克隆抗體的濃度為4. OX 10_7mOl/L ;用超純水稀釋ZnSe/ZnS核/殼量子點(diǎn)水溶液，使ZnSe/ZnS核/殼量子點(diǎn)的濃度為2. 0 X 10_8mol/L ；(2)將細(xì)胞密度為4. 0 X IO7個(gè)/mL的人乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞培養(yǎng)液500 y L (細(xì)胞數(shù)量為20000)與200 ii L濃度為4. 0 X 10^7mol/L的聯(lián)吡啶釕標(biāo)記的HER2單克隆抗體溶液混合，再加入IOOu L孵育緩沖液，室溫下放置30min，發(fā)生抗原抗體特異性結(jié)合反應(yīng)，再用500g離心力低速離心，使抗原抗體結(jié)合物沉淀；(3)將步驟(2)中的上清液與200 u L濃度為2. 0 X 10_8mol/L的ZnSe/ZnS核/殼量子點(diǎn)溶液混合，于365nm下觀察藍(lán)色熒光，在620nm下觀察紅色熒光，并用熒光儀于365nm下測量ZnSe/ZnS核/殼量子的熒光強(qiáng)度，在620nm下測量聯(lián)吡啶釕的熒光強(qiáng)度。將800 u L超純水與200 u L濃度為2. OX 10_8mol/L的ZnSe/ZnS核/殼量子點(diǎn)溶液混合作為對照。檢測結(jié)果如圖2所示，對照與人乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞的ZnSe/ZnS核/殼量子點(diǎn)熒光值相當(dāng)，20000個(gè)乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞已經(jīng)接近了試劑盒測量的上限值，20000個(gè)乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞中HER2基因的表達(dá)量高，此時(shí)無法觀察到紅色熒光，紅色熒光信號強(qiáng)度也處于無法檢測。實(shí)施例2一、所述的試劑盒中包括(I)抗體稀釋緩沖液磷酸與NaCl的混合溶液，其中磷酸和NaCl的濃度均為0.02mol/L ；(2)孵育緩沖液磷酸、NaCl、胎牛血清配置的混合溶液，磷酸、NaCl的濃度為0. 02mol/L，胎牛血清濃度為10% ；(3)聯(lián)吡啶釕標(biāo)記的HER2單克隆抗體溶液濃度為I X 10_6mOl/L ；(4) ZnSe/ZnS核/殼量子點(diǎn)水溶液濃度為I. 0 X 10_6mol/L ；二、試劑盒的應(yīng)用用一中的試劑盒對人乳腺癌細(xì)胞和人胚腎細(xì)胞進(jìn)行檢測(I)用抗體稀釋緩沖液稀釋聯(lián)吡啶釕標(biāo)記的HER2單克隆抗體的溶液，使聯(lián)吡啶釕標(biāo)記的HER2單克隆抗體的濃度為6. OX KTmol/L ;用超純水稀釋ZnSe/ZnS核/殼量子點(diǎn)的水溶液，使ZnSe/ZnS核/殼量子點(diǎn)的濃度為5. 0 X 10_8mol/L ；
(2)第一組將細(xì)胞密度為4. 0 X IO7個(gè)/mL的人乳腺癌細(xì)胞培養(yǎng)液500 y L (細(xì)胞數(shù)量為20000)與200 ii L濃度為6. OX KTmol/L的聯(lián)吡啶釕標(biāo)記的HER2單克隆抗體溶液混合，再加入100 U L孵育緩沖液，室溫下放置30min，發(fā)生抗原抗體特異性結(jié)合反應(yīng)，再用500g離心力低速離心，使抗原抗體結(jié)合物沉淀； 第二組將細(xì)胞密度為4. 0 X IO7個(gè)/mL的人胚腎細(xì)胞培養(yǎng)液500 y L (細(xì)胞數(shù)量為20000)與200 ii L濃度為6. OX 10_7mOl/L的聯(lián)吡啶釕標(biāo)記的HER2單克隆抗體溶液混合，再加入IOOy L孵育緩沖液，室溫下放置45min，發(fā)生抗原抗體特異性結(jié)合反應(yīng)，再用800g離心力低速離心，使抗原抗體結(jié)合物沉淀；(3)將步驟⑵中的第一組上清液和第二組上清液分別與200ii L濃度為
5.OX 10_8mol/L的ZnSe/ZnS核/殼量子點(diǎn)溶液混合，在620nm下觀察紅色熒光，并用熒光儀于620nm下測量聯(lián)吡啶釕的熒光強(qiáng)度。將800 u L超純水與200 u L濃度為2. 0X 10_8mol/L 的ZnSe/ZnS核/殼量子點(diǎn)溶液混合作為對照。結(jié)果如圖3所示，人胚腎細(xì)胞的紅色熒光強(qiáng)度大于乳腺癌細(xì)胞的紅色熒光強(qiáng)度，乳腺癌細(xì)胞J1ER2基因的表達(dá)量高于人胚腎細(xì)胞HER2基因的表達(dá)量，對照組紅色熒光無法檢測。實(shí)施例3一、所述的試劑盒中包括(I)抗體稀釋緩沖液磷酸與NaCl的混合溶液，其中磷酸和NaCl的濃度均為0.03mol/L ；(2)孵育緩沖液磷酸、NaCl、胎牛血清配置的混合溶液，磷酸、NaCl的濃度為0. 03mol/L，胎牛血清濃度為20% ；(3)聯(lián)吡啶釕標(biāo)記的HER2單克隆抗體溶液濃度為2X 10_6mOl/L ；(4) ZnSe/ZnS核/殼量子點(diǎn)水溶液濃度為2. 0 X 10_6mol/L ；二、試劑盒的應(yīng)用用一中的試劑盒對不同密度的BT474細(xì)胞進(jìn)行檢測(I)用抗體稀釋緩沖液稀釋聯(lián)吡啶釕標(biāo)記的HER2單克隆抗體溶液，使聯(lián)吡啶釕標(biāo)記的HER2單克隆抗體的濃度為6. OX 10_7mOl/L ;用超純水稀釋ZnSe/ZnS核/殼量子點(diǎn)水溶液，使ZnSe/ZnS核/殼量子點(diǎn)的濃度為8. 0 X 10_8mol/L ；(2)按照表I的密度將1-14組的BT474細(xì)胞培養(yǎng)液500 ii L與200 ii L濃度為
6.OX KTmol/L的聯(lián)吡啶釕標(biāo)記的HER2單克隆抗體溶液混合，再加入100 u L孵育緩沖液，室溫下放置60min，發(fā)生抗原抗體特異性結(jié)合反應(yīng)，再用600g離心力低速離心，使抗原抗體結(jié)合物沉淀；表1BT474細(xì)胞密度梯度
權(quán)利要求
1.一種檢測乳腺癌J1ER2基因表達(dá)量的量子點(diǎn)免疫熒光試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒包括 (1)抗體稀釋緩沖液； (2)孵育緩沖液； (3)聯(lián)吡啶釕標(biāo)記的HER2單克隆抗體的溶液； (4)無鎘量子點(diǎn)的水溶液； 所述的抗體稀釋緩沖液為磷酸-NaCl緩沖液； 所述的孵育緩沖液為磷酸-NaCl-胎牛血清緩沖液。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的檢測乳腺癌HER2基因表達(dá)量的量子點(diǎn)免疫熒光試劑盒，其特征在于，所述的無鎘量子點(diǎn)為ZnSe/ZnS核/殼量子點(diǎn)。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的檢測乳腺癌HER2基因表達(dá)量的量子點(diǎn)免疫熒光試劑盒，其特征在于，所述的抗體稀釋緩沖液中磷酸與NaCl的摩爾比為I : I。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的檢測乳腺癌HER2基因表達(dá)量的量子點(diǎn)免疫熒光試劑盒，其特征在于，所述的抗體稀釋緩沖液中磷酸與NaCl的濃度相同，且為0. 01-0. 03mol/L。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的檢測乳腺癌HER2基因表達(dá)量的量子點(diǎn)免疫熒光試劑盒，其特征在于，所述的孵育緩沖液含有5% -20%的胎牛血清。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的檢測乳腺癌HER2基因表達(dá)量的量子點(diǎn)免疫熒光試劑盒，其特征在于，所述的聯(lián)吡啶釕標(biāo)記的HER2單克隆抗體溶液濃度為I X 10_6mOl/L-2X 10_6mOl/L。
7.一種用權(quán)利要求I所述的試劑盒檢測乳腺癌HER2基因表達(dá)量的方法，其特征在于，具體步驟如下 (1)用抗體稀釋緩沖液稀釋聯(lián)吡啶釕標(biāo)記的J1ER2單克隆抗體的溶液； (2)將待測細(xì)胞加入步驟(I)得到的溶液中，再加入孵育緩沖液，室溫條件下聯(lián)吡啶釕標(biāo)記的HER2單克隆抗體與待測細(xì)胞表面的HER2基因表達(dá)蛋白發(fā)生特異性的結(jié)合反應(yīng)，將特異性結(jié)合反應(yīng)完畢的溶液低速離心，離心后收集上清液； (3)將步驟(2)所得上清液加入無鎘量子點(diǎn)的水溶液中，觀察無鎘量子點(diǎn)熒光，并用熒光光譜儀測定無鎘量子點(diǎn)熒光強(qiáng)度或觀察聯(lián)吡啶釕熒光，并用熒光光譜儀測定聯(lián)吡啶釕熒光強(qiáng)度。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的試劑盒使用方法，其特征在于，所述的聯(lián)吡啶釕標(biāo)記的HER2單克隆抗體與所述的無鎘量子點(diǎn)摩爾比為I : 20-1 7.5。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的試劑盒使用方法，其特征在于，步驟(2)中特異性的結(jié)合反應(yīng)的時(shí)間為30-60min。
10.根據(jù)權(quán)利要求7所述的試劑盒使用方法，其特征在于，步驟(2)中低速離心的離心力為 500_800g。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種檢測乳腺癌HER2基因表達(dá)量的方法及其檢測試劑盒。本發(fā)明所提供的試劑盒包括(1)抗體稀釋緩沖液，(2)孵育緩沖液，(3)聯(lián)吡啶釕標(biāo)記的HER2單克隆抗體的溶液，(4)無鎘量子點(diǎn)的水溶液。所述的抗體稀釋緩沖液為磷酸與NaCl混合配置的磷酸-NaCl緩沖液；所述的孵育緩沖液為所述的抗體稀釋緩沖液與胎牛血清混合。實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明的檢測乳腺癌HER2基因表達(dá)量的方法操作簡單，靈敏度高，精確度好。
文檔編號G01N33/68GK102798724SQ201210279149
公開日2012年11月28日 申請日期2012年8月7日 優(yōu)先權(quán)日2012年8月7日
發(fā)明者蔡林濤, 盛宗海, 胡德紅, 龔萍, 張鵬飛, 高篤陽 申請人:深圳先進(jìn)技術(shù)研究院