專利名稱：一種煙草及煙草制品的感官組學(xué)測定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于煙草制品測試技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種煙草及煙草制品的感官組學(xué)測定方法。
背景技術(shù)：
煙草及煙草制品的感官質(zhì)量不僅取決于它們產(chǎn)生的香氣，也取決于它們產(chǎn)生的吃味，研究煙草及煙草制品中含有的香氣、味覺和化學(xué)感覺(chemesthesis)成分有助于提高這些產(chǎn)品的感官質(zhì)量。歷史上，有關(guān)煙草及煙草制品中香氣成分的研究較多，它們的分離分析和感官評價技術(shù)相對較為完善，例如采用GC/0 (氣相色譜-嗅覺測定法)(Journal ofChromatography A, 2008, 1186,123-143)。然而,有關(guān)煙草及煙草制品 中味覺、化學(xué)感覺成分的研究極少，主要原因是它們的分離分析和感官評價技術(shù)欠缺。味覺是溶解在水中的呈味物質(zhì)作用于味蕾而產(chǎn)生的感覺?；瘜W(xué)感覺(chemesthesis)的概念形成較晚,包括了紅辣椒引發(fā)的灼燒感、薄荷引發(fā)的清涼感以及碳酸飲料引發(fā)的麻刺感，它們都與三叉神經(jīng)、舌緣神經(jīng)和迷走神經(jīng)產(chǎn)生的痛覺和溫覺有關(guān)，以前也稱為三叉神經(jīng)反應(yīng)(Chem. Rev. , 2010, 110, 2313-2365)。感官代謝組(sensometabolome)是指所有全部的感官活性、低分子量化合物的集合體，反映感官表現(xiàn)型，引發(fā)食品特征的嗅覺、味覺和化學(xué)感覺。為了尋找引發(fā)食品味覺、化學(xué)感覺的特征成分，研究人員最近將分離分析技術(shù)和感官評價技術(shù)相結(jié)合提出了感官組學(xué)(sensomics)的概念(Angew. Chem. Int. Ed. , 2011, 50, 2220-2242)。感官組學(xué)是以感官代謝組為研究對象，在分子水平上研究食品感官質(zhì)量的多學(xué)科交叉技術(shù)。在嗅覺成分方面，研究人員應(yīng)用感官組學(xué)開發(fā)了香氣萃取物稀釋分析法(aroma extract dilutionanalysis, AEDA)，這是一種基于溶劑連續(xù)稀釋直到檢測不到香氣成分存在，即逐步稀釋到香氣閾值的方法，可用于分離分析食品中嗅覺活性成分(Trends Food Sci. Technol.，1993，4，68-73)。在味覺和化學(xué)感覺成分方面，研究人員應(yīng)用感官組學(xué)開發(fā)了味覺稀釋分析法(taste dilution analysis, TDA),這是一種對食品中味覺和化學(xué)感覺活性成分進行分級分離、評價和測定的方法，可用于分離分析復(fù)雜的食品、植物原料和生物發(fā)酵湯中帶有味覺和化學(xué)感覺特征的化合物(J. Agric. Food. Chem. , 2011, 59，12578-12588)。目前，感官組學(xué)只在復(fù)雜食品體系中有一些的應(yīng)用，煙草及煙草制品領(lǐng)域還沒有出現(xiàn)應(yīng)用感官組學(xué)的報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的正是基于上述現(xiàn)有技術(shù)狀況而提供的一種煙草及煙草制品的感官組學(xué)測定方法，為開發(fā)應(yīng)用煙草及煙草制品的特征代謝物提供技術(shù)手段。本發(fā)明依據(jù)的原理是以人的鼻子和舌頭部位作為生物傳感器，對所有全部的感官活性代謝物進行分級分離、感官評價和定性定量測定，通過溶劑逐步稀釋，得到不同組分的嗅覺、味覺和化學(xué)感覺活性值，篩選主要的感官活性代謝物。
本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)的
一種煙草及煙草制品的感官組學(xué)測定方法，具體步驟如下
(I)將煙草及煙草制品用溶劑提取，得到它們的提取物；
(2 )稱取一定量的煙草及煙草制品提 取物，用柱層色譜分級分離，紫外檢測儀檢測不同波長下流分的吸光度，自動流分收集器收集各個流分，分別標記為？1、？2、？3、？4、？5、？617、P8、P9、P10......等；
(3)然后，將每一流分分為兩等份兒，其中一份兒用凍干機凍干，用于嗅覺、味覺、化學(xué)感覺的感官測定評價使用。在本發(fā)明中，嗅覺感官的測定評價方法為將未凍干的流分用乙醚作為溶劑，以體積I :1逐步稀釋，通過氣相色譜-嗅覺測定法(GC/0)分析，直到某個稀釋濃度下不再聞到相應(yīng)的氣味為止，記錄相應(yīng)的稀釋倍數(shù)，即為嗅覺活性值；然后，通過儀器分析手段，例如GC-MS得到帶有不同香韻的嗅覺活性代謝物。味覺、化學(xué)感覺的測定評價方法為(1)取一份兒凍干流分，用蒸餾水稀釋，使測評人員按10分標度法對流分的甜、酸、苦、咸和辣強度進行標度檢驗，強度和標度值如下無(-)、微有(1-3)、較強(4-6)、強(7-9) ;(2)將各流分用蒸餾水按體積比I :1逐步稀釋，然后按濃度增加的順序呈給經(jīng)過訓(xùn)練的測評人員，每一個稀釋濃度用三點測試法評價，當某一稀釋濃度與兩個空白之間的感官差異剛好被辨別出來時，稱這個稀釋倍數(shù)為感官活性值；(3)確定每一流分的味覺、化學(xué)感覺活性值。所述參加味覺、化學(xué)感覺的測評人員在進行味覺和化學(xué)感覺評價之前，參照ISO3972:2011、ISO 3972:1991和GB 12312-90，對測評人員進行味覺敏感度的校準；參照GB/T21265-2007,對測評人員進行辣度的校準；測評人員數(shù)量要求6個以上，最好為12個；評價環(huán)境溫度為22-25 °C。所述煙草及煙草制品可以為烤煙、白肋煙、香料煙等單料煙葉，國內(nèi)外各種牌號的烤煙型和混合型卷煙，口用型、鼻用型和口鼻兩用型無煙氣煙草制品。提取溶劑為水、乙醇、丙醇、乙酸乙酯、乙醚、丙二醇中的任意一種或其混合溶劑。所述的柱層色譜包括硅膠、凝膠、大孔吸附樹脂等柱色譜，其中優(yōu)先使用凝膠柱色譜；凝膠柱色譜填料可以為 SephadexG-10、Sephadex G-15、Sepharose 6B、SepharoseConA> Sephadex G-25、Sephadex LH-20 等，其中優(yōu)先使用 SephadexG-10、Sephadex G-15、Sephadex LH-20。所述的紫外檢測波長可以為220、254、280、340納米等波長。本發(fā)明涉及的煙草及煙草制品的感官組學(xué)方法可用于發(fā)現(xiàn)煙草及煙草制品的感官活性代謝物，為提高煙草及煙草制品的感官質(zhì)量提供了技術(shù)支撐。本發(fā)明以感官活性為向?qū)?，采用柱層色譜對煙草及煙草制品提取物進行分級分離，用自動流分收集器收集不同數(shù)量的流分，然后根據(jù)國際標準ISO 3972:2011以及國標GB/T 21265-2007篩選主要的感官活性代謝物，最后通過溶劑逐步稀釋得到每一流分的感官活性值。本發(fā)明具有以下優(yōu)點流程簡單、操作方便、適用范圍廣，可用于提高煙草及煙草制品的感官質(zhì)量。


圖I為本發(fā)明的測定步驟流程圖。圖2美國深色明火烤煙煙葉提取物的分離色譜圖。圖3中華成品卷煙煙絲提取物的分離色譜圖。
具體實施例方式本發(fā)明以下結(jié)合實施例子做進一步描述，但并不以任何方式限制本發(fā)明的范圍。實施例子I
美國深色明火烤煙煙葉的感官組學(xué)方法
稱取50g煙葉，進行蒸汽加熱調(diào)制，處理溫度為100°C。然后，加入100毫升的乙醇和水(I :1)作為溶劑，提取得到美國深色明火烤煙煙葉提取物。取2. O毫升清液，上樣給凝膠色譜柱，色譜柱填料為Sephadex LH-20。以蒸餾水為流動相，在220 nm波長下檢測流分的吸光度，分離效果見圖2。使用自動流分收集器收集28個流分，分別標記為P1、P2、P3、P4、P5、P6…P28。每一流分分為兩等份兒，其中一份兒用凍干機凍干，以便感官評價使用。將上述未凍干的流分用乙醚進行體積I :1逐步稀釋，然后通過GC/0分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)美國深色明火烤煙煙葉提取物中含有一種帶有果香的成分，通過GC-MS分析發(fā)現(xiàn)，該化合物的分子離子峰為191，判定它為大馬酮。通過乙醚稀釋分析發(fā)現(xiàn)，該香氣成分的嗅覺活性值為512。將上述凍干流分加入I. O毫升蒸餾水，使測評人員按10分標度法對每一流分的甜、酸、苦、咸、辣等強度進行標度檢驗，評價結(jié)果見表I。表I美國深色明火烤煙煙葉的評價結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種煙草及煙草制品的感官組學(xué)測定方法，其特征在于該方法具體步驟如下 將煙草及煙草制品用溶劑提取，得到它們的提取物； 稱取一定量的煙草及煙草制品提取物，用柱層色譜分級分離，紫外檢測儀檢測不同波長下流分的吸光度，自動流分收集器收集各個流分，分別標記為P1、P2、P3、P4、P5、P6、P7、P8、P9、P10......等； 然后，將每一流分分為兩等份兒，其中一份兒用凍干機凍干，用于嗅覺、味覺、化學(xué)感覺的感官測定評價使用。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的煙草及煙草制品的感官組學(xué)測定方法，其特征在于嗅覺感官的測定評價方法為將未凍干的流分用乙醚作為溶劑，以體積I :1逐步稀釋，通過氣相色譜-嗅覺測定法(GC/0)分析，直到某個稀釋濃度下不再聞到相應(yīng)的氣味為止，記錄相應(yīng)的稀釋倍數(shù)，即為嗅覺活性值；然后，通過儀器分析手段，例如GC-MS得到帶有不同香韻的嗅覺活性代謝物。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的煙草及煙草制品的感官組學(xué)測定方法，其特征在于味覺、化學(xué)感覺的測定評價方法為(1)取一份兒凍干流分，用蒸餾水稀釋，使測評人員按10分標度法對流分的甜、酸、苦、咸和辣強度進行標度檢驗，強度和標度值如下無(-)、微有(1-3)、較強(4-6)、強(7-9);(2)將各流分用蒸餾水按體積比I :1逐步稀釋，然后按濃度增加的順序呈給經(jīng)過訓(xùn)練的測評人員，每一個稀釋濃度用三點測試法評價，當某一稀釋濃度與兩個空白之間的感官差異剛好被辨別出來時，稱這個稀釋倍數(shù)為感官活性值；(3)確定每一流分的味覺、化學(xué)感覺活性值。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的煙草及煙草制品的感官組學(xué)測定方法，其特征在于所述參加味覺、化學(xué)感覺的測評人員在進行味覺和化學(xué)感覺評價之前，參照ISO 3972:2011、ISO.3972:1991和GB 12312-90，對測評人員進行味覺敏感度的校準;參照GB/T 21265-2007,對測評人員進行辣度的校準；測評人員數(shù)量要求6個以上，最好為12個；評價環(huán)境溫度為.22-25 0C。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的煙草及煙草制品的感官組學(xué)測定方法，其特征在于所述煙草及煙草制品可以為烤煙、白肋煙、香料煙等單料煙葉，國內(nèi)外各種牌號的烤煙型和混合型卷煙，口用型、鼻用型和口鼻兩用型無煙氣煙草制品。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的煙草及煙草制品的感官組學(xué)測定方法，其特征在于提取溶劑為水、乙醇、丙醇、乙酸乙酯、乙醚、丙二醇中的任意一種或其混合溶劑。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述的煙草及煙草制品的感官組學(xué)測定方法，其特征在于所述的柱層色譜包括硅膠、凝膠、大孔吸附樹脂等柱色譜，其中優(yōu)先使用凝膠柱色譜；凝膠柱色譜填料可以為 SephadexG-10、Sephadex G-15、Sepharose 6B、Sepharose ConA> SephadexG-25、Sephadex LH-20 等，其中優(yōu)先使用 SephadexG-10、Sephadex G-15、Sephadex LH-20。
8.根據(jù)權(quán)利要求I所述的煙草及煙草制品的感官組學(xué)測定方法，其特征在于所述的紫外檢測波長可以為220、254、280、340納米等波長。
全文摘要
一種煙草及煙草制品的感官組學(xué)測定方法，特征是具體步驟如下(1)將煙草及煙草制品用溶劑提??；(2)稱取該提取物，用柱層色譜分級分離，紫外檢測儀檢測不同波長下流分的吸光度，收集各個流分，分別標記為P1、P2、……等；(3)將每一流分分為兩等份兒，其中一份兒用凍干機凍干，用于嗅覺、味覺、化學(xué)感覺的感官評價使用。本發(fā)明以感官活性為向?qū)?，采用柱層色譜對煙草及煙草制品提取物進行分級分離，用自動流分收集器收集不同數(shù)量的流分，然后根據(jù)國際標準ISO3972:2011以及國標GB/T21265-2007篩選主要的感官活性代謝物，最后通過溶劑逐步稀釋得到每一流分的感官活性值。本發(fā)明具有以下優(yōu)點流程簡單、操作方便、適用范圍廣。
文檔編號G01N33/00GK102692465SQ20121021008
公開日2012年9月26日 申請日期2012年6月25日 優(yōu)先權(quán)日2012年6月25日
發(fā)明者何保江, 劉俊輝, 孫世豪, 宗永立, 屈展, 張建勛, 張朝平, 李鵬, 霍現(xiàn)寬, 馬驥 申請人:中國煙草總公司鄭州煙草研究院