專利名稱：一種檢測(cè)食品中石蠟含量的方法及其樣品前處理方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種檢測(cè)食品中石蠟含量的方法及其樣品前處理方法。
背景技術(shù)：
石蠟是ー種石油產(chǎn)品，主要由不同碳原子數(shù)的正烷烴CnH2n+2 (η = 14 34)組成，屬于非食用物質(zhì)，其中含有重金屬、苯、甲苯、苯并芘、長(zhǎng)碳鏈烷烴等。人過多服用石蠟會(huì)降低免疫功能，有些物質(zhì)在人體內(nèi)長(zhǎng)期積蓄，還會(huì)引發(fā)人體細(xì)胞變異疾病，嚴(yán)重危害健康。因石蠟在國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB2760中允許使用的范圍很小，質(zhì)檢人員不會(huì)把它作為食品中必檢的項(xiàng)目而使石蠟具有很大的隱蔽性。近年來將石蠟濫用于各類食品中的事件時(shí)有發(fā)生，如在大米、瓜子等產(chǎn)品中拋光増加光澤，増加粉絲的韌性和光澤，改善火鍋底料硬度等，2011年廣東中山“劣質(zhì)紅薯粉”事件的發(fā)生，引起社會(huì)各界廣泛關(guān)注并造成惡劣影響，可見對(duì)食品 中石蠟的檢測(cè)監(jiān)管迫在眉睫。GB/T 21309-2007《涂潰油脂或石蠟大米檢驗(yàn)》中所采用的油斑法僅能提供定性判定，GB/T 24313-2009《蜂蠟中石蠟的測(cè)定氣相色譜-質(zhì)譜法》對(duì)蜂蠟中石蠟烴類物質(zhì)的判別限僅為10%，并且兩類方法限于單類基質(zhì)食品，推廣應(yīng)用難度較大，難以滿足火鍋底料等復(fù)雜基質(zhì)樣品中石蠟的檢測(cè)?！禛C-MS、GC-FID測(cè)定粉絲中的石蠟含量》采用氫氧化鉀_甲醇溶液進(jìn)行皂化除雜，適用于粉絲類簡(jiǎn)單基質(zhì)，但反應(yīng)過程引入較多水，需要添加適量無水硫酸鈉脫水。《GC-MS法快速測(cè)定火鍋底料中石蠟》研究中發(fā)現(xiàn)直接進(jìn)樣分析，油脂及辣椒紅色素對(duì)進(jìn)樣ロ、色譜柱及離子源等均會(huì)造成污染，采用硫酸磺化法能很好地去除油脂及色素，浄化除雜后有機(jī)溶劑層無油脂及色素，但將產(chǎn)生一定量的十四烷酸和十六烷酸?！妒秤镁惺灥臍庀嗌V/質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定》建立了食用菌中石蠟的氣相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用檢測(cè)方法，但局限于定性地鑒別食用菌中是否有摻雜石蠟?！陡道锶~紅外光譜法檢測(cè)火鍋底料中的固體石蠟》在樣品前處理過程中，加入熱水速凍提取脂肪層進(jìn)行皂化除雜，但其定量程序比較繁瑣，而且皂化過程可能產(chǎn)生較多固形物，需要較多水或溶劑，同時(shí)鑒于指紋領(lǐng)域中的指紋圖譜是紅外光譜的特征之一，容易受到溶劑及其它因素的影響，雜質(zhì)干擾顯著。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服上述現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供一種檢測(cè)食品中石蠟含量的樣品前處理方法。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取了以下技術(shù)方案一種檢測(cè)食品中石蠟含量的樣品前處理方法，包括以下步驟(I)取樣稱取經(jīng)均勻化處理的待測(cè)樣品O. 2 5. Og ;根據(jù)樣品基質(zhì)不同(如紅薯粉等低含水量固態(tài)樣品、火鍋底料等富含油脂類凝固態(tài)樣品)采取不同的均勻化方式；根據(jù)均勻化的難易程度稱取或多或少的樣品。粉末狀樣品均勻度較好，取樣量為O. 2 I. 0g，凝固態(tài)樣品均勻度稍差，取樣量為I. O 5. 0g。(2)浸提加入3 20ml有機(jī)溶劑，振蕩O. 5 lmin，超聲浸提5 30min，1500 2500r/min離心3 lOmin，收集上清液，重復(fù)浸提2 4次，合并浸提液定容，備用；所述重復(fù)浸提為采用濃度梯度(多次浸提過程中，理論上毎次浸提的目標(biāo)產(chǎn)物濃度比上一次低；固定浸提溶劑用量，分多次浸提一般比一次性全部加入浸提效果要好，此即為濃度梯度浸提)多次浸堤，少量多次提取利用了濃度差，確保浸提充分，使提取更徹底，結(jié)果更可靠，提取效率得到提高，萃取時(shí)間縮短。(3)氧化取O. 5 3. Oml步驟⑵的浸提液，加入O. 5 3. Oml氧化試劑，振蕩20 60min ;所述氧化試劑為O. 5 2g三氧化鉻0. 5 2ml濃硫酸1 4ml水的復(fù)配溶液；振蕩為連續(xù)式振蕩或間歇式振蕩，連續(xù)式振蕩和間歇式振蕩分別為，連續(xù)式振蕩采用搖床或等同儀器設(shè)備不間斷振蕩，間歇式振蕩為間隔時(shí)間不超過5min振蕩O. 5 lmin,以確保非均相液態(tài)反應(yīng)體系的充分反應(yīng)。用有機(jī)溶劑浸提石蠟?zāi)繕?biāo)成分再針對(duì)浸提液進(jìn)行氧化，減少了食品基質(zhì)中固形物雜質(zhì)對(duì)氧化試劑的消耗。 采用非均相液態(tài)振蕩反應(yīng)方式，氧化除雜效果較好。直接氧化法，避免了皂化所產(chǎn)生的大量脂肪酸鈉鹽，大量脂肪酸鈉鹽將導(dǎo)致提取難度増大，所用試劑增多。皂化所用的NaOH溶液含有大量水，減少了皂化步驟，同時(shí)可省略后續(xù)無水硫酸鈉脫水步驟。(4)離心分離加入2 5ml有機(jī)溶劑，振蕩提取O. 5 lmin, 1500 2500r/min離心3 lOmin，收集上清液，重復(fù)提取2 4次，合井上清液備用；采用直接加入有機(jī)溶劑萃取氧化反應(yīng)后目標(biāo)組分再離心分離，為高效的液液非均相高效萃取方式，免除引入較多水的操作，萃取離心分離后無需無水硫酸鈉脫水步驟，免除添加堿性溶液中和操作，萃取離心分離后有機(jī)溶液相ロ11值> 6. 0，不至于呈強(qiáng)酸性而對(duì)檢測(cè)儀器產(chǎn)生不良影響。(5)過柱凈化將步驟(4)的上清液過有機(jī)溶劑活化后的硅膠小柱，采用2 5ml有機(jī)溶劑淋洗；(6)氮吹、定容采用50°C氮將有機(jī)溶劑吹至干，再加入有機(jī)溶劑定容，得到前處理后的樣品。步驟(I)中所述均勻化處理為打粉、絞碎或攪拌。優(yōu)選地，所述氧化試劑為Ig三氧化鉻1ml濃硫酸2ml水的復(fù)配溶液。采用上述優(yōu)選配比效果，可以達(dá)到同使用濃硫酸相近的浄化除雜效果；反應(yīng)相對(duì)比濃硫酸溫和(濃硫酸氧化除雜過程中因反應(yīng)劇烈而引入的其它副產(chǎn)物)，無其它干擾檢測(cè)的副產(chǎn)物產(chǎn)生，操作更安全。上述步驟中，所述有機(jī)溶劑為烷烴、氯代烷烴、酮類溶劑中的ー種或幾種；更優(yōu)選地，所述有機(jī)溶劑為環(huán)己烷或正己烷；在對(duì)同一個(gè)樣品進(jìn)行處理時(shí)，各步驟使用相同的有機(jī)溶剤。采用濃度梯度多次浸堤，少量多次提取利用了濃度差，確保浸提充分，使提取更徹底，結(jié)果更可靠，提取效率得到提高，萃取時(shí)間縮短。優(yōu)選地，所述重復(fù)浸提的次數(shù)為2次。本發(fā)明的另一目的在于提供一種檢測(cè)食品中石蠟含量的方法，采取了以下技術(shù)方案采用氣相色譜或氣質(zhì)聯(lián)用檢測(cè)經(jīng)過上述前處理得到的樣品。采用氣相色譜檢測(cè)時(shí)，上機(jī)檢測(cè)參數(shù)為對(duì)氣相色譜進(jìn)樣ロ溫度設(shè)定為180 280°C，載氣流速設(shè)定為O. 5 2ml/min，色譜柱為弱極性或非極性柱(優(yōu)選DB-I型或DB-5型色譜柱)，接ロ溫度設(shè)定為180 280°C。采用氣質(zhì)聯(lián)用檢測(cè)時(shí)，上機(jī)檢測(cè)參數(shù)為經(jīng)氣質(zhì)聯(lián)用儀的進(jìn)樣ロ進(jìn)入色譜柱中，進(jìn)行程序升溫，從40 120°C開始，以10 30°C /min的速度升溫至140 220°C ;再以5 300C /min的速度升溫至250 320°C，樣品的各組分被色譜柱分離，被色譜柱分離的樣品各組分再進(jìn)行質(zhì)譜檢測(cè)。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效 果I、本發(fā)明的樣品前處理方法簡(jiǎn)單，樣品在前處理中損失較少，定量結(jié)果準(zhǔn)確，回收率高；采用本發(fā)明的方法一次能處理多個(gè)樣品，批量化前處理大大提高了工作效率；溫度低，有機(jī)溶劑用量少，使得操作過程毒性低；2、本發(fā)明的樣品前處理方法適合多類食品基質(zhì)，經(jīng)前處理的樣品可供氣相色譜或氣質(zhì)聯(lián)用檢測(cè)來測(cè)定樣品中的石蠟含量，基質(zhì)干擾少，推廣適應(yīng)性好。
具體實(shí)施例方式以下通過具體實(shí)施例來詳細(xì)說明本發(fā)明。實(shí)施例I檢測(cè)火鍋底料中的石蠟含量步驟如下⑴取樣將火鍋底料攪拌均勻，取9個(gè)平行樣品，每個(gè)樣品稱取5g(精確到O. OOlg);在其中3個(gè)樣品中分別加入O. 5ml濃度為100 μ g/ml的石蠟標(biāo)準(zhǔn)溶液。所有的樣品按下列方法進(jìn)行樣品前處理(2)浸提先加入20ml環(huán)己燒,超聲浸提30min, 2500r/min速度下離心5min,收集上清液,重復(fù)浸提2次，合并環(huán)己烷浸提液定容至40ml備用；(3)氧化取I. Oml步驟(2)的浸提液，加入I. Oml氧化試劑，所述氧化試劑為Ig三氧化鉻Iml濃硫酸2ml水的復(fù)配溶液,振蕩反應(yīng)30min ；(4)離心分離加入5ml環(huán)己燒,振蕩提取O. 5 lmin, 2500r/min離心5min,收集上清液,重復(fù)提取2次，合并環(huán)己烷上清液，備用；(5)過柱凈化將步驟(4)的上清液過環(huán)己烷活化后的硅膠小柱，采用5ml環(huán)己烷淋洗；(6)氮吹、定容采用50°C氮將過柱浄化的浸提液吹至干，加入環(huán)己烷定容到1ml，得到前處理后的樣品。(7)上機(jī)檢測(cè)經(jīng)過上述前處理的樣品，采用氣相色譜來檢測(cè)樣品中的石蠟含量。上機(jī)檢測(cè)參數(shù)為對(duì)氣相色譜進(jìn)樣ロ溫度設(shè)定為180 280°C，載氣流速設(shè)定為O. 5 2ml/min，色譜柱選擇弱極性或非極性柱(優(yōu)選DB-I型或DB-5型色譜柱)，接ロ溫度設(shè)定為180 280°C。檢測(cè)結(jié)果按照標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算樣品中石蠟含量。結(jié)果為6個(gè)平行樣的含量分別為23. lmg/kg、24. 3mg/kg、25. 7mg/kg、22. 6mg/kg、24. 6mg/kg、24. 8mg/kg,平均值為 24. 2mg/kg ；3個(gè)加標(biāo)回收率分別為91. 6%,92. 1%，91. 3%。實(shí)施例2檢測(cè)火鍋底料中的石蠟含量步驟如下⑴取樣 將火鍋底料攪拌均勻，取9個(gè)平行樣品，每個(gè)樣品稱取5g(精確到O. OOlg);在其中3個(gè)樣品中分別加入O. 5ml濃度為100 μ g/ml的石蠟標(biāo)準(zhǔn)溶液。所有的樣品按下列方法進(jìn)行樣品前處理(2)浸提先加入20ml環(huán)己燒,超聲浸提5min, 2500r/min速度下離心5min,收集上清液,重復(fù)浸提2次，合并環(huán)己烷浸提液定容至40ml備用；(3)氧化取I. Oml步驟(2)的浸提液,加入I. Oml氧化試劑,所述氧化試劑為Ig三氧化鉻Iml濃硫酸2ml水的復(fù)配溶液,振蕩反應(yīng)30min ；(4)離心分離加入5ml環(huán)己燒,振蕩提取O. 5 lmin, 2500r/min離心5min,收集上清液,重復(fù)提取2次，合并環(huán)己烷上清液，備用；(5)過柱凈化將步驟⑷的上清液過環(huán)己烷活化后的硅膠小柱，采用5ml環(huán)己烷淋洗；(6)氮吹、定容采用50°C氮將過柱浄化的浸提液吹至干，加入環(huán)己烷定容到1ml，得到前處理后的樣品。(7)上機(jī)檢測(cè)經(jīng)過上述前處理的樣品，采用氣相色譜來檢測(cè)樣品中的石蠟含量。上機(jī)檢測(cè)參數(shù)為對(duì)氣相色譜進(jìn)樣ロ溫度設(shè)定為180 280°C，載氣流速設(shè)定為O. 5 2ml/min，色譜柱選擇弱極性或非極性柱(優(yōu)選DB-I型或DB-5型色譜柱)，接ロ溫度設(shè)定為180 280°C。檢測(cè)結(jié)果按照標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算樣品中石蠟含量。結(jié)果為6個(gè)平行樣的含量分別為21. 4mg/kg、22. 5mg/kg、23. 4mg/kg、20. 4mg/kg、22. 7mg/kg、22. 7mg/kg,平均值為 22. 2mg/kg ；3個(gè)加標(biāo)回收率分別為81. 6%,84. 1%，86· 3%。實(shí)施例3檢測(cè)干香菇中的石蠟含量步驟如下⑴取樣將干香菇粉碎成粉末，取9個(gè)平行樣品，每個(gè)樣品稱取Ig(精確到O. OOlg);在其中3個(gè)樣品中分別加入O. 5ml濃度為100 μ g/ml的石蠟標(biāo)準(zhǔn)溶液。
所有的樣品按下列方法進(jìn)行樣品預(yù)處理(2)浸提先加入5ml環(huán)己燒,超聲浸提lOmin, 2500r/min速度下離心5min,收集上清液,重復(fù)提取2次，合并環(huán)己烷浸提液定容至IOml備用；(3)氧化取I. Oml步驟(2)的浸提液，加入I. Oml氧化試劑，所述氧化試劑為Ig三氧化鉻、Iml濃硫酸2mL水的復(fù)配溶液,振蕩反應(yīng)30min ；(4)離心分離加入5ml環(huán)己燒,振蕩提取O. 5 lmin, 2500r/min離心5min,收集上清液,重復(fù)提取2次，合并環(huán)己烷提取液，備用；(5)過柱凈化將步驟⑷的上清液過環(huán)己烷活化后的硅膠小柱，采用5ml環(huán)己烷淋洗；(6)氮吹、定容采用50°C氮將過柱浄化浸提液吹至干，加入環(huán)己烷定容到1ml，得到前處理后的樣品。(7)上機(jī)檢測(cè)經(jīng)過上述前處理的樣品，采用氣相色譜來檢測(cè)樣品中的石蠟含量。上機(jī)檢測(cè)參數(shù)為對(duì)氣相色譜進(jìn)樣ロ溫度設(shè)定為180 280°C，載氣流速設(shè)定為O. 5 2ml/min，色譜柱選擇弱極性或非極性柱(優(yōu)選DB-I型或DB-5型色譜柱)，接ロ溫度設(shè)定為180 280°C。檢測(cè)結(jié)果按照標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算樣品中石蠟含量。結(jié)果為6個(gè)平行樣均未檢出石蠟；3個(gè)加標(biāo)回收率分別為95.6%，97. 1%，96.3%。實(shí)施例4檢測(cè)干香菇中的石蠟含量步驟如下⑴取樣將干香菇粉碎成粉末，取9個(gè)平行樣品，每個(gè)樣品稱取Ig(精確到O. OOlg);在其中3個(gè)樣品中分別加入O. 5ml濃度為100 μ g/ml的石蠟標(biāo)準(zhǔn)溶液。所有的樣品按下列方法進(jìn)行樣品預(yù)處理(2)浸提先加入5ml丙酮,超聲浸提lOmin, 2500r/min速度下離心5min,收集上清液,重復(fù)提取2次，合并丙酮浸提液定容至IOml備用；(3)氧化取I. Oml步驟(2)的浸提液,加入I. Oml氧化試劑,所述氧化試劑為Ig三氧化鉻Iml濃硫酸2mL水的復(fù)配溶液,振蕩反應(yīng)30min ；(4)離心分離加入5ml丙酮,振蕩提取O. 5 lmin, 2500r/min離心5min,收集上清液,重復(fù)提取2次，合并丙酮提取液，備用；(5)過柱凈化
將步驟(4)的上清液過丙酮活化后的硅膠小柱，采用5ml丙酮淋洗；(6)氮吹、定容采用50°C氮將過柱浄化浸提液吹至干，加入丙酮定容到1ml，得到前處理后的樣
品O(7)上機(jī)檢測(cè)經(jīng)過上述前處理的樣品，采用氣相色譜來檢測(cè)樣品中的石蠟含量。上機(jī)檢測(cè)參數(shù)為對(duì)氣相色譜進(jìn)樣ロ溫度設(shè)定為180 280°C，載氣流速設(shè)定為O. 5 2ml/min，色譜柱選擇弱極性或非極性柱(優(yōu)選DB-I型或DB-5型色譜柱)，接ロ溫度設(shè)定為180 280°C。
檢測(cè)結(jié)果按照標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算樣品中石蠟含量。結(jié)果為6個(gè)平行樣均未檢出石蠟；3個(gè)加標(biāo)回收率分別為86. 4%，92· 1%，89· 3%。實(shí)施例5檢測(cè)紅薯粉條中的石蠟含量步驟如下(I)取樣將紅薯粉條粉碎成粉末，取9個(gè)平行樣品，每個(gè)樣品稱取Ig(精確到O. OOlg);在其中3個(gè)樣品中分別加入O. 5ml濃度為100 μ g/ml的石蠟標(biāo)準(zhǔn)溶液。所有的樣品按下列方法進(jìn)行樣品預(yù)處理(2)浸提先加入5ml環(huán)己燒,超聲浸提lOmin, 2500r/min速度下離心5min,收集上清液,重復(fù)提取2次，合并環(huán)己烷浸提液定容至IOml備用；(3)氧化取I. Oml步驟(2)的浸提液,加入I. Oml氧化試劑,所述氧化試劑為Ig三氧化鉻Iml濃硫酸2mL水的復(fù)配溶液,振蕩反應(yīng)30min ；(4)離心分離加入5ml環(huán)己燒,振蕩提取O. 5 lmin, 2500r/min離心5min,收集上清液,重復(fù)提取2次，合并環(huán)己烷上清液，備用；(5)過柱凈化將步驟(4)的上清液過環(huán)己烷活化后的硅膠小柱，采用5ml環(huán)己烷淋洗；(6)氮吹、定容采用50°C氮將過柱浄化浸提液吹至干，加入環(huán)己烷定容到1ml，得到前處理后的樣品。(7)上機(jī)檢測(cè)經(jīng)過上述前處理的樣品，采用氣相色譜來檢測(cè)樣品中的石蠟含量。上機(jī)檢測(cè)參數(shù)為對(duì)氣相色譜進(jìn)樣ロ溫度設(shè)定為180 280°C，載氣流速設(shè)定為O. 5 2ml/min，色譜柱選擇弱極性或非極性柱(優(yōu)選DB-I型或DB-5型色譜柱)，接ロ溫度設(shè)定為180 280°C。檢測(cè)結(jié)果按照標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算樣品中石蠟含量。結(jié)果為6個(gè)平行樣的含量分別為36. lmg/kg、35. lmg/kg、38. 7mg/kg、36. 3mg/kg、36. 9mg/kg、38. 2mg/kg,平均值為 36. 9mg/kg ； 3個(gè)加標(biāo)回收率分別為94. 6 %，96. I %，96. 4 %。實(shí)施例6檢測(cè)紅薯粉條中的石蠟含量步驟如下(I)取樣將紅薯粉條粉碎成粉末，取9個(gè)平行樣品，每個(gè)樣品稱取Ig(精確到O. OOlg);在其中3個(gè)樣品中分別加入O. 5ml濃度為100 μ g/ml的石蠟標(biāo)準(zhǔn)溶液。
所有的樣品按下列方法進(jìn)行樣品預(yù)處理(2)浸提先加入5ml環(huán)己燒,超聲浸提lOmin, 2500r/min速度下離心5min,收集上清液,重復(fù)提取2次，合并環(huán)己烷浸提液定容至IOml備用；(3)氧化取I. Oml步驟(2)的浸提液,加入I. Oml氧化試劑,所述氧化試劑為O. 5g三氧化鉻1ml濃硫酸2. 5mL水的復(fù)配溶液,振蕩反應(yīng)30min ；(4)離心分離加入5ml環(huán)己燒,振蕩提取O. 5 lmin, 2500r/min離心5min,收集上清液,重復(fù)提取2次，合并環(huán)己烷上清液，備用；(5)過柱凈化將步驟⑷的上清液過環(huán)己烷活化后的硅膠小柱，采用5ml環(huán)己烷淋洗；(6)氮吹、定容采用50°C氮將過柱浄化浸提液吹至干，加入環(huán)己烷定容到1ml，得到前處理后的樣品。(7)上機(jī)檢測(cè)經(jīng)過上述前處理的樣品，采用氣相色譜來檢測(cè)樣品中的石蠟含量。上機(jī)檢測(cè)參數(shù)為對(duì)氣相色譜進(jìn)樣ロ溫度設(shè)定為180 280°C，載氣流速設(shè)定為O. 5 2ml/min，色譜柱選擇弱極性或非極性柱(優(yōu)選DB-I型或DB-5型色譜柱)，接ロ溫度設(shè)定為180 280°C。檢測(cè)結(jié)果按照標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算樣品中石蠟含量。結(jié)果為6個(gè)平行樣的含量分別為25. lmg/kg、21. 3mg/kg、28. 2mg/kg、27. lmg/kg、22. 8mg/kg、23. 4mg/kg,平均值為 24. 7mg/kg ;3個(gè)加標(biāo)回收率分別為77.7%，82. 1%，83.4%。實(shí)施例7檢測(cè)新鮮蘋果皮中的石蠟含量步驟如下(I)取樣將新鮮蘋果皮攪拌均勻，取9個(gè)平行樣品，每個(gè)樣品稱取Ig(精確到O. OOlg);在其中3個(gè)樣品中分別加入O. 5ml濃度為100 μ g/ml的石蠟標(biāo)準(zhǔn)溶液。所有的樣品按下列方法進(jìn)行樣品前處理(2)浸提先加入5ml環(huán)己燒,超聲浸提lOmin, 2500r/min速度下離心5min,收集上清液,重復(fù)提取2次，合并環(huán)己烷浸提液定容至IOml備用；(3)氧化取I. Oml步驟(2)的浸提液,加入I. Oml氧化試劑,所述氧化試劑為Ig三氧化鉻Iml濃硫酸2mL水的復(fù)配溶液,振蕩反應(yīng)30min ；(4)離心分離加入5ml環(huán)己燒,振蕩提取O. 5 lmin, 2500r/min離心5min,收集上清液,重復(fù)提取2次，合并環(huán)己烷上清液，備用；(5)過柱凈化將步驟(4)的上清液過環(huán)己烷活化后的硅膠小柱，采用5ml環(huán)己烷淋洗；(6)氮吹、定容采用50°C氮將過柱浄化浸提液吹至干，加入環(huán)己烷定容到1ml，得到前處理后的樣品。(7)上機(jī)檢測(cè)經(jīng)過上述前處理的樣品，采用氣相色譜來檢測(cè)樣品中的石蠟含量。上機(jī)檢測(cè)參數(shù)為對(duì)氣相色譜進(jìn)樣ロ溫度設(shè)定為180 280°C，載氣流速設(shè)定為O. 5 2ml/min，色譜柱選擇弱極性或非極性柱(優(yōu)選DB-I型或DB-5型色譜柱)，接ロ溫度設(shè)定為180 280°C。檢測(cè)結(jié)果按照標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算樣品中石蠟含量。結(jié)果為6個(gè)平行樣的含量分別為15. 3mg/kg、15. 7mg/kg、14. 7mg/kg、16. lmg/kg、16. 5mg/kg、15. 2mg/kg,平均值為 15. 6mg/kg ； 3個(gè)加標(biāo)回收率分別為92. 6 %，93. I %，93. 5 %。實(shí)施例8檢測(cè)新鮮蘋果皮中的石蠟含量步驟如下(I)取樣將新鮮蘋果皮攪拌均勻，取9個(gè)平行樣品，每個(gè)樣品稱取Ig(精確到O. OOlg);在其中3個(gè)樣品中分別加入O. 5ml濃度為100 μ g/ml的石蠟標(biāo)準(zhǔn)溶液。所有的樣品按下列方法進(jìn)行樣品前處理(2)浸提先加入5ml環(huán)己燒,超聲浸提lOmin, 2500r/min速度下離心5min,收集上清液,重復(fù)提取2次，合并環(huán)己烷浸提液定容至IOml備用；(3)氧化取I. Oml步驟(2)的浸提液，加入I. Oml氧化試劑，所述氧化試劑為Ig三氧化鉻Iml濃硫酸2mL水的復(fù)配溶液,振蕩反應(yīng)30min ；(4)離心分離加入5ml環(huán)己燒,振蕩提取O. 5 lmin, 2500r/min離心5min,收集上清液,重復(fù)提取2次，合并環(huán)己烷上清液，備用；(5)過柱凈化
、
將步驟(4)的上清液過環(huán)己烷活化后的硅膠小柱，采用5ml環(huán)己烷淋洗；(6)氮吹、定容
采用50°C氮將過柱浄化浸提液吹至干，加入環(huán)己烷定容到1ml，得到前處理后的樣品。(7)上機(jī)檢測(cè)經(jīng)過上述前處理的樣品，采用氣質(zhì)聯(lián)用來檢測(cè)樣品中的石蠟含量。上機(jī)檢測(cè)參數(shù)為經(jīng)氣質(zhì)聯(lián)用儀的進(jìn)樣ロ進(jìn)入色譜柱中，進(jìn)行程序升溫，從40 120°C開始，以10 30°C /min的速度升溫至140 220°C ;再以5 30°C /min的速度升溫至250 320°C，樣品的各組分被色譜柱分離，被色譜柱分離的樣品各組分再進(jìn)行質(zhì)譜檢測(cè)。檢測(cè)結(jié)果
按照標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算樣品中石蠟含量。結(jié)果為6個(gè)平行樣的含量分別為15. 4mg/kg、15. 8mg/kg、14. 8mg/kg、16. Omg/kg、16. 4mg/kg、15. lmg/kg,平均值為 15. 6mg/kg ； 3個(gè)加標(biāo)回收率分別為94. 6 %，94. I %，94. 5 %。以上是針對(duì)本發(fā)明的可行實(shí)施例的具體說明，但該實(shí)施例并非用以限制本發(fā)明的專利范圍，凡未脫離本發(fā)明的等效實(shí)施或變更，均應(yīng)包含于本發(fā)明的專利范圍中。
權(quán)利要求
1.一種檢測(cè)食品中石蠟含量的樣品前處理方法，其特征在于，包括以下步驟 (1)取樣稱取經(jīng)均勻化處理的待測(cè)樣品O.2 5. Og ; (2)超聲浸提加入3 20ml有機(jī)溶劑，超聲浸提5 30min，離心3 lOmin，收集上清液，重復(fù)浸提2 4次，合并浸提液，定容至10 IOOml ； (3)氧化取O.5 3. Oml步驟⑵的浸提液，加入O. 5 3. Oml氧化試劑，振蕩20 60min ;所述氧化試劑為O. 5 2g三氧化鉻0. 5 2ml濃硫酸1 4ml水的復(fù)配溶液； (4)離心分離加入2 5ml有機(jī)溶劑，振蕩O.5 Imin,離心3 IOmin,收集上清液，重復(fù)2 4次，合并上清液； (5)過柱凈化將步驟(4)的上清液過有機(jī)溶劑活化后的硅膠小柱，采用2 5ml有機(jī)溶劑淋洗； (6)氮吹、定容采用50°C氮吹至干，加入有機(jī)溶劑至I 10ml，得到前處理后的樣品。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的檢測(cè)食品中石蠟含量的樣品前處理方法，其特征在于，步驟(2)、(4)、(5)和(6)中所述有機(jī)溶劑為烷烴、氯代烷烴、酮類溶劑中的一種或幾種。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的檢測(cè)食品中石蠟含量的樣品前處理方法，其特征在于，所述有機(jī)溶劑為環(huán)己烷或正己烷。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的檢測(cè)食品中石蠟含量的樣品前處理方法，其特征在于，步驟(2)中所述重復(fù)浸提為采用濃度梯度浸提2次。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的檢測(cè)食品中石蠟含量的樣品前處理方法，其特征在于，步驟(3)中所述氧化試劑為Ig三氧化鉻1ml濃硫酸2ml水的復(fù)配溶液。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的檢測(cè)食品中石蠟含量的樣品前處理方法，其特征在于，步驟(I)中所述均勻化處理為打粉、絞碎或攪拌。
7.—種檢測(cè)食品中石蠟含量的方法，其特征在于，采用氣相色譜或氣質(zhì)聯(lián)用檢測(cè)權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述的樣品前處理方法得到的樣品。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的檢測(cè)食品中石蠟含量的方法，其特征在于，采用氣相色譜檢測(cè)時(shí)，上機(jī)檢測(cè)參數(shù)為對(duì)氣相色譜進(jìn)樣口溫度設(shè)定為180 280°C，載氣流速設(shè)定為O.5 2ml/min，色譜柱為弱極性或非極性柱，接口溫度設(shè)定為180 280°C。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的檢測(cè)食品中石蠟含量的方法，其特征在于，采用氣質(zhì)聯(lián)用檢測(cè)時(shí)，上機(jī)檢測(cè)參數(shù)為經(jīng)氣質(zhì)聯(lián)用儀的進(jìn)樣口進(jìn)入色譜柱中，進(jìn)行程序升溫，從40 120°C開始，以10 30°C /min的速度升溫至140 220°C ;再以5 30°C /min的速度升溫至250 320°C，樣品的各組分被色譜柱分離，再進(jìn)行質(zhì)譜檢測(cè)。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種檢測(cè)食品中石蠟含量的方法及其樣品前處理方法，前處理方法包括步驟取樣、超聲浸提、氧化、離心分離、過柱凈化、氮吹定容。所得到的樣品采用氣相色譜或氣質(zhì)聯(lián)用檢測(cè)其中的石蠟含量。本發(fā)明的樣品前處理方法簡(jiǎn)單，樣品在前處理中損失較少，定量結(jié)果準(zhǔn)確，回收率高；采用本發(fā)明的方法一次能處理多個(gè)樣品，批量化前處理大大提高了工作效率；溫度低，有機(jī)溶劑用量少，使得操作過程毒性低；本發(fā)明的樣品前處理方法適合多類食品基質(zhì)，經(jīng)前處理的樣品可供氣相色譜或氣質(zhì)聯(lián)用檢測(cè)來測(cè)定樣品中的石蠟含量，基質(zhì)干擾少，推廣適應(yīng)性好。
文檔編號(hào)G01N30/06GK102662016SQ201210121598
公開日2012年9月12日 申請(qǐng)日期2012年4月23日 優(yōu)先權(quán)日2012年4月23日
發(fā)明者侯向昶, 冼燕萍, 劉春生, 吳文海, 吳玉鑾, 羅東輝, 羅海英, 陳立偉 申請(qǐng)人:廣州市質(zhì)量監(jiān)督檢測(cè)研究院