專利名稱：一種超敏c反應(yīng)蛋白檢測(cè)方法及檢測(cè)試劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及免疫檢測(cè)，具體涉及一種超敏C反應(yīng)蛋白檢測(cè)方法及檢測(cè)試劑。
背景技術(shù)：
1930年，Tillett和Francis首次在急性大葉性肺炎患者的血清中發(fā)現(xiàn)一種能在Ca2+存在時(shí)與肺炎球菌細(xì)胞壁中的C 一多糖發(fā)生特異性沉淀反應(yīng)的物質(zhì)。1941年Avery等測(cè)知它是一種蛋白質(zhì)，故稱為C反應(yīng)蛋白(CRP)。 C反應(yīng)蛋白是一類正急性時(shí)相反應(yīng)蛋白，隨著損傷、炎癥或各類疾病迅速增加。
常規(guī)C反應(yīng)蛋白檢測(cè)試劑盒的檢測(cè)范圍3mg/L — 350mg/L，目前超敏C反應(yīng)蛋白試劑盒最寬的檢測(cè)范圍是lmg/L — 350mg/L，還可以繼續(xù)優(yōu)化，讓超敏C反應(yīng)蛋白能檢測(cè)到更
低含量。

發(fā)明內(nèi)容
為解決現(xiàn)有技術(shù)的上述問題，本發(fā)明提供一種超敏C反應(yīng)蛋白檢測(cè)方法及檢測(cè)試劑。本發(fā)明的超敏C反應(yīng)蛋白檢測(cè)方法，其特征是，包括以下步驟
(1)測(cè)試多個(gè)已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)液，建立濃度與散射值的標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)庫；
(2)將標(biāo)準(zhǔn)曲線制作成試劑的測(cè)試卡，在特定蛋白分析儀上刷卡后即把標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)庫錄入儀器計(jì)算軟件，通過測(cè)試樣本的散射值后通過計(jì)算可以得到樣本的濃度結(jié)果。其中，步驟(I)測(cè)試多個(gè)已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)液，建立濃度與散射值的標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)庫的操作為①用處理稀釋液將已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋成多個(gè)不同濃度將多個(gè)已知不同濃度的C反應(yīng)蛋白標(biāo)準(zhǔn)品分別與緩沖液Rl試劑混勻制得抗原標(biāo)準(zhǔn)液，然后將乳膠抗體R2試劑加入抗原標(biāo)準(zhǔn)液、同時(shí)用特定蛋白分析儀測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)品散色值，從而建立散射值-濃度對(duì)應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)庫；③測(cè)定待檢樣品的散色值用處理稀釋液按測(cè)試要求稀釋待檢樣品，將稀釋樣本與緩沖液Rl試劑混勻制得抗原液，然后將乳膠抗體R2試劑加入抗原液、同時(shí)用特定蛋白分析儀測(cè)定待檢樣品的散色值；④查詢C反應(yīng)蛋白濃度將③步驟測(cè)定的散色值與散射值-濃度數(shù)據(jù)庫對(duì)照，查詢得知C反應(yīng)蛋白濃度。所述處理稀釋液試劑包括如下組分SDS O. 1%、疊氮鈉O. 12%.
所述緩沖液Rl試劑包括如下組分NaCl O. 9%、Tirs I. 2%、Na2CO3 O. 06% ；
所述乳膠抗體R2試劑包括如下組分羊抗人C反應(yīng)蛋白抗體致敏的苯乙烯乳膠O. 6%、甘氨酸I. 1%、碳酸鈉O. 1%、碳酸氫鈉O. 1% ；
本發(fā)明所述超敏C反應(yīng)蛋白檢測(cè)試劑，該檢測(cè)試劑包含處理稀釋液、緩沖液Rl試劑、乳膠抗體R2試劑，其中，處理稀釋液包含SDS O. 1% O. 5 %、疊氮鈉O. 12% O. 4%，試劑Rl包含 NaCl O. 9% 2. 1%、Tirs I. 2% 2. 5%、Na2CO3 O. 06% O. 1% ;試劑 R2 包含羊抗人 C反應(yīng)蛋白抗體致敏的苯乙烯乳膠O. 2% O. 7%、甘氨酸I. 1% 2%、碳酸鈉O. 1% O. 9%、碳酸氫鈉O. 1% O. 9% ；
優(yōu)選地，所述處理稀釋液試劑包括如下組分SDS O. 1%、疊氮鈉O. 12% ；
所述緩沖液Rl試劑包括如下組分NaCl O. 9%、Tirs I. 2%、Na2CO3 O. 06% ；
所述乳膠抗體R2試劑包括如下組分羊抗人C反應(yīng)蛋白抗體致敏的苯乙烯乳膠O. 6%、甘氨酸I. 1%、碳酸鈉O. 1%、碳酸氫鈉O. 1%。該檢測(cè)方法及檢測(cè)試劑檢測(cè)速度快，特異性高，可以在特定蛋白分析儀上檢測(cè)體液，特別是血液中微量生物化學(xué)物質(zhì)，檢測(cè)范圍為O. 4mg/L-350mg/L，擴(kuò)大了超敏C反應(yīng)蛋白的檢測(cè)范圍。


圖I是散射值與濃度的曲線圖。
具體實(shí)施例方式以下提供本發(fā)明的一些優(yōu)選實(shí)施例，以助于進(jìn)一步理解本發(fā)明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不僅限于這些優(yōu)選實(shí)施例。實(shí)施例I
以靜脈全血為樣本測(cè)試超敏C反應(yīng)蛋白，包括如下步驟
a、建立散射值與多個(gè)已知標(biāo)準(zhǔn)品濃度的散射值-濃度對(duì)應(yīng)數(shù)據(jù)庫檢測(cè)方法為定時(shí)散射比濁法，將10微升的多個(gè)不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品分別與440微升的處理稀釋液混合，制成標(biāo)準(zhǔn)品稀釋樣本；將標(biāo)準(zhǔn)品稀釋樣本與400微升的Rl混合，再加入40微升的R2，第20秒讀取的該時(shí)間段最低散射值得Al，第80秒后讀取散射值A(chǔ)2，標(biāo)準(zhǔn)品散射值為A2減去Al的差值，根據(jù)多個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品濃度與散射值差值建立標(biāo)準(zhǔn)品散射值-濃度對(duì)應(yīng)數(shù)據(jù)庫(如圖1，圖I是散射值與濃度曲線圖。)，儀器的檢測(cè)光源為670nm。(其中，處理稀釋液試劑包括如下組分=SDS O. 1%、疊氮鈉O. 12% ;緩沖液Rl試劑包括如下組分NaCl O. 9%、Tirs I. 2%、Na2CO3
O.06% ;乳膠抗體R2試劑包括如下組分羊抗人C反應(yīng)蛋白抗體致敏的苯乙烯乳膠O. 6%、甘氨酸I. 1%、碳酸鈉O. 1%、碳酸氫鈉O. 1%。)
b、測(cè)定靜脈全血的散射值取靜脈全血10微升，加入處理稀釋液440微升，搖勻至完全溶血，制成稀釋樣本；將稀釋樣本與400微升的Rl混合，再加入40微升的R2，第20秒讀取的該時(shí)間段最低散射值得Al，第80秒后讀取散射值A(chǔ)2，樣本散射值為A2減去Al的差值為1800。C、查詢樣本的濃度步驟測(cè)定的散射值1800與數(shù)據(jù)庫對(duì)照，查詢得知樣本檢測(cè)濃度為30mg/L。其中實(shí)施案例I中檢測(cè)樣本可以是末梢全血、血清或血漿。在實(shí)踐中，取樣量為10微升至20微升，取樣量不會(huì)因?yàn)樯俣a(chǎn)生測(cè)試結(jié)果一致性偏差大，相比較目前市場(chǎng)上取樣量小于5微升的檢測(cè)方法，其檢測(cè)結(jié)果的一致性將容易受到取樣誤差影響檢測(cè)結(jié)果。步驟b檢測(cè)樣本，測(cè)試時(shí)間總共為80秒，檢測(cè)范圍為O. 4mg/L-350mg/L,目前市場(chǎng)上超敏C反應(yīng)檢測(cè)試劑的檢測(cè)范圍都沒有這么寬。實(shí)施例2準(zhǔn)確度驗(yàn)證實(shí)施取具有溯源性的血清高值質(zhì)控物和低值質(zhì)控物各一份，用試劑分別進(jìn)行檢測(cè)，各檢測(cè)10次，與質(zhì)控物靶值進(jìn)行對(duì)照。結(jié)果見下表I :
表I
由表I數(shù)據(jù)可知，本發(fā)明的C反應(yīng)蛋白檢測(cè)準(zhǔn)確度高。實(shí)施例3
精密度驗(yàn)證實(shí)施取具有溯源性的血清高值質(zhì)控物和低值質(zhì)控物各一份，用試劑分別進(jìn)行檢測(cè)，各檢測(cè)10次，計(jì)算檢測(cè)結(jié)果的平均值、標(biāo)準(zhǔn)差和變異系數(shù)。結(jié)果見下表2
表2
茨數(shù) I低值質(zhì)控物(mg/L) I高值質(zhì)控物(mg/L)
1.150.151"20. 312
2" 150. 334.21.111
3. 150.367"20. 521
4.151.137.21.033
5" 150.456■ 21.093
6. 151.990"20.681
7. 151.778"20. 555
8_ 151. 161"21.087
9.151.155~21. QQl
10" 152. 390"21.021 平均 .151.0919 "20.8415 標(biāo)準(zhǔn)差.O. 7719 "0.295
變異系數(shù)|θ.51%11. 4%-
由表2中變異系數(shù)可知，本發(fā)名檢測(cè)C反應(yīng)蛋白具有較高的精密度。實(shí)施例4
靈敏度驗(yàn)證實(shí)施取具有溯源性的質(zhì)控物稀釋至檢測(cè)范圍下限附件進(jìn)行測(cè)定，重復(fù)5次，計(jì)算平均值與質(zhì)控物靶值對(duì)照。見表3表3
及數(shù) I低值質(zhì)控物(mg/L)—
10.432
20.434
30.407
40.437
50.406 平均值|θ. 42權(quán)利要求
1.一種超敏C反應(yīng)蛋白檢測(cè)方法，其特征是，包括以下步驟 (1)測(cè)試多個(gè)已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)液，建立濃度與散射值的標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)庫； (2)將標(biāo)準(zhǔn)曲線制作成試劑的測(cè)試卡，在特定蛋白分析儀上刷卡后即把標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)庫錄入儀器計(jì)算軟件，通過測(cè)試樣本的散射值后通過計(jì)算可以得到樣本的濃度結(jié)果。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的超敏C反應(yīng)蛋白檢測(cè)方法，其特征是，步驟(I)測(cè)試多個(gè)已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)液，建立濃度與散射值的標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)庫的操作為①用處理稀釋液將已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋成多個(gè)不同濃度；②將多個(gè)已知不同濃度的C反應(yīng)蛋白標(biāo)準(zhǔn)品分別與緩沖液Rl試劑混勻制得抗原標(biāo)準(zhǔn)液，然后將乳膠抗體R2試劑加入抗原標(biāo)準(zhǔn)液、同時(shí)用特定蛋白分析儀測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)品散色值，從而建立散射值-濃度對(duì)應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)庫；③測(cè)定待檢樣品的散色值用處理稀釋液按測(cè)試要求稀釋待檢樣品，將稀釋樣本與緩沖液Rl試劑混勻制得抗原液，然后將乳膠抗體R2試劑加入抗原液、同時(shí)用特定蛋白分析儀測(cè)定待檢樣品的散色值；④查詢C反應(yīng)蛋白濃度將③步驟測(cè)定的散色值與散射值-濃度數(shù)據(jù)庫對(duì)照，查詢得知C反應(yīng)蛋白濃度。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的超敏C反應(yīng)蛋白檢測(cè)方法，其特征是，所述處理稀釋液包括如下組分=SDS O. 1%、疊氮鈉O. 12%。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的超敏C反應(yīng)蛋白檢測(cè)方法，其特征是所述緩沖液Rl試劑包括如下組分NaCl O. 9%、Tirs I. 2%、Na2CO3 O. 06% ； 所述乳膠抗體R2試劑包括如下組分羊抗人C反應(yīng)蛋白抗體致敏的苯乙烯乳膠O. 6%、甘氨酸I. 1%、碳酸鈉O. 1%、碳酸氫鈉O. 1%。
5.一種超敏C反應(yīng)蛋白檢測(cè)試劑，其特征是，該檢測(cè)試劑處理稀釋液、緩沖液Rl試劑、乳膠抗體R2試劑，其中，處理稀釋液包含SDS O. 1% O. 5 %、疊氮鈉O. 12% O. 4%，緩沖液 Rl 試劑包含 NaCl O. 9% 2. l%、Tirs I. 2% 2. 5%,Na2CO3 O. 06% O. 1% ;乳膠抗體 R2試劑包含羊抗人C反應(yīng)蛋白抗體致敏的苯乙烯乳膠O. 2% O. 7%、甘氨酸I. 1% 2%、碳酸鈉O. 1% O. 9%、碳酸氫鈉O. 1% O. 9%。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的超敏C反應(yīng)蛋白檢測(cè)試劑，其特征是，所述處理稀釋液包括如下組分=SDS O. 1%、疊氮鈉O. 12%。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的超敏C反應(yīng)蛋白檢測(cè)試劑，其特征是所述緩沖液Rl試劑包括如下組分=NaCl O. 9%,Tirs I. 2%,Na2CO3 O. 06% ;所述乳膠抗體R2試劑包括如下組分羊抗人C反應(yīng)蛋白抗體致敏的苯乙烯乳膠O. 6%、甘氨酸I. 1%、碳酸鈉O. 1%、碳酸氫鈉O. 1%。
全文摘要
本發(fā)明涉及免疫檢測(cè)，具體涉及一種超敏C反應(yīng)蛋白檢測(cè)方法及檢測(cè)試劑。該檢測(cè)方法，包括以下步驟(1)測(cè)試多個(gè)已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)液，建立濃度與散射值的標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)庫；(2)將標(biāo)準(zhǔn)曲線制作成試劑的測(cè)試卡，在特定蛋白分析儀上刷卡后即把標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)庫錄入儀器計(jì)算軟件，通過測(cè)試樣本的散射值后通過計(jì)算可以得到樣本的濃度結(jié)果。該檢測(cè)方法及檢測(cè)試劑檢測(cè)速度快，特異性高，可以在特定蛋白分析儀上檢測(cè)體液，特別是血液中微量生物化學(xué)物質(zhì)，檢測(cè)范圍為0.4mg/L-350mg/L，擴(kuò)大了超敏C反應(yīng)蛋白的檢測(cè)范圍。
文檔編號(hào)G01N33/68GK102866256SQ20121011960
公開日2013年1月9日 申請(qǐng)日期2012年4月23日 優(yōu)先權(quán)日2012年4月23日
發(fā)明者韋勝富, 李曉, 孫海江, 王建東, 李淮彬 申請(qǐng)人:深圳市希萊恒醫(yī)用電子有限公司