專利名稱：魚類受精卵定向包埋技術(shù)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及定向包埋技術(shù)。
背景技術(shù)：
由于魚類卵黃豐富在常規(guī)光鏡切片時不能切制，再一個受光顯微鏡和電鏡的局限性及切片厚度的影響，在選擇魚受精部分時容易將需要部分(通常指受精部分)丟失。直接制成的光鏡或電鏡樣本，由于切片面積小，修塊不準(zhǔn)等多種原因，又容易將需要的部分修丟，造成不完整現(xiàn)象，直接影響觀察，這樣必需做大量樣本才能觀察到所需要的部分。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了魚類受精卵定向包埋技術(shù)，目的是為了解決現(xiàn)有制片中受精部分易丟失及切制質(zhì)量差的問題。魚類受精卵定向包埋技術(shù)按以下步驟進行一、將魚卵放入質(zhì)量濃度為10%的甲醛中固定，然后依次進行包埋前的脫水處理、透明處理和透蠟處理；二、魚卵經(jīng)步驟一處理后進行包埋，包埋塊經(jīng)粗修塊后依反光定位法進行定位修塊；三、經(jīng)定位修塊的魚卵用熱刀片劃痕標(biāo)記受精部分并切取，將卵子制成2mm小塊， 然后采用二次定向包埋制成常規(guī)的光鏡包埋塊；四、光鏡包埋塊采用常規(guī)切片技術(shù)進行切片，制成常規(guī)光鏡片子，即完成魚類受精卵定向包埋。魚類受精卵定向包埋技術(shù)按以下步驟進行一、將魚卵放入質(zhì)量濃度為10%的甲醛中固定，然后依次進行包埋前的脫水處理、透明處理和透蠟處理；二、魚卵經(jīng)步驟一處理后進行包埋，包埋塊經(jīng)粗修塊后依反光定位法進行定位修塊；三、經(jīng)定位修塊的魚卵用熱刀片劃痕標(biāo)記受精部分并切取，將卵子制成Imm小塊， 經(jīng)脫臘脫苯處理后采用鋨酸進行二次固定，然后用磷酸緩沖液沖洗，再用各級丙酮進行脫水處理，然后用環(huán)氧樹脂#618進行定向包埋和聚合，獲得電鏡包埋塊；四、電鏡包埋塊采用電鏡切片技術(shù)進行切片，制成常規(guī)電鏡片子，即完成魚類受精卵定向包埋。本發(fā)明的魚類受精卵定向包埋技術(shù)，制成的光鏡或電鏡的樣本，可保證魚卵能夠切制完整，魚卵的受精部分可以精確的觀察到所需要的內(nèi)容，切制質(zhì)量好，圖像清晰，觀察效果良好，使微觀與宏觀的結(jié)構(gòu)有一個統(tǒng)一認(rèn)識；同時減少了大量煩索的工作量，提高效率。


圖I為實施例I中所得完整的鯽魚受精卵光鏡片子的顯微圖；圖2為實施例I中所得鯽魚受精卵動物極光鏡片子的顯微圖；圖3為實施例2中所得鯽魚受精卵極體電鏡片子的顯微圖；圖4為實施例2中所得鯽魚受精卵兩性核電鏡片子的顯微圖。
具體實施例方式具體實施方式
一本實施方式魚類受精卵定向包埋技術(shù)按以下步驟進行一、將魚卵放入質(zhì)量濃度為10%的甲醛中固定，然后依次進行包埋前的脫水處理、 透明處理和透蠟處理；二、魚卵經(jīng)步驟一處理后進行包埋，包埋塊經(jīng)粗修塊后依反光定位法進行定位修塊；三、經(jīng)定位修塊的魚卵用熱刀片劃痕標(biāo)記受精部分并切取，將卵子制成2mm小塊， 然后采用二次定向包埋制成常規(guī)的光鏡包埋塊；四、光鏡包埋塊采用常規(guī)切片技術(shù)進行切片，制成常規(guī)光鏡片子，即完成魚類受精卵定向包埋。本實施方式步驟一中魚卵為所有魚類的魚卵。本實施方式步驟一中脫水處理為依次采用體積濃度為70%的乙醇、體積濃度為 85%的乙醇、體積濃度為75%的乙醇和體積濃度為100%的乙醇進行處理。本實施方式步驟一中透明處理為采用體積濃度為100%的乙醇二甲苯=I I 進行處理，然后用二甲苯進行處理。本實施方式步驟一中透蠟處理為采用二甲苯石蠟=I I進行處理，然后用石蠟進行處理。本實施方式步驟二中反光定位法，是將包埋塊固定住放于立體顯微鏡下，然后調(diào)節(jié)光源，使包埋塊的卵子的切面與水平面間成28 32度，使切面出現(xiàn)反光，觀察其結(jié)構(gòu)選取受精部分，然后用鋒利刀片進行定位修塊。本實施方式步驟三中熱刀片是指用酒精燈燒熱的刀片。
具體實施方式
二 本實施方式魚類受精卵定向包埋技術(shù)按以下步驟進行一、將魚卵放入質(zhì)量濃度為10%的甲醛中固定，然后依次進行包埋前的脫水處理、透明處理和透蠟處理；二、魚卵經(jīng)步驟一處理后進行包埋，包埋塊經(jīng)粗修塊后依反光定位法進行定位修塊；三、經(jīng)定位修塊的魚卵用熱刀片劃痕標(biāo)記受精部分并切取，將卵子制成Imm小塊， 經(jīng)脫臘脫苯處理后采用鋨酸進行二次固定，然后用磷酸緩沖液沖洗，再用各級丙酮進行脫水處理，然后用環(huán)氧樹脂#618進行定向包埋和聚合，獲得電鏡包埋塊；四、電鏡包埋塊采用電鏡切片技術(shù)進行切片，制成常規(guī)電鏡片子，即完成魚類受精卵定向包埋。本實施方式步驟一中魚卵為所有魚類的魚卵。本實施方式步驟一中脫水處理為依次采用體積濃度為70%的乙醇、體積濃度為 85%的乙醇、體積濃度為75%的乙醇和體積濃度為100%的乙醇進行處理。本實施方式步驟一中透明處理為采用體積濃度為100%的乙醇二甲苯=I I 進行處理，然后用二甲苯進行處理。
本實施方式步驟一中透蠟處理為采用二甲苯石蠟=I I進行處理，然后用石蠟進行處理。本實施方式步驟二中反光定位法，是將包埋塊固定住放于立體顯微鏡下，然后調(diào)節(jié)光源，使包埋塊的卵子的切面與水平面間成28 32度，使切面出現(xiàn)反光，觀察其結(jié)構(gòu)選取受精部分，然后用鋒利刀片進行定位修塊。本實施方式步驟三中熱刀片是指用酒精燈燒熱的刀片。本實施方式步驟三中鋨酸的配制方法4% K2CrO7重鉻酸鉀(PH7. 2)5ml+2% OsO4 四氧化鋨水溶液10ml+3. 4% NaCl氯化鈉水溶液5ml進行混合得固定液，使固定液中含I % 重鉻酸鉀、I %四氧化鋨和0.85%氯化鈉，最終PH = 7. 2。本實施方式步驟三中磷酸緩沖液的配制方法①取11. 876g的Na2HPO4定溶于 IOOOml蒸溜水中，獲得溶液A ;②取4. 531g的KH2PO4磷酸二氫鉀定溶于500ml蒸溜水中，獲得溶液B 將溶液A和溶液B混合即得。本實施方式步驟三中各級丙酮進行脫水處理是依次采用體積濃度為50%的丙酮、 體積濃度為70%的丙酮、體積濃度為95%的丙酮和體積濃度為100%的丙酮進行脫水處理。實施例I魚類受精卵定向包埋技術(shù)按以下步驟進行一、將魚卵放入質(zhì)量濃度為10%的甲醛中固定，然后依次進行包埋前的脫水處理、 透明處理和透蠟處理；二、魚卵經(jīng)步驟一處理后進行包埋，包埋塊經(jīng)粗修塊后依反光定位法進行定位修塊；三、經(jīng)定位修塊的魚卵用熱刀片劃痕標(biāo)記受精部分并切取，將卵子制成2mm小塊， 然后采用二次定向包埋制成常規(guī)的光鏡包埋塊；四、光鏡包埋塊采用常規(guī)切片技術(shù)進行切片，制成常規(guī)光鏡片子，即完成魚類受精卵定向包埋。本實施例步驟一中魚卵采用鯽魚的魚卵。本實施例中所得光鏡片子，經(jīng)光鏡觀察，如圖I和2所示，魚卵能夠切制完整且圖像清晰、輪廓分明，魚卵的受精部分可以精確的觀察到所需要的內(nèi)容。實施例2魚類受精卵定向包埋技術(shù)按以下步驟進行一、將魚卵放入質(zhì)量濃度為10%的甲醛中固定，然后依次進行包埋前的脫水處理、 透明處理和透蠟處理；二、魚卵經(jīng)步驟一處理后進行包埋，包埋塊經(jīng)粗修塊后依反光定位法進行定位修塊；三、經(jīng)定位修塊的魚卵用熱刀片劃痕標(biāo)記受精部分并切取，將卵子制成Imm小塊， 經(jīng)脫臘脫苯處理后采用鋨酸進行二次固定，然后用磷酸緩沖液沖洗，再用各級丙酮進行脫水處理，然后用環(huán)氧樹脂#618進行定向包埋和聚合，獲得電鏡包埋塊；四、電鏡包埋塊采用電鏡切片技術(shù)進行切片，制成常規(guī)電鏡片子，即完成魚類受精卵定向包埋。
本實施例步驟一中魚卵采用鯽魚的魚卵。本實施例中所得電鏡片子，經(jīng)電鏡觀察，如圖3和4所示，魚卵能夠切制完整且圖像清晰、輪廓分明，魚卵的受精部分可以精確的觀察到所需要的內(nèi)容。
權(quán)利要求
1.魚類受精卵定向包埋技術(shù)，其特征在于魚類受精卵定向包埋技術(shù)按以下步驟進行 一、將魚卵放入質(zhì)量濃度為10%的甲醛中固定，然后依次進行包埋前的脫水處理、透明處理和透蠟處理；二、魚卵經(jīng)步驟一處理后進行包埋，包埋塊經(jīng)粗修塊后依反光定位法進行定位修塊；三、經(jīng)定位修塊的魚卵用熱刀片劃痕標(biāo)記受精部分并切取，將卵子制成2mm小塊，然后采用二次定向包埋制成常規(guī)的光鏡包埋塊；四、光鏡包埋塊采用常規(guī)切片技術(shù)進行切片，制成常規(guī)光鏡片子，即完成魚類受精卵定向包埋。
2.魚類受精卵定向包埋技術(shù)，其特征在于魚類受精卵定向包埋技術(shù)按以下步驟進行 一、將魚卵放入質(zhì)量濃度為10%的甲醛中固定，然后依次進行包埋前的脫水處理、透明處理和透蠟處理；二、魚卵經(jīng)步驟一處理后進行包埋，包埋塊經(jīng)粗修塊后依反光定位法進行定位修塊；三、經(jīng)定位修塊的魚卵用熱刀片劃痕標(biāo)記受精部分并切取，將卵子制成Imm小塊，經(jīng)脫臘脫苯處理后采用鋨酸進行二次固定，然后用磷酸緩沖液沖洗，再用各級丙酮進行脫水處理，然后用環(huán)氧樹脂#618進行定向包埋和聚合，獲得電鏡包埋塊；四、電鏡包埋塊采用電鏡切片技術(shù)進行切片，制成常規(guī)電鏡片子，即完成魚類受精卵定向包埋。
全文摘要
魚類受精卵定向包埋技術(shù)，它涉及定向包埋技術(shù)。它解決了現(xiàn)有制片中受精部分易丟失及切制質(zhì)量差的問題。方法1魚卵固定后進行脫水、透明和透蠟處理；包埋后進行定位修塊；標(biāo)記受精部分并切取，二次定向包埋制成光鏡包埋塊；制成常規(guī)光鏡片子即完成。方法2魚卵固定后進行脫水、透明和透蠟處理；包埋后進行定位修塊；標(biāo)記受精部分并切取，二次固定，后沖洗、脫水處理，環(huán)氧樹脂#618進行定向包埋和聚合，獲得電鏡包埋塊；制成常規(guī)電鏡片子即完成。本發(fā)明制成的光鏡或電鏡的樣本，可保證魚卵能夠切制完整，魚卵的受精部分可以精確的觀察到所需要的內(nèi)容，切制質(zhì)量好，圖像清晰，觀察效果良好；同時減少了大量煩索的工作量，提高效率。
文檔編號G01N1/36GK102607930SQ20121006511
公開日2012年7月25日 申請日期2012年3月13日 優(yōu)先權(quán)日2012年3月13日
發(fā)明者關(guān)海紅, 尹家勝 申請人:中國水產(chǎn)科學(xué)研究院黑龍江水產(chǎn)研究所