專利名稱：疾病重癥度的檢查方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及通過測定試樣中含有的三磷酸腺苷(以下稱為“ATP”)量來檢查疾病重癥度的方法。此外，本發(fā)明還涉及通過測定試樣中的ATP量和作為能量代謝中間代謝產(chǎn)物的乳酸或酮體的量來掌握能量產(chǎn)生狀態(tài)從而檢查疾病重癥度的方法。
背景技術(shù)：
ATP是所有生物用作生存所需的能量的化學(xué)物質(zhì)(核苷酸)。因此，一直以來，為了判定生物試樣中含有的微生物的有無而廣泛應(yīng)用ATP的測定。另外，由于ATP主要在細胞內(nèi)細胞器的線粒體中產(chǎn)生，因此，以前曾經(jīng)為了測定線粒體的功能而對ATP進行測定。但是，現(xiàn)有的ATP測定技術(shù)中沒有能高效地提取出生物試樣中含有的ATP的技術(shù)，因此，生物試樣中的ATP濃度的相關(guān)信息缺乏準確性，難以使用該數(shù)值由ATP量的測定值準確地類推“生物生存所需的細胞內(nèi)能量狀態(tài)”。本發(fā)明人建立了極為有效地提取試樣中的ATP并準確測定細胞內(nèi)、組織內(nèi)的ATP濃度的劃時代性的技術(shù)(專利文獻1:W02009/096429，核苷酸的提取方法)。通過本方法，能夠準確地得到生物試樣中的ATP濃度的相關(guān)信息。另一方面，在判定“疾病重癥度”的現(xiàn)有技術(shù)中，直到目前為止一直在使用根據(jù)1985 年修改的 APACHEII 評分(非專利文獻 1:KnausWA, Draper EA, Wagner DP, ZimmermanJE: A severity of diseaseclassification system.Critical Care Medicine13:818-829, 1985)來判定住院患者的重癥度的方法，但APACHEII評分并非實時評分，因此，需要替代該APACHEII評分的風(fēng)險標志物和評價方法。APACHEII評分是使用急性生理學(xué)評分(包括12個項目:1.深部體溫、2.平均動脈壓、3.心率、4.呼吸次數(shù)、5.氧合能力、
6.動脈血pH、7.血清Na濃度、8.血清K濃度、9.血清肌酐濃度、10.血細胞壓積值、11.白細胞值、12.格拉斯哥昏迷指數(shù))+年齡分數(shù)+慢性疾病狀態(tài)的總分數(shù)進行評價的方法。此外，還提出 了使用 SOFA 評分(非專利文獻 2:Vincent JL, MorenoR, Takala J, Willatts S，DeMendonca A, Bruining H，Reinhart CK, SuterPM, Thijs LG:The SOFA(Sepsis-relatedOrgan Failure Assessment)scoreto describe organ dysfunction/failure.0n behalfof the Working Group onSepsis-Related Problems of the European Society ofIntensive CareMedicine.1ntensive Care Medicine 7:707-710，1996)判定重要器官的損傷度的評價方法。SOFA評分通過急性生理學(xué)評分(1.呼吸功能、2.血小板數(shù)、3.膽紅素值、4.血壓、5.格拉斯哥昏迷指數(shù)、6.血清肌酐濃度或I天的尿量)的總分數(shù)來計算。但是，APACHEII評分、SOFA評分的測定項目多，并且像測定I天尿量這樣需要花費時間來進行評價的匯總，因此并非實時標志物，需要建立替代上述評分的評價方法?，F(xiàn)有技術(shù)文獻專利文獻專利文獻1:國際公開小冊子W02009/096429號非專利文獻
非專利文獻1-Critical Care Medicine 13:818-829, 1985非專利文獻2:1ntensive Care Medicine 7:707-710, 199
發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明所要解決的問題本發(fā)明涉及評價疾病重癥度的方法，其課題在于提供能夠?qū)崟r地判斷疾病重癥度的新的生物標志物及其判定基準而不是如上述APACHEII評分或SOFA評分那樣將器官損傷度數(shù)值化而得到的生理學(xué)評分。用于解決問題的手段本發(fā)明人為了解決上述問題反復(fù)進行了深入研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，利用本發(fā)明人的核苷酸提取方法(專利文獻I)，能夠準確地測定試樣中的ATP量，從而能夠建立由ATP量準確地類推“生物生存所需的細胞內(nèi)能量狀態(tài)”的方法，進而能夠判定疾病重癥度，此外還發(fā)現(xiàn)，通過將因重癥化伴隨的體內(nèi)能量代謝的崩潰而蓄積在血液中的乳酸或酮體的量和血液的ATP濃度作為指標來進行評價(具體而言，通過乳酸濃度mM/ATP濃度mM進行換算和/或通過酮體濃度mM/ATP濃度mM進行換算)，能夠?qū)崟r地判定疾病重癥度，從而完成了本發(fā)明。即，本發(fā)明包括:[1] 一種疾病重癥度的檢查方法，其特征在于，對試樣中的三磷酸腺苷量進行測定；[2]如上述[I]所述的檢查方法，其中，測定包括以下的步驟:1)為了測定試樣中含有的三磷酸腺苷量，用含有酚化合物的溶液處理試樣來提取試樣中的三磷酸腺苷；和2)使用三磷酸腺苷測定用試劑對提取出的三磷酸腺苷量進行測定；[3]如上述[2]所述的檢查方法，其中，含有酚化合物的溶液為pH4 10的溶液；[4]如上述[2]或所述的檢查方法，其中，含有酚化合物的溶液為還含有蛋白變性劑的溶液；[5]如上述[2r[4]中任一項所述的檢查方法，其中，酚化合物為苯酚。另外，本發(fā)明還包括:[6]如上述[1] [5]中任一項所述的檢查方法，其中，試樣為由受試者獲取的血液，在該血液中的三磷酸腺苷量低于正常值的下限即0.52mM時，判斷為異常；[7]如上述[6]所述的檢查方法，其中，在血液中的三磷酸腺苷量低于正常值的下限即0.52mM且為0.3mM以上時，將疾病重癥度判斷為輕度異常；在血液中的三磷酸腺苷量低于0.3mM時，將疾病重癥度判斷為重度異常；在血液中的三磷酸腺苷量在I天之內(nèi)沒有恢復(fù)至0.3mM以上時，將疾病重癥度判斷為致死的風(fēng)險高；[8]如上述[1] [7]中任一項所述的檢查方法，其特征在于，進一步對試樣中的乳酸量進行測定；[9]如上述[8]所述的檢查方法，其中，將試樣中的乳酸量(L ；mM)相對于三磷酸腺苷量(A;mM)的換算值(A-LES值)即L/A作為疾病重癥度指標；[10]如上述[8]或[9]所述的檢查方法，其中，試樣為由受試者獲取的血液，在該血液中的乳酸量相對于三磷酸腺苷量的換算值超過正常值的上限即3.7時，判斷為異常；[11]如上述[10]所述的檢查方法，其中，在血液中的乳酸量相對于三磷酸腺苷量的換算值超過正常值的上限即3.7且為8.0以下時，將疾病重癥度判斷為輕度異常；在血液中的乳酸量相對于三磷酸腺苷量的換算值超過8.0且為25.0以下時，將疾病重癥度判斷為重度異常；在血液中的乳酸量相對于三磷酸腺苷量的換算值為超過25.0的高值且持續(xù)6小時以上時，將疾病重癥度判斷為致死的重度異常。另外，本發(fā)明還包括:[12]如上述[1] [11]中任一項所述的檢查方法，其特征在于，進一步對試樣中的酮體量進行測定；[13]如上述[12]所述的檢查方法，其中，將試樣中的酮體量(K ；mM)相對于三磷酸腺苷量(A ；mM)的換算值(A-KES)即K/A作為疾病重癥度指標；[14]如上述[12]或[13]所述的檢查方法，其中，試樣為由受試者獲取的血液，在該血液中的酮體量相對于三磷酸腺苷量的換算值超過正常值的上限即0.25時，判斷為異常。發(fā)明效果根據(jù)本發(fā)明的檢查方法，通過由ATP量準確地類推“生物生存所需的細胞內(nèi)能量狀態(tài)”，能夠?qū)膊≈匕Y度進行評價和判定。另外，能夠?qū)⒂捎谒猩w作為能源攝取的糖、脂質(zhì)、氨基酸未順利地產(chǎn)生ATP的能量代謝崩潰狀態(tài)或ATP產(chǎn)生跟不上過量的能量消耗的代謝崩潰狀態(tài)等而蓄積在體內(nèi)的能量代謝中間代謝產(chǎn)物即乳酸或酮體的濃度與ATP濃度相關(guān)聯(lián)來評價和判定疾病重癥度。根據(jù)本發(fā)明的檢查方法，能夠?qū)σ郧巴ㄟ^各個測定值單獨的信息未能獲知的“疾病重癥度”以輕度異常狀態(tài)、重度異常狀態(tài)、致死的危險性極高的狀態(tài)等進行評價和判定。


圖1是表示健康人來源的試樣中的ATP值、年齡、性別分布的圖(參考例I)。圖2是表示健康人來源的試樣中的乳酸值、年齡、性別分布的圖(參考例2)。圖3是表示由健康人來源的試樣中的ATP量和乳酸量換算得到的A-LES值與其年齡、性別分布的圖(參考例3)。圖4A是表示以試樣中的ATP值作為指標進行監(jiān)測時各種患者在集中治療室內(nèi)的重癥度的經(jīng)時變化的圖(實施例1)。圖4B是表示以A-LES (乳酸值/ATP值)值作為指標進行監(jiān)測時各種患者在集中治療室內(nèi)的重癥度的經(jīng)時變化的圖(實施例1)。圖5是表示集中治療室管理下的患者在入室時和出室時(或死亡時)的APACHEII評分與A-LES值的變遷比較的圖(實施例2)。圖6是表示健康小鼠和流感感染重癥化小鼠血液中的ATP值、乳酸值、A-LES值、酮體(3-羥基丁酸)值、A-KES值的圖(實施例3)。
具體實施例方式作為本發(fā)明的疾病重癥度的檢查方法，只要是對試樣中的ATP量進行測定的方法則沒有特別限制，也可以測定乳酸、酮體等能量代謝中間代謝產(chǎn)物的量并使用能量代謝中間代謝產(chǎn)物的量與ATP量的比值進行評價和判定。另外，本發(fā)明中，“疾病重癥度”是指在ATP量的檢查時間點的疾病的嚴重程度，在本說明書中，與“疾病的重癥化程度”、“重癥化程度”等無區(qū)別地使用。通過掌握疾病的重癥度，能夠了解檢查時間點的疾病狀態(tài)而作為預(yù)測以后的病情變遷的指標，并且能夠用于治療方法的選擇等治療方針的確定。即，在疾病重癥度為輕度異常的情況下，可觀察到治療效果或者預(yù)測到以后病情減輕。另外，在疾病重癥度為重度異常的情況下，觀察不到治療效果或者預(yù)測到以后病情惡化，最差的情況下還暗示出致死的可能性。另外，“疾病重癥度”中的疾病沒有特別限制，可以列舉:呼吸系統(tǒng)、血液和循環(huán)系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、腦神經(jīng)系統(tǒng)、腎泌尿系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)、感覺系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)、骨骼系統(tǒng)和肌肉的疾病、多器官衰竭、感染癥等。這些疾病可以是遺傳性疾病或生活習(xí)慣病等內(nèi)因性疾病，也可以是由病原菌或病毒的感染引起的疾病，可以優(yōu)選例示:冠狀動脈疾病、感染性心內(nèi)膜炎、敗血癥、肺栓塞癥、暴發(fā)性丙型肝炎、流感肺炎、流感感染癥等。本發(fā)明中，試樣只要是從生物體采集的組織、體液則沒有特別限制，可以優(yōu)選列舉能夠成為本發(fā)明的檢查對象的人(受試者)和除人以外的脊椎動物(受試動物)來源的血液試樣。作為受試動物，可以列舉:哺乳類、魚類、兩棲類、爬行類、鳥類，優(yōu)選猴、馬、牛、綿羊、山羊、豬、狗、貓、兔、大鼠、小鼠等哺乳類動物，其中可以優(yōu)選例示小鼠。作為血液試樣，可以是動脈(Artery:A)血、肺動脈(Pulmonary Artery:PA)血、靜脈(Vein:V)血、中心靜脈(Central Vein:CV)血、末梢靜脈血中的任意一種。通過以下所示的ATP量的測定方法能夠確認:在同一受試者中，血液中的ATP量不隨血液采集部位的不同而變化(參考表3)。另外，只要不妨礙ATP量和乳酸量或酮體量的測定，也可以適當添加抗凝劑、防腐劑等或者將血液中的特定成分除去或凝結(jié)而制成血液試樣。本發(fā)明檢查方法中的試樣中的ATP量的測定方法沒有特別限制，利用專利文獻I中記載的測定方法能夠準確地進行測定，因此優(yōu)選。特別優(yōu)選的是，在采血后迅速用含有酚化合物的溶液處理試樣來提取試樣中的ATP，并對該提取出的ATP量進行測定。具體而言，利用包括以下步驟的方法來進行。I)為了測定試樣中含有的ATP量，用含有酚化合物的溶液處理試樣來提取試樣中的ATP ;和2)使用ATP測定用試劑對提取出的ATP量進行測定。本發(fā)明的檢查方法中的、提取試樣中含有的ATP的步驟中使用的酚化合物只要是含有酚基的化合物且能夠提取出試樣中的ATP的化合物即可，沒有特別限定。特別優(yōu)選的是苯酚。另外，含有酚化合物的溶液中可以含有蛋白變性劑，作為該蛋白變性劑，可以使用公知的蛋白變性劑，特別是可以優(yōu)選例示能夠在現(xiàn)有的ATP提取方法中使用的蛋白變性齊U，例如異硫氰酸胍、高氯酸、TCA、蛋白激酶K等。但是，在試樣中含有大量除ATP分解酶以外的蛋白質(zhì)的情況下，通過添加蛋白變性劑，有時會使蛋白質(zhì)變性而凝聚。在這種情況下，作為測定對象物的ATP等的核酸有時會埋藏在因變性而凝聚的蛋白質(zhì)中而難以提取，不能說能夠進行準確的測定。另外，也可以將作為現(xiàn)有ATP提取方法的加熱處理方法與本發(fā)明的核苷酸提取方法組合來進行處理，但在大量含有蛋白質(zhì)的試樣的情況下，有時同樣也會使核酸混入因加熱而變性的蛋白質(zhì)中。因此，在不組合蛋白變性劑或加熱處理的情況下用含有酚化合物的溶液進行處理有時能夠最高效地提取ATP。上述含有酚化合物的溶液的pH沒有特別限定，為了以最高的靈敏度進行測定，優(yōu)選調(diào)節(jié)至對于熒光素酶測定試劑等核酸測定試劑而言能夠最高效地進行反應(yīng)的pH。使用該含有酚化合物的溶液對試樣進行處理時，無論用例如PH4 10等何種pH的溶液進行處理，均比現(xiàn)有提取方法更有效地提取ATP。例如，在使用熒光素酶試劑測定ATP的情況下，根據(jù)熒光素酶的特性，能夠在約約9的pH下進行有效的測定，因此，優(yōu)選使本發(fā)明的含有酚化合物的溶液的PH為約約9，更優(yōu)選使pH為約8。上述的ATP提取步驟中使用的含有酚化合物的溶液可以用作從試樣中提取ATP的試劑。上述酚化合物的溶劑沒有特別限定，可以使用例如TE(IOmMTris-HCl pH8.0，ImMEDTA)。也可以根據(jù)需要進一步添加穩(wěn)定劑。本發(fā)明的檢查方法中的ATP量的測定中，可以根據(jù)測定目標對象物而選擇適當?shù)臏y定方法，可以包括公知的方法以及今后開發(fā)的所有測定方法。作為上述公知的方法，可以應(yīng)用利用熒光素-熒光素酶發(fā)光反應(yīng)的方法、利用ATP轉(zhuǎn)化反應(yīng)的方法等。作為利用熒光素-熒光素酶發(fā)光反應(yīng)的ATP的測定方法，可以列舉:對使含有熒光素和熒光素酶的發(fā)光試劑與靶ATP在金屬離子(鎂離子等)的存在下接觸而生成的光的發(fā)光量進行測定的方法。例如，通過使用作為市售的ATP測定用試劑盒的XL-ATP試劑盒(株式會社7 口寸 ^二 7公司制造)，能夠特異性地且準確地測定ATP。建立本發(fā)明的疾病重癥度的檢查方法時，需要掌握健康人來源的試樣中的ATP量。因此，采集健康志愿者的末梢靜脈血，通過上述ATP量的測定方法對血中的ATP量進行了測定，結(jié)果確認到在一大半健康人中，ATP以0.52-1.3mM的濃度存在。另外，還確認到血中ATP的值不因性別而存在顯著差異(參考圖1)。本發(fā)明中，試樣中的ATP量的正常值可以設(shè)定為0.52-1.3mM，更詳細而言，可以設(shè)定為0.52-1.21mM，并且可以將中值設(shè)定為0.72mM。另外，正常值的下限可以設(shè)定為0.52mM。

本發(fā)明的疾病重癥度的檢查方法中，具體而言，可以根據(jù)測得的試樣中的ATP量通過以下的方法來評價重癥度。對人而言，在試樣中的ATP量低于正常值的下限即0.52mM時，可以判斷為異常。此外，關(guān)于人的疾病重癥度，在ATP量低于正常值的下限即0.52mM時，可以根據(jù)ATP量的值來判斷(I)輕度異常、(2)重度異常。人的ATP量與疾病重癥度的關(guān)系可以通過以下基準來判斷。(I)低于0.52mM且為0.3mM以上時判斷為輕度異常(2)低于0.3mM時判斷為重度異常。另外，在6_24小時、特別是24小時以內(nèi)沒有恢復(fù)至0.3mM以上時，致死的風(fēng)險高。本發(fā)明中的疾病重癥度可以通過進一步測定試樣中的作為能量代謝中間代謝產(chǎn)物的乳酸量或酮體量而更有效地根據(jù)能量代謝來檢查疾病重癥度。本發(fā)明中的“酮體”是指乙酰乙酸和3-羥基丁酸，不包括丙酮。因此，本發(fā)明中，酮體量是指乙酰乙酸和/或3-羥基丁酸的量。由于能夠利用快速測定裝置在數(shù)分鐘以內(nèi)進行測定，因此，常常使用3-羥基丁酸的量作為酮體量的指標。試樣中的乳酸量或酮體量的測定只要是能夠準確地測定血中的乳酸量或酮體量的方法，則可以是公知的方法，也可以是今后開發(fā)的方法。例如，乳酸量的測定可以使用全自動血氣測定裝置(860C0T，WM 了幾J rM力 >公司制造)或簡易測定裝置(9 ^ f 一卜 口，ARKRAY公司制造)等，酮體量的測定可以使用“總酮體力4 7 7 ”或“夕卜夕
7 % r％ ( V—fM力卟y I) 二——V彐 > 文' 夕' I了夕'' 7 ^ r 4夕叉株式
會社制造)”等，可以分別按照制造商推薦的測定方法來測定。建立本發(fā)明的疾病重癥度的檢查方法時，優(yōu)選掌握健康人來源的試樣中作為能量代謝中間代謝產(chǎn)物的乳酸量。因此，采集健康志愿者的末梢靜脈血，通過上述乳酸量的測定方法對血中的乳酸量進行了測定，結(jié)果確認，在男性中顯示為2.7mM以下的值，在女性中顯示為1.65mM以下的值，在男性和女性中均為2.7mM以下的濃度(參考圖2)。各年齡的中值如圖所示。需要說明的是，0.SmM以下為測定器材(9々f 一卜 口:ARKRAY公司制造)的檢測限以下，用▽表示，并記載為0.SmM來進行計算。通過使用上述乳酸量計算出相對于通過上述方法測定的ATP量的換算值(A-LES值)，能夠以更準確的疾病重癥度進行檢查。A-LES值可以通過下式I來計算。這樣計算而得到的值可以作為由能量代謝引起的疾病的重癥度生物標志物(參考圖3)。(式I)A-LES 值=乳酸值(L) mM/ATP 值⑷ mM與以ATP量作為基準的情況相比，利用A-LES值能夠更細致且更準確地判定疾病重癥度。根據(jù)A-LES值，可以判斷(I)輕度異常、(2)重度異常、(3)致死的重度異常狀態(tài)。A-LES值與人的重癥度的關(guān)系可以通過以下基準來判斷。(I)超過正常值的上限即3.7且為8.0以下時判斷為輕度異常(2)超過8.0且為25.0以下判斷為重度異常(3)超過25.0的高值持續(xù)6-24小時、特別是持續(xù)24小時以上時，判斷為致死的重度異常。另外，對于受試動物，可以根據(jù)其種類適當設(shè)定基準來判斷該A-LES值與重癥度的關(guān)系。本發(fā)明中的疾病重癥度可以通過進一步測定試樣中的作為能量代謝中間代謝產(chǎn)物的酮體量而更有效地根據(jù)能量代謝來檢查疾病重癥度。通過使用上述酮體量計算出相對于通過上述方法測定的ATP量的換算值(A-KES值)，能夠以更準確的疾病重癥度進行檢查。A-KES值可以通過下式II來計算。作為酮體量，可以使用乙酰乙酸和/或3-羥基丁酸的酮體的量，作為該酮體量，由于能夠利用快速測定裝置在數(shù)分鐘以內(nèi)進行測定，因此，優(yōu)選使用3-羥基丁酸的量作為酮體量，并且常常使用3-羥基丁酸的量作為酮體量。這樣計算而得到的值可以作為由能量代謝引起的疾病的重癥度生物標志物(參考圖6)。(式II)A-KES值=酮體值⑷mM/ATP值⑷mM與以ATP量作為基準的情況相比，利用A-KES值能夠更準確地判定疾病重癥度。一般認為酮體量(乙酰乙酸值與3-羥基丁酸值的總和)的正常值為130微摩爾/升(0.13mM)以下(參考西*谷晴美等，醫(yī)學(xué)檢查，45，3，353(1996);原納優(yōu)等，日本臨床，48-增刊，323 333 (1990))，并且認為血液中的ATP量低于0.52mM時為異常值，因此，可以將以乙酰乙酸值與3-羥基丁酸值的總和作為酮體量時的A-KES值達到0.13mM/0.52mM=0.25以上作為異常。因此，可以將A-KES值(乙酰乙酸值與3-羥基丁酸值的總和/ATP值)的正常值上限即0.25作為指標來判斷人的疾病重癥度狀態(tài)。另外，在以3-羥基丁酸值作為酮體量的情況下，也可以同樣地設(shè)定正常值上限來判斷人的疾病重癥度狀態(tài)。需要說明的是，對于受試者或受試動物，可以分別適當設(shè)定基準來判斷A-KES值與重癥度的關(guān)系。實施例為了幫助理解本發(fā)明，以下示出參考例和實施例來具體地說明本發(fā)明，但本發(fā)明當然不受本實施例的限定。(參考例I)健康人來源的試樣中的ATP量、年齡、性別分布的研究 本參考例中，在建立本發(fā)明的疾病重癥度的檢查方法時，為了掌握健康人來源的試樣中的ATP量，對20多歲至90多歲的68名男性、71名女性共計139名健康志愿者的末梢靜脈血的ATP量和乳酸量進行了測定。使用XL-ATP試劑盒(株式會社7 口寸4 二 > ^公司制造)，按照操作說明書從試樣中提取ATP并測定ATP 量。作為ATP提取用試劑，使用將本試劑盒附帶的提取試劑A (TE飽和苯酚，成分:含69%苯酚，pH8.0)、提取試劑B (氯仿，成分:含99%氯仿)和無菌超純水分別以3:5:5的比例混合而得到的試劑。具體而言，將0.1ml采集到的血液添加到ATP提取試劑(提取試劑A 0.3ml、提取試劑B 0.5ml、無菌超純水0.5ml)中并混合,通過離心等分離成有機溶劑層和水層，然后，回收其上清(水層)，由此提取出血液中的ATP。測定結(jié)果示于圖1、表I和表2中。末梢靜脈血的ATP值在男女差異方面幾乎沒有統(tǒng)計學(xué)上的顯著差異，隨著年齡增高，觀察到ATP值有集中于低值0.5mM的傾向。中值在20多歲的男性中顯示為0.82mM，在20多歲的女性中顯示為0.63mM，在30多歲的男性中顯示為0.68mM，在30多歲的女性中顯示為0.78mM，在40多歲的男性中顯示為0.78mM，在40多歲的女性中顯示為0.62mM，在50多歲的男性中顯示為0.66mM，在50多歲的女性中顯示為0.51mM，在60多歲的男性中顯示為0.52mM，在60多歲的女性中顯示為0.46mM，在70歲以上的高齡男性中顯示為0.46mM，在70歲以上的高齡女性中顯示為0.45mM。[表 I]
權(quán)利要求
1.一種疾病重癥度的檢查方法，其特征在于，對試樣中的三磷酸腺苷量進行測定。
2.按權(quán)利要求1所述的檢查方法，其中，測定包括以下的步驟: 1)為了測定試樣中含有的三磷酸腺苷量，用含有酚化合物的溶液處理試樣來提取試樣中的三磷酸腺苷；和 2)使用三磷酸腺苷測定用試劑對提取出的三磷酸腺苷量進行測定。
3.按權(quán)利要求2所述的檢查方法，其中，含有酚化合物的溶液為pH4 10的溶液。
4.按權(quán)利要求2或3所述的檢查方法，其中，含有酚化合物的溶液為還含有蛋白變性劑的溶液。
5.按權(quán)利要求2 4中任一項所述的檢查方法，其中，酚化合物為苯酚。
6.按權(quán)利要求1、中任一項所述的檢查方法,其中,試樣為由受試者獲取的血液,在該血液中的三磷酸腺苷量低于正常值的下限即0.52mM時，判斷為異常。
7.按權(quán)利要求6所述的檢查方法，其中，在血液中的三磷酸腺苷量低于正常值的下限即0.52mM且為0.3mM以上時，將疾病重癥度判斷為輕度異常；在血液中的三磷酸腺苷量低于0.3mM時，將疾病重癥度判斷為重度異常；在血液中的三磷酸腺苷量在I天之內(nèi)沒有恢復(fù)至0.3mM以上時，將疾病重癥度判斷為致死的風(fēng)險高。
8.按權(quán)利要求廣7中任一項所述的檢查方法，其特征在于，進一步對試樣中的乳酸量進行測定。
9.按權(quán)利要求8所述的檢查方法，其中，將試樣中的乳酸量(L;mM)相對于三磷酸腺苷量(A ；mM)的換算值(A-LES值)即L/A作為疾病重癥度指標。
10.按權(quán)利要求8或9所述的檢查方法，其中，試樣為由受試者獲取的血液，在該血液中的乳酸量相對于三磷酸腺苷量的換算值超過正常值的上限即3.7時，判斷為異常。
11.按權(quán)利要求10所述的檢查方法，其中，在血液中的乳酸量相對于三磷酸腺苷量的換算值超過正常值的上限即3.7且為8.0以下時，將疾病重癥度判斷為輕度異常；在血液中的乳酸量相對于三磷酸腺苷量的換算值超過8.0且為25.0以下時，將疾病重癥度判斷為重度異常；在血液中的乳酸量相對于三磷酸腺苷量的換算值為超過25.0的高值且持續(xù)6小時以上時，將疾病重癥度判斷為致死的重度異常。
12.按權(quán)利要求f11中任一項所述的檢查方法，其特征在于，進一步對試樣中的酮體量進行測定。
13.按權(quán)利要求12所述的檢查方法，其中，將試樣中的酮體量(K；mM)相對于三磷酸腺苷量(A ；mM)的換算值(A-KES)即K/A作為疾病重癥度指標。
14.按權(quán)利要求12或13所述的檢查方法，其中，試樣為由受試者獲取的血液，在該血液中的酮體量相對于三磷酸腺苷量的換算值超過正常值的上限即0.25時，判斷為異常。
全文摘要
本發(fā)明涉及實時地測定疾病重癥度的方法，其課題在于提供能夠比現(xiàn)有的APACHEII、SOFA評分更詳細地判斷疾病重癥度的檢查方法。作為解決手段，通過準確地測定試樣中的ATP量，能夠建立由ATP量準確且快速地類推“生物生存所需的細胞內(nèi)能量狀態(tài)”的方法，進而能夠判定疾病重癥度。此外，本發(fā)明還提供一種新的生物標志物即ATP-乳酸鹽能量風(fēng)險評分(ATP-Lactate Energy Risk Score，A-LES)值，其以ATP濃度作為指標對因疾病的重癥化伴隨的體內(nèi)代謝平衡的崩潰而蓄積在試樣中的乳酸量進行再評價(具體而言，通過乳酸值mM/ATP濃度mM進行換算)，由此能夠判定疾病重癥度。另外，本發(fā)明還提供一種新的生物標志物即ATP-酮體能量風(fēng)險評分(ATP-Ketone Energy RiskScore，A-KES)值，其以ATP濃度作為指標對試樣中的酮體量進行再評價(具體而言，通過酮體值mM/ATP濃度mM進行換算)，由此能夠判定疾病重癥度。
文檔編號G01N33/50GK103097891SQ20118002648
公開日2013年5月8日 申請日期2011年5月27日 優(yōu)先權(quán)日2010年5月31日
發(fā)明者木戶博, 西村匡司, 千田淳司 申請人:國立大學(xué)法人德島大學(xué)