專利名稱：嬰幼兒奶粉中常見四種不飽和脂肪酸的檢測方法
技術領域：
本發(fā)明涉及嬰幼兒奶粉中常見四種不飽和脂肪酸的檢測方法，尤其涉及嬰幼兒奶粉中亞麻酸、亞油酸、花生四烯酸和二十二碳六烯酸的檢測方法。
背景技術：
不飽和脂肪酸是人體重要的必需脂肪酸，亞麻酸(LA)、亞油酸(LNA)、花生四烯酸 (AA)和二十二碳六烯酸(DHA)是常見的幾種不飽和脂肪酸。進年來的科學研究表明，不飽和脂肪酸是大腦和腦神經(jīng)的重要營養(yǎng)成分，對嬰幼兒的發(fā)育起著至關重要的作用，能提升嬰兒智力發(fā)育指數(shù)、提升視力敏銳度，攝人不足將影響記憶力和思維力。有些不飽和脂肪酸是人體不能自身合成，需要通過添加食物的方式攝取。因此，對嬰幼兒奶粉中不飽和脂肪酸含量的測定尤為重要?，F(xiàn)有的標準方法測定奶粉不飽和脂肪酸含量，其對樣品前處理要求以及檢測方法各不相同，有的較為復雜，不僅試劑消耗過多，而且待測成分易損失等使測定值偏低及影響了工作效率。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種嬰幼兒奶粉中常見四種不飽和脂肪酸的檢測方法。本發(fā)明的目的是這樣實現(xiàn)的，所述的嬰幼兒奶粉中常見四種不飽和脂肪酸的檢測方法，所述常見四種不飽和脂肪酸指麻酸(LA)、亞油酸(LNA)、花生四烯酸(AA)和二十二碳六烯酸(DHA)，包括如下步驟
1)稱取嬰幼兒奶粉樣品，以65°C熱水溶解、振搖；水冷至室溫后再加入氨水(優(yōu)選體積分數(shù)25%)，于65°C水浴，取出輕搖，冷卻至室溫后再加入無水乙醇和無水乙醚，塞上塞子振搖，離心或靜止，使醚層和水層分開；2)將有機的醚層進行第二次提取，加入的試劑為無水乙醇、無水乙醚和石油醚，塞上塞子振搖，離心或靜止，使醚層和水層分開；3)將有機的醚層進行第三次提取，加入的試劑為無水乙醚和石油醚，塞上塞子振搖，離心或靜止，使醚層和水層分開；4)合并上述三次提取的有機的醚層液，經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，以庚烷溶解殘留物， 加氫氧化鉀甲醇溶液Omol/L)加熱回流，往球形冷凝器頂部加入三氟化硼甲醇溶液(質(zhì)量分數(shù)14%)繼續(xù)加熱回流；5)停止加熱冷卻至室溫，取下球形冷凝器，用硫酸溶液調(diào)節(jié)PH < 1.5，加入飽和NaCl溶液，振搖靜置分層；移取上層有機相，采用無水硫酸鈉脫水后，上清液采用0. 45 μ m濾膜過濾，采用氣相色譜儀測定；6)在測定亞油酸、亞麻酸時用庚烷稀釋 100倍后測定，經(jīng)試驗獲得LA，LNA, AA和DHA標準曲線的相關系數(shù)分別為0. 9996，0. 9996， 0. 9992,0. 9991 ； 1^，11^，六六和0擬的檢出限分別為0. 057 μ g/mL, 0. 06 μ g/mL, 0. 085 μ g/ mL 禾口 0· 25 μ g/mL ο上述步驟1)的本發(fā)明實例用的是體積分數(shù)為25%的濃氨水(密度為0. 91g/cm3)。上述步驟4)的氫氧化鉀甲醇溶液的摩爾濃度是2mol/L，所加入三氟化硼甲醇溶液的質(zhì)量分數(shù)為14%。本發(fā)明的優(yōu)點是本發(fā)明采用氣相色譜法同時測定嬰幼兒奶粉中的亞麻酸(LA)、亞油酸(LNA)、花生四烯酸(AA)和二十二碳六烯酸(DHA)的含量，該方法檢測極限低， LA, LNA, AA 和 DHA 的檢出限分別為 0. 057 μ g/mL, 0. 06 μ g/mL, 0. 085 μ g/mL 和 0. 25 μ g/ mL。線性好，樣品的重復性和回收率高，樣品組份之間能得到較好的分離，為快速和準確測定嬰幼兒奶粉中不飽和脂肪酸的含量提供借鑒。


圖1為LA標準曲線和相關系數(shù)圖。

圖2為LNA標準曲線和相關系數(shù)圖。圖3為AA標準曲線和相關系數(shù)圖。圖4為DHA標準曲線和相關系數(shù)圖。
具體實施例方式下面結(jié)合實施例對本發(fā)明進行詳細說明 1.材料與方法
1. 1.材料和儀器
1.1. 1.原料和試劑
嬰幼兒奶粉，明一(福建)嬰幼兒營養(yǎng)品有限公司； 各種脂肪酸標準品，購于Sigma公司；
氫氧化鉀、氯化鈉、無水硫酸鈉、無水乙醇、無水乙醚、石油醚均為分析純(天津永大化學試劑有限公司)，體積分數(shù)為25%的氨水(優(yōu)級純，天津科密歐化學試劑有限公司)，三氟化硼甲醇溶液(質(zhì)量分數(shù)為14%，CNW)，庚烷(色譜純，CNW)，正己烷(色譜純，TEDIA)，實驗用水均為超純水。1.1.2.實驗儀器
氣相色譜儀(Focus，賽默飛世爾科技公司)，帶FID檢測器、自動進樣器(Al 3000)； 色譜柱(AB-InoWax 30mmX0. 25mmX0. 25um,美國 Abel Industries 公司)；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(RE-52AA，上海亞榮生化儀器廠)；水浴鍋(HH-4，國華電器有限公司)；超純水機 (SAGA-40TJ，南京易普易達)。2.實驗方法
2.1樣品處理
準確稱取Ig樣品(樣品取自嬰幼兒奶粉，明一(福建)嬰幼兒營養(yǎng)品有限公司)至 250ml三角燒瓶中，以IOml 65°C的熱水溶解，振搖；水冷至室溫后再加入2ml體積分數(shù)為 25%的氨水，于65°C水浴15min，取出輕搖，冷卻至室溫后再加入IOml無水乙醇和25ml無水乙醚，塞上塞子振搖lmin，離心或靜止，使醚層和水層分開。隨后，將有機層轉(zhuǎn)入燒瓶中進行第二次提取，加入的試劑為5ml無水乙醇，15ml無水乙醚和15ml石油醚，操作同前。第三次提取不加乙醇，只用15ml無水乙醚和15ml石油醚，如上操作。2. 2皂化和酯化
合并提取后的醚液置于磨口圓底燒瓶中，經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，以IOml庚烷溶解殘留物，加2ml摩爾濃度是2mol/L的氫氧化鉀甲醇溶液回流5 lOmin，往球形冷凝器頂部加入 IOml質(zhì)量分數(shù)為14%的三氟化硼甲醇溶液繼續(xù)回流2min。停止加熱，冷卻至室溫后取下球形器，用硫酸溶液調(diào)節(jié)PH < 1.5，加入15ml飽和NaCl溶液，振搖1 靜置分層。移取上層有機相，采用無水硫酸鈉脫水后，上清液采用0. 45 μ m濾膜過濾，采用氣相色譜儀測定?；谏鲜龅膵胗變耗谭壑衼営退?、亞麻酸含量較高，因此測亞油酸、亞麻酸需要庚烷稀釋100 倍后測定。2. 3測定條件
進樣口溫度220°C，不分流進樣，不分流時間lmin，檢測器溫度280°C。進樣體積1 μ L。靈敏度彡3 X 10_12g/s (C16)。柱前壓:101.OKPa ；氫氣流速1. 5mL / min ；空氣流速:20mL / min。分流比50:1。程序升溫條件140°C保持Imin ；以25°C /min升至230°C，保持Snin ；再以25°C / min 升至 245°C，保持 6min，載氣流速1. 5ml/min。3.結(jié)果與分析 3. 1定性分析
從上述程序升溫條件下測出標樣中各組分的色譜圖中，可見標樣中各組分的分離度較好，表明分析方法的可靠性。其中LA、LNA、AA和DHA的四個組分保留時間依次為7. 187min、 7.738min、9. 943min>16. 363min。從本發(fā)明樣品中的亞油酸、亞麻酸庚烷稀釋100倍后測定的LA、LNA色譜圖可見，本發(fā)明樣品中LA、LNA的出峰時間分別為7. 180min ；7. 733min ；與標準品出峰時間的重合性好、分離度好、干擾小。從本發(fā)明樣品中的AA、DHA圖譜可知，其出峰時間分別為 9. 990min ；16. 405min ；與標準品出峰時間的重合性好、分離度好、干擾小。定量分析
3.2.1方法的線性和檢出限
采用外標法定量，以目標組分的峰面積Y對相應的質(zhì)量濃度χ( μ g/mL)做標準曲
線。標準曲線各點濃度如表1所示。
權利要求
1.一種嬰幼兒奶粉中常見四種不飽和脂肪酸的檢測方法，包括如下步驟1)稱取嬰幼兒奶粉樣品，以65°c熱水溶解、振搖；水冷至室溫后再加入氨水，于65°C水浴，取出輕搖，冷卻至室溫后再加入無水乙醇和無水乙醚，塞上塞子振搖，離心或靜止，使醚層和水層分開；2)將有機的醚層進行第二次提取，加入的試劑為無水乙醇、無水乙醚和石油醚，塞上塞子振搖，離心或靜止，使醚層和水層分開；3)將有機的醚層進行第三次提取，加入的試劑為無水乙醚和石油醚，塞上塞子振搖，離心或靜止，使醚層和水層分開；4)合并上述三次提取的有機的醚層液，經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，以庚烷溶解殘留物，加氫氧化鉀甲醇溶液加熱回流，往球形冷凝器頂部加入三氟化硼甲醇溶液繼續(xù)加熱回流；5)停止加熱冷卻至室溫， 取下球形冷凝器，用硫酸溶液調(diào)節(jié)PH < 1.5，加入飽和NaCl溶液，振搖靜置分層；移取上層有機相，采用無水硫酸鈉脫水后，上清液采用0. 45 μ m濾膜過濾，采用氣相色譜儀測定；6) 在測定亞油酸、亞麻酸時用庚烷稀釋100倍后測定。
2.根據(jù)權利要求1所述的嬰幼兒奶粉中常見四種不飽和脂肪酸的檢測方法，其特征在于步驟1)的氨水是體積分數(shù)為25%、密度為0. 91g/cm3的濃氨水。
3.根據(jù)權利要求1或所述的嬰幼兒奶粉中常見四種不飽和脂肪酸的檢測方法，其特征在于上述步驟4)的氫氧化鉀甲醇溶液的摩爾濃度是2mol/L，所加入三氟化硼甲醇溶液的質(zhì)量分數(shù)為14%。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種嬰幼兒奶粉中常見四種不飽和脂肪酸的檢測方法，包括稱取嬰幼兒奶粉樣品，熱水溶解、振搖；水冷至室溫后加氨水，于65℃水浴，取出輕搖，冷卻至室溫后加入無水乙醇和無水乙醚，使醚層和水層分開；將醚層進行提取，加入無水乙醇、無水乙醚和石油醚，使醚層和水層分開；將醚層進行提取，加入無水乙醚和石油醚，使醚層和水層分開；合并上述三次提取的醚層液，經(jīng)濃縮，以庚烷溶解殘留物，加氫氧化鉀甲醇溶液加熱回流，加入三氟化硼甲醇溶液繼續(xù)加熱回流；停止加熱冷卻至室溫，調(diào)節(jié)pH＜1.5，加入飽和NaCl溶液，使分層；移取上層有機相，無水硫酸鈉脫水，上清液用0.45μm濾膜過濾，氣相色譜儀測定，檢測極限低，線性好。
文檔編號G01N30/06GK102288695SQ20111018509
公開日2011年12月21日 申請日期2011年7月2日 優(yōu)先權日2011年7月2日
發(fā)明者陳光耀 申請人:明一(福建)嬰幼兒營養(yǎng)品有限公司