專利名稱：一種原位檢測(cè)生物體內(nèi)相鄰巰基蛋白質(zhì)的化合物及其方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種原位檢測(cè)生物體內(nèi)相鄰巰基蛋白質(zhì)的化合物及其方法，尤其是一種以萘酰亞胺類化合物為熒光探針的相鄰巰基蛋白質(zhì)的原位熒光檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
細(xì)胞內(nèi)氧化還原環(huán)境的變化深刻地影響著細(xì)胞內(nèi)各種生理功能。相鄰巰基蛋白質(zhì)，作為氧化還原平衡中還原端的頂點(diǎn)，密切參與各類氧化還原的調(diào)節(jié)，在酶活性的調(diào)節(jié)、細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)、疾病發(fā)生進(jìn)程等方面起著非常重要的作用。由于蛋白質(zhì)的巰基修飾基本沒有光譜學(xué)特性，無(wú)法直接測(cè)量，而一般的檢測(cè)手段常常需要破壞細(xì)胞再通過(guò)化學(xué)方法檢測(cè)，通常無(wú)法得到相鄰巰基蛋白在細(xì)胞內(nèi)分布的信息。而細(xì)胞結(jié)構(gòu)的破壞會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)各細(xì)胞器氧化還原環(huán)境，以及各種與相鄰巰基相關(guān)酶類的重新分布。熒光成像可以提供大量直觀，動(dòng)態(tài)的信息，是進(jìn)行生命科學(xué)研究的主要手段之一。 錢永健等基于相鄰巰基與三價(jià)砷特異性結(jié)合的特點(diǎn)設(shè)計(jì)合成出了用于雙砷熒光探針FLAsH及其類似物(Science 1998，281，269-272 ;US 6008278)，但是該類探針只用于發(fā)展一種蛋白質(zhì)標(biāo)記策略，涉及到的相鄰巰基蛋白是通過(guò)外源性導(dǎo)入的多肽鏈，內(nèi)源性的細(xì)胞中的相鄰巰基蛋白反而被外加的一定濃度的EDT給抑制住。Ebright7R. H.等發(fā)展一類基于內(nèi)源性相鄰巰基蛋白的雙砷探針(US20040019104，US20060141531)，該類探針雖然可以同細(xì)胞內(nèi)內(nèi)源性的相鄰巰基蛋白作用，但是該類探針也只用于發(fā)展一種蛋白質(zhì)標(biāo)記策略，并非將該類探針用于檢測(cè)相鄰巰基蛋白以及與之密切相關(guān)的氧化還原信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和氧化還原蛋白質(zhì)組學(xué)研究。同時(shí)，該類探針上連接了兩個(gè)砷基團(tuán)，在化學(xué)計(jì)量學(xué)上并不能同單一的一個(gè)含相鄰巰基的蛋白結(jié)合，容易在同一個(gè)探針分子上連接上不同種類的相鄰巰基蛋白。因此，以上兩類探針只注重于發(fā)展一種蛋白質(zhì)標(biāo)記策略，并不能用于原位檢測(cè)內(nèi)源性的相鄰巰基蛋白。因此，設(shè)計(jì)合成特異性的相鄰巰基蛋白質(zhì)小分子熒光探針，發(fā)展蛋白質(zhì)相鄰巰基的原位熒光成像技術(shù)及相關(guān)蛋白質(zhì)組技術(shù)，對(duì)系統(tǒng)性地研究與揭示蛋白質(zhì)巰基氧化還原狀態(tài)在信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)這一與許多重要疾病相關(guān)的重大生命科學(xué)領(lǐng)域中的功能與作用具有重要意義，是目前十分迫切的任務(wù)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明設(shè)計(jì)合成了一類特異性原位檢測(cè)蛋白質(zhì)相鄰巰基的化合物，建立了一種原位熒光標(biāo)記檢測(cè)生物體內(nèi)蛋白質(zhì)相鄰巰基的方法。本發(fā)明提供下式11化合物
權(quán)利要求
1.下式II化合物
2.如權(quán)利要求I所述的化合物，其特征在于，R1為C3_8烷基-NHR2。
3.如權(quán)利要求I所述的化合物，其特征在于，R1為C3_8烷基-C00H。
4.一種熒光探針分子，其由權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的一個(gè)式II化合物與一個(gè)熒光分子共價(jià)連接形成。
5.如權(quán)利要求4所述的熒光探針分子，其特征在于，所述熒光探針分子具有下式I所示結(jié)構(gòu)
6.如權(quán)利要求5所述的熒光探針分子，其特征在于，所述A選自萘酰亞胺、4-氯-7-硝基-2，1，3-苯并噁二唑、熒光素、菁染料Cy3和Cy5。
7.如權(quán)利要求4-6中任一項(xiàng)所述的熒光探針分子，其特征在于，所述熒光探針分子選自
8.權(quán)利要求4-7中任一項(xiàng)所述的探針分子在相鄰巰基蛋白質(zhì)的檢測(cè)或定位中的應(yīng)用。
9.一種檢測(cè)或定位相鄰巰基蛋白質(zhì)的方法，其特征在于，所述方法包括將權(quán)利要求4-7中任一項(xiàng)所述的探針分子給予檢測(cè)對(duì)象，和檢測(cè)或定位所述化合物中的熒光分子，從而檢測(cè)或定位所述相鄰巰基蛋白質(zhì)。
10.如權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，所述方法包括，采用熒光偏振技術(shù)對(duì)相鄰巰基蛋白進(jìn)行離體檢測(cè)，通過(guò)利用所述熒光探針結(jié)合相鄰巰基蛋白前后的偏振值發(fā)生明顯差異實(shí)現(xiàn)特異性檢測(cè)所述相鄰巰基蛋白質(zhì)；或者，采用熒光共聚焦顯微鏡研究細(xì)胞亞顯微結(jié)構(gòu)，在細(xì)胞水平上實(shí)現(xiàn)相鄰巰基蛋白在細(xì)胞器中的定位。
全文摘要
本發(fā)明屬于生物檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種原位檢測(cè)生物體內(nèi)相鄰巰基蛋白質(zhì)的化合物及其方法。設(shè)計(jì)和合成了一類能夠特異性檢測(cè)蛋白質(zhì)相鄰巰基的小分子熒光探針，結(jié)合熒光偏振技術(shù)、蛋白質(zhì)熒光電泳和共聚焦熒光顯微技術(shù)建立了一種用于原位熒光標(biāo)記檢測(cè)生物體內(nèi)源性相鄰巰基蛋白的方法。
文檔編號(hào)G01N21/64GK102807588SQ20111014795
公開日2012年12月5日 申請(qǐng)日期2011年6月2日 優(yōu)先權(quán)日2011年6月2日
發(fā)明者朱維平, 楊弋, 黃楚森, 尹琴, 徐玉芳, 錢旭紅, 陳孟杰, 王新 申請(qǐng)人:華東理工大學(xué)