專利名稱：一種測(cè)序儀毛細(xì)管清洗試劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于化學(xué)領(lǐng)域，涉及一種用于測(cè)序儀毛細(xì)管清洗和修復(fù)的化學(xué)試劑。
背景技術(shù)：
毛細(xì)管電泳(capillary electrophoresis，CE)是一種以毛細(xì)管為分離通道、以高壓直流電場(chǎng)為驅(qū)動(dòng)力的新型分離技術(shù)。相對(duì)于其他分離技術(shù)，毛細(xì)管電泳具有分離效率高、 分析時(shí)間短、樣品消耗低等優(yōu)點(diǎn)，近年來得到迅速發(fā)展，廣泛應(yīng)用于測(cè)序儀(遺傳分析儀) 上。毛細(xì)管的缺點(diǎn)在于價(jià)格昂貴。此外，毛細(xì)管使用次數(shù)增加，分離效果將下降。以DNA 測(cè)序?yàn)槔?，新、舊毛細(xì)管最顯著的差別就是測(cè)序峰圖中雜峰信號(hào)的有無和高低。一般來說， 毛細(xì)管使用時(shí)間越長，內(nèi)部涂層破壞越嚴(yán)重，電泳分離的效果就越差，測(cè)序峰圖中的雜峰信號(hào)就越強(qiáng)。這是兩方面原因產(chǎn)生的，首先，每次測(cè)序都有的熒光信號(hào)殘留在毛細(xì)管內(nèi)，日積月累，將產(chǎn)生過高的雜峰信號(hào)；其次，毛細(xì)管內(nèi)部有涂層，以抑制電滲作用。在電泳操作時(shí)， 毛細(xì)管置于高壓下，大量產(chǎn)熱，管內(nèi)充滿的高分子凝膠介質(zhì)，在攝氏60°C左右的弱堿性條件下可對(duì)毛細(xì)管內(nèi)部涂層產(chǎn)生損傷。隨著使用次數(shù)的增加，內(nèi)部涂層將逐漸被破壞，電泳分離的效果日益下降。通常，在毛細(xì)管使用數(shù)百次之后，若發(fā)現(xiàn)測(cè)序效果變差，需要更換新的毛細(xì)管，而舊的毛細(xì)管將直接被丟棄，由于毛細(xì)管的價(jià)格昂貴，從而造成基因測(cè)序成本過高。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是，針對(duì)毛細(xì)管使用次數(shù)過多，分離效果下降，雜峰信號(hào)偏高，以及舊毛細(xì)管直接丟棄，造成浪費(fèi)和測(cè)序成本過高等現(xiàn)象，提供一種試劑，通過對(duì)毛細(xì)管進(jìn)行清洗，消除殘余熒光信號(hào)，修復(fù)內(nèi)部涂層，使其恢復(fù)電泳能力，從而提高測(cè)序效果， 降低DNA測(cè)序成本。為了實(shí)現(xiàn)以上目的，本發(fā)明通過下述技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)
本發(fā)明提供了一種用于測(cè)序儀毛細(xì)管清洗和修復(fù)的試劑及使用方法，清除毛細(xì)管內(nèi)部殘余熒光信號(hào)，修復(fù)毛細(xì)管的內(nèi)部涂層，使其電泳效果提高。本發(fā)明試劑配方及使用操作簡單，成本低廉，與傳統(tǒng)的直接丟棄廢舊毛細(xì)管相比，可以降低DNA測(cè)序成本。本發(fā)明所述試劑包含如下成分 甲基纖維素；
聚乙烯醇；
Tris-硼酸-EDTA緩沖液(即TBE緩沖液，具體配制方法參考《分子克隆實(shí)驗(yàn)指南》第三
版)；
氫氧化鈉(NaOH)。本發(fā)明所述試劑的配制方法如下
將300g甲基纖維素，IOOg聚乙烯醇(聚合度500 2000，醇解度75_99%)，加入800ml的1 X TBE緩沖液中，75°C加熱攪拌溶解，冷卻至室溫后以NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值至8. 0，以超純水定容至1L。本發(fā)明所述試劑對(duì)毛細(xì)管清洗和修復(fù)的使用方法包括如下步驟
1)將毛細(xì)管預(yù)處理；
2)將毛細(xì)管以本發(fā)明所述試劑進(jìn)行清洗和修復(fù)。


圖1是毛細(xì)管使用清洗試劑前后的測(cè)序效果對(duì)比。其中上面部分(1. abi)為使用清洗試劑前的測(cè)序效果圖，下面部分(2. abi)為使用清洗試劑后的測(cè)序效果圖。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說明。需要指出的是，以下實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法， 通常參照常規(guī)條件，例如《分子克隆實(shí)驗(yàn)指南》(第三版，科學(xué)出版社2002 [美]J.薩姆布魯克，D.W拉塞爾著，黃培堂等譯)中所述的條件，或按照制造廠商所建議的條件。除非特別說明，本發(fā)明使用的各種試劑均可以商購，也可以采用本領(lǐng)域常用的方法制備。實(shí)施例一毛細(xì)管清洗試劑的配制。將300g甲基纖維素，IOOg聚乙烯醇(聚合度500 2000，醇解度75-99%)，加入 800ml的IXTBE緩沖液中，75°C加熱攪拌溶解，冷卻至室溫后以NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值至8. 0， 以超純水定容至1L。實(shí)施例二 毛細(xì)管的預(yù)處理。陳舊的毛細(xì)管測(cè)序效果如圖1上面部分所示，出現(xiàn)雜峰，干擾測(cè)序數(shù)據(jù)讀取。此時(shí)，用NaOH溶液(lmol/L)將電泳效果不好的毛細(xì)管完全浸沒，2小時(shí)后將毛細(xì)管用擦鏡紙擦干，接著分別以水和甲醇浸泡毛細(xì)管30分鐘，每次保證毛細(xì)管被完全浸沒， 并用擦鏡紙擦干，最后以真空干燥儀干燥。實(shí)施例三毛細(xì)管清洗和修復(fù)。將干燥后的待處理的毛細(xì)管裝回測(cè)序儀，在測(cè)序儀的膠瓶中注入實(shí)施例一所制備的毛細(xì)管清洗試劑，通過測(cè)序儀的灌膠裝置將清洗試劑灌入毛細(xì)管中，維持30分鐘，然后將清洗試劑排出，將毛細(xì)管取下放入真空干燥儀干燥。將干燥后的毛細(xì)管在只有電泳緩沖液的狀況下進(jìn)行電泳，直到電流和檢測(cè)基線穩(wěn)定，即完成毛細(xì)管的清洗和修復(fù)。修復(fù)后的毛細(xì)管測(cè)序效果如圖1下面部分所示，基線平整，背景清晰，基本沒有雜峰。
權(quán)利要求
1.一種用于測(cè)序儀毛細(xì)管清洗和修復(fù)的試劑，其特征在于，它至少由如下組分組成1)甲基纖維素；2)聚乙烯醇；3)Tris-硼酸-EDTA緩沖液(S卩TBE緩沖液)；4)氫氧化鈉(NaOH)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述試劑，其中，各組分具體用量和試劑的配制方法為將300g甲基纖維素，IOOg聚乙烯醇(聚合度500 2000，醇解度75_99%)，加入800ml 的1 X TBE緩沖液中，75°C加熱攪拌溶解，冷卻至室溫后以NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值至8. 0，以超純水定容至1L。
3.一種基于權(quán)利要求1所述試劑，對(duì)測(cè)序儀毛細(xì)管進(jìn)行清洗和修復(fù)的方法，其特征在于，它至少由如下兩個(gè)步驟組成1)將毛細(xì)管預(yù)處理；2)將毛細(xì)管以權(quán)利要求1所述試劑進(jìn)行清洗和修復(fù)。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種用于測(cè)序儀上毛細(xì)管清洗和修復(fù)的試劑及其使用方法，本試劑包括甲基纖維素、聚乙烯醇、Tris-硼酸-EDTA緩沖液(即TBE緩沖液)、氫氧化鈉等化學(xué)組分。使用本發(fā)明所述試劑，可以對(duì)使用多次后電泳分離效果降低、出現(xiàn)測(cè)序雜峰信號(hào)的毛細(xì)管進(jìn)行清洗，消除殘留的熒光信號(hào)，并修復(fù)毛細(xì)管內(nèi)部涂層，使其恢復(fù)良好的電泳分離效果，解決基因測(cè)序過程中雜峰信號(hào)過高的問題，并可使廢舊的毛細(xì)管重新利用，從而降低基因測(cè)序的成本。
文檔編號(hào)G01N27/447GK102220107SQ20111009768
公開日2011年10月19日 申請(qǐng)日期2011年4月19日 優(yōu)先權(quán)日2011年4月19日
發(fā)明者葉鋒, 趙洪斌 申請(qǐng)人:北京鑫諾美迪基因檢測(cè)技術(shù)有限公司