專利名稱：一種半定量快速檢測大麻植物中△⁹-THC含量的方法
技術領域：
本發(fā)明屬于植物成分檢測技術領域，具體涉及一種半定量快速檢測大麻植物中 A9-THC含量的方法。
背景技術：
大mCannabis sativa L.)中含有一種致幻物質(zhì)四氫大麻酚(THC， tetrahydrocannabinol)，易被不法分子用來提煉毒品，造成社會危害。由于非法毒品的蔓延，許多國家采取了限制種植大麻的措施。按照國際禁毒公約的規(guī)定，大麻干物質(zhì)中THC含量> 0. 3%作為判定毒品大麻的依據(jù)。而THC含量低于0. 3%的工業(yè)大麻的纖維、籽、桿甚至全株皆具有較高的經(jīng)濟開發(fā)利用價值，它的利用可涉及造紙、紡織、建材、工業(yè)用油、功能保健食品、化妝品、醫(yī)藥等工業(yè)行業(yè)。由于在我國，工業(yè)大麻推廣種植利用力度加大和與四氫大麻酚相關的刑事案件逐年上升之間的矛盾日趨顯著，迫切需要研發(fā)一種快速測定新采集的大麻植物中THC含量是否低于0. 3%，可供實驗室快速篩查及基層單位容易掌握并配置的檢測分析方法，為大麻的禁(限)種執(zhí)法管理和大麻育種研究服務。由于大麻中近百種大麻酚類衍生物之間的化學性質(zhì)相近，給Δ 9-THC的分離和進一步定量分析造成了困難。現(xiàn)有國內(nèi)外文獻中，有基于化學顯色原理的大麻定性分析方法，但只能對大麻酚類化合物進行顯色，從而定性判定是否為大麻或大麻毒品；有基于氣相色譜法、液相色譜的儀器方法，可以進行Δ 9-THC的準確定量分析，但缺點是檢驗速度慢，分析操作繁瑣，購買儀器價格昂貴，需要專門培訓，且檢驗成本高(一個樣品需400元人民幣以上)，難以在基層單位推廣；還有基于免疫測定技術的大麻定性方法，該方法主要用于如唾液、血液、尿液等流體生物樣品中A9-THC的定性檢測(CN200910004736. 5)。這些方法都無法對大麻植物中的 Δ 9-THC含量是否超過或低于0. 3%進行快速、準確地測定。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于針對現(xiàn)有技術的不足，提供一種快速、簡易、準確地檢測大麻植物中A9-THC含量的方法。本發(fā)明的目的通過以下技術方案實現(xiàn)。除非另有說明，本發(fā)明所采用的百分數(shù)均為重量百分數(shù)。一種半定量快速檢測大麻植物中Δ 9-THC含量的方法，包括以下步驟
1、樣品前處理將大麻植株置于9(Tl80°C環(huán)境下烘烤廣lOmin，粉碎至過0. 425mm篩； 烘烤溫度優(yōu)選14(T160°C，加熱時間優(yōu)選2 5 min02、超聲波提取將粉碎好的大麻樣品與有機溶劑按固液比1: 20 50 (g: ml)混合后，超聲波提取廣8 min，過濾后得供試品溶液；另取A9-THC含量為0.3%的標準溶液作為對照品溶液；
所述的有機溶劑為石油醚、正己烷、氯仿、甲醇或乙醇中的任一種，或是以下兩種有機溶劑的混合物，包括石油醚-乙酸乙酯、正己烷-乙酸乙酯、正己烷-氯仿、石油醚-氯仿、氯仿-乙酸乙酯，正己烷-二氯甲烷、正己烷-甲醇；兩種有機溶劑的混合體積比為 1:1 15:1。兩種有機溶劑的混合體積比優(yōu)選5:廣10:1。超聲波提取時間優(yōu)選3、min。3、樣品展開在1(T30°C環(huán)境下，取供試品溶液和對照品溶液各1在同一塊薄層層析材料上點樣，再用展開劑展開，展開高度為rScm ；
展開時環(huán)境溫度優(yōu)選為15 25°C。所述的薄層層析材料為聚酰胺、硅膠GF254、硅膠HF254或硅膠H。所述的展開劑為石油醚-乙醚、正己烷-乙醚、石油醚-甲醇、石油醚-乙醇、石油醚-乙酸乙酯、石油醚-丙酮、正己烷-甲醇、正己烷-乙醇、正己烷-乙酸乙酯、正己烷-丙酮、氯仿或二氯甲烷；當展開劑為兩種有機溶劑的混合物時，兩種有機溶劑的混合體積比為1 :5 20 :1ο當選擇聚酰胺作為薄層層析材料時，展開劑優(yōu)選氯仿、二氯甲烷、正己烷-甲醇 (乙醇)、石油醚-甲醇(乙醇)或正己烷-乙酸乙酯；當展開劑為兩種有機溶劑的混合物時， 兩種有機溶劑的混合體積比為ι :5 15 :1。當選擇硅膠作為薄層層析材料時，展開劑優(yōu)選正己烷-乙醚、石油醚-乙酸乙酯或正己烷-丙酮，兩種有機溶劑的混合體積比為1 :5 10 :1。展開高度優(yōu)選為5 7cm。4、顯色采用濃度1 5 mg/ml的快藍B鹽或快藍BB鹽的有機溶劑同時對展開后的供試品和對照品進行顯色，有機溶劑為三氯甲烷或二氯甲烷；
5、判定在與對照品Δ 9-THC的&值相同的位置若樣品出現(xiàn)玫紅色斑點，則該斑點可定性為Δ 9_THC，然后按照該斑點的顏色深淺進行半定量判定若斑點顏色明顯比對照品 A9-THC深，則樣品中A9-THC的含量明顯高于0. 3% ；若顏色明顯比對照品Δ 9_THC淺，則樣品中Δ 9-THC的含量明顯低于0. 3% ；若顏色與對照品Δ 9-THC近似，則視為樣品中Δ 9-THC 的含量近似于0. 3%。本發(fā)明人經(jīng)過長期和深入的研究，尋找到新的應用于大麻植物中A9-THC半定量檢測的薄層層析材料和對應的展開劑體系，繼而摸索出快速加熱大麻植物的前處理條件， 通過與對照品目視比色，達到快速檢測判定的目的。前處理加熱溫度選擇
由文獻和實際檢測實驗(如

圖1)可知，在新采集的大麻植物中，THC含量較THCA的含量低，在高溫情況下，存在THC的轉化和THCA脫羧基轉化為THC的競爭，采用不同的溫度處理，以期得到最佳的處理溫度。前處理加熱溫度研究選擇9(T180°C采用不同處理時間對少量大麻植物樣品進行高溫快速處理，優(yōu)選出加熱溫度為14(T160°C，加熱時間最佳為2飛分鐘。選用高毒和低毒大麻植物樣品進行快速半定量檢測方法與標準《工業(yè)大麻品種類型》(DB53/ T 295. 1-2009)中使用的HPLC儀器定量分析方法比較，THC含量的相對誤差高毒品種為 1. 3 9. 8%，低毒品種為1. 6% 12· 8%ο提取溶劑和超聲時間的選擇提取溶劑的研究，通過對常用提取溶劑的篩選，可知用甲醇、甲醇-氯仿(二氯甲烷) 等溶劑對大麻植物樣品進行提取，提取液雜質(zhì)較多，對隨后的薄層層析顯色判定造成假陽性干擾，而用石油醚-乙酸乙酯、正己烷-乙酸乙酯、正己烷、石油醚提取的干擾較小，且提取率為949Γ98%。當使用兩種有機溶劑混合時，低極性與較高極性有機溶劑的體積比為 1:廣15:1，優(yōu)選為5:廣10:1;超聲提取時間選擇廣8 min0進行上述HPLC儀器定量分析可知，超聲提取3、min分鐘后的THC的溶出達到最大值。薄層層析材料及層析條件選擇
選擇硅膠(含硅膠GF254、硅膠HF254或硅膠H等)作為薄層層析材料，優(yōu)選出正己烷-乙醚、石油醚-乙酸乙酯、正己烷-丙酮為展開劑體系，低極性溶劑與高極性溶劑的體積比為 1 :5 20 :1，更優(yōu)選1 :5 10 :1。采用其中的最佳展開劑體系展開，CBD、CBN和^(的&值分別可為0. 36,0. 32、0· 27 (如圖2所示)。選擇聚酰胺作為薄層層析材料，優(yōu)選出氯仿、二氯甲烷、正己烷-甲醇(乙醇)、石油醚-甲醇(乙醇)、正己烷-乙酸乙酯為展開劑體系，當使用有機溶劑混合溶液時，低極性溶劑與高極性溶劑的體積比為1 :5 20 :1，更優(yōu)選1 :5 15 :1。采用其中的最佳展開劑體系展開，CBD、CBN和THC的&值分別可為0. 31,0. 37,0. 67(如圖2所示)。與使用硅膠薄層層析材料的對應展開體系結果比較，THC與其他兩個干擾成分相距較遠，且處于較前位置， 易于辨識，更便于目視定量。顯色條件選擇
顯色條件研究，選擇快藍B鹽或快藍BB鹽的有機溶液，如三氯甲烷、二氯甲烷。該顯色劑對THC等大麻酚類化合物有特征顯色，其他酚類對其干擾較少。THC、CBD、CBN三種化合物顏色分別顯示為玫紅色、橘黃色、紫色。有機溶液顯色后易揮干，顯色2 5min內(nèi)為最佳判定時間?？焖{B鹽或快藍BB鹽的有機溶液濃度可選擇廣5mg/ml，現(xiàn)配現(xiàn)用，若密封并避光低溫(_20°C)放置，有效時間會延長至12小時。采用硅膠薄層層析，在上述顯色劑濃度下，檢測下限為10μ g/ml ；采用聚酰胺薄膜層析，檢測下限為20. 0 μ g/ml。檢測方法有效性驗證
硅膠薄層層析板半定量檢測分析
取不同THC濃度的大麻植物樣品36份，采用本發(fā)明所述的Δ 9-THC快速半定量檢測方法操作并做出判定，與HPLC儀器定量分析結果比較，判定結果正確率為91. 7% (如表1)。表1小同大麻大庥 SlffiSi THC含呈半判定結果
權利要求
1.一種半定量快速檢測大麻植物中A9-THC含量的方法，包括以下步驟(1)樣品前處理將大麻植株置于9(Tl80°C環(huán)境下烘烤廣lOmin，粉碎至過0.425mm篩；(2)超聲波提取將粉碎好的大麻樣品與有機溶劑按固液比1:20 50混合后，超聲波提取廣8 min，過濾后得供試品溶液；另取A9-THC含量為0. 3%的標準溶液作為對照品溶液；(3)樣品展開在1(T30°C環(huán)境下，取供試品溶液和對照品溶液在同一塊薄層層析材料上點樣，再用展開劑展開，展開高度為rScm ；(4)顯色采用濃度1 5mg/ml的快藍B鹽或快藍BB鹽的有機溶劑同時對展開后的供試品和對照品進行顯色，有機溶劑為三氯甲烷或二氯甲烷；(5)判定在與對照品Δ9-THC的&值相同的位置若樣品出現(xiàn)玫紅色斑點，則該斑點可定性為Δ 9_THC，然后按照該斑點的顏色深淺進行半定量判定若斑點顏色明顯比對照品 A9-THC深，則樣品中A9-THC的含量明顯高于0. 3% ；若顏色明顯比對照品Δ9_THC淺，則樣品中Δ 9-THC的含量明顯低于0. 3% ；若顏色與對照品Δ 9-THC近似，則視為樣品中Δ 9-THC 的含量近似于0. 3%。
2.根據(jù)權利要求1所述的半定量快速檢測大麻植物中Δ9-THC含量的方法，其特征在于步驟(1)中，烘烤溫度為14(T160°C，加熱時間為2、min。
3.根據(jù)權利要求1所述的半定量快速檢測大麻植物中Δ9-THC含量的方法，其特征在于步驟(2)中，所述的有機溶劑為石油醚、正己烷、氯仿、甲醇或乙醇中的任一種，或是以下兩種有機溶劑的混合物，包括石油醚-乙酸乙酯、正己烷-乙酸乙酯、正己烷-氯仿、石油醚-氯仿、氯仿-乙酸乙酯，正己烷-二氯甲烷、正己烷-甲醇；兩種有機溶劑的混合體積比為1:1 15:1。
4.根據(jù)權利要求3所述的半定量快速檢測大麻植物中Δ9-THC含量的方法，其特征在于兩種有機溶劑的混合體積比為5:廣10:1。
5.根據(jù)權利要求1所述的半定量快速檢測大麻植物中Δ9-THC含量的方法，其特征在于步驟(2)中，所述的超聲波提取時間為3、min。
6.根據(jù)權利要求1所述的半定量快速檢測大麻植物中Δ9-THC含量的方法，其特征在于步驟(3)中，展開時的環(huán)境溫度為15 25°C。
7.根據(jù)權利要求1所述的半定量快速檢測大麻植物中Δ9-THC含量的方法，其特征在于步驟(3)中，所述的薄層層析材料為聚酰胺、硅膠GF254、硅膠HF254或硅膠H。
8.根據(jù)權利要求1所述的半定量快速檢測大麻植物中Δ9-THC含量的方法，其特征在于步驟(3)中，所述的展開劑為石油醚-乙醚、正己烷-乙醚、石油醚-甲醇、石油醚-乙醇、石油醚-乙酸乙酯、石油醚-丙酮、正己烷-甲醇、正己烷-乙醇、正己烷-乙酸乙酯、正己烷-丙酮、氯仿或二氯甲烷；當展開劑為兩種有機溶劑的混合物時，兩種有機溶劑的混合體積比為1 5 20 :1ο
9.根據(jù)權利要求8所述的半定量快速檢測大麻植物中Δ9-THC含量的方法，其特征在于當選擇聚酰胺作為薄層層析材料時，展開劑為氯仿、二氯甲烷、正己烷-甲醇、正己烷-乙醇、石油醚-甲醇、石油醚-乙醇或正己烷-乙酸乙酯；展開劑為兩種有機溶劑的混合物時，兩種有機溶劑的混合體積比為1 :5 15 1 ；當選擇硅膠作為薄層層析材料時，展開劑為正己烷-乙醚、石油醚-乙酸乙酯或正己烷-丙酮，兩種有機溶劑的混合體積比為1 : 5 10 :1。
10.根據(jù)權利要求1所述的半定量快速檢測大麻植物中A9-THC含量的方法，其特征在于步驟(3)中，展開劑的展開高度為5 7cm。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種半定量快速檢測大麻植物中△9-THC含量的方法。將大麻植株烘烤、粉碎至細粉，經(jīng)有機溶劑超聲波提取得供試品溶液，另取Δ9-THC含量為0.3%的標準溶液作為對照品溶液，再經(jīng)點樣、展開、顯色后，通過觀察供試品與對照品顏色的差異，即可判定供試品中△9-THC的含量。通過高溫加熱，大麻植物中的水分被迅速揮去，△9-THC快速從其羧酸類前體經(jīng)過脫羧基而轉化形成，解決了新采集大麻植物樣品中難以檢測到△9-THC的問題。該方法具有快速、簡便、易操作、檢測成本低的特點，能夠對大麻植物進行快速半定量檢測，可供實驗室快速篩查，基層單位容易掌握并配置，具有良好的應用前景。
文檔編號G01N30/90GK102175813SQ20111003281
公開日2011年9月7日 申請日期2011年1月30日 優(yōu)先權日2011年1月30日
發(fā)明者張慶瀅, 楊明, 許艷萍, 郭孟璧, 郭鴻彥, 陳璇 申請人:云南省農(nóng)業(yè)科學院經(jīng)濟作物研究所