專利名稱：mimecan在評(píng)價(jià)心力衰竭中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種評(píng)估個(gè)體心力衰竭的方法，該方法包括以下步驟a)測(cè)量從個(gè)體獲得的樣品中標(biāo)記mimecan的濃度，b)任選測(cè)量樣品中一種或多種其它心力衰竭標(biāo)記的濃度，并通過(guò)將步驟(a)中測(cè)定的濃度以及任選的在步驟(b)中測(cè)定的濃度與對(duì)照樣品確立的所述一種或多種標(biāo)記的濃度進(jìn)行比較，來(lái)評(píng)估心力衰竭。還公開了 mimecan作為標(biāo)記蛋白評(píng)估心力衰竭的用途，包括mimecan的標(biāo)記組合，以及用于測(cè)量mimecan的試劑盒。
背景技術(shù)：
心力衰竭(HF)是危害大眾健康的一個(gè)重要問(wèn)題，并且日趨嚴(yán)重。例如，在美國(guó)，大約5 百萬(wàn)患者患有HF，并且每年超過(guò)550000名患者被首次診斷為HF (載于American Heart Association, Heart Disease and Stroke Statistics: 2008 Update, Dallas, Texas, American Heart Association O008))。同樣，美國(guó)統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)表明，對(duì)于每年1200萬(wàn)至1500 萬(wàn)個(gè)診所就診次數(shù)和650萬(wàn)個(gè)住院日而言，HF是主要原因。從1990年至1999年，每年以 HF作為主要診斷結(jié)論住院治療的患者數(shù)量從大約81萬(wàn)增長(zhǎng)至超過(guò)100萬(wàn)，以HF作為主要或次要診斷結(jié)論的人數(shù)從240萬(wàn)增至360萬(wàn)。在2001年，接近53000名患者死于HF作為主因的疾病。心力衰竭主要是老年人的病癥，因此，人們普遍認(rèn)為“人口老齡化”也促使HF 發(fā)病率增加。在年齡大于65歲的人群中，HF的發(fā)病率接近10%。。僅僅在美國(guó)，2005年由HF引起的直接和間接損失總共估計(jì)約為$279億，并且每年在治療HF的藥物上花費(fèi)大約為億(參照上述引用的AHA-統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù))。心力衰竭
心力衰竭的特征是心臟泵出身體所需血液量的能力喪失。衰竭并不意味著心臟停止泵送，而是指不能有效地泵出血液。NYHA [紐約心臟協(xié)會(huì)(New York Heart Association)]和 ACC/AHA [美國(guó)心臟病學(xué)協(xié)會(huì) / 美國(guó)心臟協(xié)會(huì)(American Association of Cardiology/American Heart Association)]都建立了 HF的功能分類以評(píng)價(jià)該疾病的進(jìn)程。NYHA分類方案有四級(jí)疾病狀態(tài)1級(jí)為在任何行為程度下均無(wú)癥狀，2級(jí)為在重體力行為下有癥狀，而III級(jí)和IV級(jí)分別在輕度行為和無(wú)行為下有癥狀。在四階段的ACC/AHA方案中，階段A為無(wú)癥狀但有發(fā)展為HF的危險(xiǎn)。階段B有心臟功能紊亂的證據(jù)而無(wú)癥狀。在階段C中，有心臟功能紊亂的證據(jù)并伴有癥狀。在階段D 中，患者盡管受到最大程度的治療但仍有癥狀。HF的病原學(xué)
在醫(yī)學(xué)上，必須將心力衰竭(HF)理解為一種復(fù)合型疾病。它可能由觸發(fā)事件而引起， 比如心肌梗死(心臟病發(fā)作)，或者是其它病因的后續(xù)，比如高血壓、糖尿病或心臟畸形(例如心瓣膜病)。心肌梗死或其它的HF病因會(huì)導(dǎo)致心臟泵送能力的初始減退，例如因?yàn)閾p傷心肌。由于一種或多種代償機(jī)制的激活，可能不會(huì)感覺不到這種泵送能力的減退。但是，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)HF的進(jìn)展與患者的血液動(dòng)力狀態(tài)無(wú)關(guān)。因此，由疾病所引起的損害性變化已經(jīng)出現(xiàn)發(fā)展，而患者甚至仍無(wú)癥狀。事實(shí)上，在HF早期階段維持正常心血管功能的代償機(jī)制，實(shí)際上可能最終促進(jìn)了疾病的進(jìn)展，例如因?yàn)閷?duì)心臟及其功能施加有害作用從而維持足夠水平的血流循環(huán)。HF出現(xiàn)的一些更重要的病理生理變化有(i)下丘腦-垂體-腎上腺軸的活化， (ii)全身性內(nèi)皮功能紊亂和(iii)心肌重塑。(i)專門針對(duì)拮抗下丘腦-垂體-腎上腺軸活化的治療包括β -腎上腺素能阻滯劑(B-阻滯劑)、血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)抑制劑、某些鈣通道阻滯劑、硝酸鹽和內(nèi)皮素-1 阻滯劑。鈣通道阻滯劑和硝酸鹽雖然產(chǎn)生臨床改善，卻沒有明確顯示出能延長(zhǎng)生存期，而 B-阻滯劑和ACE抑制劑已經(jīng)表現(xiàn)出明顯延長(zhǎng)壽命，醛留酮拮抗藥也是如此。使用內(nèi)皮素-1 阻滯劑的實(shí)驗(yàn)研究已展示出有益效果。(ii)全身性內(nèi)皮功能紊亂是HF的一種公知特征，在左心室功能紊亂體征出現(xiàn)時(shí)會(huì)明顯表現(xiàn)。內(nèi)皮功能紊亂對(duì)于心肌微循環(huán)與心臟肌細(xì)胞的密切關(guān)系十分重要。該證據(jù)表明微血管功能紊亂明顯促發(fā)肌細(xì)胞功能紊亂，并且導(dǎo)致進(jìn)行性心肌衰竭的形態(tài)學(xué)變化。依據(jù)潛在的病理生理學(xué)，有證據(jù)表明內(nèi)皮功能紊亂可能由NO的相對(duì)缺乏所引起， 而NO的相對(duì)缺乏可以歸結(jié)為NADH依賴性氧化酶引起的血管&生成增加和隨后的NO過(guò)度清除。潛在的提高O2生成的作用因素包括升高的交感緊張性、去甲腎上腺素、血管緊張素 II、內(nèi)皮素-1和TNF-α。此外，相對(duì)于TNF-α水平，一種關(guān)鍵的抗炎細(xì)胞因子IL-10的水平過(guò)低?，F(xiàn)在，人們認(rèn)為，TNF-α與相關(guān)的促炎細(xì)胞因子(包括11^-6和可溶性1順-(1受體)的水平升高，通過(guò)引起心肌收縮性降低、雙心室膨大和血壓過(guò)低而在HF的發(fā)展中起著重要作用，并且可能涉及內(nèi)皮細(xì)胞活化和功能紊亂。人們還認(rèn)為TNF-a可能在嚴(yán)重HF患者中發(fā)生肌肉消瘦的這種至今仍無(wú)法解釋的現(xiàn)象中起作用。對(duì)少數(shù)患者使用可溶性TNF受體療法的初步研究已顯示了對(duì)于NYHA功能分類及患者健康狀況(依據(jù)對(duì)生活質(zhì)量指數(shù)的測(cè)量)的改善。(iii)心肌重塑是一個(gè)復(fù)雜過(guò)程，其伴隨著從無(wú)癥狀向有癥狀的心力衰竭轉(zhuǎn)變， 并可被描述成心肌內(nèi)的一系列適應(yīng)性改變，例如心室形狀、質(zhì)量和體積的改變(Piano， Μ. R.等人，J. Cardiovasc. Nurs. 14 (2000) 1-23 ；Molkentin, J. D.，Ann. Rev. Physiol. 63 (2001) 391-426)。心肌重塑的主要內(nèi)容是肌細(xì)胞生物學(xué)的改變，如肌細(xì)胞肥大，因?yàn)閴乃阑虻蛲龆鸬募〖?xì)胞損失，胞外基質(zhì)的改變和左心室腔的幾何學(xué)改變。還不清楚心肌重塑是否只是受到長(zhǎng)期神經(jīng)激素刺激產(chǎn)生的毒性效應(yīng)數(shù)年之后發(fā)生的終末器官效應(yīng)，或者心肌重塑是否獨(dú)立地促使心力衰竭進(jìn)展。迄今為止的證據(jù)提示，適當(dāng)?shù)闹委熆梢詼p緩或停止心肌重塑的進(jìn)展。標(biāo)記和疾病狀態(tài)
如上所述，肌細(xì)胞肥大可能代表發(fā)展至HF的最初步驟之一。肌細(xì)胞肥大的特征為某些編碼收縮蛋白(如P-肌球蛋白重鏈和肌鈣蛋白T (TnT))的基因和一些非收縮蛋白(如 A型和B型利鈉肽)的表達(dá)升高，細(xì)胞體積增加和細(xì)胞骨架變化(Piano，Μ. R.等人，J. Cardiovasc. Nurs. 14 (2000) 1-23 ；Molkentin, J. D.，Ann. Rev. Physiol. 63 (2001) 391-426)。對(duì)人類和動(dòng)物心力衰竭模型的研究表明，在心力衰竭的后期，肌細(xì)胞功能降低。現(xiàn)已表明，導(dǎo)致肌細(xì)胞功能紊亂的機(jī)制涉及鈣處理網(wǎng)絡(luò)、肌絲和細(xì)胞支架的改變(de Tombe, P.P., Cardiovasc. Res. 37 (1998) 367-380)。例如，在心力衰竭的人類和動(dòng)物模型中，肌漿網(wǎng)鈣-ATP酶的酶活性降低，而肌膜NaYCa2+交換器的mRNA水平和蛋白水平都得以提高。而且，在心力衰竭的人類和動(dòng)物模型中都具有TnT的同種型轉(zhuǎn)換、肌鈣蛋白I (TnI)磷酸化減少、肌纖維肌動(dòng)球蛋白ATP酶活性降低和微管形成增加。最初，導(dǎo)致心肌重塑的心臟改變是為了補(bǔ)償心肌病變部分，以維持身體對(duì)氧和營(yíng)養(yǎng)的需要。但是，心力衰竭的代償期是有限的，于是在最后，衰竭的心臟不能維持足夠滿足身體需求的心輸出量。因此，將會(huì)從代償期轉(zhuǎn)變?yōu)槭Т鷥斊?。在失代償期?nèi)，心臟級(jí)聯(lián)變化持續(xù)但不再是有利的，這使得患者的心力衰竭發(fā)展為慢性狀態(tài)并最終死亡。根據(jù)“ACC/AHA 2005成年人慢性心力衰竭的診斷和管理的更新指南”(S. Hunt等人，www, acc. org = ACC/AHA實(shí)踐指南)，如今，在心力衰竭領(lǐng)域內(nèi)，該疾病進(jìn)程被分為如上所述的四個(gè)階段。在階段A和B中，發(fā)現(xiàn)個(gè)體處于心力衰竭發(fā)展的危險(xiǎn)中，而階段C和D表示這些患者組顯示了心力衰竭的體征和癥狀。A至D不同階段定義的詳細(xì)說(shuō)明如上述參考資料中給出，通過(guò)引用包括在本文中。心力衰竭的診斷方法
評(píng)價(jià)HF患者唯一最有效的診斷測(cè)試是采用全面的2維超聲心動(dòng)圖聯(lián)同多普勒血流研究，以確定心肌、心臟瓣膜或心包是否出現(xiàn)異常，以及涉及哪些腔室。必須考慮三個(gè)基本問(wèn)題1) LVEF是維持還是減少，2) LV結(jié)構(gòu)是正常還是異常，和3)是否還有其它可以解釋臨床表現(xiàn)的結(jié)構(gòu)異常，如瓣膜、心包或右心室的異常？該信息應(yīng)該由EF的數(shù)值預(yù)期、心室尺度和/或體積的測(cè)量、壁厚度的測(cè)量和腔室的幾何結(jié)構(gòu)以及局部室壁活動(dòng)的評(píng)價(jià)來(lái)量化。 應(yīng)該評(píng)估右心室的大小以及收縮性能。此外還應(yīng)該半定量地確定心房的大小并測(cè)量左心房的尺度和/或體積。對(duì)于EF保持或減少的患者來(lái)說(shuō)，在進(jìn)行超聲心動(dòng)描記時(shí)獲得的非侵襲性血液動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù)是重要的附加關(guān)聯(lián)指標(biāo)。綜合二尖瓣輸入模型、肺靜脈輸入模型和二尖瓣環(huán)流速的組合定量提供了關(guān)于LV充盈和左房壓特征的數(shù)據(jù)。評(píng)定三尖瓣回流梯度以及測(cè)量下腔靜脈的尺度及其在呼吸過(guò)程的反應(yīng)，可估算收縮肺動(dòng)脈壓和中心靜脈壓。心搏量可以聯(lián)合尺度測(cè)量和LV流出道的脈沖多普勒加以確定。但是，在沒有HF 時(shí)，這些參數(shù)的任何一項(xiàng)都可能出現(xiàn)異常。這些參數(shù)沒有一個(gè)必然與HF特異關(guān)聯(lián)；然而，總體正常的充盈模型可排除臨床HF。由臨床觀點(diǎn)來(lái)看，該疾病在代償期和失代償初期無(wú)臨床癥狀(階段A完全無(wú)癥狀， 階段B有結(jié)構(gòu)性心臟病但沒有HF的體征和癥狀，參考ACC/AHA實(shí)踐指南)。直到徹底進(jìn)入失代償期(即依照ACC/AHA指南的階段C和D)，疾病的外部體征(如氣促)才會(huì)出現(xiàn)?，F(xiàn)行的診斷方式基于階段C和D的患者的外部癥狀。通常，心力衰竭患者接受使用符合心力衰竭特異性機(jī)制的藥物的標(biāo)準(zhǔn)治療。沒有診斷性試驗(yàn)?zāi)芸煽康胤从衬切┨禺悪C(jī)制并幫助醫(yī)師為適當(dāng)?shù)幕颊哌x擇適當(dāng)?shù)乃幬?和劑量)(例如ACE抑制劑、AT II、β -阻滯劑等等)。用標(biāo)記早期診斷HF
似乎可能僅由生化標(biāo)記對(duì)具有心力衰竭風(fēng)險(xiǎn)的患者進(jìn)行早期評(píng)估，因?yàn)橛邪l(fā)展心力衰竭風(fēng)險(xiǎn)的個(gè)體在那個(gè)階段仍是沒有HF臨床癥狀的?，F(xiàn)在尚無(wú)確定的生化標(biāo)記能在該疾病癥狀出現(xiàn)前進(jìn)行可靠評(píng)估。現(xiàn)在到了確立HF診斷的時(shí)候，該疾病已經(jīng)有了深度發(fā)展。近年來(lái)，利鈉肽家族，尤其是心房利鈉肽家族和腦利鈉肽家族，被證明對(duì)評(píng)估HF有重要價(jià)值。HF的預(yù)后和需求
至少部分因?yàn)闇蟮脑\斷，50%的HF患者在診斷后兩年之內(nèi)死亡。5年生存率小于30%。 急需有助于心力衰竭早期診斷的新型生化標(biāo)記。已批準(zhǔn)對(duì)心力衰竭風(fēng)險(xiǎn)個(gè)體(即無(wú)心力衰竭臨床癥狀的個(gè)體)早期評(píng)估的改進(jìn)方案。近年來(lái)，已經(jīng)將B型利鈉肽標(biāo)記確定為一種監(jiān)測(cè)HF患者疾病進(jìn)程的良好手段，并用其評(píng)估患者心血管并發(fā)癥如心臟病發(fā)作的風(fēng)險(xiǎn)。然而，對(duì)于其它很多診斷方面，單一標(biāo)記是不夠的。盡管NT-proBNP值低是排除HF或LV的非常好的陰性預(yù)測(cè)指標(biāo)值，但在上述的和其它的研究(參考Tri印els R. H.等人，Clin. Chem. 49，Supp 1. A (2003) A37-A38) 中，已發(fā)現(xiàn)心力衰竭的陽(yáng)性預(yù)測(cè)值在50-60%的范圍內(nèi)。因此，可用于評(píng)估個(gè)體心力衰竭風(fēng)險(xiǎn)的標(biāo)記具有很高的臨床/實(shí)踐重要性，這樣的標(biāo)記獨(dú)立具有較高的HF陽(yáng)性預(yù)測(cè)率，或者， 相對(duì)于單獨(dú)的NT-proBNP，其組合NT-proBNP具有更好的HF陽(yáng)性預(yù)測(cè)率。在這個(gè)臨床上非常重要并急需的診斷領(lǐng)域中，輔助評(píng)估心力衰竭患者的標(biāo)記對(duì)于取得更深遠(yuǎn)的技術(shù)進(jìn)步也意義重大。發(fā)明概述
現(xiàn)在已發(fā)現(xiàn)并確定，標(biāo)記mimecan能輔助評(píng)估心力衰竭。在一個(gè)實(shí)施方案中，它可幫助評(píng)估個(gè)體是否具有發(fā)生心力衰竭的風(fēng)險(xiǎn)。在進(jìn)一步的方面，它可以輔助評(píng)估疾病的進(jìn)展。在另一個(gè)實(shí)施方案中，它可以輔助預(yù)測(cè)心力衰竭的發(fā)生。在另一個(gè)實(shí)施方案中，它能輔助評(píng)估并選擇一種適當(dāng)?shù)闹委煼桨敢灶A(yù)防或治療心力衰竭。本文公開一種評(píng)估個(gè)體心力衰竭的方法，其包括以下步驟測(cè)量從該個(gè)體獲得的樣品中標(biāo)記mimecan的濃度；任選測(cè)量樣品中一種或多種其它心力衰竭標(biāo)記的濃度；并通過(guò)將mimecan的濃度和任選的所述一種或多種其它標(biāo)記的濃度與對(duì)照樣品確定的所述一種或多種標(biāo)記的濃度進(jìn)行比較，來(lái)評(píng)估心力衰竭。本發(fā)明還涉及使用蛋白mimecan作為標(biāo)記分子在心力衰竭評(píng)估中的用途。本文進(jìn)一步公開了包括mimecan和一種或多種其它心力衰竭標(biāo)記的標(biāo)記組合在評(píng)估心力衰竭中的用途。本文還提供實(shí)施體外評(píng)估心力衰竭方法的試劑盒，所述方法包括以下步驟測(cè)量樣品中標(biāo)記mimecan的濃度；任選測(cè)量樣品中一種或多種其它的心力衰竭標(biāo)記的濃度；并通過(guò)將mimecan的濃度和任選的一種或多種其它標(biāo)記的濃度與用參考群體中確定的所述一種或多種標(biāo)記的濃度進(jìn)行比較，以評(píng)估心力衰竭，該試劑盒包括特異性測(cè)定mimecan所需試劑和任選特異性測(cè)定一種或多種其它心力衰竭標(biāo)記的所需試劑。本發(fā)明的其它方面和優(yōu)點(diǎn)將通過(guò)隨后的描述而變得明顯。然而，應(yīng)當(dāng)理解，當(dāng)提及本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案時(shí)，提供的詳細(xì)描述和具體實(shí)施例僅作為示例說(shuō)明，因?yàn)楸绢I(lǐng)域技術(shù)人員由該詳細(xì)描述顯而易見在本發(fā)明精神和范圍內(nèi)的各種變化和修改。發(fā)明詳述
在第一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及一種評(píng)估個(gè)體心力衰竭的方法，其包括以下步驟a) 測(cè)量從該個(gè)體獲得的樣品中標(biāo)記mimecan的濃度，b)任選測(cè)量樣品中一種或多種其它心力衰竭標(biāo)記的濃度，和c)通過(guò)將步驟(a)中測(cè)得的濃度和任選的步驟(b)測(cè)得的濃度與對(duì)照樣品確定的所述一種或多種標(biāo)記的濃度比較，以評(píng)估心力衰竭。在本文中，以下每一個(gè)術(shù)語(yǔ)都具有與其在本節(jié)中相關(guān)的意義。本文使用的冠詞“一個(gè)”或“一種”是指一或超過(guò)一(即至少一)的該冠詞的語(yǔ)法客體。例如，“一種抗體”表示一種抗體或一種以上的抗體。表述“一或更多”、“一種或多種”表示1至50，優(yōu)選1到20，也優(yōu)選2、3、4、5、6、7、 8、9、10、12 或 15。本文使用的術(shù)語(yǔ)“標(biāo)記”或“生化標(biāo)記”是指一種分子，該分子用作分析患者的測(cè)試樣品的靶標(biāo)。在一個(gè)實(shí)施方案中，這些分子靶標(biāo)的實(shí)例是蛋白質(zhì)或多肽。在本發(fā)明中用作標(biāo)記的蛋白或多肽預(yù)計(jì)包括所述蛋白的天然片段，特別是免疫學(xué)可檢測(cè)的片段。免疫學(xué)可檢測(cè)的片段優(yōu)選包含所述標(biāo)記多肽的至少6、7、8、10、12、15或20個(gè)連續(xù)氨基酸。本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到，細(xì)胞釋放的蛋白或細(xì)胞外基質(zhì)中存在的蛋白可能被損壞，比如在炎癥階段，并且可被降解或者裂解成這樣的片段。某些標(biāo)記以非活性的形式合成，隨后可能通過(guò)蛋白水解被活化。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)理解，蛋白質(zhì)或其片段也可以作為復(fù)合物的一部分存在。這些復(fù)合物也可能用作本發(fā)明意義上的標(biāo)記。此外，或替代地，標(biāo)記多肽可以帶有翻譯后修飾。翻譯后修飾的實(shí)例有糖基化、?；?或磷酸化等等。術(shù)語(yǔ)“評(píng)估/評(píng)價(jià)心力衰竭”用于表示本發(fā)明的方法將輔助醫(yī)師評(píng)估個(gè)體是否具有發(fā)生心力衰竭的風(fēng)險(xiǎn)，或輔助醫(yī)師在一個(gè)或幾個(gè)其它HF診斷相關(guān)方面評(píng)估HF患者。在評(píng)估HF個(gè)體時(shí)，優(yōu)選的診斷方面有心力衰竭的分期、鑒別診斷急性和慢性心力衰竭、判斷疾病發(fā)展的風(fēng)險(xiǎn)、指導(dǎo)選擇適當(dāng)?shù)乃幬?、監(jiān)控治療反應(yīng)和隨訪HF患者。就本發(fā)明而言，“心力衰竭標(biāo)記”是一種標(biāo)記，該標(biāo)記如果與標(biāo)記mimecan組合，就會(huì)為正在進(jìn)行的診斷增加評(píng)估HF的相關(guān)信息。對(duì)評(píng)估HF而言，將所述標(biāo)記納入已包含標(biāo)記mimecan的標(biāo)記組合，如果在給定特異性下的靈敏度或如果在給定靈敏度下的特異性可分別提高，則該信息被認(rèn)為是相關(guān)的或具有附加價(jià)值。優(yōu)選地，靈敏度或特異性的提高分別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著水平P = 0. 05,0. 02,0. 01或更低。優(yōu)選所述一種或多種心力衰竭的其它標(biāo)記選自利鈉肽標(biāo)記、心肌肌鈣蛋白標(biāo)記和炎癥標(biāo)記。本文使用的術(shù)語(yǔ)“樣品，，是指為了進(jìn)行體外評(píng)價(jià)而獲取的生物樣品。在本發(fā)明方法中，樣品或患者樣品可優(yōu)選包含任何體液。優(yōu)選的試驗(yàn)樣品包括血液、血清、血漿、尿液、 唾液和關(guān)節(jié)液。優(yōu)選樣品是全血、血清、血漿或關(guān)節(jié)液，血漿或血清是最方便的樣品種類。 技術(shù)人員將會(huì)知道，任何這樣的評(píng)估均在體外進(jìn)行。然后丟棄患者樣品?；颊邩悠穬H僅用于本發(fā)明的體外方法，并且患者樣品中的物質(zhì)不會(huì)回輸給患者身體。一般地，樣品是液體樣品，例如，全血、血清或血漿?！皩?.....濃度與對(duì)照樣品確定的濃度進(jìn)行比較”的表述僅用于進(jìn)一步說(shuō)明對(duì)于
技術(shù)人員來(lái)說(shuō)顯而易見的內(nèi)容。對(duì)照樣品可以是內(nèi)部對(duì)照樣品或外部對(duì)照樣品。在一個(gè)實(shí)施方案中，使用內(nèi)部對(duì)照樣品，即評(píng)估受試樣品中的標(biāo)記水平，以及評(píng)估取自于同一受試者的一個(gè)或更多個(gè)其它樣品中的標(biāo)記水平，以確定所述標(biāo)記水平是否有任何的變化。在另一個(gè)實(shí)施方案中，使用外部對(duì)照樣品。對(duì)于外部對(duì)照樣品，將來(lái)自某個(gè)體的樣品中標(biāo)記的存在或數(shù)量與另一個(gè)體中該標(biāo)記的存在或數(shù)量進(jìn)行比較，后一體已知患有某種給定病癥或已知具有某種給定病癥的風(fēng)險(xiǎn)；或者一個(gè)個(gè)體已知沒有給定病癥，即“正常個(gè)體”。例如，患者樣品中的標(biāo)記水平可與已知與HF特定病程有關(guān)的水平相比較。通常，樣品標(biāo)記水平直接或間接與診斷相關(guān)，并且例如標(biāo)記水平用于例如確定個(gè)體是否具有HF風(fēng)險(xiǎn)。或者，樣品的標(biāo)記水平例如可以與已知與以下情況有關(guān)的標(biāo)記水平相比較HF患者對(duì)治療的反應(yīng)、急性和慢性心力衰竭的鑒別診斷、指導(dǎo)選擇適當(dāng)?shù)乃幬镏委烪F、鑒別疾病發(fā)展風(fēng)險(xiǎn)或隨訪HF患者。 根據(jù)計(jì)劃的診斷用途，選擇適當(dāng)?shù)膶?duì)照樣品，并且確定其中標(biāo)志物的對(duì)照值或參考值。技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到，在一個(gè)實(shí)施方案中這些對(duì)照樣品是從參考群體獲得的，該群體年齡匹配并且沒有混雜的疾病。同時(shí)技術(shù)人員明了，在對(duì)照樣品中確定的標(biāo)記絕對(duì)值將取決于所用的測(cè)定。對(duì)照(參考)值用來(lái)自于適當(dāng)參考群體的100位明確表征的個(gè)體的優(yōu)選樣品確定。 還優(yōu)選的是，可以選擇參考群體由20、30、50、200、500或1000個(gè)個(gè)體組成。健康個(gè)體為確定對(duì)照值的優(yōu)選參考群體。Mimecan
Mimecan是一種小蛋白聚糖，其具有富含亮氨酸重復(fù)和由298個(gè)氨基酸組成的前體 (參見SEQ ID NO: 1)。Mimecan 的其他名稱是 OGN、osteoglycin、DKFZp586P2421、0G、 OIF、SLRR3A。Mimecan是分泌型小的富含亮氨酸的蛋白聚糖(SLRP)家族的成員，具有結(jié)構(gòu)相關(guān)核心蛋白。所有SLRP共有的共同特征是在核心蛋白的C-末端一半部分處的串聯(lián)富含亮氨酸重復(fù)(LRR)單元。但是，在N-末端區(qū)中，每一類的SLRP具有稱為L(zhǎng)RR N-結(jié)構(gòu)域的獨(dú)特結(jié)構(gòu)域，其含有具有保守間隔的半胱氨酸簇。III類SLRP含有六個(gè)羧基LRR并包含mimecan、 epiphycan 禾口 Opticin0從小鼠敲除對(duì)于I類和II類成員，例如核心蛋白多糖、雙糖鏈蛋白多糖、lumecan 和纖維調(diào)節(jié)素的功能性研究顯示SLRP-缺乏小鼠展現(xiàn)由于異常膠原纖維原纖維形成導(dǎo)致的大量缺陷，表明這些SLRP在建立和維持膠原蛋白基質(zhì)中發(fā)揮重要作用(Ameye，L.和 Young, Μ. F. , Glycobiology 12 (2002) 107R - 116R)。III 類mimecan 的缺乏也導(dǎo)致膠原蛋白纖維異常(Tasheva, Ε. S.等人，Mol. Vis. 8 (2002) 407-415)。Mimecan是細(xì)胞外基質(zhì)的多功能組分。它結(jié)合多種其他蛋白(IGF2、IKBKG、IFNBl、 INSR、CHUK, IKBKB, NFKBIA、IL15、Cd3、視黃酸、APP、TNF、脂多糖、c_abl 癌基因 1、受體酪氨酸激酶、v-crk肉瘤病毒CTlO癌基因、v-src肉瘤病毒癌基因)。這些多樣的結(jié)合能力可以使得mimecan在多種疾病中發(fā)揮多樣功能的能力。Mimecan已在角膜、骨骼、皮膚和其他組織中發(fā)現(xiàn)。它的表達(dá)模式在不同病理?xiàng)l件下改變。盡管對(duì)于mimecan的生物學(xué)作用存在增加的數(shù)據(jù)量，但是它的功能仍不清楚。Mimecan已顯示參與調(diào)節(jié)膠原纖維原纖維形成，這是在發(fā)育、組織修復(fù)和轉(zhuǎn)移中必需的過(guò)程CTasheva等人，Mol. Vis. 8 (2002) 407-415)。它在骨骼形成中與TGF-β _1 或TGF-β-2聯(lián)合發(fā)揮作用。Mimecan發(fā)現(xiàn)在小鼠水晶體中組成型表達(dá)(Tasheva等人，Molecular Vision 10 (2004) 403-416)。Mimecan顯示在血管受損后和成骨細(xì)胞低強(qiáng)度激光照射后被上調(diào)，表明相應(yīng)蛋白可在血管平滑肌細(xì)胞和成骨細(xì)胞中的傷口愈合中發(fā)揮作用(Sianahan，C.M.等人， Arter. Thromb. Vase. Biol. 17 (1997) 2437 - 2447; Hamajima, S. ^A, Lasers Med. Sci. 18 (2003) 78 - 82)。
發(fā)現(xiàn)其他mimecan在活化的內(nèi)皮中上調(diào)并在動(dòng)脈粥樣硬化中發(fā)揮作用 (Fernandez, B.等人，Mol. Cell. Biochem. 246 (2003) 3-11)。大鼠和人心臟組織中的轉(zhuǎn)錄組分析表明mimecan與左心室質(zhì)量(left ventricular mass)以及與擴(kuò)張性心肌病中細(xì)胞外重構(gòu)高度相關(guān)(Petretto，Ε.等人， Nature Genetics 40 (2008) 546-552; Barth, Α. S.等人，J. American College of Cardiology 48 (2006) 1610-1617)。WO 2006/099336提供了缺血和非缺血心臟病的復(fù)雜基因表達(dá)概況。大量差異表達(dá)的 m-RNA 中之一是 mimecan 的 m-RNA。WO 2009/061382要求保護(hù)來(lái)自心臟干細(xì)胞或肌細(xì)胞的分泌的蛋白在心臟再生治療中的用途以及篩選心臟患者用于肝細(xì)胞治療的方法。Mimecan是描述的在心臟再生治療中有用的幾種蛋白以外的一種蛋白。在增殖性/惡性疾病領(lǐng)域，發(fā)現(xiàn)mimecan在大多數(shù)癌細(xì)胞系中以低水平表達(dá)或根本不表達(dá)。蛋白質(zhì)組研究和蛋白質(zhì)印跡驗(yàn)證表明mimecan在結(jié)腸直腸癌(CRC)中的下調(diào)與正常粘膜相一致(Wang, Y.等人，Exp. Biol. Med. 232 (2007) 1152-1159)。其他申請(qǐng)涉及mimecan的治療用途。WO 2006/043031涉及促進(jìn)III類SLRP活性例如舉例來(lái)說(shuō)Mmecan的治療劑用于預(yù)防和/或治療癌癥的用途。WO 2004/105784要求保護(hù)促進(jìn)III類SLRP活性例如mimecan的治療劑用于抑制血管形成或抑制特征在于單核細(xì)胞和/或巨噬細(xì)胞的過(guò)度活性和/或遷移的病癥的用途。應(yīng)當(dāng)看到，在現(xiàn)有技術(shù)中，不知道也沒有暗示體液中蛋白mimecan的存在情況或水平對(duì)評(píng)價(jià)心力衰竭具有診斷用途。本發(fā)明的發(fā)明人現(xiàn)在發(fā)現(xiàn)并確定，來(lái)自個(gè)體的體液樣品中的mimecan測(cè)定值升高代表心力衰竭。將對(duì)照組或?qū)φ杖后w中測(cè)得的mimecan值用于例如確定截止值或參考范圍。數(shù)值高于該截止值或超出在其高端的參考范圍，就表示數(shù)值升高了。在一個(gè)實(shí)施方案中，確定了固定的截止值。根據(jù)診斷目標(biāo)選定截止值。在一個(gè)實(shí)施方案中，將對(duì)照組或?qū)φ杖后w測(cè)得的mimecan值用于確定參考范圍。 在優(yōu)選的實(shí)施方案中，如果測(cè)量值高于參考范圍的90%，則mimecan濃度被認(rèn)為升高。在進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，如果測(cè)量值高于參考范圍的95%、96%、97%或97. 5%，則mimecan濃度被認(rèn)為升高。在一個(gè)實(shí)施方案中，對(duì)照樣品為內(nèi)部對(duì)照樣品。在該實(shí)施方案中，從研究的個(gè)體中獲得系列樣品并比較標(biāo)記水平。這樣可能對(duì)例如評(píng)價(jià)療效有用。本發(fā)明的方法基于從個(gè)體獲得的液體樣品，并基于這些樣品中的mimecan測(cè)量。 本文使用的“個(gè)體”指單個(gè)人類或非人類生物體。因此，在此描述的方法和組合物可應(yīng)用到人類和獸醫(yī)疾病。優(yōu)選的個(gè)體是人。標(biāo)記mimecan優(yōu)選通過(guò)使用特異結(jié)合試劑由液體樣品特異性測(cè)定。特異性結(jié)合試劑例如為mimecan受體，結(jié)合mimecan的凝集素或mimecan的抗體。 特異性結(jié)合試劑對(duì)其相應(yīng)的靶分子具有至少IO7 1/mol的親合力。特異性結(jié)合試劑對(duì)靶分子優(yōu)選具有IO8 1/mol、甚至更優(yōu)選IO9 1/mol的親合力。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)理解，術(shù)語(yǔ)特異性用于表示存在于樣品中的其它生物分子不能與mimecan特異性結(jié)合試劑明顯結(jié)合。優(yōu)選地，與非靶分子的生物分子結(jié)合的結(jié)合親合力僅僅為與靶分子的親合力的10%或更小， 更優(yōu)選僅5%或更小。優(yōu)選的特異性結(jié)合試劑應(yīng)具有上述親合力以及特異性的最低標(biāo)準(zhǔn)。特異性結(jié)合試劑優(yōu)選是與mimecan反應(yīng)的抗體。術(shù)語(yǔ)“抗體”指多克隆抗體、單克隆抗體、這些抗體的抗原結(jié)合片段、單鏈抗體以及包括抗體結(jié)合結(jié)構(gòu)域的遺傳構(gòu)建體?？梢允褂萌魏伪Ａ羯鲜鎏禺愋越Y(jié)合試劑標(biāo)準(zhǔn)的抗體片段。抗體可通過(guò)目前工藝7jC平步驟生產(chǎn)，例如 Ti jssen 所述(Ti jssen, P. , Practice and theory of enzyme immunoassays, Elsevier Science Publishers B. V. , Amsterdam (1990),全書，特別是 43-78頁(yè))。此外，技術(shù)人員非常了解基于可用于抗體特異性分離的免疫吸附劑的方法。通過(guò)這些方法，多克隆抗體的質(zhì)量及其由此在免疫測(cè)定中的性能將得以提高(Tijssen，P., 上文，108-115頁(yè))。對(duì)于在本發(fā)明中公開的成果，可以使用在山羊中產(chǎn)生的多克隆抗體。顯然也可以使用得自不同物種(例如大鼠、兔子或豚鼠)的多克隆抗體以及單克隆抗體。因?yàn)閱慰寺】贵w能以恒定性能按需要的任意量生產(chǎn)，所以它們是開發(fā)臨床常規(guī)測(cè)定的理想工具。在本發(fā)明的方法中，抗mimecan單克隆抗體的產(chǎn)生和使用分別代表其它的優(yōu)選實(shí)施方案。從天然來(lái)源純化mimecan并不容易。mimecan的重組生產(chǎn)是獲得更高數(shù)量mimecan 的可選方法。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，使用真核表達(dá)系統(tǒng)重組表達(dá)生產(chǎn)mimecan。真核表達(dá)系統(tǒng)的實(shí)例是桿狀病毒表達(dá)、在酵母中表達(dá)以及在哺乳動(dòng)物表達(dá)系統(tǒng)中表達(dá)。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，mimecan表達(dá)在哺乳動(dòng)物表達(dá)系統(tǒng)中進(jìn)行。哺乳動(dòng)物表達(dá)系統(tǒng)的實(shí)例為CHO 細(xì)胞、HEK細(xì)胞、骨髓瘤細(xì)胞等等。在進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，重組生產(chǎn)的mimecan用作抗原，以生產(chǎn)抗mimecan的多克隆或單克隆抗體。也優(yōu)選利用本文上述方法重組生產(chǎn)的 mimecan，通過(guò)在mimecan免疫吸附劑上進(jìn)行免疫吸附來(lái)純化多克隆抗體?，F(xiàn)在，技術(shù)人員應(yīng)理解，mimecan已被鑒定為有效評(píng)估HF的標(biāo)記，可用替代方法獲得與本發(fā)明成果相當(dāng)?shù)慕Y(jié)果。例如，可使用產(chǎn)生抗體的替代策略。這樣的策略包括使用合成肽或重組肽，這些肽代表mimecan的臨床相關(guān)免疫表位?；蛘?，可以使用DNA免疫(又稱做DNA接種免疫)。對(duì)于測(cè)量，將從個(gè)體獲得的液體樣品和mimecan的特異性結(jié)合試劑在適合形成結(jié)合試劑mimecan復(fù)合體的條件下溫育。這樣的條件無(wú)須特別指定，因?yàn)榧夹g(shù)人員即便沒有任何創(chuàng)造性勞動(dòng)也可以很容易地鑒定這些適當(dāng)?shù)臏赜龡l件。測(cè)定結(jié)合試劑mimecan復(fù)合體的數(shù)量并用于HF的評(píng)估。技術(shù)人員應(yīng)理解，有許多方法可測(cè)定特異性結(jié)合試劑mimecan 復(fù)合體的數(shù)量，這些方法在相關(guān)教科書中均有詳細(xì)描述(參見例如Tijssen P.,上文，或 Diamandis, E. P.禾口 Christopoulos , T. K. (編輯)，Immunoassay, Academic Press, Boston (1996))。優(yōu)選地，以?shī)A心型測(cè)定形式檢測(cè)mimecan。在這種測(cè)定中，用第一特異性結(jié)合試劑從一側(cè)捕獲mimecan，另一側(cè)使用帶有能直接或間接檢測(cè)的標(biāo)記的第二特異性結(jié)合試劑。優(yōu)選地，在定性(有或無(wú)mimecan)或定量(確定mimecan的量)的免疫測(cè)定中使用抗mimecan 的抗體。如在實(shí)施例部分詳細(xì)描述的，已經(jīng)將兩種小鼠模型用于通過(guò)先進(jìn)的微陣列和蛋白組方法鑒定存在于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物心臟組織中的mRNA和多肽。然而，這些模型得到至少部分矛盾的數(shù)據(jù)，當(dāng)然，mRNA或相應(yīng)多肽的組織數(shù)據(jù)并不能代表這些多肽在循環(huán)中的有或無(wú)。在一個(gè)模型中被發(fā)現(xiàn)差異表達(dá)的標(biāo)記可能不在第二個(gè)模型中差異表達(dá)，或者，在又一個(gè)模型中甚至顯示出矛盾的數(shù)據(jù)?？梢园l(fā)現(xiàn)差異表達(dá)的mRNA與循環(huán)中相應(yīng)多肽的增強(qiáng)水平不相關(guān)。 即使蛋白可以在組織中差異表達(dá)，但如果從體液中測(cè)定，大多數(shù)情況下，這種蛋白沒有任何診斷性關(guān)聯(lián)，因?yàn)樗赡懿槐会尫胖裂h(huán)中，可能變成片段或者被修飾，例如從細(xì)胞或者組織釋放時(shí)，可能在循環(huán)系統(tǒng)中不穩(wěn)定，可能在循環(huán)中不能被檢測(cè)，可能對(duì)于特定的疾病不是特異性的，等等。令人驚訝的是，本發(fā)明的發(fā)明人能檢測(cè)體液樣品中的蛋白mimecan。更令人驚訝的是，他們能證明在這種獲自個(gè)體的液體樣品中mimecan的存在情況可以與HF相關(guān)聯(lián)。使用標(biāo)記mimecan評(píng)估HF無(wú)需組織和活檢樣品。測(cè)量蛋白mimecan的水平在HF領(lǐng)域被認(rèn)為是非常有益的。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及評(píng)估個(gè)體心力衰竭的方法，其包括以下步驟 a)測(cè)量從個(gè)體獲得的樣品中標(biāo)記mimecan的濃度，其中所述樣品是體液樣品，b)任選測(cè)量所述樣品中一種或多種其它選自利鈉肽標(biāo)記、心肌肌鈣蛋白標(biāo)記和炎癥標(biāo)記的心力衰竭標(biāo)記的濃度，和c)將步驟(a)測(cè)得的濃度以及任選步驟(b)測(cè)得的濃度與對(duì)照樣品確定的這種標(biāo)記或這些標(biāo)記的濃度進(jìn)行比較，從而評(píng)估心力衰竭，其在mimecan增加的濃度指示心力衰竭。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法是以血清作為液體樣品材料進(jìn)行的。在一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法是以血漿作為液體樣品材料進(jìn)行的。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法是以全血作為液體樣品材料進(jìn)行的。在進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及蛋白mimecan作為標(biāo)記分子從獲自個(gè)體的液體樣品來(lái)評(píng)價(jià)心力衰竭的用途。用于診斷的理想情況應(yīng)是其中單一事件或者過(guò)程會(huì)導(dǎo)致相應(yīng)疾病的情況，例如傳染病。在其它所有的病例中，正確的診斷可能是很難的，尤其是該疾病的病原學(xué)沒有被充分認(rèn)識(shí)時(shí)，HF就是這種情況。技術(shù)人員應(yīng)理解，在HF領(lǐng)域，針對(duì)某一診斷問(wèn)題，沒有生化標(biāo)記在診斷上有100%特異性并同時(shí)具有100%靈敏度。相反，生化標(biāo)記以某種可能性或者預(yù)測(cè)值用于評(píng)估潛在的診斷問(wèn)題。技術(shù)人員十分熟悉通常用來(lái)計(jì)算所評(píng)價(jià)的診斷指標(biāo)的相對(duì)危險(xiǎn)性或者可能性的數(shù)學(xué)/統(tǒng)計(jì)學(xué)方法。在常規(guī)臨床實(shí)踐中，醫(yī)師在診斷、治療和處置潛在疾病時(shí)通常會(huì)同時(shí)考察各種的臨診癥狀和生物標(biāo)志。優(yōu)選地，在本發(fā)明的進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，用于評(píng)估HF的方法如下進(jìn)行測(cè)量mimecan和一種或多種其它標(biāo)記的濃度，并利用mimecan和所述一種或多種其它標(biāo)記的濃度評(píng)估HF。在HF評(píng)估中，標(biāo)記mimecan將會(huì)在以下一個(gè)或更多個(gè)方面輔助醫(yī)師評(píng)估個(gè)體患心力衰竭的風(fēng)險(xiǎn)或者評(píng)估患有心力衰竭的患者，例如想鑒定心力衰竭的階段；區(qū)分急性和慢性心力衰竭；判斷疾病進(jìn)程的風(fēng)險(xiǎn)；對(duì)選擇適當(dāng)治療提供指導(dǎo)；監(jiān)測(cè)患者對(duì)治療的反應(yīng)； 以及監(jiān)測(cè)病程，即隨訪HF患者。篩選(評(píng)估個(gè)體是否有發(fā)生心力衰竭的風(fēng)險(xiǎn))
在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及評(píng)估個(gè)體是否有發(fā)展心力衰竭風(fēng)險(xiǎn)的體外方法，其包括以下步驟測(cè)量樣品中標(biāo)記mimecan的濃度；任選測(cè)量樣品中一種或多種心力衰竭的其它標(biāo)記的濃度；并通過(guò)將該mimecan濃度和任選測(cè)量的所述一種或多種其它標(biāo)記的濃度與所述一種或多種標(biāo)記濃度的參考值比較，來(lái)評(píng)價(jià)所述個(gè)體發(fā)生心力衰竭的風(fēng)險(xiǎn)。從本發(fā)明角度上講，篩選涉及相關(guān)個(gè)體發(fā)生或出現(xiàn)心力衰竭風(fēng)險(xiǎn)的無(wú)偏差評(píng)估。 而這種篩選在理論上可以對(duì)任何樣品進(jìn)行，在臨床實(shí)踐中，這種篩選通常會(huì)給予具有以某種方式發(fā)生心力衰竭風(fēng)險(xiǎn)的個(gè)體。如上所述，這樣的個(gè)體可以無(wú)臨床癥狀，即他們沒有HF 的體征或者癥狀。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，將對(duì)具有發(fā)展心力衰竭風(fēng)險(xiǎn)的個(gè)體進(jìn)行HF篩選，例如屬于按ACC/AHA實(shí)踐指南定義的階段A或B。如上所述，心力衰竭是發(fā)達(dá)國(guó)家中最主要的、花費(fèi)高的威脅生命的疾病之一。因?yàn)樗母甙l(fā)病率且長(zhǎng)時(shí)間無(wú)癥狀期，為了干預(yù)并阻斷該病程(如果可能的話)，對(duì)于個(gè)體發(fā)生 HF風(fēng)險(xiǎn)的鑒定將變得極其重要。只有盡早進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，才可能阻止HF病程從無(wú)癥狀期進(jìn)入有癥狀期。心力衰竭風(fēng)險(xiǎn)的評(píng)估是通過(guò)數(shù)學(xué)/統(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行的，技術(shù)人員對(duì)這些方法有充分的認(rèn)識(shí)和理解。優(yōu)選地，個(gè)體患心力衰竭的風(fēng)險(xiǎn)以相對(duì)值表示，并按所謂的相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)性 (=RR)給出。為了計(jì)算這種心力衰竭的RRJfmimecan的個(gè)體數(shù)值與在參考群體中確定的mimecan數(shù)值進(jìn)行對(duì)比，參考群體優(yōu)選為不發(fā)生心力衰竭的健康個(gè)體。還優(yōu)選對(duì)這種心力衰竭RR的評(píng)估基于在研究期內(nèi)(優(yōu)選一年或者也可優(yōu)選兩年之內(nèi))發(fā)展心力衰竭的個(gè)體群和在相同研究期內(nèi)未發(fā)展心力衰竭的個(gè)體群。在另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及標(biāo)記mimecan篩選心力衰竭的用途。如技術(shù)人員所知，術(shù)語(yǔ)“用作標(biāo)記”表示通過(guò)適當(dāng)手段對(duì)標(biāo)記分子的濃度進(jìn)行定量后，用測(cè)得的標(biāo)記值指示(即標(biāo)示)疾病的有無(wú)或者臨床狀況的有無(wú)。用于定量的適當(dāng)手段例如為特異性結(jié)合試劑，如抗體。優(yōu)選地，對(duì)懷疑將出現(xiàn)心力衰竭的風(fēng)險(xiǎn)個(gè)體實(shí)施HF篩選。在該意義上，具有未來(lái)心力衰竭風(fēng)險(xiǎn)的患者是已診斷有高血壓、動(dòng)脈粥樣硬化疾病、糖尿病、肥胖和代謝綜合征的患者。優(yōu)選地，對(duì)患有高血壓、動(dòng)脈粥樣硬化疾病、糖尿病和/或代謝綜合征的個(gè)體評(píng)估未來(lái)心力衰竭的風(fēng)險(xiǎn)。還優(yōu)選使用標(biāo)記mimecan對(duì)按照ACC/AHA實(shí)踐指南定義的階段B的個(gè)體(即呈現(xiàn)心臟結(jié)構(gòu)改變但沒有顯示心力衰竭癥狀的個(gè)體)評(píng)估未來(lái)心力衰竭風(fēng)險(xiǎn)。在一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及使用mimecan作為HF標(biāo)記組合中的一種標(biāo)記用于篩選HF。在篩選中，mimecan的水平升高是個(gè)體發(fā)生心力衰竭的風(fēng)險(xiǎn)增加的陽(yáng)性指標(biāo)。患者的分級(jí)
在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及輔助對(duì)心力衰竭患者分級(jí)的體外方法，其包括以下步驟a)測(cè)量樣品中標(biāo)記mimecan的濃度，b)任選測(cè)量樣品中一種或多種心力衰竭的其它標(biāo)記的濃度，并通過(guò)將在步驟(a)中測(cè)定的濃度和任選步驟(b)中測(cè)定的濃度與所述一種或多種標(biāo)記濃度的參考值進(jìn)行比較，來(lái)對(duì)心力衰竭進(jìn)行分級(jí)。優(yōu)選地，標(biāo)記mimecan的水平用于輔助將受試個(gè)體分入個(gè)體組，這些組為臨床“正?！?即按照ACA/ACC分類在階段 A的個(gè)體)、具有結(jié)構(gòu)性心臟病但無(wú)癥狀的患者(按照ACA/ACC分類的階段B)和心力衰竭患者組(即按照ACA/ACC分類處于階段C或階段D的患者)。區(qū)別急性心臟事件和慢性心臟病
12在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及輔助鑒別診斷急性心臟事件和慢性心臟病的體外方法，其包括以下步驟測(cè)量樣品中標(biāo)記mimecan的濃度；任選測(cè)量樣品中一種或多種心力衰竭的其它標(biāo)記的濃度；并通過(guò)將步驟(a)測(cè)定的濃度和任選步驟(b)中測(cè)定的濃度與這個(gè)標(biāo)記或這些標(biāo)記濃度的參考值進(jìn)行比較，來(lái)確立對(duì)急性心臟事件和慢性心臟病的鑒別診斷。本領(lǐng)域技術(shù)人員熟悉“急性心臟事件”和“慢性心臟病”的含義。優(yōu)選地，“急性心臟事件”涉及心臟的急性狀況、疾病或機(jī)能紊亂，特別指急性心力衰竭，例如心肌梗死(MI)或心律失常。根據(jù)MI的程度，其可能后續(xù)LVD和CHF。優(yōu)選地，“慢性心臟病”是心臟功能的減弱，例如，由于心臟缺血、冠狀動(dòng)脈病或前期的特別小的心肌梗死(也許后續(xù)發(fā)生進(jìn)行性LVD)造成。其也可能是由炎性疾病、心臟瓣膜缺陷(例如二尖瓣缺陷)、擴(kuò)張型心肌病、肥厚型心肌病、心臟節(jié)奏缺陷(心律失常)和慢性阻塞性肺病造成的虛弱。因此，慢性心臟病顯然也可以包括患有急性冠狀動(dòng)脈綜合征如 MI的患者，但他們當(dāng)前沒有急性心臟事件。區(qū)分急性心臟事件和慢性心臟病十分重要，因?yàn)榧毙孕呐K事件和慢性心臟病可能要求相當(dāng)不同的治療方案。例如對(duì)于急性心肌梗塞患者，再灌注早期治療可能極度重要。而對(duì)慢性心力衰竭患者進(jìn)行再灌注治療，最多是對(duì)這個(gè)患者無(wú)害或僅僅是幾乎無(wú)害。在本發(fā)明的一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)施方案中，標(biāo)記mimecan用于鑒別診斷急性和慢性心力衰竭。評(píng)估疾病進(jìn)展的風(fēng)險(xiǎn)
在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及一種評(píng)估HF患者疾病進(jìn)展風(fēng)險(xiǎn)的體外方法，其包括以下步驟測(cè)量樣品中標(biāo)記mimecan的濃度；任選測(cè)量樣品中一種或多種心力衰竭的其它標(biāo)記的濃度；并通過(guò)將該mimecan濃度和任選測(cè)定的所述一種或多種其它標(biāo)記濃度與所述一種或多種標(biāo)記的濃度參考值比較，來(lái)確定所述個(gè)體疾病進(jìn)展的風(fēng)險(xiǎn)。目前，很難以合理的可能性評(píng)估乃至預(yù)言一位診斷患有HF的患者是否具有或多或少的穩(wěn)定狀態(tài)，或疾病是否將會(huì)發(fā)展，以及患者的健康狀態(tài)是否可能惡化。在臨床上，心力衰竭的嚴(yán)重性和進(jìn)展通常通過(guò)評(píng)估臨床癥狀來(lái)確定，或者，使用成像技術(shù)(如超聲波心動(dòng)描記術(shù))鑒定有害變化來(lái)確定。在一個(gè)實(shí)施方案中，心力衰竭的惡化是通過(guò)監(jiān)測(cè)左側(cè)心室射血分?jǐn)?shù)(LVEF)來(lái)確定的。LVEF減少5%或更多就被認(rèn)為是疾病進(jìn)展或惡化。因此，在進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及使用標(biāo)記mimecan評(píng)估患有HF的患者疾病進(jìn)展風(fēng)險(xiǎn)。在患有HF的患者的疾病進(jìn)展評(píng)估中，mimecan水平的升高指示疾病進(jìn)展的風(fēng)險(xiǎn)升高。指導(dǎo)選擇適當(dāng)?shù)腍F療法
在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及輔助選擇適當(dāng)?shù)腍F療法的體外方法，其包括以下步驟測(cè)量樣品中標(biāo)記mimecan的濃度；任選測(cè)量樣品中一種或多種心力衰竭的其它標(biāo)記的濃度，并通過(guò)將該mimecan濃度和任選測(cè)定的所述一種或多種其它標(biāo)記濃度與所述一種或多種標(biāo)記的濃度的參考值比較，來(lái)選擇適當(dāng)?shù)寞煼?。預(yù)期標(biāo)記mimecan能輔助醫(yī)師從目前心力衰竭領(lǐng)域的各種治療方案中選擇最適當(dāng)?shù)闹委煼桨?。因此，更?yōu)選的實(shí)施方案涉及使用標(biāo)記mimecan為HF患者選擇治療方案。監(jiān)測(cè)患者對(duì)療法的反應(yīng)在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及一種監(jiān)測(cè)患者對(duì)HF治療反應(yīng)的體外方法，其包括以下步驟a)測(cè)量樣品中標(biāo)記mimecan的濃度，b)任選測(cè)量樣品中一種或多種心力衰竭的其它標(biāo)記的濃度，并通過(guò)將步驟(a)測(cè)定的濃度和任選步驟(b)測(cè)定的濃度與所述一種或多種標(biāo)記的濃度的參考值比較，來(lái)監(jiān)測(cè)患者對(duì)HF療法的反應(yīng)?；蛘?，上述用于監(jiān)測(cè)患者對(duì)療法反應(yīng)的方法可以通過(guò)如下實(shí)施確定治療前后的 mimecan和任選的一種或多種其它標(biāo)記的標(biāo)記水平并對(duì)治療前后的標(biāo)記水平加以比較。心力衰竭的診斷在臨床上是確立的。根據(jù)本發(fā)明，如果患者達(dá)到ACC/AHA實(shí)踐指南定義的階段C或D的標(biāo)準(zhǔn)，則認(rèn)為HF在臨床上是確立的。依據(jù)這些指南，階段C指患者具有結(jié)構(gòu)性心臟病并有心力衰竭的較早或當(dāng)前癥狀。階段D的患者是具有難治性心力衰竭的患者，他們需要專門的干預(yù)。進(jìn)一步如上所示，測(cè)得的NT-proBNP值與心力衰竭的嚴(yán)重性密切相關(guān)。然而，BNP 和NT-proBNP在監(jiān)測(cè)患者對(duì)療法的反應(yīng)上似乎均不理想，參見例如Beck-da-Silva，L.等人，Congest. Heart Fail. 11 (2005) 248—253，quiz 254—255。標(biāo)記mimecan看來(lái)適于監(jiān)測(cè)患者對(duì)療法的反應(yīng)。本發(fā)明因此也涉及使用mimecan 監(jiān)測(cè)患者對(duì)療法的反應(yīng)。在該診斷領(lǐng)域，標(biāo)記mimecan還可以用于確定在治療之前的基線值，并測(cè)定在治療之后的一個(gè)時(shí)間點(diǎn)或幾個(gè)時(shí)間點(diǎn)的mimecan。在HF患者的隨訪中， mimecan的水平升高是有效的HF治療的陽(yáng)性指示。標(biāo)記組合
生化標(biāo)記可以單獨(dú)測(cè)定，或者，在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，它們可以用基于芯片或基于珠的陣列技術(shù)同時(shí)測(cè)定。然后用每個(gè)標(biāo)記的截止值獨(dú)立解釋生物標(biāo)記的濃度，或?qū)⑺鼈兘M合起來(lái)解釋，即它們形成標(biāo)記組合。本領(lǐng)域技術(shù)人員知道，可以用不同的方法實(shí)施并完成將標(biāo)記水平與某種可能性或風(fēng)險(xiǎn)聯(lián)系起來(lái)的步驟。優(yōu)選地，將標(biāo)記mimecan和一種或多種其它標(biāo)記的測(cè)定值用數(shù)學(xué)的方法進(jìn)行組合，然后將該組合值與潛在的診斷問(wèn)題關(guān)聯(lián)?？梢杂萌魏文壳斑m當(dāng)?shù)臄?shù)學(xué)法將標(biāo)記值與mimecan的測(cè)量數(shù)據(jù)組合起來(lái)。應(yīng)用于標(biāo)記組合的數(shù)學(xué)算法優(yōu)選邏輯函數(shù)。應(yīng)用這種數(shù)學(xué)算法或這種邏輯函數(shù)的結(jié)果優(yōu)選單一值。視潛在的診斷問(wèn)題而定，該值可以很容易地與例如個(gè)體患心力衰竭的風(fēng)險(xiǎn)關(guān)聯(lián)起來(lái)，或者，與例如有益于評(píng)估HF患者的其它預(yù)定診斷應(yīng)用關(guān)聯(lián)起來(lái)。在一個(gè)優(yōu)選的方式中，該邏輯函數(shù)如下獲得a)將個(gè)體分成組，例如正常個(gè)體組、心力衰竭風(fēng)險(xiǎn)個(gè)體組、急性或慢性心力衰竭患者組等，b)用單變量分析法鑒定這些組之間有顯著相異的標(biāo)記， c)邏輯回歸分析以評(píng)估在評(píng)估這些不同的組時(shí)有用的標(biāo)記的獨(dú)立判別值，和d)構(gòu)建邏輯函數(shù)來(lái)組合獨(dú)立判別值。在這類分析中，所述標(biāo)記不再是獨(dú)立的，而是代表標(biāo)記組合。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，如下獲得用于組合mimecan值和另外至少一個(gè)標(biāo)記值的邏輯函數(shù)a)將個(gè)體分別地分入正常組和心力衰竭風(fēng)險(xiǎn)個(gè)體組，b)確立mimecan的值和另外至少一個(gè)標(biāo)記的值，c)進(jìn)行邏輯回歸分析，和d)構(gòu)建邏輯函數(shù)來(lái)組合mimecan的標(biāo)記值和另外至少一個(gè)標(biāo)記的值。用于將標(biāo)記組合與疾病關(guān)聯(lián)的邏輯函數(shù)，優(yōu)選使用通過(guò)應(yīng)用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法開發(fā)得到的算法。適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計(jì)學(xué)方法例如判別分析(DA)(即線性DA、二次方程DA、正則化DA)、核方法 (即SVM)、非參數(shù)法(即k-最近-相鄰分級(jí)法)、PLS (偏最小二乘法)、基于樹狀法(即邏輯回歸、CART、隨機(jī)!^orest法、Boosting/Bagging法)、廣義線性模型(即邏輯回歸)、基于主分量的方法(即SIMCA)、廣義加性模型、基于模糊邏輯的方法、基于神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)和遺傳算法的方法。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該能夠選擇適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計(jì)方法來(lái)評(píng)價(jià)本發(fā)明的標(biāo)記組合，并藉此獲得適當(dāng)?shù)臄?shù)學(xué)算法。優(yōu)選用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法來(lái)獲得用于評(píng)估心力衰竭的數(shù)學(xué)算法，該統(tǒng)計(jì)學(xué)方法選自DA (即線性、二次方程、正則化的判別分析)、核方法(即SVM)、非參數(shù)法(即k-最近-相鄰分級(jí)法)、PLS (偏最小二乘法)、基于樹狀法(即邏輯回歸、CART、隨機(jī)forest法、 Boosting方法)或廣義線性模型(即邏輯回歸)。關(guān)于這些統(tǒng)計(jì)學(xué)方法的詳細(xì)描述可見于以下的參考文獻(xiàn)Ruczinski, I.等人，J. of Computational and Graphical Statistics 12 (2003) 475-511 ；Friedman, J. H. , J. of the American Statistical Association 84 (1989) 165-175 ；Hastie, Τ.等人，The Elements of Statistical Learning, Springer Verlag (2001) ；Breiman, L.等人，Classification and regression trees, Wadsworth International Group, California (1984) ；Breiman, L. , Machine Learning 45 (2001) 5-32 ；Pepe, Μ. S. , The Statistical Evaluation of Medical Tests for Classification and Prediction, Oxford Statistical Science Series, 28, Oxford University Press (2003)；禾口 Duda, R. 0.等人，Pattern Classification, John Wiley & Sons, Inc.,第 2版，(2001)。本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案是將優(yōu)化多變量截止值用于生物標(biāo)記的潛在組合，并區(qū)分狀態(tài)A和狀態(tài)B，例如，分別區(qū)分正常個(gè)體和心力衰竭風(fēng)險(xiǎn)個(gè)體、對(duì)治療有反應(yīng)的HF患者和治療失敗的HF患者、急性心力衰竭患者和慢性心力衰竭HF患者、顯示疾病進(jìn)展的HF 患者和未顯示疾病進(jìn)展的患者。受試者工作曲線以下的面積( = AUC)指示診斷程序的有效性或正確性。診斷方法的正確性最好是由它的受試者工作特征(ROC)來(lái)描述(特別見Zweig，Μ. H.和Campbell， G., Clin. Chem. 39 (1993) 561-577)。ROC圖是從連續(xù)改變所觀測(cè)的整個(gè)數(shù)據(jù)范圍內(nèi)的判定閾得到的全部靈敏度/特異性配對(duì)的繪圖。實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)的臨床效果取決于它診斷的準(zhǔn)確性，或取決于將受試者正確分類為臨床相關(guān)亞群的能力。診斷準(zhǔn)確性能衡量該試驗(yàn)正確區(qū)別研究對(duì)象兩種不同情況的能力。這兩種不同情況例如為健康與疾病或者有疾病進(jìn)展與沒有疾病進(jìn)展。在每個(gè)病例中，ROC曲線圖通過(guò)在判定閾全范圍中繪制靈敏度對(duì)1-特異性的曲線來(lái)描述兩種分布之間的重疊。y軸是靈敏度，或真陽(yáng)性分?jǐn)?shù)[按(真陽(yáng)性測(cè)定結(jié)果數(shù))/(真陽(yáng)性測(cè)定結(jié)果數(shù)+假陰性測(cè)定結(jié)果數(shù))確定]。這也被稱為疾病或病癥存在的陽(yáng)性。它僅由受影響亞群計(jì)算得到。X軸是假陽(yáng)性分?jǐn)?shù)，或1-特異性[按(假陽(yáng)性結(jié)果數(shù))/(真陰性結(jié)果數(shù)+假陽(yáng)性結(jié)果數(shù))確定]。它是特異性的指標(biāo)，完全由未受影響亞群計(jì)算得到。因?yàn)檎婕訇?yáng)性分?jǐn)?shù)通過(guò)使用來(lái)自兩種不同亞群的試驗(yàn)結(jié)果完全分開計(jì)算，所以ROC曲線圖與樣品中的疾病流行性無(wú)關(guān)。曲線圖上的每個(gè)點(diǎn)均表示靈敏度Λ-特異性配對(duì)，其對(duì)應(yīng)于一個(gè)特定的判定閾。辨別力很好的測(cè)定(兩種結(jié)果分布沒有重疊)具有的ROC曲線圖穿過(guò)左上角，其真陽(yáng)性分?jǐn)?shù)為1. 0或100% (非常好的靈敏度)，假陽(yáng)性分?jǐn)?shù)是0 (非常好的特異性)。對(duì)于一個(gè)無(wú)辨別力的測(cè)定(兩組的結(jié)果分布相同)來(lái)說(shuō)，理論曲線圖是一條從左下角到右上角的45°對(duì)角線。大多數(shù)曲線在這兩個(gè)極端之間。(如果ROC曲線圖完全落在45° 對(duì)角線下，則這種情況很容易補(bǔ)救，即通過(guò)顛倒“陽(yáng)性”標(biāo)準(zhǔn)，從“大于”到“小于”，或反之亦然)。在性質(zhì)上，曲線圖越接近左上角，測(cè)定的總精度越高。定量實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)的診斷準(zhǔn)確性的一個(gè)便利目的是通過(guò)單一數(shù)字來(lái)表示它的效果。 最常用的總體量度是ROC曲線下的面積(AUC)。按照慣例，該面積總>0.5 (如果不是這樣，人們可以顛倒判定規(guī)則來(lái)使它如此)。數(shù)值介于1. 0 (非常好地分開兩組測(cè)試值)和 0. 5 (兩組測(cè)試值無(wú)明顯的分布差異)之間。該面積不僅僅依賴曲線圖的特定部分，如最接近對(duì)角線的點(diǎn)或在90%特異性處的靈敏度，而是整個(gè)曲線圖。這是一個(gè)定量的、描述性的表達(dá)式，表示ROC曲線圖接近完美(面積=1.0)的程度。總的測(cè)定靈敏度取決于特異性，該特異性是實(shí)踐本文公開的方法所需要的。在某些優(yōu)選的設(shè)定中，75%的特異性可能是足夠的，并且統(tǒng)計(jì)方法和結(jié)果算法可以基于該特異性需求。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，應(yīng)用于評(píng)估個(gè)體心力衰竭風(fēng)險(xiǎn)的方法基于80%、85%的特異性，或者，還優(yōu)選90%或95%的特異性。如上所述，標(biāo)記mimecan有助于評(píng)估個(gè)體發(fā)生心力衰竭的風(fēng)險(xiǎn)，還有助于體外診斷性評(píng)估患有心力衰竭的患者。因此，一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案是使用mimecan作為評(píng)估心力衰竭的標(biāo)記分子。 使用包括mimecan和一種或多種其它HF標(biāo)記的標(biāo)記組合來(lái)評(píng)估HF患者或評(píng)估個(gè)體患HF風(fēng)險(xiǎn)代表了本發(fā)明的進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案。在這樣的標(biāo)記組合中，一種或多種其它的標(biāo)記優(yōu)選選自利鈉肽標(biāo)記、心肌肌鈣蛋白標(biāo)記和炎癥標(biāo)記?？膳cmimecan測(cè)量組合的一種或多種優(yōu)選的其它HF標(biāo)記優(yōu)選是或者選自利鈉肽標(biāo)記、心肌肌鈣蛋白標(biāo)記和炎癥標(biāo)記。這些優(yōu)選的其它標(biāo)記的測(cè)量?jī)?yōu)選地與mimecan的測(cè)量組合，或者形成包括mimecan在內(nèi)的HF標(biāo)記組合的一部分，以下分別更詳細(xì)地討論。利鈉肽標(biāo)記
在本發(fā)明意義上，利鈉肽標(biāo)記是選自心房利鈉肽(ANP)家族的標(biāo)記，或是選自腦利鈉肽(BNP)家族的標(biāo)記。心房利鈉肽家族或腦利鈉肽家族中的多肽標(biāo)記都源自于相應(yīng)活性激素的前原形式。本發(fā)明優(yōu)選的利鈉肽標(biāo)記是NT-proANP、ANP、NT-proBNP、BNP和可用免疫法檢測(cè)的其生理片段。技術(shù)人員很容易理解，可用免疫法檢測(cè)的片段必須包括至少一個(gè)表位，以允許特異性檢測(cè)這樣的生理片段。生理片段是天然存在于個(gè)體循環(huán)中的片段。兩種利鈉肽家族中的標(biāo)記代表相應(yīng)激素原(分別是proANP和proBNP)的片段。因?yàn)閷?duì)于兩個(gè)家族的考慮是相似的，所以僅對(duì)BNP標(biāo)記家族作略微詳細(xì)描述。BNP家族的激素原，即proBNP，由108個(gè)氨基酸組成。proBNP被剪切成為32個(gè)C末端氨基酸(77-108)，其代表有生物活性的激素BNP，和叫做N末端proBNP (或NT-proBNP)的N末端氨基酸1_76。 BNP、N末端proBNP (1-76)以及進(jìn)一步的分解產(chǎn)物(Hunt, P. J.等人，Biochem. Biophys. Res. Com. 214 (1995) 1175-1183)在血液中循環(huán)。完整的前體分子(proBNP 1-108) 是否也存在于血漿中現(xiàn)在還不完全明確。不過(guò)有論述(Hunt，P.J.等人，P印tides 18 (1997) 1475-1481)指出，proBNP (1_108)在血漿中的低釋放量是可檢測(cè)的，但由于在其 N末端的非常快速的局部降解，一些氨基酸是缺失的。現(xiàn)在普遍接受例如對(duì)于NT-proBNP， 該分子于氨基酸10至50之間的中心部分代表生理上更穩(wěn)定的部分。包括該中心部分的 NT-proBNP分子能從體液中可靠測(cè)定?；诿庖叻z測(cè)該NT-proBNP分子中心部分的方法在TO 00/45176中有詳細(xì)的公開內(nèi)容，讀者可以參考該文獻(xiàn)了解細(xì)節(jié)。僅測(cè)定NT-proBNP 的某一亞組份可能更有利，對(duì)此已提出了術(shù)語(yǔ)天然NT-proBNP。關(guān)于此NT-proBNP亞組份的詳細(xì)公開內(nèi)容見于WO 2004/099253。技術(shù)人員將在那里找到所有必需的指導(dǎo)。優(yōu)選地，測(cè)定的 NT-proBNP 是(或?qū)?yīng)于)使用來(lái)自德國(guó) Roche Diagnostics 的 Elecsys NT-proBNP 測(cè)定檢測(cè)的NT-proBNP。應(yīng)用NT-proBNP進(jìn)行預(yù)分析是有效的，這樣可使樣品轉(zhuǎn)移至中心實(shí)驗(yàn)室變得容易 (Mueller, Τ.等人，Clin. Chem. Lab. Med. 42 (2004) 942-944)。血樣可以在室溫下存儲(chǔ)幾天，或可郵寄或運(yùn)輸，而沒有回收率的損失。相反，將BNP在室溫下或4°C儲(chǔ)存48小時(shí)可能造成至少20%的濃度損失(Mueller, Τ.等人，上文；Wu，Α.Η.等人，Clin. Chem. 50 (2004) 867-873)。在篩選某些群體的HF中已經(jīng)對(duì)腦源的利鈉肽家族(尤其是BNP和NT-proBNP)進(jìn)行了徹底的研究。這些標(biāo)記，尤其是NT-proBNP的發(fā)現(xiàn)，是相當(dāng)鼓舞人心的。NT-proBNP的值甚至在無(wú)癥狀“患者”中升高，明確預(yù)示了“心臟問(wèn)題” (Gremmler，B.等人，Exp. Clin. Cardiol. 8 (2003) 91-94)。這些作者表明，升高的NT-proBNP顯示了‘心-腎不適，的存在，并應(yīng)該迅速安排進(jìn)一步檢查。與幾個(gè)其它小組研究人員相一致，Gremmler等人也發(fā)現(xiàn)了 NT-proBNP濃度異常對(duì)于排除群體中的HF和排除氣喘患者中的左心室功能紊亂(=LVD)是準(zhǔn)確的診斷性試驗(yàn)。陰性BNP或NT-proBNP值排除HF或LVD的作用被其它組研究人員確證， 參考如McDonagh, T.A.等人，Eur. J. Heart Fail. 6 (2004) 269-273 ；和Gustafsson, F.等人，J. Card. Fail. 11，增刊 5 (2005) S15-20。BNP主要在心室中產(chǎn)生(雖然不是唯一的)，并在壁壓力升高時(shí)釋放。因此，BNP釋放的增加主要反映了心室功能紊亂或發(fā)生于心房但影響到心室的功能紊亂，例如，通過(guò)流入量減少或血容量過(guò)載。與BNP相反，ANP主要從心房產(chǎn)生并釋放。因此ANP的水平可能主要反映心房的功能。ANP和BNP是活性激素，與其相應(yīng)的非活性對(duì)應(yīng)物NT-proANP和NT-proBNP相比， 具有較短的半衰期。BNP在血液中被代謝，而NT-proBNP則作為完整的分子在血液中循環(huán)， 并通過(guò)腎臟除去。NT-proBNP的體內(nèi)半衰期比BNP長(zhǎng)120分鐘，BNP的體內(nèi)半衰期為20分鐘(Smith, Μ. W.等人，J. Endocrinol. 167 (2000) 239-246)。因此，取決于時(shí)間過(guò)程或目標(biāo)特性，對(duì)活性形式或非活性形式的利鈉肽進(jìn)行測(cè)量可能是有益的。在個(gè)體心力衰竭風(fēng)險(xiǎn)的評(píng)估中，測(cè)定的mimecan值優(yōu)選與NT-proANP和/或 NT-proBNP的值相組合。NT-proBNP的值優(yōu)選與mimecan的值相組合。類似的考慮適用于選擇適當(dāng)?shù)寞煼?、鑒別疾病進(jìn)展的風(fēng)險(xiǎn)和監(jiān)測(cè)疾病的過(guò)程。mimecan用于評(píng)估患者對(duì)療法的反應(yīng)時(shí)，優(yōu)選將其檢測(cè)與ANP或BNP的測(cè)量組合起來(lái)。mimecan用來(lái)區(qū)分急性和慢性心力衰竭時(shí)，優(yōu)選的標(biāo)記組合包括mimecan、ANP或 proANP 和 BNP 或 proBNP。心肌肌鈣蛋白標(biāo)記
術(shù)語(yǔ)心肌肌鈣蛋白涉及肌鈣蛋白I和肌鈣蛋白T的心臟同種型。按上述已說(shuō)明的，術(shù)語(yǔ)標(biāo)記也涉及標(biāo)記分子的生理變異體，如生理片段或復(fù)合體。對(duì)于心肌肌鈣蛋白標(biāo)記，已知它們的生理學(xué)存在的復(fù)合體具有診斷價(jià)值，并因此明確包含在本發(fā)明內(nèi)。肌鈣蛋白T具有約37. 000 Da的分子量。發(fā)現(xiàn)于心臟組織的肌鈣蛋白T同種型 (cTnT)與骨骼肌TnT有相當(dāng)大的區(qū)別，以至于可以生產(chǎn)抗體來(lái)判別這兩種TnT同種型。TnT 被認(rèn)為是急性心肌損傷的標(biāo)記；參見Katus，H. Α.等人，J. Mol. Cell. Cardiol. 21 (1989) 1349-1353 ；Hamm, C. W.等人，N. Engl. J. Med. 327 (1992) 146-150 ；Ohman, E.M.等人，N. Engl. J. Med. 335 (1996) 1333-1341 ；Christenson, R.H.等人，Clin. Chem. 44 (1998) 494-501 ；和 EP 0 394 819。肌鈣蛋白I (TnI)是肌鈣蛋白復(fù)合物的抑制元件，為25 kDa，存在于肌肉組織中。 TnI在沒有Ca2+時(shí)結(jié)合肌動(dòng)蛋白，抑制肌動(dòng)球蛋白的ATP酶活性。存在于心臟組織的TnI 同種型(cTnl)與骨骼肌TnI有40%的差異，使得可以用免疫法判別兩種同種型。cTnl的正常血漿濃度小于0.1 ng/ml (4 pM)。cTnl在心臟細(xì)胞死亡后釋放進(jìn)入血流中；因此，在有急性心肌梗塞的患者中血漿cTnl濃度升高(Benamer，H.等人，Am. J. Cardiol. 82 (1998) 845-850)。肌鈣蛋白I和T獨(dú)特的心臟同種型讓它們可以通過(guò)免疫法與其它的骨骼肌肌鈣蛋白加以區(qū)別。因此，由損傷心肌釋放進(jìn)入血液的肌鈣蛋白I和T可以特異性地與心臟組織損傷相關(guān)?，F(xiàn)在技術(shù)人員也知道，心肌肌鈣蛋白可從循環(huán)中檢出，其可是游離態(tài)或者復(fù)合物組成部分(參考例如 US 6，333，397、US 6，376，206 和 US 6，174，686)。在評(píng)估個(gè)體患心力衰竭的風(fēng)險(xiǎn)以及評(píng)估已患心力衰竭的患者的時(shí)候，測(cè)定的 mimecan值優(yōu)選與肌鈣蛋白T和/或肌鈣蛋白I心臟同種型的值相結(jié)合。與標(biāo)記mimecan 組合使用的優(yōu)選心肌肌鈣蛋白是心肌肌鈣蛋白T。炎癥標(biāo)記
技術(shù)人員對(duì)術(shù)語(yǔ)炎癥標(biāo)記是熟悉的。優(yōu)選的炎癥標(biāo)記是白介素_6、C-反應(yīng)蛋白、血清淀粉樣蛋白A和S100蛋白。白介素-6 (IL-6)是一種21 kDa的分泌性蛋白質(zhì)，它具有多種生物活性，可分為參與紅細(xì)胞生成作用的活性和參與活化先天免疫反應(yīng)的活性。IL-6是急性期反應(yīng)物并刺激多種蛋白(包括粘著分子)的合成。它的主要功能是介導(dǎo)急性期肝臟蛋白的生產(chǎn)，細(xì)胞因子IL-I和TNF-α誘導(dǎo)它的合成。IL-6通常是由巨噬細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生。IL-6的正常血清濃度小于5 pg/ml。C-反應(yīng)蛋白(CRP)是一種同型五聚體Ca2+結(jié)合急性期蛋白，具有參與宿主防御的 21 kDa亞基。CRP的合成可被IL-6誘導(dǎo)，并被IL-I間接誘導(dǎo)，因?yàn)镮L-I可以通過(guò)肝血竇的 Kupffer細(xì)胞觸發(fā)合成IL-6。在90%的健康群體中CRP的正常血漿濃度小于3 μδ/πι1 (30 ηΜ)，在99%的健康個(gè)體中小于10 μδ/πι1 (100 ηΜ)。例如血漿的CRP濃度可以通過(guò)ELISA 來(lái)測(cè)定。它主要由肝臟響應(yīng)于IL-I、IL-6或TNF-α刺激合成，并參與調(diào)控T細(xì)胞依賴性免疫反應(yīng)。在急性事件中，SAA的濃度增加至1000倍，達(dá)到1毫克/毫升。它可以用來(lái)監(jiān)測(cè)在如囊性纖維化、腎移植排斥、外傷或感染的多種疾病中的炎癥。在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的某些病例中已被用于替代CRP，但是SAA仍然沒有被廣泛認(rèn)可。S100蛋白形成不斷擴(kuò)大的Ca2+結(jié)合蛋白家族，該家族現(xiàn)在包括20個(gè)以上的成員。SlOO蛋白的生理性相關(guān)結(jié)構(gòu)是一種同二聚體，但有些也可以互相形成異二聚體，例如 S100A8和S100A9。其細(xì)胞內(nèi)功能涵蓋調(diào)控蛋白質(zhì)磷酸化、酶活性或涉及細(xì)胞增殖和分化的細(xì)胞骨架動(dòng)力學(xué)。因?yàn)槟承㏒lOO蛋白也可以從細(xì)胞中釋放，其胞外功能現(xiàn)在也已有描述， 例如神經(jīng)元存活、星形膠質(zhì)細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)凋亡以及炎性過(guò)程的調(diào)控。S100A8、S100A9、異二聚體S100A8/A9以及S100A12已經(jīng)在炎癥中發(fā)現(xiàn)，S100A8對(duì)慢性炎癥應(yīng)答，而S100A9、 S100A8/A9 和 S100A12 在急性炎癥中增多。已發(fā)現(xiàn) S100A8、S100A9、S100A8/A9 和 S100A12 與有炎性成分的不同疾病有關(guān)聯(lián)，包括某些癌癥、腎同種異體移植排斥、結(jié)腸炎，最重要的是與 RA 有關(guān)聯(lián)(Burmeister, G.禾口 Gallacchi, G. , Inflammopharmacology 3 (1995) 221-230 ；Foell, D.等人，Rheumathology 42 (2003) 1383-1389)。例如，對(duì)于本發(fā)明使用的標(biāo)記組合，在用于評(píng)估個(gè)體HF風(fēng)險(xiǎn)或HF患者時(shí)，最優(yōu)選的SlOO標(biāo)記是S100A8、S100A9、 S100A8/A9 異二聚體和 S100A12。
sE-選擇蛋白(可溶的內(nèi)皮性白細(xì)胞粘著分子-1，ELAM-1)是一種115 kDa的I 型跨膜糖蛋白，只在內(nèi)皮細(xì)胞上并僅受炎性細(xì)胞因子(IL-Ιβ、TNF-α)或內(nèi)毒素活化后表達(dá)。細(xì)胞表面的E-選擇蛋白是白細(xì)胞轉(zhuǎn)動(dòng)附著至內(nèi)皮的介導(dǎo)物，該過(guò)程是白細(xì)胞在炎癥位點(diǎn)外滲的必需步驟，由此該蛋白在局部炎性反應(yīng)中具有重要作用。在健康個(gè)體的血液中存在可溶性E-選擇蛋白，這可能是由于表面表達(dá)的分子被蛋白酶剪切后生成的。已有報(bào)道稱，在許多病理狀況下血清中的sE-選擇蛋白水平升高(Gearing，A. J.和Hemingway，I.， Ann. N. Y. Acad. Sci. 667 (1992) 324—331)。
在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及將mimecan作為HF的標(biāo)記分子與一種或多種 HF標(biāo)記分子組合用于對(duì)得自個(gè)體的液體樣品進(jìn)行HF評(píng)價(jià)。
如上所示，在本發(fā)明的優(yōu)選方法中，mimecan的測(cè)定值至少與至少另一種選自以下標(biāo)記的值組合利鈉肽標(biāo)記、心肌肌鈣蛋白標(biāo)記和炎癥標(biāo)記。
在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及使用包含mimecan和一種或多種其他選自利鈉肽標(biāo)記、心肌肌鈣蛋白標(biāo)記和炎癥標(biāo)記的心力衰竭標(biāo)記的標(biāo)記組合評(píng)估心力衰竭的用途。
在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及使用mimecan和NT-proBNP的標(biāo)記組合評(píng)估心力衰竭的用途。
在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及使用mimecan和肌鈣蛋白T的標(biāo)記組合評(píng)估心力衰竭的用途。
在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及使用mimecan和CRP的標(biāo)記組合評(píng)估心力衰竭的用途。
在一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及包括標(biāo)記mimecan、肌鈣蛋白T、 NT-proBNP和CRP的標(biāo)記組合。
在再一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及用于在體外通過(guò)生化標(biāo)記評(píng)估HF的方法的標(biāo)記組，所述方法包括測(cè)量樣品中mimecan和一種或多種其它HF標(biāo)記的濃度，并使用測(cè)定的濃度評(píng)估HF。
本發(fā)明的標(biāo)記組優(yōu)選用蛋白陣列技術(shù)測(cè)定。陣列是可尋址的個(gè)體標(biāo)記集合。這樣的標(biāo)記可以在空間上被尋址，如包含于微量滴定板中或印在平面表面的陣列，其中每個(gè)標(biāo)記存在于不同的X和Y軸坐標(biāo)?；蛘?，標(biāo)記也可根據(jù)標(biāo)簽、珠、納米顆?；蛭锢硇再|(zhì)來(lái)尋址。微陣列可按照普通技術(shù)人員已知的方法(參見如US 5, 807, 522 ；Robinson, W. H.等人，Nat. Med. 8 (2002) 295-301 ；Robinson, W. H.等人，ArthritisRheum. 46 (2002)19885-893)制備。本文使用的陣列是指任何具有多種可尋址標(biāo)記的免疫學(xué)測(cè)定。在一種實(shí)施方案中，可尋址標(biāo)記是抗原。在另一個(gè)實(shí)施方案中，可尋址元件是自身抗體。微陣列是小型化形式的陣列。本文使用的抗原是指任何可以特異性結(jié)合于抗體的分子。術(shù)語(yǔ)自身抗體在本領(lǐng)域已有明確的定義。
在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及蛋白陣列，其包括標(biāo)記mimecan和任選的一種或多種HF的其它標(biāo)記。
在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及蛋白陣列，其包括標(biāo)記mimecan和 NT-proBNPo
在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及蛋白陣列，其包括標(biāo)記mimecan和肌鈣蛋白 T。
在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及蛋白陣列，其包括標(biāo)記mimecan和CRP。
在一個(gè)進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及包括標(biāo)記mimecan、肌鈣蛋白T、 NT-proBNP和CRP的蛋白陣列。
在再一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及試劑盒，其包括特異性測(cè)定mimecan 需要的試劑。優(yōu)選的另一種試劑盒包括特異性測(cè)定mimecan需要的試劑和測(cè)定一種或多種其它心力衰竭標(biāo)記需要的試劑，這些標(biāo)記在HF標(biāo)記組合中一起使用。
在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及試劑盒，其包括特異性測(cè)定mimecan和任選一種或多種其他選自利鈉肽標(biāo)記、心肌肌鈣蛋白標(biāo)記和炎癥標(biāo)記的心力衰竭標(biāo)記需要的試齊LU
以下提供的實(shí)施例、序列表和附圖用于輔助理解本發(fā)明，本發(fā)明的真實(shí)范圍在權(quán)利要求中闡述。需要理解，在未偏離本發(fā)明精神的前提下，可以修改所述方法。
附圖簡(jiǎn)述

圖1野生型小鼠和R9C小鼠的表型分析。(A)野生型小鼠(n = 79)和R9C小鼠(n = 44)在M周后產(chǎn)生的生存曲線。(B)用超聲波心動(dòng)描記術(shù)進(jìn)行的心臟縮短評(píng)估(=縮短分?jǐn)?shù))。早在8周齡R9C轉(zhuǎn)基因動(dòng)物就開始出現(xiàn)明顯的功能性損害。
圖2野生型小鼠和AB小鼠的超聲心動(dòng)圖和血液動(dòng)力學(xué)參數(shù)。㈧術(shù)后2、4和8 周最高壓強(qiáng)的變化(mmHg)。(B)術(shù)后2、4和8周左心室射血分?jǐn)?shù)(LVEF)變化百分?jǐn)?shù)。(實(shí)心圓表示數(shù)據(jù)來(lái)源于假手術(shù)小鼠，空心圓表示數(shù)據(jù)來(lái)源于主動(dòng)脈結(jié)扎(AB)小鼠)。
圖3分別從臨床常規(guī)組和擴(kuò)展對(duì)照組的HF樣品中檢出的mimecan值。分別根據(jù)由241位心力衰竭患者樣品(標(biāo)記HF)和健康對(duì)照樣品(146個(gè)樣品)(標(biāo)記為正常人血清標(biāo)記，= NHS)測(cè)得的mimecan計(jì)算其濃度。盒須圖顯示了較低和較高的四分位值(盒)以及最高和最低的值(須)。
實(shí)施例1 心力衰竭的小鼠模型 1.1 R9C小鼠模型已報(bào)道一種遺傳性人類擴(kuò)張型心肌病源于人受磷蛋白(PLN)基因中的Arg9轉(zhuǎn)變?yōu)镃ys (PLN-R9C) (Schmitt, J. P.等人，Science 299 (2003) 1410-1413)。擴(kuò)張型心肌病患者的發(fā)病一般開始于青春期，隨后心臟功能漸進(jìn)性惡化，導(dǎo)致危險(xiǎn)和死亡。該突變的轉(zhuǎn)基因小鼠模型顯示出與患病患者類似的心臟表型，出現(xiàn)擴(kuò)張型心肌病、心臟收縮力降低和過(guò)早死亡(Schmitt 等人，2003，上文)。
我們建立了轉(zhuǎn)基因小鼠的存活曲線。PLN-R9C小鼠平均存活僅約20周，少于15% 的存活超過(guò)對(duì)周(圖1A)。在PLN-R9C系中，觀察到的最早死亡記錄是12周齡，而僅一只野生型對(duì)照鼠在M周死亡。在最早的死亡記錄之前，八周被選為疾病‘早期’的代表性時(shí)間點(diǎn)，同時(shí)選擇16周，是因?yàn)槠涫?至M周之間的中點(diǎn)(經(jīng)典DCM)。離體心臟的詳細(xì)病理學(xué)分析顯示了 PLN-R9C小鼠甚至在8周齡時(shí)心室和心房擴(kuò)大的證據(jù)。橫切片離體心肌(得自野生型和PLN-R9C小鼠)，然后蘇木紫及伊紅染色，證據(jù)也顯示轉(zhuǎn)基因動(dòng)物在8周開始左心室擴(kuò)張或心室壁變薄，隨年齡增長(zhǎng)擴(kuò)張繼續(xù)加重。
對(duì)8、16和M周齡的雄性小鼠用超聲波心動(dòng)描記術(shù)進(jìn)行心臟功能測(cè)定(匯總于表 1中)。前后壁厚度的超聲波心動(dòng)描記術(shù)測(cè)定結(jié)果顯示R9C小鼠在8周時(shí)具有顯著的擴(kuò)張， 且在小鼠生存期內(nèi)持續(xù)惡化。收縮性用心臟縮短來(lái)評(píng)估(圖1B)，也是在8周時(shí)輕微但顯著地減低，而更顯著的減低在16周時(shí)變得明顯。所分析的雌性小鼠與雄性顯示相同的結(jié)果 (數(shù)據(jù)未顯示)。
表1 野生型和R9C雄性小鼠在8、16和M周時(shí)的超聲心動(dòng)圖和血液動(dòng)力學(xué)參數(shù)年》Jii
8_8周16周 M16周 24 m24周 MHR (bprolAW (mm) PWlmmf560-656 -SSiS^S552-15
565-9502+15·Τ￥β6 θΓθΤ τ腿±麗.◎-60:0-01' 0；61^0；01'Ο. 0 0Λ1 丨 CU8:O.0rTo—"T1:t)J1 丨 HShCLOI0； 0.001—！
0,59.0,01* ( 0,71t0J1
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1. 2 主動(dòng)脈結(jié)扎(AB)小鼠模型在該小鼠模型中，由主動(dòng)脈結(jié)扎(AB)引起的壓力過(guò)載誘導(dǎo)心臟肥大和心力衰竭。
通過(guò)外科手術(shù)對(duì)C57BL小鼠實(shí)施壓力過(guò)載。升主動(dòng)脈縮窄(稱為主動(dòng)脈結(jié)扎)誘導(dǎo)心臟肥大以及心肌生長(zhǎng)，特別是在左心室，這作為主動(dòng)脈縮窄的初級(jí)反應(yīng)。在這種小鼠模型的后期階段中，心臟會(huì)變得肥大并最終膨脹。該模型可以很好地表征并已證明可以高度重現(xiàn)，根據(jù)經(jīng)驗(yàn)該模型有10-15%或更低的低死亡率。在縮窄之后，該動(dòng)物模型可用于評(píng)價(jià)響應(yīng)血液動(dòng)力學(xué)應(yīng)力的左心室肥大和心力衰竭的發(fā)展進(jìn)程。
簡(jiǎn)言之，用氯胺酮(90 mg/kg)和甲苯噻嗪(10 mg/kg)混合麻醉C57BL小鼠，并使用25號(hào)針結(jié)扎主動(dòng)脈。假手術(shù)小鼠經(jīng)歷相同的手術(shù)步驟，只是結(jié)扎處不用針扎緊。
實(shí)驗(yàn)時(shí)間點(diǎn)為了檢驗(yàn)肥大反應(yīng)，結(jié)扎的動(dòng)物和假手術(shù)對(duì)照在干預(yù)后1、2、4和8周處死。通過(guò)超聲心動(dòng)圖分析以評(píng)估心臟功能和肥大發(fā)展，并在處死后通過(guò)組織學(xué)檢查加以確認(rèn)。表2顯示了不同的時(shí)間點(diǎn)用超聲波心動(dòng)描記術(shù)評(píng)價(jià)的心臟功能的總覽。技術(shù)人員知曉表2中給出的有關(guān)超聲心動(dòng)圖參數(shù)的細(xì)節(jié)，且例如可見于Asahi，Μ.等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101 (2004) 9199-9204，和 Oudit, G. Y.等人，Nat. Med. 9 (2003) 1187-1194。
彪
權(quán)利要求
1.一種評(píng)估個(gè)體心力衰竭的方法，其包括以下步驟a)測(cè)量從個(gè)體獲得的樣品中標(biāo)記mimecan的濃度，b)任選測(cè)量所述樣品中一種或多種其它心力衰竭標(biāo)記的濃度，和c)將步驟(a)測(cè)得的濃度以及任選步驟(b)測(cè)得的濃度與對(duì)照樣品確定的這種或這些標(biāo)記的濃度進(jìn)行比較，從而評(píng)估心力衰竭。
2.權(quán)利要求1的方法，其進(jìn)一步的特征是所述樣品選自血清、血漿以及全血。
3.權(quán)利要求1和2的任一項(xiàng)的方法，其進(jìn)一步的特征是所述一種或多種其它標(biāo)記選自利尿鈉肽標(biāo)記、心肌肌鈣蛋白標(biāo)記以及炎癥標(biāo)記。
4.權(quán)利要求3的方法，其進(jìn)一步的特征是所述一種或多種其它標(biāo)記是NT-proBNP。
5.權(quán)利要求3的方法，其進(jìn)一步的特征是所述一種或多種其它標(biāo)記是肌鈣蛋白T。
6.蛋白mimecan作為標(biāo)記分子在評(píng)估心力衰竭中的用途。
7.包括mimecan和一種或多種其它心力衰竭標(biāo)記的標(biāo)記組合在評(píng)估心力衰竭中的用途。
8.權(quán)利要求7的標(biāo)記組合的用途，其中所述一種或多種其它標(biāo)記選自利尿鈉肽標(biāo)記、 心肌肌鈣蛋白標(biāo)記和炎癥標(biāo)記。
9.權(quán)利要求8的標(biāo)記組合的用途，其包括至少mimecan和NT-proBNP。
10.一種用于實(shí)施權(quán)利要求1的方法的試劑盒，所述試劑盒包括特異性測(cè)定mimecan以及任選的所述一種或多種其它心力衰竭標(biāo)記所需要的試劑。
11.權(quán)利要求1的方法，其中測(cè)量獲自心力衰竭風(fēng)險(xiǎn)個(gè)體的樣品中的標(biāo)記mimecan。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種體外評(píng)估心力衰竭的方法，所述方法包括以下步驟測(cè)量樣品中標(biāo)記mimecan的濃度，任選測(cè)量樣品中一種或多種其它選自利鈉肽標(biāo)記、心肌肌鈣蛋白標(biāo)記和炎癥標(biāo)記的心力衰竭標(biāo)記的濃度，并通過(guò)將測(cè)定的mimecan濃度和任選測(cè)定的所述一種或多種其它標(biāo)記濃度與在對(duì)照人群確定的所述一種或多種標(biāo)記的濃度進(jìn)行比較來(lái)評(píng)估心力衰竭。還公開了mimecan作為標(biāo)記蛋白用于評(píng)估心力衰竭的用途，包括mimecan的標(biāo)記組合和用于測(cè)量mimecan的試劑盒。
文檔編號(hào)G01N33/68GK102549436SQ201080029136
公開日2012年7月4日 申請(qǐng)日期2010年7月23日 優(yōu)先權(quán)日2009年7月27日
發(fā)明者D.布洛克, G.黑斯, H.許迪希, P.劉, S.阿拉布, U-H.魏因許斯-特倫 申請(qǐng)人:多倫多大學(xué)董事局, 霍夫曼-拉羅奇有限公司