專利名稱：一種同時手性分離分析山茛菪堿、阿替洛爾和美托洛爾的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及手性藥物的手性分離分析領(lǐng)域，尤其涉及一種同時手性分離分析山茛
菪堿、阿替洛爾和美托洛爾的方法。
背景技術(shù)：
阿替洛爾和美托洛爾均屬于13 1腎上腺受體抑制類藥物，具有相似的結(jié)構(gòu)和性 質(zhì)，廣泛應(yīng)用于高血壓、心絞痛、心律失常和心肌梗塞等心血管疾病的治療。山茛菪堿為抗 膽堿藥，臨床主要用于平滑肌痙攣、胃腸絞痛、膽道痙攣等疾病的治療。阿替洛爾、美托洛爾 和山茛菪堿均為手性藥物，其各自的對映異構(gòu)體在藥理、毒理乃至臨床性質(zhì)方面存在較大 差異，因此，對阿替洛爾對映異構(gòu)體、美托洛爾對映異構(gòu)體和山茛菪堿對映異構(gòu)體進(jìn)行分離 分析具有重要意義。 現(xiàn)有技術(shù)已經(jīng)公開了多種手性分離分析阿替洛爾、美托洛爾和山茛菪堿的方法， 如H.Wang等用毛細(xì)管電泳紫外檢測方法對山莨菪堿對映異構(gòu)體進(jìn)行了分離(H.Wang， J丄Gu， H. F. Hu， R. J. Dai， T. H. Ding， R. N. Fu。 Analyticachimica acta， 1998， 359， 39)， H. -L. Zhang等用毛細(xì)管電泳紫外檢測方法對手性阿替洛爾對應(yīng)異構(gòu)體和酒石酸美托洛爾 對映異構(gòu)體逐一進(jìn)行了分離(H-L. Zhang， H. Shao， Y-M. A， Z_Z. Zhang. Chromatographia， 2008,68,653)。但是紫外檢測法靈敏度較低，難以滿足高靈敏度的檢測要求。
電化學(xué)發(fā)光方法是一種新型的分析檢測方法，尤其是以聯(lián)吡啶釕體系作為發(fā)光 體系時，發(fā)光效率較高，檢測靈敏度也較高。現(xiàn)有技術(shù)已經(jīng)公開了使用毛細(xì)管電泳電化學(xué) 發(fā)光方法對氨基酸、蛋白質(zhì)、DNA和有機(jī)胺類等物質(zhì)進(jìn)行分離檢測的技術(shù)，如中國專利文獻(xiàn) 200610173390. 8公開了一種毛細(xì)管電泳電化學(xué)發(fā)光檢測美托洛爾和阿替洛爾的方法，使用 毛細(xì)管電泳電化學(xué)發(fā)光技術(shù)將結(jié)構(gòu)相似的美托洛爾和阿替洛爾進(jìn)行了分離分析，但是并沒 有實現(xiàn)美托洛爾對映異構(gòu)體和阿替洛爾對映異構(gòu)體的分離分析。 因此，本發(fā)明人考慮提供一種方法同時將山茛菪堿對映異構(gòu)體、阿替洛爾對映異 構(gòu)體和美托洛爾對映異構(gòu)體分離檢測，以降低成本、提高效率，并獲得較高的檢測靈敏度。

發(fā)明內(nèi)容
有鑒于此，本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于提供了一種同時手性分離分析山茛菪 堿、阿替洛爾和美托洛爾的方法，本發(fā)明提供的方法能夠?qū)⒉煌Y(jié)構(gòu)的手性藥物分離檢測， 降低檢測成本，提高分離效率。 本發(fā)明提供了一種同時手性分離分析山茛菪堿、阿替洛爾和美托洛爾的方法，包 括 將山茛菪堿樣品、阿替洛爾樣品和美托洛爾樣品投入毛細(xì)管電泳電化學(xué)發(fā)光檢測
聯(lián)用儀器的樣品池中，施加進(jìn)樣電壓，使所述樣品進(jìn)入所述儀器的毛細(xì)管； 施加分離電壓，使所述樣品在所述毛細(xì)管內(nèi)進(jìn)行電泳分離，所述毛細(xì)管為含有羧
3甲基-13 -環(huán)糊精的分離溶液，所述分離溶液的pH值為3. 0-6. 0 ; 分離后的樣品進(jìn)入所述儀器的檢測池，施加檢測電壓進(jìn)行檢測，所述檢測池內(nèi)為
含有三聯(lián)吡啶釕的檢測溶液，所述檢測溶液的pH值為6. 0-9. 0。優(yōu)選的，所述羧甲基-13 -環(huán)糊精的濃度為5mmol/L-20mmol/L。優(yōu)選的，所述羧甲基-13 -環(huán)糊精的濃度為13mmol/L-16mmol/L。 優(yōu)選的，所述分離溶液的pH值由HAc-NaAc緩沖溶液保持。優(yōu)選的，所述HAc-NaAc緩沖溶液的濃度為30mmol/L-70mmol/L。優(yōu)選的，所述三聯(lián)吡啶釕的濃度為4mmol/L-10mmol/L。 優(yōu)選的，所述三聯(lián)妣啶釕的濃度為5mmol/L。 優(yōu)選的，所述檢測溶液的pH值由NaH2P04-Na2HP04緩沖溶液保持。
優(yōu)選的，所述NaH2P04_Na2HP04緩沖溶液的濃度為50mmol/L-150mmol/L。
優(yōu)選的，所述毛細(xì)管為內(nèi)徑為50ym的未涂層融硅毛細(xì)管。 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明以羧甲基_ 13 _環(huán)糊精為手性選擇劑，使不同結(jié)構(gòu)的山茛 菪堿、阿替洛爾和美托洛爾的異構(gòu)體在pH值為3. 0-6.0的毛細(xì)管內(nèi)電泳分離，然后通過三 聯(lián)吡啶釕電化學(xué)發(fā)光體系對各個異構(gòu)體進(jìn)行檢測，最終實現(xiàn)對山茛菪堿、阿替洛爾和美托 洛爾等3種手性藥物的同時分離檢測。本發(fā)明提供的手性分離分析方法試劑使用較少、檢 測成本較低、分離效率較高、檢測靈敏度較高。實驗表明，通過本發(fā)明提供的方法同時對山 茛菪堿對映異構(gòu)體、阿替洛爾對映異構(gòu)體和美托洛爾對映異構(gòu)體進(jìn)行分離檢測時，山茛菪 堿、阿替洛爾和美托洛爾的檢測限分別為6X 10—7mol/L、5. 5X 10—7mol/L和3X 10—7mol/L。


圖1為本發(fā)明實施例提供的NaH2P04-Na2HP04緩沖溶液、三聯(lián)吡啶釕、山茛菪堿、阿 替洛爾和美托洛爾在鉑盤電極上的循環(huán)伏安曲線圖； 圖2為本發(fā)明實施例提供的NaH2P04-Na2HP04緩沖溶液、三聯(lián)吡啶釕、山茛菪堿、阿 替洛爾和美托洛爾的電化學(xué)發(fā)光曲線圖； 圖3為本發(fā)明實施例提供的山茛菪堿、阿替洛爾和美托洛爾的電泳譜圖； 圖4為本發(fā)明實施例提供的空白尿樣以及添加了山茛菪堿、阿替洛爾和美托洛爾
的尿樣的電泳譜圖。
具體實施例方式
本發(fā)明提供了一種同時手性分離分析山茛菪堿、阿替洛爾和美托洛爾的方法，包 括 將山茛菪堿樣品、阿替洛爾樣品和美托洛爾樣品投入毛細(xì)管電泳電化學(xué)發(fā)光檢測
聯(lián)用儀器的樣品池中，施加進(jìn)樣電壓，使所述樣品進(jìn)入所述儀器的毛細(xì)管； 施加分離電壓，使所述樣品在所述毛細(xì)管內(nèi)進(jìn)行電泳分離，所述毛細(xì)管為含有羧
甲基-|3 -環(huán)糊精的分離溶液，所述分離溶液的pH值為3. 0-6. 0 ; 分離后的樣品進(jìn)入所述儀器的檢測池，施加檢測電壓進(jìn)行檢測，所述檢測池內(nèi)為 含有三聯(lián)吡啶釕的檢測溶液，所述檢測溶液的pH值為6. 0-9. 0。 按照本發(fā)明，首先將山茛菪堿樣品、阿替洛爾樣品和美托洛爾樣品投入毛細(xì)管電泳電化學(xué)發(fā)光檢測聯(lián)用儀器的樣品池中，施加進(jìn)樣電壓，使所述樣品進(jìn)入所述儀器的毛細(xì) 管。本發(fā)明對毛細(xì)管電泳電化學(xué)發(fā)光檢測聯(lián)用儀器的來源沒有特殊限制，可以從市場上購 得，如西安瑞邁分析儀器有限責(zé)任公司出售的MPI-A型毛細(xì)管電泳電化學(xué)發(fā)光檢測儀。本 發(fā)明對進(jìn)樣電壓沒有特殊限制，優(yōu)選為10kV-20kV，更優(yōu)選為10kV-15kV。本發(fā)明對所使用 的毛細(xì)管沒有特殊限制，優(yōu)選為內(nèi)徑50ym的未涂層融硅毛細(xì)管。為了使樣品分離效果 更好，本發(fā)明的進(jìn)樣時間優(yōu)選為2s-15s，更優(yōu)選為2s-10s，最優(yōu)選為3s-8s。為了保證檢 測的靈敏度及分析結(jié)果的重現(xiàn)性，優(yōu)選在進(jìn)樣之前對所述毛細(xì)管進(jìn)行預(yù)處理，優(yōu)選依次使 用80mmol/L-120mmol/L的NaOH溶液沖洗所述毛細(xì)管5min-15min、二次水沖洗所述毛細(xì)管 2min-6min， 30mmol/L-70mmol/L、pH值為3. 0-6. 0之間的HAc-NaAc緩沖溶液沖洗所述毛細(xì) 管5min-15min。 所述樣品進(jìn)入毛細(xì)管后，對毛細(xì)管施加分離電壓，使樣品在毛細(xì)管內(nèi)實現(xiàn)電泳分 離。本發(fā)明對所述分離電壓沒有特殊限制，優(yōu)選為10kV-20kV，更優(yōu)選為13kV-20kV，最優(yōu)選 為13kV-15kV。 所述毛細(xì)管內(nèi)為含有羧甲基-l3-環(huán)糊精的分離溶液。由于將山茛菪堿對映異構(gòu) 體、阿替洛爾對映異構(gòu)體和美托洛爾對映異構(gòu)體電泳分離后還需要在三吡啶釕的發(fā)光體系 中進(jìn)行檢測，因此，本發(fā)明使用沒有還原性的羧甲基-13 _環(huán)糊精作為手性選擇劑，降低試 劑對后續(xù)檢測結(jié)果的影響。所述羧甲基-P -環(huán)糊精能夠分別與山茛菪堿對映異構(gòu)體、阿替 洛爾對映異構(gòu)體和美托洛爾對映異構(gòu)體結(jié)合形成絡(luò)合物，但形成的絡(luò)合物的穩(wěn)定度不同， 因此所述絡(luò)合物在毛細(xì)管中進(jìn)行電泳的速率也不同，從而最終實現(xiàn)對映異構(gòu)體的分離。實 驗表明，山茛菪堿對映異構(gòu)體最先與羧甲基-e-環(huán)糊精結(jié)合并分離，美托洛爾對映異構(gòu)體 最后與羧甲基_ P _環(huán)糊精結(jié)合并分離。本發(fā)明對所述羧甲基_ P _環(huán)糊精的濃度沒有特殊 限制，優(yōu)選為lmmol/l-25mmol/l，更優(yōu)選為5mmol/l_25mmol/l，最優(yōu)選為5mmol/l_20mmol/ L。 按照本發(fā)明，所述毛細(xì)管內(nèi)溶液的pH值為3. 0-6. O，所述溶液的pH值優(yōu)選由緩沖 溶液保持，所述緩沖溶液優(yōu)選為本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的HAc-NaAc緩沖溶液，所述HAc-NaAc 的濃度優(yōu)選為10mmol/L-100mmol/L，更優(yōu)選為20mmol/L-90mmol/L，最優(yōu)選為30mmo1/ L-70mmol/L。 所述山茛菪堿對映異構(gòu)體、阿替洛爾對映異構(gòu)體和美托洛爾對映異構(gòu)體在毛細(xì)管 內(nèi)實現(xiàn)分離后，先后進(jìn)入毛細(xì)管電泳電化學(xué)發(fā)光檢測聯(lián)用儀器的檢測池中，在檢測電壓下 進(jìn)行檢測。本發(fā)明對檢測電壓沒有特殊限制，優(yōu)選為1. 0V-1. 4V，更優(yōu)選為1. 0V-1. 2V。
所述檢測池內(nèi)為含有三聯(lián)吡啶釕的溶液，所述三聯(lián)吡啶釕是最常見電化學(xué)發(fā)光體 系，其發(fā)光檢測原理如下三聯(lián)吡啶釕體系中含有Ru (bpy) 32+， Ru (bpy) 32+經(jīng)工作電極被氧化 成不穩(wěn)定的氧化態(tài)Ru (bpy) 33+，該氧化態(tài)物質(zhì)與手性山茛菪堿相互作用，被還原成激發(fā)態(tài)的 Ru (bpy) 32+*，該激發(fā)態(tài)立即回遷至基態(tài)Ru (bpy) 32+，并釋放出光子，此光信號的強(qiáng)度與被測物 的濃度呈線性關(guān)系。由于山茛菪堿、阿替洛爾和美托洛爾各有左旋和右旋兩種異構(gòu)體，經(jīng)過 毛細(xì)管電泳分離先后進(jìn)入檢測池，會先后發(fā)生六次激發(fā)，產(chǎn)生六個發(fā)光強(qiáng)度峰值，從而實現(xiàn) 對山茛菪堿對映異構(gòu)體、阿替洛爾對映異構(gòu)體和美托洛爾對映異構(gòu)體的檢測。本發(fā)明對三 聯(lián)吡啶釕的濃度沒有特殊限制，優(yōu)選為lmmo 1 /L-20mmo 1 /L，更優(yōu)選為lmmo 1 /L-15mmo 1 /L， 最優(yōu)選為4mmol/L-10mmol/L。
按照本發(fā)明，所述檢測池內(nèi)溶液的pH值為6.0-9.0，優(yōu)選由緩沖溶液保持，所述 緩沖溶液優(yōu)選為本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的NaH2P04-Na2HP04緩沖液，NaH2P04-Na2HP04緩沖液 的濃度優(yōu)選為10mmol/L-200mmol/L，更優(yōu)選為30mmol/L-200mmol/L，最優(yōu)選為50mmol/ L-150mmol/L。
按照本發(fā)明，所述檢測池內(nèi)為三電極體系，所述三電極體系優(yōu)選為直徑為
500 ii m的Pt盤工作電極、Ag/AgCl參比電極(KC1飽和溶液)和Pt絲對電極。 按照本發(fā)明，所述毛細(xì)管電泳電化學(xué)發(fā)光檢測聯(lián)用儀器的發(fā)光檢測器用于檢測并
記錄光信號，獲得毛細(xì)管-電化學(xué)發(fā)光檢測的譜圖，從而得到山茛菪堿、阿替洛爾和美托洛
爾的手性分離分析結(jié)果。按照本發(fā)明，所述發(fā)光檢測器優(yōu)選為光電倍增管，其電壓優(yōu)選為
700V-900V。 按照本發(fā)明，優(yōu)選將分離后的山茛菪堿、阿替洛爾和美托洛爾進(jìn)行本領(lǐng)域技術(shù)人 員熟知的結(jié)構(gòu)分析，以確定分離后的物質(zhì)為左旋分子還是右旋分子。 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明以羧甲基-e-環(huán)糊精為手性選擇劑，使不同結(jié)構(gòu)的山茛 菪堿、阿替洛爾和美托洛爾的異構(gòu)體在pH值為3. 0-6.0的毛細(xì)管內(nèi)電泳分離，然后通過三 聯(lián)吡啶釕電化學(xué)發(fā)光體系對各個異構(gòu)體進(jìn)行檢測，最終實現(xiàn)山茛菪堿、阿替洛爾和美托洛 爾的同時手性分離分析。本發(fā)明提供的手性分離分析方法試劑使用較少、檢測成本較低、 分離效率較高、檢測靈敏度較高。實驗表明，通過本發(fā)明提供的方法同時對山茛菪堿、阿 替洛爾和美托洛爾進(jìn)行手性分離分析時，山茛菪堿、阿替洛爾和美托洛爾的檢測限分別為 6X10—7mol/L、5. 5X10—7mol/L和3X10—7mol/L。 為了進(jìn)一步理解本發(fā)明，下面結(jié)合實施例對本發(fā)明提供的同時手性分離分析山茛
菪堿、阿替洛爾和美托洛爾的方法進(jìn)行詳細(xì)描述。 實施例1 按以下步驟配制NaH2P04-Na2HP04緩沖溶液 分別配制濃度為200mmol/L的NaH2P04溶液和200mmol/L的Na2HP04溶液，將兩溶 液混合后，用二次水稀釋至濃度為10Ommol/L，然后將混合溶液的pH調(diào)到7. 0備用。
實施例2 按照以下步驟配制HAc-NaAc緩沖溶液 首先配制濃度為200mmol/L的NaAc溶液，然后用二次水稀釋至57. 6mmol/L，然后 用冰醋酸將溶液的pH值調(diào)到5. 3備用。
實施例3 使用的儀器裝置為內(nèi)徑50iim的未涂層融硅毛細(xì)管柱，直徑500iim的Pt盤工作 電極，Ag/AgCl參比電極，Pt絲對電極，從西安瑞邁分析儀器有限責(zé)任公司購買的MPI-A型 毛細(xì)管電泳電化學(xué)發(fā)光檢測儀。 以實施例1配制的NaH2P04-Na2HP04緩沖溶液為背景電解質(zhì)，掃描電位為0-1. 30V， 記錄穩(wěn)定時的循環(huán)伏安曲線和電化學(xué)發(fā)光曲線，參見圖1中的a曲線和圖2中的a曲線；
向所述背景電解質(zhì)中加入5mmol/L的三聯(lián)吡啶釕，掃描電位為0-1. 30V，記錄穩(wěn)定 時的循環(huán)伏安曲線和電化學(xué)發(fā)光曲線，參見圖1中的b曲線和圖2中的b曲線；
向含三聯(lián)吡啶釕的溶液中加入0. 3mmol/L的山茛菪堿、0. 3mmol/L的阿替洛爾和 0. 3mmol/L的美托洛爾，掃描電位均為0_1. 30V，記錄穩(wěn)定時的循環(huán)伏安曲線和電化學(xué)發(fā)光曲線，分別參見圖1中的c曲線、d曲線、e曲線和圖2中的c曲線、d曲線、e曲線。 將所得到的循環(huán)伏安曲線和電化學(xué)發(fā)光曲線對比，參見圖1和圖2，圖1為本發(fā)明
實施例提供的NaH2P04-Na2HP04緩沖溶液、三聯(lián)吡啶釕、山茛菪堿、阿替洛爾和美托洛爾在鉑
盤電極上的循環(huán)伏安曲線圖；圖2為本發(fā)明實施例提供的NaH2P04-Na2HP04緩沖溶液、三聯(lián)
吡啶釕、山茛菪堿、阿替洛爾和美托洛爾的電化學(xué)發(fā)光曲線圖；由圖l可知，加入山茛菪堿、
阿替洛爾和美托洛爾后，溶液的電響應(yīng)沒有顯著增強(qiáng)；由圖2可知，加入山茛菪堿、阿替洛
爾和美托洛爾后，溶液的電化學(xué)發(fā)光曲線中的響應(yīng)度比只加入三聯(lián)吡啶釕的響應(yīng)度強(qiáng)，說
明山茛菪堿、阿替洛爾和美托洛爾雖然不會增強(qiáng)三聯(lián)吡啶釕的電化學(xué)活性，但能夠增強(qiáng)三
聯(lián)吡啶釕的電化學(xué)發(fā)光活性，因此，使用電化學(xué)發(fā)光方法同時檢測山茛菪堿、阿替洛爾和美
托洛爾是可行的。 實施例4 使用的儀器裝置為內(nèi)徑50iim的未涂層融硅毛細(xì)管柱，直徑500iim的Pt盤工作
電極，Ag/AgCl參比電極，Pt絲對電極，MPI-A型毛細(xì)管電泳電化學(xué)發(fā)光檢測儀。 將實施例1配制的NaH2P04-Na2HP04緩沖溶液和5mmol/L的三聯(lián)吡啶釕溶液加入到
MPI-A型毛細(xì)管電泳電化學(xué)發(fā)光檢測儀的檢測池中，將實施例2配制的HAc-NaAc緩沖溶液
和14. 7mol/L的羧甲基-13 _環(huán)糊精加入到MPI-A型毛細(xì)管電泳電化學(xué)發(fā)光檢測儀的毛細(xì)管中。 對毛細(xì)管進(jìn)行預(yù)處理首先用100mmol/L的NaOH溶液沖洗后備用；在使用前，再 依次用100mmol/L的NaOH溶液、二次水溶液和實施例2配制好的HAc-NaAc緩沖溶液沖洗 10min、5min禾卩10min。 將l. 0mmol/L的山茛菪堿溶液、1. Ommol/L的阿替洛爾溶液和1. Ommol/L的美托洛 爾溶液加入到MPI-A型毛細(xì)管電泳電化學(xué)發(fā)光檢測儀的樣品池中，控制MPI-A型毛細(xì)管電
泳電化學(xué)發(fā)光檢測儀的操作條件如下進(jìn)樣電壓10kV，進(jìn)樣時間4s ;分離電壓17. 5kV ;檢
測電壓1. 15V，光電倍增光電壓為800V，對山茛菪堿、阿替洛爾和美托洛爾進(jìn)行手性分離分 析，檢測結(jié)果參見圖3，圖3為本發(fā)明實施例提供的山茛菪堿、阿替洛爾和美托洛爾的電泳 譜圖；由圖3可知，在開始手性分離分析后1133s時出現(xiàn)Al、A2兩個峰，2489s時出現(xiàn)B 1、 B2兩個峰，3074s時出現(xiàn)C1、C2兩個峰。 保持手性分離分析條件不變，以2. Ommol/L的山茛菪堿溶液、1. Ommol/L的阿替洛 爾溶液和1. Ommol/L的美托洛爾溶液為樣品進(jìn)行手性分離分析，得到的電泳譜圖中，最先 出現(xiàn)的兩個峰的出現(xiàn)時間和峰形發(fā)生了變化，但依然是最先出現(xiàn)，而后面的四個峰的出現(xiàn) 時間和峰形均無明顯變化，由此可以得知，圖3中1133s出現(xiàn)的Al和A2兩個峰為山茛菪堿 對映異構(gòu)體的峰。 保持手性分離分析條件不變，以1. Ommol/L的山茛菪堿溶液、2. Ommol/L的阿替洛 爾溶液和1. Ommol/L的美托洛爾溶液為樣品進(jìn)行手性分離分析，得到的電泳譜圖中，中間 出現(xiàn)的兩個峰的出現(xiàn)時間和峰形發(fā)生了變化，但依然是在中間出現(xiàn)，而前面兩個峰和后面 兩個峰的出現(xiàn)時間和峰形均無明顯變化，由此可以得知，圖3中2489s出現(xiàn)的Bl和B2兩個 峰為阿替洛爾對映異構(gòu)體的峰。 保持手性分離分析條件不變，以1. Ommol/L的山茛菪堿溶液、1. Ommol/L的阿替洛 爾溶液和2. Ommol/L的美托洛爾溶液為樣品進(jìn)行手性分離分析，得到的電泳譜圖中，最后
7出現(xiàn)的兩個峰的出現(xiàn)時間和峰形發(fā)生了變化，但依然最后出現(xiàn)，而前面的四個峰的出現(xiàn)時 間和峰形均無明顯變化，由此可以得知，圖3中3074s出現(xiàn)的CI和C2兩個峰為美托洛爾對 映異構(gòu)體的峰。 由此可知，山茛菪堿、阿替洛爾和美托洛爾與三聯(lián)吡啶釕發(fā)生作用釋放光子的時 間不同，因此，本發(fā)明提供的方法能夠同時將山茛菪堿、阿替洛爾和美托洛爾進(jìn)行手性分離 分析。 在上述操作條件下，山茛菪堿、阿替洛爾和美托洛爾的檢出限分別為6X10—7mol/ L、5. 5X10—7mol/L和3X10—7mol/L。
實施例5 取健康人的尿液，經(jīng)0. 22 m濾膜過濾后，用實施例2制備的緩沖溶液將其稀釋， 作為空白尿樣；向空白尿樣中加入6 X 10—5mol/L的山茛菪堿溶液、5. 0 X 10—5mol/L的阿替洛 爾溶液和3X 10—5mol/L的美托洛爾溶液。 使用與實施例4相同的儀器、試劑和操作條件對空白尿樣和添加了手性藥物的尿 樣進(jìn)行手性分離分析，結(jié)果參見圖4，圖4為本發(fā)明實施例提供的空白尿樣以及添加了山茛 菪堿、阿替洛爾和美托洛爾的尿樣的電泳譜圖。圖4中，曲線1為空白尿樣的電泳譜圖，曲 線2為添加了山茛菪堿、阿替洛爾和美托洛爾的尿樣的電泳譜圖，在曲線2中，1133s處出現(xiàn) 了 Al和A2兩個峰，2489s處出現(xiàn)了 Bl和B2兩個峰，3074s處出現(xiàn)了 Cl和C2兩個峰。
參考實施例4的分析，Al和A2為山茛菪堿同分異構(gòu)體的峰，B 1禾P B2分別為阿 替洛爾同分異構(gòu)體的峰，C1和C2分別為美托洛爾同分異構(gòu)體的峰。由此可見，尿液的基底 對這三種手性物質(zhì)的分離并沒有很大影響，本發(fā)明提供的方法可以實現(xiàn)對尿液中的山茛菪 堿、阿替洛爾和美托洛爾同時進(jìn)行手性分離分析。 以上實施例的說明只是用于幫助理解本發(fā)明的方法及其核心思想。應(yīng)當(dāng)指出，對 于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以對本發(fā)明進(jìn)行 若干改進(jìn)和修飾，這些改進(jìn)和修飾也落入本發(fā)明權(quán)利要求的保護(hù)范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
一種同時手性分離分析山茛菪堿、阿替洛爾和美托洛爾的方法，其特征在于，包括將山茛菪堿樣品、阿替洛爾樣品和美托洛爾樣品投入毛細(xì)管電泳電化學(xué)發(fā)光檢測聯(lián)用儀器的樣品池中，施加進(jìn)樣電壓，使所述樣品進(jìn)入所述儀器的毛細(xì)管；施加分離電壓，使所述樣品在所述毛細(xì)管內(nèi)進(jìn)行電泳分離，所述毛細(xì)管為含有羧甲基-β-環(huán)糊精的分離溶液，所述分離溶液的pH值為3.0-6.0；分離后的樣品進(jìn)入所述儀器的檢測池，施加檢測電壓進(jìn)行檢測，所述檢測池內(nèi)為含有三聯(lián)吡啶釕的檢測溶液，所述檢測溶液的pH值為6.0-9.0。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述羧甲基-e -環(huán)糊精的濃度為5mmo1/L-20,l/L。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述羧甲基-|3-環(huán)糊精的濃度為13mmol/L-16mmol/L。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述分離溶液的pH值由HAc-NaAc緩沖溶液保持。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述HA c -NaA c緩沖溶液的濃度為30mmo1/L_70mmo1。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述三聯(lián)吡啶釕的濃度為4mmo1/L-10mmol/L。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述三聯(lián)吡啶釕的濃度為5mmol/L。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述檢測溶液的pH值由NaH2P04-Na2HP04緩沖溶液保持。
9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述NaH2P04-Na2HP04緩沖溶液的濃度為50mmol/L-150mmol/L。
10. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述毛細(xì)管為內(nèi)徑為50ym的未涂層融硅毛細(xì)管。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種同時手性分離分析山茛菪堿、阿替洛爾和美托洛爾的方法，包括將山茛菪堿樣品、阿替洛爾樣品和美托洛爾樣品投入毛細(xì)管電泳電化學(xué)發(fā)光檢測聯(lián)用儀器的樣品池中，施加進(jìn)樣電壓，使所述樣品進(jìn)入所述儀器的毛細(xì)管；施加分離電壓，使所述樣品在所述毛細(xì)管內(nèi)進(jìn)行電泳分離，所述毛細(xì)管為含有羧甲基-β-環(huán)糊精的分離溶液，所述分離溶液的pH值為3.0-6.0；分離后的樣品進(jìn)入所述儀器的檢測池，施加檢測電壓進(jìn)行檢測，所述檢測池內(nèi)為含有三聯(lián)吡啶釕的檢測溶液，所述檢測溶液的pH值為6.0-9.0。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明提供的手性分離分析方法試劑使用較少、檢測成本較低、分離效率較高、檢測靈敏度較高。
文檔編號G01N27/447GK101788490SQ201010107910
公開日2010年7月28日 申請日期2010年2月10日 優(yōu)先權(quán)日2010年2月10日
發(fā)明者于彩霞, 唐小風(fēng), 徐春熒, 李霞, 由天艷, 袁柏青 申請人:中國科學(xué)院長春應(yīng)用化學(xué)研究所