專利名稱：：一種酒曲發(fā)酵力的檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于分析檢測領(lǐng)域，具體涉及一種酒曲發(fā)酵力的檢測方法。
背景技術(shù)：
：酒曲發(fā)酵力指標(biāo)是衡量酒曲曲藥質(zhì)量重要的生化指標(biāo)，酒曲曲藥的產(chǎn)酒能力是固態(tài)白酒發(fā)酵、生酯產(chǎn)香的基礎(chǔ)。酒曲發(fā)酵力是指大曲生成乙醇的能力，是反映酒曲產(chǎn)酒能力的重要指標(biāo)。對酒曲發(fā)酵力的檢測，目前通用的有兩種方法1、C02失重法測定大曲發(fā)酵力，此方法的操作為取裝有100ml糖化液的發(fā)酵瓶滅菌后冷卻到25。C左右時(shí)在無菌條件下加入曲粉樣1.00g，瓶口用發(fā)酵栓封口，發(fā)酵栓中加入5-10ml5mol/LH2S04(l/2H2S04)密封，擦干瓶外壁，在千分之一感量的天平上稱重。然后，放入25"C保溫箱中發(fā)酵72h。取出發(fā)酵瓶，輕輕搖動(dòng)，使C02全部逸出，在同一天平上再稱重。計(jì)算發(fā)酵液前、后的重量差即為C02生成量(g/g'72h)。根據(jù)C02生成量與酒曲的發(fā)酵力成正比關(guān)系來評價(jià)大曲生成乙醇的能力。2、通過比重瓶法測定酒精生成量來計(jì)算發(fā)酵力比重瓶法采用的發(fā)酵液制備方法與C02失重法相同，用100ml的容量瓶(烘干至恒重)，稱取100g除去氣體的發(fā)酵液，轉(zhuǎn)入500ml燒瓶中，用50ml蒸餾水分?jǐn)?shù)次洗滌容量瓶，并轉(zhuǎn)入燒瓶中，連接好冷凝器，加熱緩慢蒸餾。再將一個(gè)巳知重量的100ml容量瓶浸入冰水中，接收蒸出的蒸餾液。當(dāng)流出液體積為90ml左右時(shí)，停止蒸餾，將蒸餾液重量調(diào)至100g，混合均勻，用附溫比重瓶法測定蒸餾液20°C時(shí)的相對密度，然后査表得出酒精的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。以上兩種酒曲發(fā)酵力檢測方法，都存在一定弊端。C02失重法測發(fā)酵力是把大曲假設(shè)為單一酵母菌，在72h內(nèi)測定其失重來判定，并主要以產(chǎn)生的C02揮發(fā)量(g/g'72h)作為衡量依據(jù)。眾所周知，大曲為"多菌"共棲體，所有活性微生物率先進(jìn)行有氧呼吸，在把糖徹底氧化為C02和H20的同時(shí)，獲得大量的能量，供菌體繁殖，待氧氣消耗殆盡，微生物在厭氧條件下，進(jìn)行醇、酸代謝。實(shí)際結(jié)果與假設(shè)存在很大差異，其測定的指標(biāo)值遠(yuǎn)超出發(fā)酵力(即生成乙醇的能力)所涵蓋的內(nèi)容。比重瓶法測酒精含量是通過取一定量的酒曲發(fā)酵液于蒸餾瓶中，蒸出餾出液，取餾出液于烘干恒重的密度瓶中，按密度法操作，測出餾出液的相對密度，査表得出酒精含量。此方法操作步驟多，手續(xù)繁瑣，精確度低，檢測結(jié)果低于實(shí)際酒精含量。另外，傳統(tǒng)的檢測方法是直接稱取少量的固體曲藥進(jìn)行發(fā)酵力檢測，而曲藥中具有發(fā)酵能力的菌株不可能均勻分布在曲藥中，同時(shí)檢測樣用量又極小，導(dǎo)致該方法平行樣檢測結(jié)果的精密度差。因此，本領(lǐng)域急需建立一種方法簡便、快捷、準(zhǔn)確的檢測大曲發(fā)酵力。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明所解決的技術(shù)問題是提供一種可以準(zhǔn)確檢測酒曲發(fā)酵力的方法。該方法是由如下步驟完成A、將待測酒曲制備成菌懸液，接入發(fā)酵培養(yǎng)基中發(fā)酵；B、取發(fā)酵后的發(fā)酵液測定酒精含量。本發(fā)明檢測方法可以根據(jù)發(fā)酵液中的實(shí)際酒精含量來準(zhǔn)確判斷酒曲發(fā)酵力的強(qiáng)弱?，F(xiàn)有檢測方法中有很多可用于酒精的檢測，但是由于發(fā)酵液產(chǎn)生的酒精很少，多數(shù)檢測方法的精確度不高，不足以準(zhǔn)備反應(yīng)酒曲發(fā)酵力，故本發(fā)明檢測方法優(yōu)選采用高效液相色譜檢測酒精含量。本發(fā)明的有益效果為1、傳統(tǒng)檢測方法C02失重法和比重瓶法是直接在發(fā)酵培養(yǎng)液中加入曲粉，而本發(fā)明檢測方法是將酒曲樣溶于無菌水中制備成均勻的菌液，然后再在無菌條件下取菌液接入發(fā)酵培養(yǎng)液中進(jìn)行發(fā)酵，這樣可有效提高平行樣檢測結(jié)果的精密度。2、傳統(tǒng)檢測方法C02失重法和比重瓶法所使用的發(fā)酵培養(yǎng)液為大米、麥芽、玉米等在一定條件下制備的糖化液(即麥芽汁或米曲汁等)，采用糖化液自然PH值進(jìn)行發(fā)酵力檢測。而本發(fā)明檢測方法是根據(jù)釀酒實(shí)際發(fā)酵環(huán)境，將糖化液pH值調(diào)節(jié)至3.0-4.0左右，然后進(jìn)行發(fā)酵力的測定，此測定結(jié)果更能真實(shí)反映酒曲在釀酒酸性體系中所具有的發(fā)酵力。3、傳統(tǒng)檢測方法是采用C02失重和比重瓶法測酒精度來檢測發(fā)酵力大小。其中C02失重法其測定的指標(biāo)值遠(yuǎn)遠(yuǎn)超出發(fā)酵力(即產(chǎn)酒精)所涵蓋的內(nèi)容；另外該方法存在方法誤差，也容易出現(xiàn)過失誤差，從而影響分析結(jié)果。比重瓶法測定酒精度需將發(fā)酵液蒸餾后才能測定，此操作會(huì)造成測定值偏低。而本發(fā)明檢測方法采用高效液相色譜法直接對發(fā)酵液中的酒精含量進(jìn)行分析檢測，檢測結(jié)果可準(zhǔn)確反應(yīng)發(fā)酵液中的實(shí)際酒精含量。綜上，本發(fā)明檢測方法操作簡單，分析結(jié)果準(zhǔn)確，精密度高，重現(xiàn)性好，適用性強(qiáng)，可切實(shí)反應(yīng)酒曲在進(jìn)入固態(tài)釀酒環(huán)境后所表現(xiàn)出的發(fā)酵產(chǎn)酒能力及有效評估酒曲質(zhì)量的優(yōu)劣。具體實(shí)施例方式以下通過對本發(fā)明具體實(shí)施方式的描述說明但不制本發(fā)明。本發(fā)明檢測方法是由如下步驟完成A、將待測酒曲制備成菌懸液，接入發(fā)酵培養(yǎng)基中發(fā)酵；B、取發(fā)酵后的發(fā)酵液采用高效液相色譜檢測酒精含量即可。其中，步驟A中將待測酒曲制成菌懸液將待測酒曲樣溶于無菌水中，浸泡l-2小時(shí)，每10min搖動(dòng)一次，使酒曲中微生物溶于液體中。步驟A中，調(diào)節(jié)發(fā)酵培養(yǎng)基pH值至3.0-4.0。然后按常規(guī)方法加棉塞滅菌，冷卻后接入菌懸液。步驟A中，發(fā)酵液發(fā)酵溫度為25-28'C，發(fā)酵時(shí)間72小時(shí)。其中步驟A中的參數(shù)控制主要是為了模擬酒曲的發(fā)酵條件以便檢測到酒曲正常情況下的發(fā)酵能力。若針對不同的酒曲，菌懸液的配制條件和發(fā)酵條件均可以按照該酒曲類型做適應(yīng)性修改。步驟B取發(fā)酵后的發(fā)酵液采用高效液相色譜檢測酒精含量，具體步驟如下a、離心發(fā)酵后的發(fā)酵液；b、取離心后的上清液用高效液相色譜直接檢測酒精含量。其中，步驟a的離心條件為在轉(zhuǎn)速12000-15000rpm/min的條件下離心5-10分鐘。為取得較好的離心效果，可調(diào)整轉(zhuǎn)速為15000rpm/min，離心5分鐘。步驟b后高效液相色譜采用外標(biāo)法測定，檢測條件可采用常規(guī)色譜條件檢測酒精含量示差檢測器，有機(jī)酸柱，柱溫40-7CTC，流動(dòng)相為5mMH2S04，流速O.8-1.4ml/min，進(jìn)樣量10-20y1。發(fā)酵力計(jì)算公式如下，以酒精的體積分?jǐn)?shù)計(jì)算Ci(v/v%)=AiKiX100式中Ci——發(fā)酵液中乙醇的含量(％);Ai——發(fā)酵液中乙醇組分的峰面積；Ki——乙醇組分單位峰面積的濃度校正值。本發(fā)明檢測方法原理濃香型大曲酒以大曲作為糖化、發(fā)酵劑。曲藥中的酵母微生物能使酒醅中還原糖發(fā)酵，生成酒精和二氧化碳，反應(yīng)式為C6Hi206—2C2H50H+2C02所以可使用在一定條件下制備的糖化液為培養(yǎng)基，測定發(fā)酵過程中生成的乙醇量，以衡量曲的發(fā)酵能力。實(shí)施例l本發(fā)明檢測方法對比C02失重法和比重瓶法的檢測結(jié)果1、麥芽汁培養(yǎng)基的制備取大麥芽一定數(shù)量，粉碎，力Q4倍于麥芽量的6(TC的水，在55-6(TC下保溫糖化，不斷攪拌，經(jīng)3-4h后，用紗布過濾，除去殘?jiān)蠓泻笤僦貜?fù)用濾紙或脫脂棉過濾一次，即得澄清的麥芽汁。加水稀釋成6-l()GBX的麥芽汁備用。取麥芽汁于發(fā)酵瓶中，在gSkpa壓力下滅菌l&nin。2、C02失重法測定發(fā)酵力取裝有100ml糖化液的發(fā)酵瓶滅菌后冷卻到25。C左右時(shí)在無菌條件下加入待測酒曲l.OOg，瓶口用發(fā)酵栓封口，發(fā)酵栓中加入5-10ml5mol/LH2S04(l/2H2S04)密封，擦干瓶外壁，在千分之一感量的天平上稱重。然后，放入25"C保溫箱中發(fā)酵72h。取出發(fā)酵瓶，輕輕搖動(dòng)，使C02全部逸出，在同一天平上再稱重。計(jì)算發(fā)酵液前、后的重量差即為C02生成量(g/g72h)，每個(gè)實(shí)驗(yàn)樣作三個(gè)平行。3、比重瓶法測定發(fā)酵力取裝有100ml糖化液的發(fā)酵瓶滅菌后冷卻到25。C左右時(shí)在無菌條件下加入待測酒曲l.OOg，瓶口用發(fā)酵栓封口，發(fā)酵栓中加入5-10ml5mol/LH2S04(l/2H2S04)密封，放入25。C保溫箱中發(fā)酵72h。取出發(fā)酵瓶，輕輕搖動(dòng)，使C02全部逸出，用100ml的容量瓶(烘干至恒重)，稱取100g除去氣體的發(fā)酵液，轉(zhuǎn)入500ml燒瓶中，用50ml蒸餾水分?jǐn)?shù)次洗滌容量瓶，并轉(zhuǎn)入燒瓶中，連接好冷凝器，加熱緩慢蒸餾。再將一個(gè)巳知重量的100ml容量瓶浸入冰水中，接收蒸出的蒸餾液。當(dāng)流出液體積為90ml左右時(shí)，停止蒸餾，將蒸餾液重量調(diào)至100g，混合均勻，用附溫比重瓶法測定蒸餾液2(TC時(shí)的相對密度，然后査表得出酒精的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，每個(gè)實(shí)驗(yàn)樣作三個(gè)平行。4、本發(fā)明檢測方法A、將待測酒曲以每10g溶于100ml無菌水中，浸泡1小時(shí)，每10min搖動(dòng)一次制備成菌懸液，發(fā)酵培養(yǎng)基為6化X的麥芽汁，調(diào)節(jié)發(fā)酵培養(yǎng)基pH值至3.0-4.0，然后按常規(guī)方法加棉塞滅菌，冷卻到28'C左右接入10ml菌懸液(相當(dāng)于lg酒曲)，每個(gè)實(shí)驗(yàn)樣作三個(gè)平行。蓋上發(fā)酵栓，并在發(fā)酵栓中滴加5-10ml5mol/L的H2S04溶液密封后發(fā)酵，發(fā)酵溫度為25-28。C，發(fā)酵時(shí)間為72小時(shí)；B、離心發(fā)酵后的發(fā)酵液，離心條件為轉(zhuǎn)速15000rpm/min，離心5分鐘，離心后的上清液用高效液相色譜檢測酒精度；高效液相色譜采用外標(biāo)法測定，檢測條件為示差檢測器，有機(jī)酸柱，柱溫60。C，流動(dòng)相為5mMH2S04，流速l.2ml/min，進(jìn)樣量10yl。發(fā)酵力計(jì)算公式如下，以酒精的體積分?jǐn)?shù)計(jì)算Ci(v/v%)=AiKiX100式中Ci——發(fā)酵液中乙醇的含量(％);Ai——發(fā)酵液中乙醇組分的峰面積；Ki——乙醇組分單位峰面積的濃度校正值c酒曲發(fā)酵力檢測結(jié)果見表l.表l<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>綜上，本發(fā)明檢測方法操作簡單，分析結(jié)果準(zhǔn)確，精密度高，可行性強(qiáng)，應(yīng)用前景廣。權(quán)利要求1.一種酒曲發(fā)酵力的檢測方法，其特征在于該方法是由如下步驟完成A、將待測酒曲制成菌懸液，接入發(fā)酵培養(yǎng)基中發(fā)酵；B、取發(fā)酵后的發(fā)酵液測定酒精含量。2.根據(jù)權(quán)利要求l所述的酒曲發(fā)酵力的檢測方法，A中將待測酒曲溶于無菌水中即制成菌懸液。3.根據(jù)權(quán)利要求l所述的酒曲發(fā)酵力的檢測方法，A中的發(fā)酵培養(yǎng)基pH值調(diào)節(jié)至3-4。4.根據(jù)權(quán)利要求l所述的酒曲發(fā)酵力的檢測方法，A中發(fā)酵溫度為25-28'C，發(fā)酵72小時(shí)。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的酒曲發(fā)酵力的檢測方法，A中發(fā)酵溫度為25r。6.根據(jù)權(quán)利要求l所述的酒曲發(fā)酵力的檢測方法，B中是取發(fā)酵后的發(fā)酵液采用高效液相色譜檢測酒精含量。7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的酒曲發(fā)酵力的檢測方法，取發(fā)酵后的發(fā)酵液采用高效液相色譜檢測酒精含量包括如下步驟a、離心發(fā)酵后的發(fā)酵液；b、取離心后的上清液用高效液相色譜檢測酒精度。8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的酒曲發(fā)酵力的檢測方法，其特征在于步驟a的離心條件為在轉(zhuǎn)速12000-15000rpm/min的條件下離心5-10分鐘。9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的酒曲發(fā)酵力的檢測方法，其特征在于步驟a的離心條件為在轉(zhuǎn)速15000rpm/min的條件下離心5分鐘。10.根據(jù)權(quán)利要求7所述的酒曲發(fā)酵力的檢測方法，其特征在于步驟b高效液相色譜檢測條件為示差檢測器，有機(jī)酸柱，柱溫40-7(TC，流動(dòng)相為5mMH2SC>4，其特征在于步驟其特征在于步驟其特征在于步驟其特征在于步驟其特征在于步驟其特征在于所述流速O.8-1.4ml/min，進(jìn)樣量10-20yL全文摘要本發(fā)明屬于分析檢測領(lǐng)域，具體涉及一種酒曲發(fā)酵力的檢測方法。所解決的技術(shù)問題是提供一種可以準(zhǔn)確檢測酒曲發(fā)酵力的方法，該方法是由如下步驟完成A、將待測酒曲制備成菌懸液，接入發(fā)酵培養(yǎng)基中發(fā)酵；B、取發(fā)酵后的發(fā)酵液測定酒精含量。該檢測方法是根據(jù)發(fā)酵液中的實(shí)際酒精含量來準(zhǔn)確判斷酒曲發(fā)酵力的強(qiáng)弱，較傳統(tǒng)CO₂失重法和比重瓶法可有效提高平行樣檢測結(jié)果的精密度，檢測結(jié)果可準(zhǔn)確反應(yīng)發(fā)酵液中的實(shí)際酒精含量，真實(shí)反映酒曲在釀酒酸性體系中所具有的發(fā)酵力。本方法操作簡單，分析結(jié)果準(zhǔn)確，精密度高，重現(xiàn)性好，適用性強(qiáng)，可切實(shí)反應(yīng)酒曲在進(jìn)入固態(tài)釀酒環(huán)境后所表現(xiàn)出的發(fā)酵產(chǎn)酒能力及有效評估酒曲質(zhì)量的優(yōu)劣。文檔編號(hào)G01N30/02GK101672832SQ20091030898公開日2010年3月17日申請日期2009年10月29日優(yōu)先權(quán)日2009年10月29日發(fā)明者唐清蘭,徐占成,樊科權(quán),石永凌,勇陳申請人:四川綿竹劍南春酒廠有限公司