專利名稱：：一種苯二胺類物質(zhì)的快速半定量檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種化學(xué)物質(zhì)的理化分析領(lǐng)域，具體涉及一種苯二胺類物質(zhì)的快速半定量檢測方法。
背景技術(shù)：
：苯二胺類物質(zhì)包括對苯二胺(p-Phenylenediamine,PPD)及其鹽類或衍生物(簡稱"對苯二胺類")、鄰苯二胺(o-phenylenediamine，OPD)及其鹽類或衍生物(簡稱"鄰苯二胺類")和間苯二胺(m-Phenylenediamine，MPD)及其鹽類或衍生物(簡稱"間苯二胺類")。對苯二胺、鄰苯二胺和間苯二胺為同分異構(gòu)體，分子式均為C6H8N2，分子量均為108.14,其結(jié)構(gòu)式如下A.對苯二胺B.鄰苯二胺C.間苯二胺近年來，實驗研究和流行病學(xué)調(diào)查表明，化妝品中使用的部分氧化染料(氧化前體及偶合物)和氧化劑具有致癌及致突變作用，可導(dǎo)致機體染色體畸變、DNA斷裂及膀胱癌、皮膚癌和胰腺癌等癌癥的發(fā)病率增加。自1975年Ames實驗室發(fā)現(xiàn)89%的氧化型染發(fā)劑具有致突變作用后，染發(fā)劑的致突變性研究就引起了人們的關(guān)注。研究表明，在體外誘變測試系統(tǒng)，染發(fā)劑的功效成分苯胺類衍生物、氧化劑和著色劑，可直接或在加用代謝活化系統(tǒng)后誘發(fā)原核細胞和真核細胞基因突變、染色體畸變和DNA損傷。對苯二胺主要用于制造偶氮染料和硫化染料等，并用作毛皮染料(毛皮黑D，即烏爾絲D或毛皮元D、UrsolD或FurBlackD)和顯影劑等?？诜拘詣×?，易引起高鐵血紅蛋白血癥、溶血性貧血和肝、腎損害。有很強的致敏作用，可引起接觸性皮炎、濕療、支氣管哮喘等，當(dāng)與氧化劑反應(yīng)后產(chǎn)物易引致突變作用，是一種潛在致癌物質(zhì)。鄰苯二胺是對苯二胺的同分異構(gòu)體，主要用作農(nóng)藥中間體，染料中間體。間苯二胺也是對苯二胺的同分異構(gòu)體，毒性較大，是國際公認具有致癌、致敏、致畸作用，被嚴禁用于化妝品，主要用作染料中間體，用于制造堿性橙、堿性棕G、直接耐曬黑G等染料，并用作毛皮染料，也用作環(huán)氧樹脂的固化劑、水泥的促凝劑等，但由于價格較之對苯二胺便宜，個別不法企業(yè)用之代替對苯二胺牟利。鑒于上述三者的毒性作用，2007年版《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》明確規(guī)定前者為限用品種，濃度不得超過6%，而后兩者則禁止使用。國家也多次開展打擊，而部分不法企業(yè)卻以"無化學(xué)成分"、"純植物"、"生態(tài)型"、"健康型"、"可以喝的，，等嗥頭大肆宣傳，而暗中卻添加禁限用成分，甚至加入洗發(fā)劑中大肆宣傳，從而引發(fā)多例嚴重過敏甚至死亡事件。國家針對上述禁、限用物質(zhì)的4全測標準，多為精密儀器4企測，如HPLC、GC、CE、LC-MS、GC-MS等方法，儀器設(shè)備價格昂貴、體積較大、檢測環(huán)境要求較高、處理條件嚴格，必須使用標準物質(zhì)同時對照檢測，不便于開展現(xiàn)場監(jiān)督使用。目前未見采用化學(xué)方法的筒便快速檢測方法的研究，尤其未見利用濾紙作為分離、擴散、化學(xué)反應(yīng)顯色載體同時半定量檢測化學(xué)成分方法的研究。
發(fā)明內(nèi)容為克服上述技術(shù)缺陷，本發(fā)明的目的是提供一種苯二胺類物質(zhì)的快速半定量檢測方法，該方法簡單，易于現(xiàn)場直接操作。為實現(xiàn)上述目的，采用如下的技術(shù)方案本發(fā)明的一種苯二胺類物質(zhì)的快速半定量檢測方法，包括如下步驟(1)制備供試液將待測樣品中加入乙酸乙酯，使待測樣品溶散，取上層溶液作為供試液；(2)制備檢測濾紙在定性濾紙中心處加入l-2滴次氯酸鉤飽和溶液；(3)檢測反應(yīng)在所述步驟(l)中得到的供試液中加入稀鹽酸l-2ml，振搖使混合均勻，靜置片刻，取下層溶液4-5滴注入所述步驟(2)中得到的定性濾紙的中心處；(4)根據(jù)顯色判讀。優(yōu)選的，所述步驟(1)中的待測樣品與所述乙酸乙酯的質(zhì)量體積比為1g:5-6ml或體積體積比為1:5-6。優(yōu)選的，所述步驟(l)中的上層溶液取5-6ml作為供試液。優(yōu)選的，所述步驟(2)中的定性濾紙的直徑為4.0-4.5cm。優(yōu)選的，所述待測樣品包括液體制劑、粉末、軟膏或乳膏劑。所迷苯二胺類物質(zhì)包括鄰苯二胺類物質(zhì)、間苯二胺類物質(zhì)和對苯二胺類物質(zhì)。優(yōu)選的，所述步驟(4)中的判讀的方法如下若3分鐘內(nèi)呈現(xiàn)橙紅色、橙黃色或黃色系列顏色，則樣品中含有鄰苯二胺類物質(zhì)或間苯二胺類物質(zhì)；若3分鐘內(nèi)呈現(xiàn)紫色系列顏色，則樣品中含有對苯二胺類物質(zhì)。優(yōu)選的，所述步驟(4)中的判讀的方法為若3分鐘內(nèi)呈現(xiàn)橙紅色、橙黃色或黃色系列顏色，則樣品中含有鄰苯二胺類物質(zhì)或間苯二胺類物質(zhì)；若3分鐘內(nèi)呈現(xiàn)紫色系列顏色，則樣品中含有對苯二胺類物質(zhì)；若顯示的顏色接近苯二胺類物質(zhì)限用限度顏色，應(yīng)將樣品稀釋10-20倍后重復(fù)檢測過程，并將呈現(xiàn)的顏色與標準比色卡中的紫色系列顏色進行對比，判斷待測樣品是否超出規(guī)定限度。優(yōu)選的，所述對苯二胺類物質(zhì)限用限度的質(zhì)量體積百分比濃度(或質(zhì)量百分比濃度)為6%。優(yōu)選的，所述鄰苯二胺類和間苯二胺類的最低檢測限為0.01%的質(zhì)量體積百分比濃度(或質(zhì)量百分比濃度)，所述對苯二胺類的最低^r測限為0.05%的質(zhì)量體積百分比濃度(或質(zhì)量百分比濃度)。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的苯二胺類物質(zhì)的快速半定量檢測方法具有操作簡單、檢測快速、成本低廉、半定量測定、準確度、靈敏度高等優(yōu)點，適用于監(jiān)督現(xiàn)場快速篩查化妝品中禁用物質(zhì)，也能夠?qū)ο抻梦镔|(zhì)快速進行半定量分析，定位準確、效果理想。本發(fā)明的方法利用一定直徑圓形濾紙的擴散作用、過濾作用達到消除樣品溶液顏色背景干擾和復(fù)雜基質(zhì)干擾，達到同時進行多組份半定量分離檢測的目的。圖l是對苯二胺對照品的顯色圖；圖2是間苯二胺對照品的顯色圖；圖3是鄰苯二胺對照品的顯色圖4是樣品14的顯色圖(樣品14的相關(guān)信息見表7所示)；圖5是不同濃度(從左到右0.2%、0.4%、0.6%、0.8%、1.0%)的對苯二胺對照品溶液的顯色圖6是不同濃度(從左到右2.0%、4.0%、6.0%、8.0%)的對苯二胺對照品溶液的顯色圖7是樣品15的顯色圖(樣品15的相關(guān)信息見表7所示，右邊濾紙為樣品15空白的顏色。)；圖8是樣品15稀釋10倍后的顯色圖(樣品15的相關(guān)信息見表7所示)；圖9是樣品31及其稀釋10倍后的顯色圖(樣品31的相關(guān)信息見表7所示，左圖為樣品31的顯色結(jié)果，右圖為樣品31稀釋10倍后的顯色結(jié)果)；圖10是同時采用方法C和方法D檢測樣品1的顯色圖(樣品1的相關(guān)信息見表7所示，方法C和方法D具體見實施例5);圖ll是對照品溶液的圖譜，其中從左至右依次為鄰苯二胺、對苯二胺、間苯二酚和間苯二胺；圖12是對照品溶液TIC圖，其中從左至右依次為鄰苯二胺、對苯二胺和間苯二胺；圖13是鄰苯二胺二級質(zhì)語圖14是鄰苯二胺譜庫檢索圖；圖15是對苯二胺二級質(zhì)譜圖；圖16是對苯二胺譜庫檢索圖；圖17是間苯二胺二級質(zhì)鐠圖；圖18是間苯二胺語庫檢索圖1923為樣品21的TIC圖、二級質(zhì)i普圖和譜庫檢索圖(樣品l的相關(guān)信息見表7所示)圖19是樣品21的TIC圖譜；圖20是樣品21保留時間10.149min峰的二級質(zhì)譜圖；圖21是樣品21保留時間10.149min峰的諳庫檢索圖；圖22是樣品21保留時間10.896min峰的二級質(zhì)譜圖；圖23是樣品21保留時間10.896min峰的i普庫檢索圖；圖24是樣品6和樣品22的顯色圖，其中左邊為樣品6,右邊為樣品22，右下角濾紙為樣品22空白的顏色(樣品6和22的相關(guān)信息見表7所示)。具體實施例方式為使本發(fā)明更加容易理解，下面結(jié)合具體實施例，進一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍，下列實施例中未提及的具體實驗方法，通常按照常規(guī)實驗方法進行。實施例中所用到的儀器型號等信息如下天平SartoriusCP-225D;高效液相色譜儀Agilent1100Series;氣相色譜儀Agilent6890N;氣相-質(zhì)譜聯(lián)用儀Agilent6890N-5975B。實施例中所用到的試劑來源等信息如下乙酸乙酯分析純，廣州化學(xué)試劑廠；鹽酸分析純，廣州化學(xué)試劑廠；次氯酸4丐化學(xué)純，上海潤捷化學(xué)試劑有限公司；定性濾紙分析用、中性(102)，杭州新華紙業(yè)有P艮公司；玻璃棒(O0.5cm，用于蘸取試劑的一頭應(yīng)平整)；塑料吸管(lml，帶刻度，一次性使用，l滴約0.05ml);苯二胺類對照品對苯二胺(p-Phenylenediamine，PPD):化學(xué)純，上?；瘜W(xué)試劑采購供應(yīng)五聯(lián)化工廠，批號20070827;間苯二胺(m-Phenylenediamine,MPD):分析純，上海晶純試劑有限公司，批號10428;鄰苯二胺(o-phenylenediamine，OPD):化學(xué)純，上?；瘜W(xué)試劑采購供應(yīng)五聯(lián)化工廠，批號20081103;貯備液PPD、MPD、OPD各配制成濃度5mg/ml;樣品共51種(其中市售樣品50種、國家專項抽驗陽性樣品1種)。實施例1:對苯二胺、鄰苯二胺和間苯二胺對照品與次氯酸鈣的理化反應(yīng)取對苯二胺、鄰苯二胺和間苯二胺對照品各約0.5g置100ml量瓶中，加乙酸乙酯溶解并稀釋至刻度，作為各自的對照品貯備液。取對苯二胺^備液適量置于不同的試管中，分別加入稀鹽酸lml，振搖，靜置片刻，分別取下層溶液4滴和5滴滴于預(yù)先滴加有1滴次氯酸4弓飽和溶液的定性濾紙上，顯紫色。見圖1,圖l是對苯二胺滴加后3min的顯色圖。取間苯二胺!^備液適量置于不同的試管中，分別加入稀鹽酸lml,振搖，靜置片刻，分別取下層溶液4滴和5滴滴于預(yù)先滴加有1滴次氯酸釣飽和溶液的定性濾紙上，顯黃色至橙黃色。見圖2,圖2是間苯二胺滴加后3min的顯色圖。取鄰苯二胺Ji&備液適量置于不同的試管中，分別加入稀鹽酸lml，振搖，靜置片刻，分別取下層溶液4滴和5滴滴于預(yù)先滴加有1滴次氯酸釣飽和溶液的定性濾紙上，顯橙紅至橙黃色。見圖3，圖3是鄰苯二胺滴加后3min的顯色圖。實施例2:樣品的顯色檢測在收集的樣品中P逭斜抽取樣品14，樣品14的相關(guān)信息見表7所示，取樣品14約1.5g置于15ml具塞試管中，加入乙酸乙酯9ml，擰緊瓶塞，用力振搖1分鐘使溶散，靜置片刻，取上層溶液6ml置試管中，加入稀鹽酸lml，振搖使混合均勻，靜置片刻，取下層溶液5滴，滴于臨用前預(yù)先加入次氯酸鉤飽和溶液l滴的定性濾紙?zhí)?，顯紫色。樣品14的顯色情況如圖4所示，圖4顯示樣品14檢測結(jié)果為對苯二胺類呈陽性。實施例3:半定量檢測配制不同濃度的對苯二胺對照品溶液，各取5ml用稀鹽酸lml萃取，取下層溶液5滴滴于滴加1滴次氯酸4丐飽和溶液的濾紙上，3分鐘內(nèi)，顯紫色，顏色隨著對照品濃度的減小而變淺。當(dāng)濃度小于1.0%時，顯淡紫色；當(dāng)濃度為1.0%~2.0%為紫色；當(dāng)濃度為4.0%8.0%為深紫色。結(jié)果見圖5-6，(圖5從左至右右濃度依次為0.2%、0.4%、0.6%、0.8%、1.0%,圖6從左到右濃度依次為2.0%、4.0%、6.0%、8.0%)。該方法可以實現(xiàn)對苯二胺類物質(zhì)的半定量檢測。在收集的樣品中隨機抽取樣品15，樣品15的相關(guān)信息見表7所示，取樣品15約1.5g置于15ml具塞試管中，加入乙酸乙酯9ml，擰緊瓶塞，用力振搖1分鐘使溶散，靜置片刻，取上層溶液6ml置試管中，加入稀鹽酸lml，振搖使混合均勻，靜置片刻，取下層溶液5滴，滴于臨用前預(yù)先加入次氯酸鈣飽和溶液1滴的定性濾紙?zhí)帲@紫褐色。樣品15的顯色情況如圖7所示。取"樣品15約1.5g置于15ml具塞試管中，力n入乙酸乙酯9ml，擰緊瓶塞，用力振搖l分鐘使溶散，靜置片刻，，的上層溶液L2ml置試管中，加入稀鹽酸2ml，振搖使混合均勻(即將樣品15稀釋10倍)，靜置片刻，取下層溶液5滴，滴于臨用前預(yù)先加入次氯酸4丐飽和溶液1滴的定性濾紙?zhí)?，顯紫色。樣品15稀釋10倍后的顯色情況如圖8所示，顯示樣品15檢測結(jié)果為對苯二胺類呈陽性。將圖8與圖5-6比較，顏色相當(dāng)于2.0%~4.0%濃度，與樣品15的GC檢測結(jié)果(含對苯二胺30.91%)相吻合，已超過6.0%。在收集的樣品中隨機抽取樣品31,樣品31的相關(guān)信息見表7所示，取樣品31約1.5g置于15ml具塞試管中，加入乙酸乙酯9ml，擰緊瓶塞，用力振搖1分鐘使溶散，靜置片刻，取上層溶液6ml置試管中，加入稀鹽酸lml，振搖使混合均勻，靜置片刻，取下層溶液5滴，滴于臨用前預(yù)先加入次氯酸鈣飽和溶液1滴的定性濾紙?zhí)?，顯紫紅色伴淺綠色，不易判斷。樣品31的顯色情況如圖9(左圖)所示。取"樣品31約1.5g置于15ml具塞試管中，加入乙酸乙酯9ml,擰緊瓶塞，用力振搖l分鐘使溶散，靜置片刻，，的上層溶液1.2ml置試管中，加入稀鹽酸2ml，振搖使混合均勻(即將樣品31稀釋10倍)，靜置片刻，取下層溶液5滴，滴于臨用前預(yù)先加入次氯酸4i^包和溶液1滴的定性濾紙?zhí)?，顯淡紫色。樣品31稀釋10倍后的顯色情況如圖9(右圖)所示，顯示樣品9檢測結(jié)杲為對苯二胺類呈陽性。將圖9(右圖)與圖5-6比較，顏色相當(dāng)于0.2%濃度，與樣品31的GC檢測結(jié)果(含對苯二胺1.93%)相吻合，未超過6.0%。實施例4:濾紙的選擇分別選用定性分析、定量分析和層析用三種分析濾紙，剪成直徑2.5cm、4.0cm、12.5cm圓形，實驗時用玻璃棒蘸取次氯酸鉤飽和溶液，取出，垂直點于上述濾紙中心，并分別用一次性塑料吸管吸取上述苯二胺類對照品貯備液配制成的不同濃度標準溶液0,25ml注入濾紙中心，使之均勻擴散并與次氯酸4丐進行化學(xué)反應(yīng)而顯色。通過試驗，選擇擴散速度快、擴散均勻、顏色變化明顯的濾紙作為正式試^r載體。按如上方法，最后確定定性濾紙作用本法所用濾紙。各分別選擇OPD、MPD、PPD三種相同濃度(質(zhì)量體積百分比濃度為0.1%、1%、5%)對照品溶液分別混合，并經(jīng)2ml鹽酸溶液提取后，在三種不同性質(zhì)的濾紙上(02.5cm、4.0cm、12.5cm)進行溶液擴散性、顯色分離性反應(yīng)，結(jié)果如表1所示。表1顯示三種濾紙的試驗效果。由該表可以看出，定性濾紙的溶液擴散速度快，顯現(xiàn)顏色分離度好，顏色變化明顯。表1濾紙類型試驗效杲定性濾紙定量濾紙層析濾紙溶液擴散速度快，顯現(xiàn)顏色分離度好，顏色變化明顯溶液擴散速度慢，顯現(xiàn)顏色分離度差，顏色變化不明顯溶液擴散速度較快，顯現(xiàn)顏色分離度較好，顏色變化較明顯而且，選用02.5cm無法分離、選用012.5cm均勻性較差、選用O4.0cm效果最好，既可使溶液快速均勻擴散，又可使各組份顯現(xiàn)顏色有效分離，顏色變化也明顯。本發(fā)明選用O4.0cm、中速、定性分析濾紙作為試-驗用載體材料。實施例5:供試品溶液體積最初采用方法A(取供試品約0.5g，加乙酸乙酯5ml溶解，再用稀鹽酸2ml萃取的溶液進行點樣實驗)，發(fā)現(xiàn)有的樣品在5ml乙酸乙酯中有絮狀沉淀，必須過濾；接著以相同的樣品采用方法B(取供試品約1.5g，加乙酸乙酯15ml溶解，取上層5ml再用稀鹽酸2ml萃取的溶液進行點樣實驗)，發(fā)現(xiàn)點樣效果與方法A過濾后相同。由于采用方法B對樣品l(樣品1的相關(guān)信息見表7，含對苯二胺0.09%)無法檢出，故將供試品配制修改成方法C(取供試品約1.5g，加乙酸乙酯9ml溶解，取上層6ml再用稀鹽酸2ml萃取的溶液進行點樣實驗)和方法D(取供試品約1.5g，加乙酸乙酯9ml溶解，取上層6ml再用稀鹽酸lml萃取的溶液進行點樣實驗)，方法D的效果最明顯，見圖7。故釆用方法D進行實驗，該法點樣的供試品溶液濃度約相當(dāng)于方法B的4倍，有效地降低了檢測限。圖IO為樣品1的不同方法的顯色情況，左邊為方法C的顯色結(jié)果，右邊為方法D的顯色結(jié)果。實施例6:顯色務(wù)ft的確定(1)顯色時間選用不同濃度OPD、MPD、PPD三種系列標準溶液，按上述檢測與評價方法進行顯色試驗，結(jié)果見表2。表2是三種對照品標準溶液的顯色時間比較。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>上述試驗顏色顯現(xiàn)時間到3分鐘為量，清晰，且維持至5分鐘不變色，之后，顏色則無可比性。因此確定顯色時間為3-5分鐘。(2)顯色試劑的選擇根據(jù)染發(fā)劑中可能添加的常用組份(MPD、OPD、PPD)及氧化劑的氧化特性，選擇過氧化氬(30%)、次氯酸釣(飽和溶液)、高錳酸鉀(0.02mol/L)等三種不同等級的強氧化劑進行試驗，結(jié)果見表3。表3是顯色試劑試驗結(jié)果。表3試劑用量顯色時間及顯色效果過氧化氫次氯酸鉤高錳酸鉀0.05ml0.05ml0.05ml所有組份在10分鐘開始顯色，所顯顏色區(qū)分不明顯OPD即時顯色，MPD、PPD1分鐘內(nèi)開始顯色、3分鐘最顯著并維持至5分鐘色彩無變化所有組份即刻被氧化而漂白，難以從顏色上予以區(qū)分由上表可知，在樣品溶液定量且過量的情況下(一部分^^皮漂白，余下部分則根據(jù)其量的大小起氧化反應(yīng)而顯現(xiàn)不同深淺和色澤的顏色)，選擇次氯酸4丐飽和溶液作為氧化劑既可起到快速顯色的作用，又可區(qū)分組份的種類，并可根據(jù)所顯顏色的深淺進行半定量。(3)用量的確定選用顯色試劑及樣品溶液的不同用量對檢出限及檢測敏感度的影響進行研究，結(jié)果見表4。表4是顯色試劑及樣品溶液不同用量試驗結(jié)果。表4試劑及樣品用量(ml)試劑c0.050.050.050.050.050.05樣品溶液0.050.100.150.200.25〉0.25顯色效果氧化過度氧化過度靈敏度低靈敏度較高靈敏度最高靈敏度降低由表4可知，在選擇中性濾紙為①4.0cm時，次氯酸鉤飽和溶液用量為0.05ml(l滴)點于濾紙中心處，樣品溶液用量為0.25ml(約5滴)顯色效果最好。實施例7:檢測fML呈色特征用上迷確定的濾紙、顯色試劑及樣品溶液用量，對不同濃度的對照品標準溶液進行試驗，結(jié)果見表5，表5是檢測限評價表。表5對照品溶液(％)0.010.020.030.040.050.080.100.200.300.35顏色OPD淺橙黃色淺橙黃色淺橙黃色橙黃色橙黃色橙黃色橙黃色橙黃色橙黃色橙黃色MPD淡黃色淡黃色淡黃色淺黃色淺黃色淺黃色黃色黃色黃色黃色PPD-----淡紫色淡紫色淡紫色淺紫色淺紫色淺紫色對照品溶液(％)0.400.501.002.02.53.04.05.06.07.0顏色OPD橙黃色橙黃色授紅色橙紅色橙紅色橙紅色檢紅色深橙紅色深橙紅色深橙紅色MPD黃色黃色深黃色深黃色深黃色深黃色深黃色深黃色深黃色深黃色PPD淺紫色淺紫色紫色紫色紫色紫色深紫色深紫色紫籃色紫藍色由上表可知，OPD及MPD從0.01。/。開始顯色，此后顏色逐漸加深，因此，確定最低檢測限均為0.01%;而PPD則從0.05。/。開始顯色，此后顏色逐漸加深，因此，確定最低檢測限均為0.05%,隨著濃度的增大，不同濃度范圍顯現(xiàn)的顏色不同，當(dāng)濃度增大到6%時，不易察覺出顏色變化，在操作時應(yīng)將樣品供試液稀釋到10倍后再同法測定，并將顯色結(jié)果與標準比色卡進行比對，折算出可能含量，從而初步判斷PPD是否超出規(guī)定的限量(6%)。實施例8:標準比色卡的制作因為間苯二胺類和鄰苯二胺類實際含量都比較小，而且禁止添加，本法雖可實現(xiàn)半定量，對其定量意義不大。而對苯二胺類屬限用成分，在化妝品中允許其使用量不得超過6%，且必須標注"含苯二胺類"，若未標注或在其他洗發(fā)劑、煩油、頭發(fā)定型劑等化妝品中添加，則亦屬禁止使用，因而半定量檢測對苯二胺類具有比較實際的意義。將上述對苯二胺對照品貯備液(濃度5mg/ml)分別配制成的系列濃度標準溶液(0.2%、0.4%、0.6%、0.8%、1.0%、2.0%、4.0%、6.0%、8.0%),再分別與事先用玻璃棒蘸取、并點于上述濾紙中心的次氯酸釣(飽和溶液，臨用前新配)進行化學(xué)反應(yīng)，顯色時間在3-5min,拍照，并以此作為樣品檢測結(jié)果的標準對照，塑封，即為標準比色卡(見圖5-6)。與該標準比色卡比對，若待測樣品檢測結(jié)果顯淡紫色，則表明待測樣品中對苯二胺含量小于1.0%;若顯紫色，則表明待測樣品中對苯二胺含量為1.0%4.0%;若顯深紫色，則表明待測樣品中對苯二胺含量大于4.0%。實施例9:樣品測定(1)樣品的處理取樣量取樣量約為液體制劑1.5ml(粉末、軟膏或乳膏劑取樣量約為1.5g)。供試液的制備取上述樣品量置于15ml具塞試管中，加入乙酸乙酯9ml，擰緊瓶塞，用力振搖約1分鐘使溶散(液體樣品則混合均勻即可)，靜置片刻，取上層溶液6ml作為供試液。(2)4全測與評價將上述供試液6ml置試管中，加入稀鹽酸lml，振搖使混合均勻，靜置片刻，取下層溶液0.25ml(約5滴)，注入臨用前預(yù)先用玻璃棒蘸取并加入乙酸乙酯1滴的定性濾紙中心處，如3分鐘內(nèi)呈現(xiàn)標準比色卡中的橙紅(黃)色至黃色系列顏色，則可判斷樣品中可能含有鄰苯二胺或間苯二胺及其鹽類或衍生物；如3分鐘內(nèi)呈現(xiàn)標準比色卡中的紫色系列顏色，則可判斷樣品中可能含有對苯二胺及其鹽類或衍生物，若顯示的顏色接近限用限度顏色，應(yīng)將樣品稀釋10-20倍后重復(fù)上述過程，并將呈現(xiàn)的顏色與標準比色卡中的紫色系列顏色進行對比，從而初步判斷該樣品是否超出規(guī)定P艮度。實施例10:氣相色語法初步確證以DB-1(30m，0.25mmx0.1um)毛細管柱為氣相色語柱，F(xiàn)ID檢測，分流模式，分流比為5:1。進樣口溫度為260°C,檢測器溫度為280°C，空氣、氫氣、氮氣流速分別為400ml/min、40ml/min、40ml/min;恒壓模式，柱溫在80°C保持2分鐘后以5°C/min的速度上升至190。C，再以20°C/min的速度上升至240°C,保持5分鐘。對照品溶液的制備與測定精密稱取對苯二胺、鄰苯二胺和間苯二胺對照品各約0,5g置100ml量瓶中，加入乙酸乙酯適量，超聲IO分鐘使溶解，放冷至室溫，用乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻，作為l&備液。取l&備液，用乙酸乙酯稀釋制成系列對照品溶液(濃度分別為500、250、100、50、10ug/ml)，分別取lpl注入氣相色鐠儀，記錄色謙。依據(jù)各對照品溶液濃度及氣相色譜峰面積建立擬合方程，計算相關(guān)系數(shù)(r值不小于0.99)。結(jié)果見表6，表6顯示了線性關(guān)系及回收率。表6<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>供試品溶液的制備與測定取本品約0.5g置50ml具塞試管中，加乙酸乙酯約20ml超聲振搖IO分鐘，放冷至室溫，力口乙酸乙酯至25ml，搖勻，濾過，取續(xù)濾液lul注入氣相色語儀，記錄其色譜圖。由于染發(fā)劑中經(jīng)常添加間苯二酚，故取對苯二胺、鄰苯二胺和間苯二胺混合對照品溶液2ml與間苯二酚(0.5g置1OOml，加乙酸乙酯溶解并稀釋至刻度)2ml置同一20ml量瓶中，加乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻，作為四種對照品混合溶液，取lul注入氣相色譜儀，圖譜如圖11。圖11為對照品溶液圖譜(從左至右依次為鄰苯二胺、對苯二胺、間苯二酴和間苯二胺，四個組分的分離度均大于1.5)。取對照品溶液逐級稀釋后注入氣相色譜儀，測得最低檢測限均為2pg/ml。實施例ll:氣相色譜-質(zhì)謙法確證以DB-1(30m,0.25mmx0.25um)毛細管柱為氣相色譜柱，分流模式，分流比為5:1。進樣口溫度為260°C，氦氣流速為8.5ml/min;恒壓才莫式，柱溫在80。C保持2分鐘后以5°C/min的速度上升至140°C，再以30°C/min的速度上升至240'C,保持2分鐘。電離方式為電子轟擊(EI);電子能量70eV;掃描范圍5(M50u。對照品溶液的TIC圖如圖12，其中從左至右依次為鄰苯二胺、對苯二胺和間苯二胺；鄰苯二胺、對苯二胺和間苯二胺的二級質(zhì)語圖和質(zhì)鐠庫檢索圖如圖13~18;其中，圖13是鄰苯二胺二級質(zhì)語圖；圖14是鄰苯二胺謙庫檢索圖；圖15是對苯二胺二級質(zhì)譜圖；圖16是對笨二胺語庫檢索圖；圖17是間笨二胺二級質(zhì)語圖；圖18是間苯二胺譜庫檢索圖。樣品21的TIC圖如圖19，圖20~23分別是樣品21的二級質(zhì)鐠圖和鐠庫檢索圖(樣品21的相關(guān)信息見表7所示)其中，圖20是樣品21保留時間10.149min峰的二級質(zhì)譜圖；圖21是樣品21保留時間10.149min峰的語庫檢索圖；圖22是樣品21保留時間10.896min峰的二級質(zhì)譜圖；圖22是樣品21保留時間10.896min峰的譜庫檢索圖。實施例12:將本發(fā)明的方法與自擬方法GC法以及確證方法GC/MS進行由于法定方法(《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》2007年版"氧化型染發(fā)劑中染料，，檢測標準采用HPLC測定，檢測限較高，且有個別樣品對苯二胺峰與樣品中其他物質(zhì)同時出峰，故自擬了檢測標準(GC法)及確證方法(GC-MS法)，并進行方法學(xué)驗證。用上述方法對市售50種染發(fā)劑及1種國家專項抽驗陽性品種進行快速測定，并與法定方法(《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》2007年版"氧化型染發(fā)劑中染料"檢測標準)、自擬標準(GC法)及確證方法(GC/MS法)對比。其中，樣品6(陰性)和樣品22(陽性)的實驗結(jié)果如圖24所示。左邊為樣品6，右邊為樣品22，右下角濾紙為樣品22空白的顏色。其51個樣品的測定結(jié)果與自擬方法GC法以及確證方法GC/MS的4企測結(jié)果具有較高的吻合度，見表7所示表7<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>最后所應(yīng)當(dāng)說明的是，以上實施例僅用以說明本發(fā)明的技術(shù)方案而非對本發(fā)明保護范圍的限制，盡管參照較佳實施例對本發(fā)明作了詳細說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對本發(fā)明的技術(shù)方案進行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實質(zhì)和范圍。權(quán)利要求1、一種苯二胺類物質(zhì)的快速半定量檢測方法，其特征在于，包括如下步驟(1)制備供試液將待測樣品中加入乙酸乙酯，使待測樣品溶散，取上層溶液作為供試液；(2)制備檢測濾紙在定性濾紙中心處加入1-2滴次氯酸鈣飽和溶液；(3)檢測反應(yīng)在所述步驟(1)中得到的供試液中加入稀鹽酸1-2ml，振搖使混合均勻，靜置片刻，取下層溶液4-5滴注入所述步驟(2)中得到的定性濾紙的中心處；(4)根據(jù)顯色判讀。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的苯二胺類物質(zhì)的快速半定量檢測方法，其特征在于，所述步驟(l)中的待測樣品與所述乙酸乙酯的質(zhì)量體積比為lg:5-6ml或體積體積比為1:5-6。3、根據(jù)權(quán)利要求1所述的苯二胺類物質(zhì)的快速半定量檢測方法，其特征在于，所述步驟(1)中的上層溶液取5-6ml作為供試液。4、根據(jù)權(quán)利要求1所述的苯二胺類物質(zhì)的快速半定量檢測方法，其特征在于，所述步驟(2)中的定性濾紙的直徑為4.0-4.5cm。5、根據(jù)權(quán)利要求1所述的苯二胺類物質(zhì)的快速半定量檢測方法，其特征在于，所述待測樣品包括液體制劑、粉末、軟膏或乳膏劑。6、根據(jù)權(quán)利要求1所述的苯二胺類物質(zhì)的快速半定量檢測方法，其特征在于，所述苯二胺類物質(zhì)包括鄰苯二胺類、間苯二胺類和對苯二胺類。7、根據(jù)權(quán)利要求6所述的苯二胺類物質(zhì)的快速半定量檢測方法，其特征在于，所述步驟(4)中的判讀的方法如下若3分鐘內(nèi)呈現(xiàn)橙紅色、橙黃色或黃色系列顏色，則樣品中含有鄰苯二胺類物質(zhì)或間苯二胺類物質(zhì)；若3分鐘內(nèi)呈現(xiàn)紫色系列顏色，則樣品中含有對苯二胺類物質(zhì)。8、根據(jù)權(quán)利要求6所述的苯二胺類物質(zhì)的快速半定量檢測方法，其特征在于，所述步驟(4)中的判讀的方法為將顯色結(jié)果與標準比色卡比對若3分鐘內(nèi)呈現(xiàn)橙紅色、橙黃色或黃色系列顏色，則樣品中含有鄰苯二胺類物質(zhì)或間苯二胺類物質(zhì)；若3分鐘內(nèi)呈現(xiàn)紫色系列顏色，則樣品中含有對苯二胺類物質(zhì)；若顯示的顏色接近苯二胺類物質(zhì)限用限度顏色，應(yīng)將樣品稀釋10-20倍后重復(fù)檢測過程，并將呈現(xiàn)的顏色與標準比色卡中的紫色系列顏色進行對比，判斷待測樣品是否超出規(guī)定限度。9、根據(jù)權(quán)利要求8所述的苯二胺類物質(zhì)的快速半定量檢測方法，其特征在于，所述對苯二胺類物質(zhì)限用范圍的最高濃度為6%的質(zhì)量體積百分比濃度或6%的質(zhì)量百分比濃度。10、根據(jù)權(quán)利要求6所述的苯二胺類物質(zhì)的快速半定量檢測方法，其特征在于，所述鄰苯二胺類和間苯二胺類的最低4企測限為0.01%的質(zhì)量體積百分比濃度或0.01%的質(zhì)量百分比濃度，所述對苯二胺類的最低檢測限為0.05%的質(zhì)量體積百分比濃度或0.05%的質(zhì)量百分比濃度。全文摘要本發(fā)明提供了一種苯二胺類物質(zhì)的快速半定量檢測方法，將待測樣品中加入乙酸乙酯，使待測樣品溶散，取上層溶液作為供試液；在定性濾紙中心處加入1-2滴次氯酸鈣飽和溶液；在供試液中加入稀鹽酸1-2ml，振搖使混合均勻，靜置片刻，取下層溶液4-5滴注入定性濾紙的中心處；根據(jù)顯色判讀。該方法簡單，易于現(xiàn)場直接操作，成本低廉、半定量測定、準確度、靈敏度高等優(yōu)點，適用于監(jiān)督現(xiàn)場快速篩查化妝品中禁用物質(zhì)，也能夠?qū)ο抻梦镔|(zhì)快速進行半定量分析，定位準確、效果理想。文檔編號G01N21/77GK101672794SQ20091019262公開日2010年3月17日申請日期2009年9月23日優(yōu)先權(quán)日2009年9月23日發(fā)明者嚴全鴻,林奇藝申請人:廣東省藥品檢驗所