專利名稱：一種血紅素含量的測(cè)定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種血紅素含量的方法。
(二)
背景技術(shù)：
血紅素是從動(dòng)物血中提取的、原卟啉IX的Fe2+復(fù)合物——金屬卟啉配位化合 物，是各種血紅素蛋白的輔基，它與不同的蛋白結(jié)合，可形成血紅蛋白、肌紅蛋白、細(xì)胞色素 C、過氧化氫酶和過氧化物酶等。血紅素，由卟啉和一分子亞鐵構(gòu)成鐵卟啉化合物，分子式 C34H30FeN404，相對(duì)分子質(zhì)量614. 48，結(jié)構(gòu)式為
6Hj
o 血紅素是現(xiàn)代醫(yī)學(xué)公認(rèn)的防治缺鐵性貧血吸收率高、效果好的生物鐵源，無鐵腥 味，不剌激胃腸；血紅素還是抗腫瘤藥物的重要原料，現(xiàn)已被用于治療肝癌、膀胱癌、黑色素 瘤、視網(wǎng)膜瘤等??；在食品行業(yè)，血紅素可代替熟肉制品危及人體健康的發(fā)色劑亞硝酸鹽及 人工合成色素，使肉制品更加美觀誘人，減少亞硝酸鹽致癌作用。因此，近幾年來，血紅素在 食品、醫(yī)藥和精細(xì)化工方面均得到了應(yīng)用，并越來越受到重視。近期我國正在積極從事這一 領(lǐng)域的研究，相繼研制和開發(fā)出具有補(bǔ)血功能的血紅素糖果、飲料、食品、藥物等產(chǎn)品。
有關(guān)血紅素的測(cè)定方法有多種，如熒光法、血紅素的吡啶血色原吸收測(cè)定法、紫外 光譜法、極譜法和電極法，這些測(cè)定方法各自有各自的特點(diǎn)，但是也有一定的缺點(diǎn)，這些方 法的使用成本都很高，許多實(shí)驗(yàn)室也沒有這些設(shè)備。目前由于可見光分光光度法具有操作 簡(jiǎn)便、快速易行，設(shè)備簡(jiǎn)單而被廣大研究者所接受，是在血紅素測(cè)定中使用較廣泛的一種方 法。但容易受其它成分干擾，測(cè)定值一般有偏離。測(cè)定過程中的主要干擾因素是氧化，血紅 素顏色不穩(wěn)定，容易被氧化而褐變。本發(fā)明旨在解決可見光分光光度法測(cè)定血紅素時(shí)氧化 的干擾，從而為精確測(cè)定血紅素含量提供了保證。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于準(zhǔn)確的測(cè)定出血紅素的含量。
本發(fā)明的目的通過如下技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn) (1)血紅素標(biāo)準(zhǔn)供試溶液的制備精密稱取105t:干燥至恒重的粉末狀血紅素標(biāo) 準(zhǔn)品20. Omg，再稱取異抗壞血酸鈉10mg，用0. Imol/LNaOH溶液定容于lOOmL棕色容量瓶 中，搖勻，得血紅素標(biāo)準(zhǔn)供試溶液。 (2)血紅素標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作精密量取血紅素標(biāo)準(zhǔn)供試溶液lmL、2mL、3mL、4mL、 5mL(相當(dāng)于200、400、600、800、1000ii g血紅素)，用0. lmol/L NaOH溶液定容于100ml棕 色容量瓶中，搖勻，以0. lmol/LNaOH溶液為空白，在400nm處測(cè)定其吸光值，以血紅素的濃 度為橫坐標(biāo)，吸光值為縱坐標(biāo)，作回歸處理，得回歸方程A = aC+b(A為吸光值，C為血紅素 濃度)。 (3)含血紅素的樣品溶液的制備精密稱取105t:干燥至恒重的20mg的含血紅素
的樣品放入燒杯中，再稱取異抗壞血酸鈉10mg，加入50mL 0. lmol/L NaOH溶液溶解，然后
轉(zhuǎn)移到lOOmL棕色容量瓶中，定容至刻度。用漏斗過濾溶液，棄去初濾液。 (4)樣品液血紅素含量的測(cè)定濾液在400nm處測(cè)定吸光值。將吸光值代入標(biāo)準(zhǔn)
曲線公式求出樣品液中血紅素的濃度(C)，然后按下面的公式計(jì)算樣品中血紅素的含量。
血紅素含量(％) =Wxl06
式中C-為供試樣品液中血紅素濃度，y g/mL ;
W-為供試樣品的重量，g。
(四)


附圖血紅素標(biāo)準(zhǔn)曲線
(五) 具體實(shí)施方案
實(shí)施例一 (1)血紅素標(biāo)準(zhǔn)供試溶液的制備精密稱取105t:干燥至恒重的粉末狀血紅素標(biāo) 準(zhǔn)品20. Omg，再稱取異抗壞血酸鈉10mg，用0. lmol/L NaOH溶液定容于100mL棕色容量瓶 中，搖勻，得血紅素標(biāo)準(zhǔn)供試溶液； (2)血紅素標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作精密量取血紅素標(biāo)準(zhǔn)供試溶液lmL、2mL、3mL、4mL、 5mL (相當(dāng)于2 、 4、 6 、 8 、 10 ii g血紅素)，用0. lmo 1/LNaOH溶液定容于100ml棕色容量瓶中，搖 勻，以O(shè). lmol/L NaOH溶液為空白，在400nm處測(cè)定其吸光值，以血紅素的濃度為橫坐標(biāo)，吸 光值為縱坐標(biāo)，作回歸處理，得回歸方程A = 0. 0775C-0. 0026， R2 = 0. 9998 (A為吸光值， C為血紅素濃度)； (3)含血紅素的樣品溶液的制備精密稱取105t:干燥至恒重的20mg的含血紅素 的樣品放入燒杯中，再稱取異抗壞血酸鈉10mg，加入50mL 0. lmol/LNaOH溶液溶解，然后轉(zhuǎn) 移到lOOmL棕色容量瓶中，定容至刻度。用漏斗過濾溶液，棄去初濾液；
(4)樣品液血紅素含量的測(cè)定濾液在400nm處測(cè)定吸光值。將吸光值代入標(biāo)準(zhǔn)曲 線公式求出樣品液中血紅素的濃度(C)，然后按下面的公式計(jì)算樣品中血紅素的含量。(結(jié) 果見表1)
4血紅素含量(％) =Wxl06
式中C-為供試樣品液中血紅素濃度，y g/mL ;
W-為供試樣品的重量，g。
表1血紅蛋白粉中血紅素含量的測(cè)定
樣品號(hào)吸光值(A)血紅素濃度血紅素濃度平均 (ng/mL )血紅素含量 (%)
10.4986.46
20.5046.546.532.66
30.5076.58 實(shí)施例二 (1)血紅素標(biāo)準(zhǔn)供試溶液的制備精密稱取105t:干燥至恒重的粉末狀血紅素標(biāo) 準(zhǔn)品20. Omg，再稱取異抗壞血酸鈉10mg，用0. lmol/L NaOH溶液定容于lOOmL棕色容量瓶 中，搖勻，得血紅素標(biāo)準(zhǔn)供試溶液； (2)血紅素標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作精密量取血紅素標(biāo)準(zhǔn)供試溶液lmL、2mL、3mL、4mL、 5mL (相當(dāng)于2 、 4、 6 、 8 、 10 ii g血紅素)，用0. lmo 1/LNaOH溶液定容于100ml棕色容量瓶中，搖 勻，以O(shè). lmol/L NaOH溶液為空白，在400nm處測(cè)定其吸光值，以血紅素的濃度為橫坐標(biāo)，吸 光值為縱坐標(biāo)，作回歸處理，得回歸方程A = 0. 0775C-0. 0026， R2 = 0. 9998 (A為吸光值， C為血紅素濃度)； (3)含血紅素的樣品溶液的制備精密稱取105t:干燥至恒重的20mg的粗制血紅
素樣品放入燒杯中，再稱取異抗壞血酸鈉10mg，加入50mL 0. lmol/L NaOH溶液溶解，然后
轉(zhuǎn)移到lOOmL棕色容量瓶中，定容至刻度。用漏斗過濾溶液，棄去初濾液； (4)樣品液血紅素含量的測(cè)定濾液在400nm處測(cè)定吸光值。將吸光值代入標(biāo)準(zhǔn)曲
線公式求出樣品液中血紅素的濃度(C)，然后按下面的公式計(jì)算樣品中血紅素的含量。(結(jié)
果見表2)
CX100:DX100 血紅素含量(％) = WxlO6 式中C-為供試樣品液中血紅素濃度，y g/mL ; D-為稀釋倍數(shù)，實(shí)施例中D = 3 ; W-為供試樣品的重量，g。 表二粗制血紅素樣品中血紅素含量的測(cè)定
樣品號(hào)吸光值(A)血紅素濃度 (|xg/mL)血紅素濃度平均血紅素含量 (%)
10.3774.89
20.3754.874.886.29
30.3774.89
權(quán)利要求
一種血紅素含量的測(cè)定方法，其特征在于包括以下步驟(1)血紅素標(biāo)準(zhǔn)供試溶液的制備精密稱取105℃干燥至恒重的粉末狀血紅素標(biāo)準(zhǔn)品20.0mg，再稱取異抗壞血酸鈉10mg，用0.1mol/L NaOH溶液定容于100mL棕色容量瓶中，搖勻，得血紅素標(biāo)準(zhǔn)供試溶液。(2)血紅素標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作精密量取血紅素標(biāo)準(zhǔn)供試溶液1mL、2mL、3mL、4mL、5mL(相當(dāng)于200、400、600、800、1000μg血紅素)，用0.1mol/L NaOH溶液定容于100ml棕色容量瓶中，搖勻，以0.1mol/L NaOH溶液為空白，在400nm處測(cè)定其吸光值，以血紅素的濃度為橫坐標(biāo)，吸光值為縱坐標(biāo)，作回歸處理，得回歸方程A＝aC+b(A為吸光值，C為血紅素濃度)。(3)含血紅素的樣品溶液的制備精密稱取105℃干燥至恒重的20mg的含血紅素的樣品放入燒杯中，再稱取異抗壞血酸鈉10mg，加入50mL 0.1mol/L NaOH溶液溶解，然后轉(zhuǎn)移到100mL棕色容量瓶中，定容至刻度。用漏斗過濾溶液，棄去初濾液。(4)樣品液血紅素含量的測(cè)定濾液在400nm處測(cè)定吸光值。將吸光值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線公式求出樣品液中血紅素的濃度(C)，然后按下面的公式計(jì)算樣品中血紅素的含量。式中C-為供試樣品液中血紅素濃度，μg/mL；W-為供試樣品的重量，g。F2009101852807C0000011.tif
2. 根據(jù)權(quán)利要求l所述的一種血紅素含量的測(cè)定方法，其特征在于步驟(1)中加入 10mg的異抗壞血酸鈉。
3. 根據(jù)權(quán)利要求l所述的一種血紅素含量的測(cè)定方法，其特征在于步驟(1)中選用棕 色的容量瓶定容。
4. 根據(jù)權(quán)利要求l所述的一種血紅素含量的測(cè)定方法，其特征在于步驟(1)中用 0. lmol/LNaOH溶液溶解血紅素標(biāo)準(zhǔn)品。
5. 根據(jù)權(quán)利要求l所述的一種血紅素含量的測(cè)定方法，其特征在于步驟(2)中在 400nm處測(cè)定吸光值。
6. 根據(jù)權(quán)利要求l所述的一種血紅素含量的測(cè)定方法，其特征在于步驟(2)中用各濃 度標(biāo)準(zhǔn)溶液產(chǎn)生的吸光度對(duì)標(biāo)準(zhǔn)溶液中血紅素濃度作回歸處理，可以得到一個(gè)回歸方程。
7. 根據(jù)權(quán)利要求l所述的一種血紅素含量的測(cè)定方法，其特征在于步驟(3)中用漏斗 過濾樣品溶液，棄去初濾液。
8. 根據(jù)權(quán)利要求l所述的一種血紅素含量的測(cè)定方法，其特征在于步驟(4)中血紅素 含量的計(jì)算先測(cè)出樣品液的吸光值，再根據(jù)蛋白濃度對(duì)吸光度作出的回歸方程計(jì)算出此 時(shí)血紅素的濃度。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種血紅素含量的測(cè)定方法。本發(fā)明提供了一種在用分光光度法測(cè)定血紅素時(shí)解決氧化干擾的方法，其主要內(nèi)容包括(1)血紅素標(biāo)準(zhǔn)供試溶液的制備；(2)血紅素標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作；(3)含血紅素的樣品溶液的制備；(4)樣品液血紅素含量的測(cè)定。本發(fā)明通過在溶液中添加異抗壞血酸鈉減少了血紅素測(cè)定過程中的干擾因素，增加了分光光度法測(cè)定血紅素含量的準(zhǔn)確性，為血紅素含量的測(cè)定提供了一種更準(zhǔn)確可靠的方法。
文檔編號(hào)G01N21/31GK101713728SQ200910185280
公開日2010年5月26日 申請(qǐng)日期2009年11月3日 優(yōu)先權(quán)日2009年11月3日
發(fā)明者張立娟, 蔡克周, 賈征 申請(qǐng)人:安徽寶迪肉類食品有限公司