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免疫層析檢測裝置及其檢測方法

文檔序號:6152881閱讀:180來源:國知局
專利名稱:免疫層析檢測裝置及其檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于醫(yī)學(xué)檢測技術(shù)領(lǐng)域,涉及一種免疫層析檢測裝置及其檢測方法。
背景技術(shù)
免疫層析(Immunochromatogr即hy, IC)是上世紀(jì)八十年代初發(fā)展起來的一種快 速免疫分析技術(shù)。原理是借助毛細作用,樣品在條狀纖維膜上泳動,使其中的待測物質(zhì)與膜 上預(yù)置的相應(yīng)配體結(jié)合,通過顯色反應(yīng)(或熒光或直接使用著色標(biāo)記物)在短時間(20min) 內(nèi)得到直觀的結(jié)果。免疫層析因使用標(biāo)記物不同而名稱各異,如酶免疫層析、乳膠微粒免疫 層析、膠體金免疫層析、膠體硒免疫層析、膠體鐵免疫層析等等。在當(dāng)前應(yīng)用最廣且技術(shù)最 為成熟的免疫層析技術(shù)是膠體金免疫層析。僅在國內(nèi)市場上,就能輕易找到上百種的膠體 金免疫層析試紙條,它們在早孕檢測、傳染疾病檢測、毒品檢測、食品衛(wèi)生檢測(如獸藥殘 留等)以及基因檢測等方面發(fā)揮著重要的作用。然而,膠體金免疫層析層析檢測技術(shù)的最 大局限性在于靈敏度和準(zhǔn)確性都難以達到ELASA檢測的水平,另外,膠體金容易產(chǎn)生凝聚, 且形成的標(biāo)記物不穩(wěn)定,對于小分子標(biāo)記差,標(biāo)記特異性難把握,這一技術(shù)瓶頸極大地限制 了免疫層析技術(shù)的進一步的發(fā)展和應(yīng)用。 在免疫層析檢測中,待測物與其反應(yīng)性物質(zhì)(抗體、核酸或受體等具有特異結(jié)合 能力的物質(zhì))的反應(yīng)不是平衡反應(yīng),樣本中的待測物都要通過由反應(yīng)性物質(zhì)組成的檢測帶 區(qū)域而得到富集,使得膜層析反應(yīng)的效率較高。但常用的膠體金指示物的靈敏度偏低,造成 了目前免疫層析技術(shù)靈敏度偏低,這也是膠體金免疫層析技術(shù)遲遲不替代ELISA的最重要 原因之一。因此,人們提高膜層析技術(shù)靈敏度的努力從來沒有停止過,而標(biāo)記物的推陳出新 則是提高膜層析靈敏度的最重要途徑,曾經(jīng)使用的標(biāo)記物有膠體金、膠體硒、膠體鐵、乳膠 顆粒以及近年來還使用了脂質(zhì)體,其目的都是希望把層析檢測的靈敏度提高到一個新的水 平。最近,有研究者用順磁粒子標(biāo)記、量子點標(biāo)記等技術(shù),或是把免疫反應(yīng)信號轉(zhuǎn)化為電子 信號模式來提高靈敏度也都取得了不錯的效果。但是這些新技術(shù)對于設(shè)備和技術(shù)的要求頗 高,距離實際應(yīng)用還有很長的路要走。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題在于,針對現(xiàn)有技術(shù)中免疫檢測設(shè)備靈敏度偏低、準(zhǔn)確
性不好、設(shè)備及其技術(shù)要求較高的問題,提供一種高靈敏度、高特異性的免疫層析裝置。 本發(fā)明進一步要解決的技術(shù)問題在于,針對現(xiàn)有技術(shù)中靈敏度偏低、準(zhǔn)確性不好、
設(shè)備及其技術(shù)要求較高的問題,提供一種高靈敏、快速可靠的免疫層析檢測方法。 本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是一種免疫層析檢測裝置,包括膜基
體,在膜基體上依次設(shè)置有樣品墊、承載由反應(yīng)性物質(zhì)和指示性物質(zhì)組成的標(biāo)記物的標(biāo)記
物墊、包被或化學(xué)交聯(lián)有反應(yīng)性物質(zhì)的檢測帶、吸水墊,所述標(biāo)記物為反應(yīng)性物質(zhì)和指示性
物質(zhì)偶聯(lián)在聚合物骨架上形成的多功能聚合物,所述檢測帶為包被或化學(xué)交聯(lián)在膜基體上
的反應(yīng)性物質(zhì)或是有反應(yīng)性物質(zhì)偶聯(lián)在聚合物骨架上形成的反應(yīng)性聚合物。
3J方法中,所述聚合物骨架還可以為葡聚糖、多聚賴氨酸、聚乙烯或聚
l方法中,反應(yīng)性物質(zhì)、指示性物質(zhì)通過化學(xué)修飾或生物交聯(lián)的方法
J方法中,所述反應(yīng)性聚合物為聚合物骨架上偶聯(lián)至少一個反應(yīng)性物 所述聚合物骨架為帶有-CHO、 _NH2、 -OH、 -C00H中至少一個官能團的聚合物。
所述聚合物骨架為葡聚糖、多聚賴氨酸、聚乙烯或聚苯乙烯。 免疫層析檢測方法為樣品在纖維或凝膠制成的膜上泳動,樣品中的待測物首先 通過標(biāo)記物墊與其上的標(biāo)記物反應(yīng),然后在毛細作用下泳動到檢測帶與反應(yīng)性物質(zhì)反應(yīng), 顯色或通過指示物質(zhì)被檢出;所述標(biāo)記物為反應(yīng)性物質(zhì)和指示性物質(zhì)偶聯(lián)在聚合物骨架上 形成的多功能聚合物,所述檢測帶為包被或化學(xué)交聯(lián)在膜基體上反應(yīng)性物質(zhì)或是有反應(yīng)性 物質(zhì)偶聯(lián)在聚合物骨架上形成的反應(yīng)性聚合物。 免疫層析檢測方法中,所述聚合物骨架為帶有-CHO、 -NH2、 -OH、 -C00H中至少一個
官能團的聚合物。
免疫層析檢》
苯乙稀o 免疫層析檢;
偶聯(lián)到聚合物骨架上。
免疫層析檢《質(zhì)。 免疫層析檢測方法中,所述多功能聚合物為聚合物骨架上偶聯(lián)至少一個反應(yīng)性物 質(zhì)和至少一個指示性物質(zhì)。 本發(fā)明以聚合物為骨架,通過化學(xué)修飾或生物交聯(lián),把相同功能或不同功能物質(zhì) 偶聯(lián)到聚合物骨架的特定部位上,賦予其多重生物活性。這些連接到聚合物骨架上的物質(zhì) 按照功能可分成兩種一是反應(yīng)性物質(zhì),二是指示性物質(zhì)。反應(yīng)性物質(zhì)是指執(zhí)行特異反應(yīng)功 能的物質(zhì)如抗原、抗體、酶、配體、受體、核酸等。指示性物質(zhì)是指肉眼可見或能被儀器檢測 到的信號物質(zhì)如色素、熒光物質(zhì)、酶量子點等。在膜層析檢測中,把僅帶有反應(yīng)性物質(zhì)的聚 合物稱為反應(yīng)性聚合物,包被或通過化學(xué)交聯(lián)到纖維素膜檢測帶位置;二是把既攜帶了反 應(yīng)性物質(zhì)又有指示性物質(zhì)的多功能聚合物作為標(biāo)記物,加入到膜層析裝置的標(biāo)記物墊上。 這樣的多功能聚合物應(yīng)用在膜層析檢測時,樣本中的待測物質(zhì)經(jīng)過標(biāo)記物墊時就與相應(yīng)的 多功能聚合物反應(yīng)生成復(fù)合物,到達預(yù)先包被有與這種待測物反應(yīng)的檢測帶時,這個復(fù)合 物就與檢測帶反應(yīng)而被聚集,其聚集程度可通過酶促顯色、熒光檢測或顏色判斷來反映結(jié) 果。由于聚合物骨架對膜為惰性物質(zhì),同時采用降低非特異吸附的特殊處理過程,其余未反 應(yīng)的多功能聚合物不會吸附在膜上,繼續(xù)泳動到吸水材料中。 由于將反應(yīng)性物質(zhì)或指示性物質(zhì)共價偶聯(lián)到聚合物骨架上能改變反應(yīng)性物質(zhì)或 指示性物質(zhì)的表面性質(zhì)和溶解性,對于溶解性不佳的物質(zhì)參與各種水溶性液相反應(yīng)具有極 大的意義。而在檢驗分析方面,作為通用試劑起到放大免疫反應(yīng)的作用。具體原理是把 抗原或抗體等反應(yīng)性物質(zhì)與色素、熒光物質(zhì)、辣根過氧化物酶(HRP)等指示性物質(zhì)通過化 學(xué)修飾或生物交聯(lián)的方式偶聯(lián)到聚合物骨架上制備成復(fù)合物,這種復(fù)合物既有多重反應(yīng)基 團,又可以按不同需要添加上大量的指示性物質(zhì),因此能增加了免疫層析反應(yīng)的靈敏度和 特異性,提高反應(yīng)的準(zhǔn)確性。同時又保留了膜層析技術(shù)的快速、便利、經(jīng)濟的優(yōu)勢,形成一種 全新的集高靈敏度、高特異性、快速可靠于一體的免疫層析檢測新技術(shù)。 本發(fā)明以多功能聚合物替代膠體金作為標(biāo)記物,取得了非常理想的結(jié)果,在不降 低特異性的情況下,靈敏度得到大幅度提高。多功能聚合物不但能避免由于膠體金穩(wěn)定性
4差、難以標(biāo)記小分子和標(biāo)記特異性差的缺點,而且還能提高蛋白質(zhì)(多肽)的穩(wěn)定性,使得 檢測試劑的有效期更長,檢測結(jié)果更為準(zhǔn)確和可靠。很好地解決了現(xiàn)代檢測技術(shù)中存在的 快速檢測與高靈敏度之間的矛盾,而且,通過多重標(biāo)記,能同時進行多重項目的檢測。符合 現(xiàn)代實驗檢測技術(shù)的發(fā)展方向,具有突出的社會效益和經(jīng)濟效益。


下面將結(jié)合附圖及實施例對本發(fā)明作進一步說明,附圖中
圖1是本發(fā)明實施例1多功能聚合物的制備工藝流程圖。
圖2是本發(fā)明實施例2免疫檢測裝置的結(jié)構(gòu)示意圖。
具體實施例方式實施例l,免疫層析檢測方法為樣品在纖維制成的膜上泳動,樣品中的待測物先 與膜上的標(biāo)記物反應(yīng),在毛細作用下泳動到檢測帶與反應(yīng)性物質(zhì)反應(yīng),顯色;所述標(biāo)記物為 反應(yīng)性物質(zhì)和指示性物質(zhì)偶聯(lián)在聚合物骨架上形成的多功能聚合物,所述檢測帶包被或化 學(xué)交聯(lián)有反應(yīng)性物質(zhì)偶聯(lián)在聚合物骨架上形成的反應(yīng)性聚合物。
—、多功能聚合物的制備 如圖1所示是本發(fā)明實施例的多功能聚合物的制備工藝流程圖,以抗體為反應(yīng)性 物質(zhì),以辣根過氧化物酶(HRP)為指示性物質(zhì)舉例說明。 1、 HRP-葡聚糖的制備首先在中性條件下,使用過碘酸鈉法將作為聚合物骨架的 葡聚糖活化。稱取10mg葡聚糖,溶于0.01mol/L pH7. 2的磷酸鹽緩沖液(PBS)中,加入 0. 15mol/L的過碘酸鈉溶液0. 5ml,25t:反應(yīng)60min。脫鹽柱除去未反應(yīng)的過碘酸鈉后,再加 入10mg的聯(lián)氨(_NH2-NH2_) , 25"避光反應(yīng)30min。對0. Olmol/L的磷酸鹽緩沖液充分透析, 形成氨基化葡聚糖;同樣采用過碘酸鈉法活化HRP,稱取10mg HRP溶于1.0ml新鮮配制的 0. lmol/L的NaHC03溶液中,加入0. 15mol/L的過碘酸鈉溶液0. 5ml,25t:避光反應(yīng)30min, 脫鹽柱除去未反應(yīng)的過碘酸鈉后,形成醛基化的HRP ;將收集到的有顏色液體全部加入到 上述氨基化的葡聚糖中,25。C避光反應(yīng)120min,加入4. Omg/ml的硼氫化鈉0. 4ml, 25。C避光 反應(yīng)60min,對0. Olmol/L的磷酸鹽緩沖液充分透析,就形成HRP-葡聚糖。
由于葡聚糖分子量較大,活化的位點多,使之帶上大量的氨基,并且由于葡聚糖分 子為長鏈狀,因此每個骨架分子能偶聯(lián)上10個以上的辣根過氧化物酶(HRP) , HRP-葡聚糖 還可以偶聯(lián)熒光物質(zhì)或染料分子,可偶聯(lián)IOO個以上的熒光物質(zhì)或染料分子。偶聯(lián)完成后 使用乙醇胺對活性基團進行封閉。 2、抗體使用蛋白酶消化及還原取10mg抗體,用70mmol/L的醋酸鹽緩沖液調(diào)整 pH4. 2左右,加入1. Omg的胃蛋白酶,37。C水浴反應(yīng)16小時,用1. Omol/L的Tris緩沖液調(diào) 整pH8. 0左右,上預(yù)先使用0. 01mol/L磷酸鹽緩沖液平衡的Superdex 75分子篩柱,收集 第一洗脫峰,濃縮到5mg/ml,即得到抗體片段F(ab' )2 ;然后按照每毫升上述F(ab' )2加入 0. lmol/L的二巰基蘇糖醇(DTT)O. Olml的比例混合F(ab' ) 2和DTT, 37。C水浴反應(yīng)90min, 脫鹽柱脫鹽后就形成含有巰基的抗體片段(Fab'-SH)。此過程還可使用交聯(lián)劑法活化抗體 片段,形成F(ab' )2-SH。 3、 HRP-葡聚糖使用交聯(lián)劑活化把步驟1中制備的HRP-葡聚糖濃縮成約為5mg/
5ml的濃度,每毫升加入配制好的濃度為10mg/ml的異雙功能交聯(lián)劑GMBS (N_ y-Maleimidob utyryloxy-oxysuccinimide ester) 0. lml,25。C避光反應(yīng)120min,脫鹽柱脫鹽后,收集第一 峰即為帶有馬來酰亞胺活性基團的HRP-葡聚糖。 4、把步驟2的產(chǎn)物Fab' _SH和步驟3的產(chǎn)物帶有馬來酰亞胺活性基團的HRP_葡
聚糖按照質(zhì)量比l : 1混合,25t:避光反應(yīng)120min,加入甘氨酸50mg25t:避光反應(yīng)60min
以封閉活性基團。最終完成反應(yīng)性物質(zhì)與聚合物的連接,得到的多功能聚合物。 這樣制備的多功能聚合物外圍帶有反應(yīng)性物質(zhì),內(nèi)側(cè)帶有指示性物質(zhì),有利于多
功能聚合物參與各種生物學(xué)反應(yīng)。對于含有-m^的聚合物骨架可直接使用雙功能或三功
能交聯(lián)劑與指示性物質(zhì)和反應(yīng)性物質(zhì)偶聯(lián),形成多功能聚合物。 二、反應(yīng)性聚合物的制備 以抗體為反應(yīng)性物質(zhì),多聚賴氨酸為聚合物骨架,采用交聯(lián)劑法制備反應(yīng)性聚合 物。 1、抗體的還原把抗體置于0. lmol/L pH7. 2的PBS中,調(diào)整濃度為10mg/ml,加入 終濃度10mmol/L的EDTA ;每毫升抗體加入6mg的P -巰基乙胺,攪拌溶解,37。C保溫90min。 過S印hadex G-25或類似的脫鹽柱,測定在280nm的吸收峰來確定抗體的位置,收集的抗體 即是帶有-SH的抗體片段。 2、多聚賴氨酸的活化把多聚賴氨酸配制成10mg/ml的濃度,在每毫升這樣的多 聚賴氨酸中加入配制好的濃度為10mg/ml的異雙功能交聯(lián)劑GMBS(N-y-Maleimidobutyry loxy-oxysuccinimide ester) 0. lml,25。C避光反應(yīng)120min,脫鹽柱脫鹽后,收集第一峰即 為帶有馬來酰亞胺活性基團的多聚賴氨酸。 3、反應(yīng)性聚合物的生成把步驟1產(chǎn)生的帶有-SH的抗體片段與步驟2的產(chǎn)物活 化的多聚賴氨酸按照質(zhì)量比4 : 1的比例混合,25t:避光反應(yīng)120min,過Superdex 200分 子篩除去未結(jié)合的抗體,收集第一洗脫峰即為反應(yīng)性聚合物。
名詞說明 過碘酸鈉法是一種化學(xué)修飾方法,把-OH氧化為-CHO,再在堿性條件下與-NH2 反應(yīng)并還原生成酰胺鍵的連接方法,是傳統(tǒng)的糖類與蛋白質(zhì)連接技術(shù),在此不再贅述。
交聯(lián)劑法是一種化學(xué)修飾方法,將交聯(lián)劑作為橋鏈把不同物質(zhì)相連接并生成長 度不一的伸展臂。為現(xiàn)有技術(shù),在此不再贅述。 生物交聯(lián)主要是指通過基因工程等手段在細菌或細胞內(nèi)把兩類物質(zhì)連接在一起 的方法。生物交聯(lián)為現(xiàn)有技術(shù),在此不再贅述。 化學(xué)修飾或生物交聯(lián)方法還包括EDC法,EDC法是利用碳二亞胺(EDC)或其衍生 物活化羧酸,使能與-NH2反應(yīng),為現(xiàn)有技術(shù),在此不再贅述。 包被把具有反應(yīng)性的蛋白質(zhì)或核酸點樣于檢測帶位置,干燥后,使用白蛋白或是 酪蛋白溶液封閉未結(jié)合位點,這個過程稱之為包被。包被的原理一般是物理吸附過程,也可 使用化學(xué)交聯(lián)方法。 本發(fā)明免疫膜層析方法可以從兩個層面來提高靈敏度,首先聚合物骨架上偶聯(lián) 多個參與反應(yīng)的反應(yīng)性物質(zhì),增加了反應(yīng)性物質(zhì)的相對濃度,而膜層析能提高反應(yīng)性物質(zhì) 接觸的機會,使得反應(yīng)靈敏度增加,另外,每個聚合物骨架能帶有10個以上的指示性物質(zhì) (酶、熒光物質(zhì)或是更多的染料分子),提高了檢測的靈敏度。膜層析中的膜可保證多功能
6聚合物能在其中正常泳動,而聚合物骨架(如葡聚糖) 一般是層析惰性物質(zhì),不會吸附到膜
上,保證了反應(yīng)的特異性。用反應(yīng)性聚合物進行包被增加了包被量,進一步增加了靈敏度。
聚合物骨架上可以偶聯(lián)上多種反應(yīng)性物質(zhì)和指示性物質(zhì),膜上可以包被多重反應(yīng)帶,執(zhí)行
多種反應(yīng),并在膜上不同位置進行定位顯示,故可同時檢測多種待測物。 實施例2,免疫層析裝置下面以丙型肝炎并HCV感染檢測試劑盒為例。 如圖2所示,丙型肝炎并HCV感染檢測試劑盒包括膜基體,膜基體由下部的聚酯膜
IO和上部的層析膜11組成,從膜基體的層析膜11 一端依次設(shè)置有樣品墊1、承載由反應(yīng)性
物質(zhì)和指示性物質(zhì)組成的標(biāo)記物的標(biāo)記物墊2、包被或化學(xué)交聯(lián)有反應(yīng)性物質(zhì)的檢測帶3、
吸水墊4。 標(biāo)記物為使用HCV抗原片段或是HCV核心抗體作為反應(yīng)性物質(zhì),以辣根過氧化物 酶作為指示性物質(zhì),偶聯(lián)在聚合物骨架 一葡聚糖上形成的多功能聚合物,所述的檢測帶為 多條,分別包被有不同片段的HCV抗原或HCV核心抗體。 那么根據(jù)檢測帶顯示的結(jié)果就可以得出樣本中含有抗體所針對的片段類型或是 否含有核心抗原。通過對多功能聚合物免疫層析法同步檢測HCV抗原抗體試劑盒技術(shù)指標(biāo) 的檢測,并與ELISA和膠體金試劑作比較,結(jié)果見下表1 : 表1 :多功能聚合物免疫層析法同步檢測HCV抗原抗體與ELISA和膠體金的比較
ELISA檢測法膠體金檢測法本發(fā)明
靈敏度抗原檢測10pg100pg10pg
抗體檢測2.0ncu2.0ncu2.0ncu
特異性抗原檢測100%100%100%
抗體檢測100%100%100%
臨床符合 率(120份)抗原檢測110/12095/120119/120
抗體檢測102/12098/120120/120
抗原抗體辰步分別檢測否否倉巨
抗體分片斷檢測否能能
檢測時間60~120min15min15min
操作繁瑣簡便簡便 表1中,本發(fā)明同步檢測HCV抗原抗體試劑盒的抗原檢測靈敏度為10pg,達到 ELISA的水平,遠高于膠體金的檢測水平,抗體檢測靈敏度由于要求不高,三種試劑盒都為 2. Oncu ;特異性方面,本發(fā)明同步檢測HCV抗原抗體試劑盒也都達到100% ;對于臨床標(biāo) 本的檢測,與進口試劑盒(抗體檢測使用美國Chiron公司的RIBA試劑盒,抗原檢測為美 國0rtho公司的核心抗原檢測試劑盒)比較,此法的符合率分別高達99. 2%和100% ;高 于ELISA試劑盒(抗原檢測為91. 7%,抗體檢測為85% )和膠體金試劑盒(抗原檢測為
779. 2%,抗體檢測為81. 7%,)。同時,ELISA試劑盒在一個測試中只能進行單一檢測抗原 或抗體,即使同時檢測也不能分片斷檢測,而膠體金雖然能進行分片斷檢測,但不能同步檢 測。另外在檢測時間和操作簡便性方面,本發(fā)明同步檢測HCV抗原抗體試劑盒也具有明顯 的技術(shù)優(yōu)勢。 此外,本發(fā)明還能進行不同病毒感染的聯(lián)合快速檢測,如乙型肝炎病毒(HBV)、丙 型肝炎病毒(HCV)、愛滋病毒(HIV)、梅毒等輸血檢測項目的聯(lián)合快速檢測,只需要分別把 HBV表面抗體、HCV核心抗原、HIV抗原、梅毒抗原分別偶聯(lián)在不同的聚合物骨架上,并且在 層析膜上不同區(qū)域內(nèi)包被上與標(biāo)記物抗體(原)配對的HBV表面抗體、HCV核心抗原、HIV 抗原、梅毒抗原等形成不同的檢測帶,當(dāng)樣本中含有待檢物質(zhì)時就會在相應(yīng)的檢測帶檢測 出來。
權(quán)利要求
一種免疫層析檢測裝置,包括膜基體,在膜基體上依次設(shè)置有樣品墊、承載由反應(yīng)性物質(zhì)和指示性物質(zhì)組成的標(biāo)記物的標(biāo)記物墊、包被或化學(xué)交聯(lián)有反應(yīng)性物質(zhì)的檢測帶、吸水墊,其特征在于,所述標(biāo)記物為反應(yīng)性物質(zhì)和指示性物質(zhì)偶聯(lián)在聚合物骨架上形成的多功能聚合物,所述檢測帶為包被或化學(xué)交聯(lián)在膜基體上的反應(yīng)性物質(zhì)或是有反應(yīng)性物質(zhì)偶聯(lián)在聚合物骨架上形成的反應(yīng)性聚合物。
2. 根據(jù)權(quán)利要求l所述的免疫層析檢測裝置,其特征在于,所述聚合物骨架為帶 有-CHO、 -NH2、 -OH、 -C00H中至少一個官能團的聚合物。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的免疫層析檢測裝置,其特征在于,所述聚合物骨架為葡聚糖、 多聚賴氨酸、聚乙烯或聚苯乙烯。
4. 免疫層析檢測方法,其特征在于,樣品在纖維或凝膠制成的膜上泳動,樣品中的待測 物首先通過標(biāo)記物墊與其上的標(biāo)記物反應(yīng),然后在毛細作用下泳動到檢測帶與反應(yīng)性物質(zhì) 反應(yīng),顯色或通過指示物質(zhì)被檢出;所述標(biāo)記物為反應(yīng)性物質(zhì)和指示性物質(zhì)偶聯(lián)在聚合物 骨架上形成的多功能聚合物,所述檢測帶為包被或化學(xué)交聯(lián)在膜基體上反應(yīng)性物質(zhì)或是有 反應(yīng)性物質(zhì)偶聯(lián)在聚合物骨架上形成的反應(yīng)性聚合物。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的免疫層析檢測方法,其特征在于,所述聚合物骨架為帶 有-CHO、 -NH2、 -OH、 -C00H中至少一個官能團的聚合物。
6. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的免疫層析檢測方法,其特征在于,所述聚合物骨架為葡聚糖、 多聚賴氨酸、聚乙烯或聚苯乙烯。
7. 根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的免疫層析檢測方法,其特征在于,反應(yīng)性物質(zhì)、指示性物 質(zhì)通過化學(xué)修飾或生物交聯(lián)的方法偶聯(lián)到聚合物骨架上。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的免疫層析檢測方法,其特征在于,所述反應(yīng)性聚合物為聚合 物骨架上偶聯(lián)至少一個反應(yīng)性物質(zhì)。
9. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的免疫層析檢測方法,其特征在于,所述多功能聚合物為聚合 物骨架上偶聯(lián)至少一個反應(yīng)性物質(zhì)和至少一個指示性物質(zhì)。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種免疫層析檢測裝置及其檢測方法,裝置包括膜基體,膜基體上依次設(shè)置有樣品墊、承載由反應(yīng)性物質(zhì)和指示性物質(zhì)組成的標(biāo)記物的標(biāo)記物墊、包被或化學(xué)交聯(lián)有反應(yīng)性物質(zhì)的檢測帶、吸水墊,標(biāo)記物為反應(yīng)性物質(zhì)和指示性物質(zhì)偶聯(lián)在聚合物骨架上形成的多功能聚合物,檢測帶為包被或化學(xué)交聯(lián)在膜基體上的反應(yīng)性物質(zhì)或是有反應(yīng)性物質(zhì)偶聯(lián)在聚合物骨架上形成的反應(yīng)性聚合物。檢測方法樣品在膜上泳動,待測物先通過標(biāo)記物墊與其上的標(biāo)記物反應(yīng),然后在毛細作用下泳動到檢測帶與反應(yīng)性物質(zhì)反應(yīng),顯色或通過指示物質(zhì)被檢出;本發(fā)明提供一種高靈敏度、高特異性的免疫層析裝置及一種高靈敏、快速可靠的免疫層析檢測方法。
文檔編號G01N33/533GK101769919SQ200910104908
公開日2010年7月7日 申請日期2009年1月6日 優(yōu)先權(quán)日2009年1月6日
發(fā)明者買制剛, 盧海蓉, 姜麗華, 易俊波, 李凌云, 林楓, 王曉紅, 陳少娟, 雷明軍, 黃德新 申請人:深圳大學(xué)
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