專利名稱：電化學(xué)生物傳感器及其制備方法以及細(xì)胞積壓校正的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種生物測(cè)量技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種電化學(xué)生物傳感器及其制備方 法以及測(cè)試準(zhǔn)確性的校正方法。
背景技術(shù)：
電化學(xué)生物傳感器的工作原理是，物質(zhì)在外加電壓的電極表面發(fā)生電子得失，得 失電子沿電極傳導(dǎo)產(chǎn)生電流，電流與物質(zhì)濃度成正比，而通過(guò)測(cè)量電流的強(qiáng)度可以測(cè)量物 質(zhì)的濃度。其中，物質(zhì)首先要傳遞到電極表面才能發(fā)生反應(yīng)，物質(zhì)的傳遞速度取決于溶液傳 質(zhì)系數(shù)。血液中溶質(zhì)傳質(zhì)系數(shù)主要受細(xì)胞壓積(紅細(xì)胞比例)的影響，細(xì)胞壓積越高，傳質(zhì) 系數(shù)越小，反之亦然。以血糖測(cè)試為例，細(xì)胞壓積每增加1%，快速血糖儀的測(cè)試值就有可能 降低 1 % (The effect of hematocrit is significant, with a bias of-1 % per% Hct0 Edmond Magner，Analyst，2001，126 :861)。正常人全血細(xì)胞壓積范圍為35% 55%，由此 引起的血糖測(cè)試誤差達(dá)到20%，因此對(duì)細(xì)胞壓積的影響進(jìn)行校正是提高血糖儀測(cè)試準(zhǔn)確性 的主要途徑。一種消除細(xì)胞壓積影響的方法是在電極表面加血清分離膜(Douglas，etal. US6818180B2)，血液經(jīng)血清分離膜分離紅細(xì)胞后得到的單純血清再與電極表面的酶發(fā)生反 應(yīng)。這種方法可以徹底消除細(xì)胞壓積的影響，但電極結(jié)構(gòu)復(fù)雜，不僅需要測(cè)試條上固載血清 分離膜，還需要構(gòu)建血清引流渠，也需要較多的血液才能產(chǎn)生足夠檢測(cè)量的血清。歐洲專利說(shuō)明書EP1394545A1公開了一種采用交流阻抗來(lái)測(cè)定細(xì)胞壓積的方法， 并依此對(duì)血糖測(cè)定值進(jìn)行校正。不同細(xì)胞壓積的血液樣品具有不同的溶質(zhì)擴(kuò)散傳質(zhì)系數(shù)， 溶質(zhì)擴(kuò)散系數(shù)的的差異導(dǎo)致交流阻抗譜相位移的變化。PCT專利說(shuō)明書W02005/003748A1 也采用類似的交流相位移法測(cè)定細(xì)胞壓積并對(duì)血糖測(cè)定值進(jìn)行校正，測(cè)定分為5個(gè)步驟 1)施加第一個(gè)交流信號(hào)于血液樣品；2)測(cè)定第一個(gè)信號(hào)的相角響應(yīng)；3)施加第二個(gè)交流信 號(hào)于血液樣品；4)測(cè)定第二個(gè)信號(hào)的相角響應(yīng)；5)、由兩次相角響應(yīng)差值計(jì)算細(xì)胞壓積值。 但是，交流方法測(cè)定細(xì)胞壓積對(duì)儀器的電路和電源的要求較高，需要復(fù)雜的電子線路和控 制原件，無(wú)疑會(huì)增加儀器成本。中國(guó)專利說(shuō)明書CN1815236A介紹了在血糖測(cè)定體系中增加測(cè)定流速的電極來(lái)測(cè) 定細(xì)胞壓積。在血糖測(cè)試電極的后端增加一流速測(cè)定電極，根據(jù)血液從血糖工作電極流動(dòng) 到測(cè)速電極的時(shí)間來(lái)計(jì)算細(xì)胞壓積，并由此對(duì)血糖值進(jìn)行校正。細(xì)胞壓積影響血液的流動(dòng) 速度，細(xì)胞壓積越高，血液流動(dòng)速度越慢。然而，血液流動(dòng)速度除與細(xì)胞壓積有關(guān)以外，還受 采血量的影響，特別是對(duì)于末梢血測(cè)定。當(dāng)末梢血采血量不足時(shí)，血液可能只流到血糖工作 電極，需要再次擠壓采血部分以增加血量，增加的血量繼續(xù)進(jìn)樣才能達(dá)到測(cè)速電極，這會(huì)導(dǎo) 致錯(cuò)誤的流速時(shí)間測(cè)定結(jié)果。PCT國(guó)際專利說(shuō)明書W02008/040982A1提出了，在血糖測(cè)定體系中增加一微電極 陣列來(lái)測(cè)定細(xì)胞壓積。掩膜光刻技術(shù)產(chǎn)生的微電極陣列與血糖測(cè)試的參比電極共同組成細(xì) 胞壓積測(cè)定體系。血糖工作電極表面所發(fā)生的反應(yīng)為平面擴(kuò)散控制的反應(yīng)，產(chǎn)生瞬態(tài)電流；微電極陣列電極表面所發(fā)生的反應(yīng)為球形擴(kuò)散控制的反應(yīng)，產(chǎn)生穩(wěn)態(tài)響應(yīng)電流。由兩種響 應(yīng)電流的時(shí)間變化規(guī)律可以求出溶質(zhì)在血液樣品中的擴(kuò)散系數(shù)及細(xì)胞壓積，并對(duì)血糖測(cè)定 值進(jìn)行校正。血糖工作電極由絲網(wǎng)印刷技術(shù)制備，微電極陣列由掩膜光刻技術(shù)制備，測(cè)試條 的制備工藝復(fù)雜；兩種電極響應(yīng)的都是葡萄糖氧化酶的反應(yīng)產(chǎn)物，難免會(huì)相互干擾

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明實(shí)施例提供一種電化學(xué)生物傳感器，該傳感器至少包括蓋板，雙面膠片和 底板，雙面膠片設(shè)置在蓋板和底板之間并將兩者粘合起來(lái)，底板上設(shè)置有第一工作電極、第 二工作電極和參比電極，第一工作電極上固定有與被測(cè)物質(zhì)反應(yīng)的生物試劑，第二工作電 極上固定有不溶解的電化學(xué)反應(yīng)物質(zhì)。本發(fā)明實(shí)施例還提供一種電化學(xué)生物傳感器的制備方法，該方法包括形成用于 血糖測(cè)定的第一工作電極、用于細(xì)胞壓積測(cè)定的第二工作電極、用于與第一工作電極或第 二工作電極組成電化學(xué)測(cè)試系統(tǒng)的參比電極；在第一工作電極上固定與被測(cè)物質(zhì)反應(yīng)的試 劑；在第二工作電極上固定不溶解的電化學(xué)反應(yīng)物質(zhì)；以及用雙面膠片粘合蓋板和底板， 形成虹吸進(jìn)樣通道。本發(fā)明實(shí)施例再提供一種利用上述電化學(xué)生物傳感器對(duì)被測(cè)物測(cè)定值進(jìn)行細(xì)胞 壓積校正的方法，該方法包括用第二工作電極上測(cè)定的細(xì)胞壓積值對(duì)第一工作電極上的 被測(cè)物測(cè)定值進(jìn)行校正；被測(cè)樣品細(xì)胞壓積偏高時(shí)，給予被測(cè)物測(cè)定值正補(bǔ)償；被測(cè)樣品 細(xì)胞壓積偏低時(shí)，給予被測(cè)物測(cè)定值負(fù)補(bǔ)償。本發(fā)明實(shí)施例在同一血液體系中實(shí)現(xiàn)血糖和細(xì)胞壓積的分別測(cè)定，并根據(jù)細(xì)胞壓 積的測(cè)定值對(duì)血糖測(cè)定值進(jìn)行校正。測(cè)定細(xì)胞壓積時(shí)采用的是不溶解于血液中的電化學(xué)反 應(yīng)物質(zhì)，如銀、銅、鐵、氧化銅、三氧化二鐵等金屬及其化合物的納米或微米顆粒，這些顆粒 被粘結(jié)劑固定在細(xì)胞壓積測(cè)定電極上，對(duì)血糖測(cè)定沒(méi)有影響。不溶解的電化學(xué)反應(yīng)物質(zhì)還 可以直接是磁控濺射的金、銀、銅等電極導(dǎo)軌。血糖測(cè)試采用的是固定在血糖測(cè)試電極表 面的葡萄糖氧化酶或葡萄糖脫氫酶及電子傳遞媒體，固定的酶不會(huì)向細(xì)胞壓積測(cè)試電極擴(kuò) 散，因此對(duì)細(xì)胞壓積測(cè)定沒(méi)有影響。


此處所說(shuō)明的附圖用來(lái)提供對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步理解，構(gòu)成本申請(qǐng)的一部分，并不 構(gòu)成對(duì)本發(fā)明的限定。在附圖中圖1為本發(fā)明實(shí)施例中血糖測(cè)定試條的結(jié)構(gòu)示意圖。圖2為本發(fā)明實(shí)施例中血糖測(cè)定試條制備方法的流程圖。圖3為本發(fā)明實(shí)施例的細(xì)胞壓積測(cè)定結(jié)果示意圖。圖4為本發(fā)明實(shí)施例的細(xì)胞壓積測(cè)定值對(duì)血糖測(cè)定值的校正結(jié)果示意圖。
具體實(shí)施例方式為使本發(fā)明實(shí)施例的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白，下面結(jié)合實(shí)施例和附 圖，對(duì)本發(fā)明實(shí)施例做進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明。在此，本發(fā)明的示意性實(shí)施例及其說(shuō)明用于解釋本 發(fā)明，但并不作為對(duì)本發(fā)明的限定。
實(shí)施例一本實(shí)施例提供一種電化學(xué)生物傳感器。如圖1所示，以血糖測(cè)定試條為例說(shuō)明本 發(fā)明的電化學(xué)生物傳感器。該血糖測(cè)定試條包括蓋板110，雙面膠片120和底板130，雙面膠片120設(shè)置在蓋 板110和底板130之間并將兩者粘合起來(lái)。蓋板110由親水材料制成，如親水塑料，其上設(shè)置有用于排氣的小孔111。底板130上設(shè)置有用于血糖測(cè)定的第一工作電極131、用于細(xì)胞壓積測(cè)定的第二 工作電極133、用于與第一工作電極或第二工作電極組成電化學(xué)測(cè)試系統(tǒng)的參比電極135。 其中，底板130由PET、PP、PVC等塑料制成。其中，血糖測(cè)定和細(xì)胞壓積測(cè)定可以共用一個(gè) 參比電極，也可以采用兩個(gè)參比電極供兩種測(cè)定獨(dú)自使用。所有電極的排列順序沒(méi)有特殊 要求。此外，還可以包括觸發(fā)電極136，用于感測(cè)到有被測(cè)樣品存在而啟動(dòng)測(cè)量?jī)x器。第一工作電極131表面固定有血糖檢測(cè)試劑132。血糖檢測(cè)試劑132至少包括一 種與葡萄糖反應(yīng)的酶和一種電子傳遞媒體。酶與葡萄糖反應(yīng)而得到電子并轉(zhuǎn)移給電子傳遞 媒體，電子傳遞媒體在電極表面發(fā)生氧化而產(chǎn)生電流，儀器檢測(cè)所產(chǎn)生的電流并換算出葡 萄糖的濃度。與葡萄糖反應(yīng)的酶可以是葡萄糖氧化酶，也可以是葡萄糖脫氫酶。電子傳遞 媒體可以是鐵氰化鉀、二茂鐵及其衍生物、釕的絡(luò)合物、苯醌類化合物等。第二工作電極133表面固定用于細(xì)胞壓積測(cè)定的反應(yīng)試劑134。該反應(yīng)試劑134 為不溶解的電化學(xué)反應(yīng)物質(zhì)。該物質(zhì)在外加電壓下發(fā)生電化學(xué)氧化或還原而產(chǎn)生電流，所 產(chǎn)生的電流在儀器、工作電極導(dǎo)軌、參比電極導(dǎo)軌和血氧樣品組成的導(dǎo)電回路中傳遞，其中 在血液樣品中的導(dǎo)電是靠電解質(zhì)離子定向遷移來(lái)完成的。電解質(zhì)離子來(lái)自于外加緩沖試 劑或血液自身的鹽分。電解質(zhì)離子在血液樣品中的遷移速度與血液細(xì)胞壓積有關(guān)，細(xì)胞壓 積越高、離子遷移速度越慢，響應(yīng)電流就越小，從而實(shí)現(xiàn)細(xì)胞壓積的檢測(cè)。不溶解的電化學(xué) 反應(yīng)物質(zhì)是指電化學(xué)反應(yīng)前不溶解于或微溶解于緩沖液、血液等以水為溶劑的液體中的物 質(zhì)，但不限制它們?cè)谟袡C(jī)溶劑中的溶解性，也不限制它們電化學(xué)反應(yīng)后在水溶液或血液中 溶解性。這些物質(zhì)可以是銀、銅、鐵、氯化銀、氧化銅、三氧化二鐵等金屬及其化合物的納米 或微米顆粒，也可以是苯胺衍生物、苯酚衍生物、苯醌衍生物等有機(jī)類化合物。雙面膠片120的一側(cè)設(shè)有開槽121，對(duì)應(yīng)于電極反應(yīng)區(qū)域，即暴露第一工作電極 131和第二工作電極132上有試劑的一端，以及參考電極135和觸發(fā)電極136。此外，通過(guò) 該開槽121，雙面膠片120與蓋板110和底板130 —起形成虹吸進(jìn)樣通道。本實(shí)施例中與葡萄糖反應(yīng)的酶也可換成與膽固醇、β-3-羥丁酸、尿酸、乳酸等物 質(zhì)反應(yīng)的酶，從而用于血液中這些物質(zhì)的檢測(cè)。實(shí)施例二本實(shí)施例提供一種電化學(xué)生物傳感器的制備方法。如圖2所示，以制備血糖測(cè)定 試條為例說(shuō)明本發(fā)明的電化學(xué)生物傳感器的制備方法。該方法包括步驟S210 在底板上形成用于血糖測(cè)定的第一工作電極、用于細(xì)胞壓積測(cè)定的第 二工作電極、用于與第一工作電極或第二工作電極組成電化學(xué)測(cè)試系統(tǒng)的參比電極。所有電極可以采用絲網(wǎng)印刷技術(shù)或磁控濺射技術(shù)進(jìn)行制備。采用絲網(wǎng)印刷技術(shù)制 備時(shí)，印刷材料為導(dǎo)電碳油墨、導(dǎo)電銀油墨或其他任何一種導(dǎo)電油墨；采用磁控濺射技術(shù)制 備時(shí)，濺射材料可以是金、鈀、鎳等金屬。
步驟S220 在第一工作電極上固定血糖檢測(cè)試劑；血糖檢測(cè)試劑至少包括一種與葡萄糖反應(yīng)的酶和一種電子傳遞媒體。與葡萄糖反 應(yīng)的酶可以是葡萄糖氧化酶，也可以是葡萄糖脫氫酶。與葡萄糖反應(yīng)的酶也可換成與膽固 醇、β-3-羥丁酸、尿酸、乳酸等物質(zhì)反應(yīng)的酶，從而用于血液中這些物質(zhì)的檢測(cè)。電子傳遞 媒體可以是鐵氰化鉀、二茂鐵及其衍生物、釕的絡(luò)合物、苯醌類化合物等。固定的方法可以 是吸附法、交聯(lián)法、溶膠_凝膠法、粘合劑法等。吸附法固定酶只需要將酶液直接滴加在第 一工作電極表面上，酶的疏水基團(tuán)與疏水的電極表面經(jīng)范德華力而吸附。交聯(lián)法固定酶可 以在酶液中加入戊二醛等交聯(lián)試劑。溶膠_凝膠法固定酶可以將酶溶入二氧化硅水溶膠、 二氧化鈦水溶膠、 明膠等試劑中，在第一工作電極表面干燥后形成凝膠。粘合劑法固定酶可 以將酶與粘合劑及其他輔料配成可印刷的漿料，絲網(wǎng)印刷在電極表面。電子傳遞媒體可以 與酶一起滴加或印刷在第一工作電極的表面上。步驟S230 在第二工作電極上固定用于細(xì)胞壓積測(cè)定的反應(yīng)試劑；不溶解的電化學(xué)反應(yīng)物質(zhì)是指電化學(xué)反應(yīng)前不溶解于或微溶解于緩沖液、血液等 以水為溶劑的液體中的物質(zhì)，但不限制它們?cè)谟袡C(jī)溶劑中的溶解性，也不限制它們電化學(xué) 反應(yīng)后在水溶液或血液中溶解性。這些物質(zhì)可以是銀、銅、鐵、氯化銀、氧化銅、三氧化二鐵 等金屬及其化合物的納米或微米顆粒，也可以是苯胺衍生物、苯酚衍生物、苯醌衍生物等有 機(jī)類化合物。固定方法具體為，將不溶解電化學(xué)反應(yīng)物質(zhì)的顆粒與粘合劑、有機(jī)溶劑及其他 輔助試劑配制成可印刷的油墨，絲網(wǎng)印刷在第二工作電極表面，或者將它們?nèi)芙庠谟袡C(jī)溶 劑中直接滴加在電極表面。不溶解的電化學(xué)反應(yīng)物質(zhì)還可以直接是磁控濺射的金、銀、銅等 電極導(dǎo)軌。步驟S240 用雙面膠片粘合蓋板和底板，形成虹吸進(jìn)樣通道。在雙面膠片上開設(shè)開槽121，對(duì)應(yīng)于電極反應(yīng)區(qū)域，即暴露第一工作電極和第二工 作電極上有試劑的一端，以及參考電極和觸發(fā)電極。蓋板由親水材料制成，如親水塑料，其 上設(shè)置有用于排氣的小孔。實(shí)施例三本實(shí)施例提供一血糖測(cè)定試條的制備實(shí)例，從而說(shuō)明本發(fā)明的電化學(xué)生物傳感器 及其制備方法，以及利用該電化學(xué)生物傳感器對(duì)被測(cè)物測(cè)定值進(jìn)行細(xì)胞壓積校正的方法。采用絲網(wǎng)印刷技術(shù)在0. 25mm厚PET塑料底板上制作觸發(fā)電極、第一工作電極、參 比電極和第二工作電極。觸發(fā)電極、第一工作電極和第二工作電極采用從AcheS0n(日本) 公司購(gòu)買的導(dǎo)電碳油墨制作。參比電極采用從Acheson(日本)公司購(gòu)買的銀/氯化銀油 墨制作。在第一工作電極表面固定反應(yīng)試劑1用于葡萄糖的檢測(cè)。滴加2 μ L含1000U/ml 葡萄糖氧化酶、2. 5%戊二醛、羧基二茂鐵試劑于工作電極1表面，50°C烘干。在第二工作電極表面固定反應(yīng)試劑2用于細(xì)胞壓積的測(cè)定。取IOOml松油醇，力口 入2g羥乙基纖維素，加熱至80°C使羥乙基纖維素完全溶解，加入Ig亞微米級(jí)金粉末，充分 攪拌后印刷在工作電極2表面，烘干待用。 固定反應(yīng)試劑1和反應(yīng)試劑2后，用雙面膠片將親水蓋片和PET底板粘合，雙面膠 片上設(shè)有開槽，對(duì)應(yīng)于電極反應(yīng)區(qū)域，即暴露第一工作電極和第二工作電極上有試劑的一 端，以及參考電極和觸發(fā)電極。PET底板、雙面膠片和蓋片組成虹吸進(jìn)樣通道。
將以上方法構(gòu)建的傳感器試條與檢測(cè)儀器聯(lián)接。加樣后，檢測(cè)儀器分別向工作電 極1與參比電極組成的測(cè)定系統(tǒng)、工作電極2與參比電極組成的測(cè)定系統(tǒng)施加工作電壓，兩 個(gè)系統(tǒng)獨(dú)自進(jìn)行檢測(cè)。用第二工作電極上測(cè)定的細(xì)胞壓積值對(duì)第一工作電極上的被測(cè)物測(cè) 定值進(jìn)行校正；當(dāng)被測(cè)樣品細(xì)胞壓積偏高時(shí)，給予被測(cè)物測(cè)定值正補(bǔ)償；當(dāng)被測(cè)樣品細(xì)胞 壓積偏低時(shí)，給予被測(cè)物測(cè)定值負(fù)補(bǔ)償。圖3是細(xì)胞壓積測(cè)定結(jié)果示意圖。如圖3所示，當(dāng)血液的細(xì)胞壓積為20% 70% 時(shí)，響應(yīng)電流與細(xì)胞壓積有良好的線性關(guān)系，R2 = 0. 9936。圖4是細(xì)胞壓積測(cè)定值對(duì)血糖測(cè)定值的校正結(jié)果示意圖。如圖4所示，細(xì)胞壓積 校正前，細(xì)胞壓積低時(shí)血糖測(cè)定值高于YSI標(biāo)定值，細(xì)胞壓積高時(shí)血糖測(cè)定值低于YSI標(biāo)定 值。為此，儀器對(duì)細(xì)胞壓積偏低樣品的血糖值給予負(fù)補(bǔ)償，對(duì)細(xì)胞壓積偏高樣品的血糖值給 予正補(bǔ)償。細(xì)胞壓積校正后，血糖測(cè)定值在各細(xì)胞壓積范圍均與YIS標(biāo)定值良好吻合。以上所述的具體實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和有益效果進(jìn)行了進(jìn)一步詳 細(xì)說(shuō)明，所應(yīng)理解的是，以上所述僅為本發(fā)明的具體實(shí)施例而已，并不用于限定本發(fā)明的保 護(hù)范圍，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所做的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本 發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
一種電化學(xué)生物傳感器，該傳感器至少包括蓋板，雙面膠片和底板，所述雙面膠片設(shè)置在蓋板和底板之間并將兩者粘合起來(lái)，其特征在于所述底板上設(shè)置有第一工作電極、第二工作電極和參比電極，所述第一工作電極上固定有與被測(cè)物質(zhì)反應(yīng)的生物試劑，所述第二工作電極上固定有不溶解的電化學(xué)反應(yīng)物質(zhì)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的電化學(xué)生物傳感器，其特征在于所述與被測(cè)物質(zhì)反應(yīng)的生 物試劑包括與被測(cè)物質(zhì)反應(yīng)的酶和一種電子傳遞媒體。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的電化學(xué)生物傳感器，其特征在于所述與被測(cè)物質(zhì)反應(yīng)的酶 為與葡萄糖、膽固醇、β-3-羥丁酸、尿酸或乳酸反應(yīng)的酶；所述電子傳遞媒體為鐵氰化鉀、 二茂鐵及其衍生物、釕的絡(luò)合物或苯醌類化合物。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的電化學(xué)生物傳感器，其特征在于所述不溶解的電化學(xué)反應(yīng) 物質(zhì)是銀、銅、鐵、氯化銀、氧化銅、三氧化二鐵或其化合物的納米或微米顆粒，或者是苯胺 衍生物、苯酚衍生物或苯醌衍生物。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的電化學(xué)生物傳感器，其特征在于所述雙面膠片的一側(cè)設(shè)有 開槽，暴露所述第一工作電極和第二工作電極上有試劑的一端，以及參考電極，且在與所述 蓋板和底板130之間形成虹吸進(jìn)樣通道。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的電化學(xué)生物傳感器，其特征在于所述底板上設(shè)置有觸發(fā)電 極，用于啟動(dòng)測(cè)量?jī)x器。
7.一種電化學(xué)生物傳感器的制備方法，其特征在于，該方法包括形成用于血糖測(cè)定的第一工作電極、用于細(xì)胞壓積測(cè)定的第二工作電極、用于與第一 工作電極或第二工作電極組成電化學(xué)測(cè)試系統(tǒng)的參比電極；在第一工作電極上固定與被測(cè)物質(zhì)反應(yīng)的試劑；在第二工作電極上固定不溶解的電化學(xué)反應(yīng)物質(zhì)；以及用雙面膠片粘合蓋板和底板， 形成虹吸進(jìn)樣通道。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于通過(guò)絲網(wǎng)印刷技術(shù)或磁控濺射技術(shù)在底 板上形成所述電極。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于通過(guò)吸附法、交聯(lián)法、溶膠-凝膠法或粘 合劑法將與被測(cè)物質(zhì)反應(yīng)的試劑固定到所述第一工作電極上。
10.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于通過(guò)絲網(wǎng)印刷或滴定干燥方法將不溶解 的電化學(xué)反應(yīng)物質(zhì)固定到所述第二工作電極上。
11.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于所述與被測(cè)物質(zhì)反應(yīng)的試劑包括與被測(cè) 物質(zhì)反應(yīng)的酶和一種電子傳遞媒體。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其特征在于所述與被測(cè)物質(zhì)反應(yīng)的酶為與葡萄糖、 膽固醇、β-3-羥丁酸、尿酸或乳酸反應(yīng)的酶；所述電子傳遞媒體為鐵氰化鉀、二茂鐵及其 衍生物、釕的絡(luò)合物或苯醌類化合物。
13.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其特征在于所述不溶解的電化學(xué)反應(yīng)物質(zhì)是銀、 銅、鐵、氯化銀、氧化銅、三氧化二鐵或其化合物的納米或微米顆粒，或者是苯胺衍生物、苯 酚衍生物或苯醌衍生物。
14.一種利用如權(quán)利要求1所述的電化學(xué)生物傳感器對(duì)被測(cè)物測(cè)定值進(jìn)行細(xì)胞壓積校 正的方法，其特征在于，該方法包括用第二工作電極上測(cè)定的細(xì)胞壓積值對(duì)第一工作電極上的被測(cè)物測(cè)定值進(jìn)行校正；被 測(cè)樣品細(xì)胞壓積偏高時(shí)，給予被測(cè)物測(cè)定值正補(bǔ)償；被測(cè)樣品細(xì)胞壓積偏低時(shí)，給予被測(cè)物 測(cè)定值負(fù)補(bǔ)償。
全文摘要
本發(fā)明提供一種電化學(xué)生物傳感器，該傳感器至少包括蓋板，雙面膠片和底板，所述雙面膠片設(shè)置在蓋板和底板之間并將兩者粘合起來(lái)，所述底板上設(shè)置有第一工作電極、第二工作電極和參比電極，所述第一工作電極上固定有與被測(cè)物質(zhì)反應(yīng)的生物試劑，所述第二工作電極上固定有不溶解的電化學(xué)反應(yīng)物質(zhì)。本發(fā)明能同時(shí)分別測(cè)定物質(zhì)含量和細(xì)胞壓積，并用細(xì)胞壓積測(cè)定值對(duì)物質(zhì)含量測(cè)定值進(jìn)行校正，以保證物質(zhì)含量測(cè)定結(jié)果不受細(xì)胞壓積的影響。
文檔編號(hào)G01N27/327GK101943673SQ20091008866
公開日2011年1月12日 申請(qǐng)日期2009年7月7日 優(yōu)先權(quán)日2009年7月7日
發(fā)明者付鐵英, 何偉, 李元光, 李獻(xiàn)紅 申請(qǐng)人:北京怡成生物電子技術(shù)有限公司