專利名稱：：降糖中成藥中非法添加格列齊特的檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種中成藥中非法添加化學(xué)藥物的檢測(cè)方法，更具體地說(shuō)，本發(fā)明涉及一種降糖中成藥中非法添加降糖化學(xué)藥物的檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
：降糖中成藥一般含人參、黃芪等中藥而不含降糖西藥，但有的降糖中成藥中非法添加了磺酰脲類西藥，如格列齊特，患者在不知情之下服用了添加有降糖西藥的降糖中成藥后，增大了副作用和風(fēng)險(xiǎn)性。目前，降糖中成藥中所含的降糖西藥通常采用薄層色譜法或高效液相色譜法進(jìn)行檢測(cè)，但這些方法需要額外的儀器設(shè)備，而且耗時(shí)長(zhǎng)(薄層色譜法需時(shí)12小時(shí)，高效液相色譜法需時(shí)34小時(shí))，因此在現(xiàn)場(chǎng)監(jiān)督檢查時(shí)并不適用。為此，建立一種快速、簡(jiǎn)單、靈敏、可靠、特異性強(qiáng)的降糖中成藥中非法添加降糖化學(xué)藥物的檢測(cè)方法，具有十分重要的社會(huì)意義。本發(fā)明利用磺酰脲類降糖西藥——格列齊特的理化性質(zhì)，建立了一種全新的降糖中成藥中所含格列齊特的檢測(cè)方法，具有快速、簡(jiǎn)單以及特異性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，克服了上述色譜法的各種缺陷。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種降糖中成藥中非法添加格列齊特的檢測(cè)方法。本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的一種降糖中成藥中非法添加格列齊特的檢測(cè)方法，包括以下步驟1)待測(cè)樣品的處理；2)經(jīng)處理的待測(cè)樣品用有機(jī)溶劑進(jìn)行提取，得到待測(cè)樣品的提取液；3)所得到的提取液中加入堿溶液進(jìn)行萃取，取堿溶液層萃取液作為供試品溶液；4)取部分供試品溶液，滴入三硝基苯酚飽和水溶液，進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)I;5)另取部分供試品溶液，滴入碘化汞鉀試液，進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)II;6)檢測(cè)結(jié)果的判斷化學(xué)反應(yīng)I和n均產(chǎn)生沉淀或渾濁，則判斷為待測(cè)樣品中含有格列齊特。步驟1)所得到的經(jīng)處理的待測(cè)樣品用有機(jī)溶劑進(jìn)行提取前，先滴入少量堿溶液。3本發(fā)明所述的有機(jī)溶劑為與水不相互溶并且對(duì)格列齊特具有良好溶解性的有機(jī)溶劑，包括三氯甲垸、二氯甲烷、環(huán)己烷等，其中優(yōu)選的是三氯甲烷。本發(fā)明所述的堿溶液選自NaOH溶液或KOH溶液。所述堿溶液的濃度為0.14mol/L0.18mol/L，其中優(yōu)選的是0.15mol/L。步驟1)所述的待測(cè)樣品的處理包括以下方法-片劑壓碎，取粉末；丸劑搗碎，取粉末；膠囊劑直接取內(nèi)容物；顆粒劑研細(xì)，取粉末。步驟2)所得到的提取液在加入堿溶液進(jìn)行萃取前，先用孔徑為0.45pm的有機(jī)系微孔濾膜進(jìn)行過(guò)濾。在步驟3)中加入堿溶液進(jìn)行萃取時(shí)，堿溶液與有機(jī)溶劑的體積比為l:1。步驟3)所得到的供試品溶液在進(jìn)行步驟4)和步驟5)所述的化學(xué)反應(yīng)前，先用孔徑為0.45pm的有機(jī)系微孔濾膜進(jìn)行過(guò)濾。在步驟4)中，供試品溶液與三硝基苯酚飽和水溶液的體積比為l:1.251:3，其中優(yōu)選的是l:21:3。在步驟5)中，供試品溶液與碘化汞鉀試液的體積比為l:0.31:1，其中優(yōu)選的是l:0.6。由于中成藥中含有大量色素，其成分多為水溶或醇溶，用水提、醇提均有色素干擾，而本發(fā)明優(yōu)選三氯甲垸進(jìn)行提取，既能有效地提取出格列齊特，又能除去大量色素的干擾。此外，由于多數(shù)降糖中成藥都含有地黃等粘性成分，直接用三氯甲烷進(jìn)行提取，提取液難以與藥粉分離，但滴入少量堿溶液可使提取液易于與藥粉分離?；酋ｋ孱惤堤俏魉帲绺窳旋R特、格列本脲、格列喹酮、格列吡嗪、格列美脲、甲苯磺丁脲等，由于分子中含有脲的結(jié)構(gòu)，可與三硝基苯酚反應(yīng)，形成黃色混濁或沉淀，而其它非磺酰脲類降糖西藥，如鹽酸二甲雙胍、鹽酸苯乙雙胍、鹽酸吡格列酮、鹽酸羅格列酮、瑞格列奈、羅格列酮、馬來(lái)酸羅格列酮等，并不能與三硝基苯酚試劑反應(yīng)形成混濁或沉淀。因此，當(dāng)步驟4)所述的化學(xué)反應(yīng)I產(chǎn)生黃色沉淀或渾濁時(shí)，即可判斷待測(cè)樣品中含有磺酰脲類降糖西藥。再者，由于格列齊特為含N雜環(huán)化合物，可與碘化汞鉀反應(yīng)，產(chǎn)生白色混濁或沉淀，而其它常見的磺酰脲類降糖西藥，如格列本脲、格列喹酮、格列吡嗪、格列美脲、甲苯磺丁脲等，均不能與碘化汞鉀反應(yīng)形成混濁或沉淀。因此，當(dāng)步驟5)所述的化學(xué)反應(yīng)II產(chǎn)生白色沉淀或渾濁時(shí)，即可進(jìn)一步判斷待測(cè)樣品中含有格列齊特。本發(fā)明所述的降糖中成藥中非法添加格列齊特的檢測(cè)方法既能有效地提取出格列齊特，又能除去大量色素的干擾；既形成了有顏色的沉淀反應(yīng)，又可在短時(shí)間內(nèi)完成，符合"快檢法"的要求，可作為現(xiàn)場(chǎng)監(jiān)督檢査時(shí)使用。此外，本發(fā)明采用了兩個(gè)特異性強(qiáng)的化學(xué)反應(yīng)作為檢測(cè)手段，具有靈敏、可靠等優(yōu)點(diǎn)。另外，《中國(guó)藥典》2005年版第二部第595頁(yè)"格列齊特"項(xiàng)下的鑒別方法是將格列齊特溶解于吡啶中，再滴加CuS04試液，使形成絡(luò)合物產(chǎn)生藍(lán)紫色。但該鑒別方法存在兩個(gè)缺點(diǎn)1、吡啶有特殊的嗅氣，污染實(shí)驗(yàn)室空間使實(shí)驗(yàn)人員難以承受；2、篩選性不強(qiáng)，格列本脲、格列喹酮、格列吡嗪、格列美脲、甲苯磺丁脲等也可與CuS04試液產(chǎn)生藍(lán)紫色。本發(fā)明所述的檢測(cè)方法同樣可以用于格列齊特的常規(guī)鑒別將格列齊特溶解于0.15mol/LNaOH溶液中，分別滴入三硝基苯酚飽和水溶液和碘化汞鉀試液，兩者均產(chǎn)生沉淀或渾濁即可鑒別為格列齊特。這一方法能夠克服目前的鑒別方法的缺陷，有利于完善《中國(guó)藥典》載錄的鑒別方法。具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。試驗(yàn)~":取下述表1中樣品編號(hào)為112的降糖西藥各一片，壓成粉末后分別置10m該ij度試管中，各加入2ml0.15mol/L的NaOH溶液。振搖或超聲處理10分鐘，然后靜置5分鐘，必要時(shí)可進(jìn)行離心。分別用注射器吸取上清液，然后用0.45pm的有機(jī)系微孔濾膜進(jìn)行過(guò)濾。各取0.8ml濾液，分別滴入lml三硝基苯酚飽和水溶液，進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)I。試驗(yàn)結(jié)果顯示表1中樣品編號(hào)為16的藥品均產(chǎn)生明顯的黃色沉淀，樣品編號(hào)為712的藥品均未產(chǎn)生任何沉淀。這是因?yàn)楸?中樣品編號(hào)為16的藥品屬于磺酰脲類藥物，可與三硝基苯酚反應(yīng)形成黃色沉淀，而樣品編號(hào)為712的藥品均不屬于磺酰脲類藥物，所以不會(huì)產(chǎn)生任何沉淀。取0.15mol/LNaOH溶液2ml，置試管中，然后滴入lml三硝基苯酚飽和水溶液，未產(chǎn)生任何沉淀，說(shuō)明試劑本身對(duì)試驗(yàn)無(wú)干擾。試驗(yàn)二取下述表1中樣品編號(hào)為16的降糖西藥各一片，壓成粉末后分別置10m該lj度試管中，各加入2ml0.15mol/L的NaOH溶液。振搖或超聲處理10分鐘，然后靜置5分鐘，必要時(shí)可進(jìn)行離心。分別用注射器吸取上清液，然后用0.45tim的有機(jī)系微孔濾膜進(jìn)行過(guò)濾。各取0.8ml濾液，分別滴入0.4ml碘化汞鉀試液，進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)II。試驗(yàn)結(jié)果顯示表l中樣品編號(hào)為l的藥品(格列齊特片)產(chǎn)生明顯的白色沉淀，樣品編號(hào)為26的藥品均未產(chǎn)生任何沉淀。這是因?yàn)楦窳旋R特是含N雜環(huán)化合物，可與碘化汞鉀反應(yīng)形成白色沉淀。取0.15mol/LNaOH溶液2ml，置試管中，然后滴入0.4ml碘化汞鉀試液，未產(chǎn)生任何沉淀，說(shuō)明試劑本身對(duì)試驗(yàn)無(wú)干擾。表1降糖西藥樣品<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>試驗(yàn)三分別取下述表2中樣品編號(hào)為116的降糖中成藥，按以下方法進(jìn)行處理片劑取l片(0.3g0.5g)，除去包衣，壓碎，取粉末；丸劑取0.5g，搗碎，取粉末；膠囊劑取l粒(0.3g0.5g)，除去囊殼，直接取內(nèi)容物；顆粒劑取0.5g，研細(xì)，取粉末；將經(jīng)過(guò)處理的待測(cè)樣品分別置于10ml具塞刻度試管中，各滴入l滴0.15mol/L的NaOH溶液，再加入6ml三氯甲烷。塞緊試管塞，用力振搖或超聲處理10分鐘，然后靜置35分鐘。分別用注射器吸取4ml提取液，經(jīng)0.45pm的有機(jī)系微孔濾膜過(guò)濾后，分別置于另一支10ml具塞刻度試管中，各加入4ml0.15mol/L的NaOH溶液，振搖35次，靜置5分鐘。分別用注射器吸取上層的NaOH溶液層萃取液，然后用0.45Mm的有機(jī)系微孔濾膜進(jìn)行過(guò)濾，所得濾液作為供試品溶液。分別取上述的供試品溶液1.6ml，平均分置于兩支試管中，每支試管0.8ml。在其中一支試管中滴入1.5ml2ml三硝基苯酚飽和水溶液，進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)I。若未產(chǎn)生渾濁或沉淀，則可判斷樣品中不含磺酰脲類降糖西藥；若產(chǎn)生明顯的黃色渾濁或沉淀，則可判斷樣品中含有磺酰脲類降糖西藥。在另一支試管中滴入0.5ml碘化汞鉀試液，進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)II，滴入過(guò)程和滴完后不能振搖試管。若未產(chǎn)生渾濁或沉淀，則可判斷樣品中不含格列齊特；若產(chǎn)生明顯的白色渾濁或沉淀，則可判斷樣品中含有格列齊特。試驗(yàn)結(jié)果顯示表2中樣品編號(hào)為116的藥品在化學(xué)反應(yīng)I和II中均未產(chǎn)生任何沉淀，說(shuō)明陰性反應(yīng)均呈陰性，無(wú)假陰性。試驗(yàn)四分別取下述表2中樣品編號(hào)為116的降糖中成藥，人為添加40mg的格列齊特片(北京京豐制藥有限公司生產(chǎn)，規(guī)程為80mg/片，批號(hào)為080302)，然后按照試驗(yàn)三所述的方法對(duì)樣品進(jìn)行處理。將經(jīng)過(guò)處理的待測(cè)樣品分別置于10ml具塞刻度試管中，各滴入l滴0.15mol/L的NaOH溶液，再加入6ml三氯甲烷。塞緊試管塞，用力振搖或超聲處理10分鐘，然后靜置35分鐘。分別用注射器吸取4ml提取液，經(jīng)0.45pm的有機(jī)系微孔濾膜過(guò)濾后，分別置于另一支10ml具塞刻度試管中，各加入4ml0.15mol/L的NaOH溶液，振搖35次，靜置5分鐘。分別用注射器吸取上層的NaOH溶液層萃取液，然后用0.45pm的有機(jī)系微孔濾膜進(jìn)行過(guò)濾，所得濾液作為供試品溶液。分別取上述的供試品溶液1.6ml，平均分置于兩支試管中，每支試管0.8ml。在其中一支試管中滴入1.5ml2ml三硝基苯酚飽和水溶液，進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)I。若未產(chǎn)生渾濁或沉淀，則可判斷樣品中不含磺酰脲類降糖西藥；若產(chǎn)生明顯的黃色渾濁或沉淀，則可判斷樣品中含有磺酰脲類降糖西藥。在另一支試管中滴入0.5ml碘化汞鉀試液，進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)II,滴入過(guò)程和滴完后不能振搖試管。若未產(chǎn)生渾濁或沉淀，則可判斷樣品中不含格列齊特；若產(chǎn)生明顯的白色渾濁或沉淀，則可判斷樣品中含有格列齊特。試驗(yàn)結(jié)果顯示表2中樣品編號(hào)為116的藥品在化學(xué)反應(yīng)I中均產(chǎn)生明顯的黃色沉淀，而且在化學(xué)反應(yīng)II中均產(chǎn)生明顯的白色沉淀，說(shuō)明陽(yáng)性反應(yīng)均呈陽(yáng)性，無(wú)假陽(yáng)性。7表2降糖中成藥樣品<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>試驗(yàn)結(jié)果的統(tǒng)計(jì)對(duì)上述試驗(yàn)一至四的試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，如下表3<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>靈敏度(Se):Se=A/(A+C)X100%=16+16X100%=100%特異度(Sp):Sp=D/(B+D)X100%=16+16X100%=100%漏檢率(OT):OT=C/(A+C)X100°/。=0+16X100°/o=0誤檢率(MT):MT=B/(B+D)X100%=0+16X100%=0正確率(AR):AR=(A+D)/(A+B+C+D)X100%=32+32X100%=100%正確指數(shù)(AI):AI=l—MT-OT=1—0-0=1最低檢測(cè)限取表2中的任一樣品，分別添加2mg、4mg、6mg、8mg和10mg的格列齊特(素片)，按照試驗(yàn)四所述的方法進(jìn)行試驗(yàn)。結(jié)果顯示格列齊特的添加量為6mg時(shí)，化學(xué)反應(yīng)I和化學(xué)反應(yīng)II剛好能產(chǎn)生渾濁。因此，本發(fā)明所述檢測(cè)方法的最低檢測(cè)限為每毫升的堿溶液含0.80mg格列齊特。權(quán)利要求1、一種降糖中成藥中非法添加格列齊特的檢測(cè)方法，包括以下步驟1)待測(cè)樣品的處理；2)經(jīng)處理的待測(cè)樣品用有機(jī)溶劑進(jìn)行提取，得到待測(cè)樣品的提取液；3)所得到的提取液中加入堿溶液進(jìn)行萃取，取堿溶液層萃取液作為供試品溶液；4)取部分供試品溶液，滴入三硝基苯酚飽和水溶液，進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)I；5)另取部分供試品溶液，滴入碘化汞鉀試液，進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)II；6)檢測(cè)結(jié)果的判斷化學(xué)反應(yīng)I和II均產(chǎn)生沉淀或渾濁，則判斷為待測(cè)樣品中含有格列齊特。2、根據(jù)權(quán)利要求l所述的檢測(cè)方法，其特征在于步驟1)所得到的經(jīng)處理的待測(cè)樣品用有機(jī)溶劑進(jìn)行提取前，先滴入堿溶液。3、根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的檢測(cè)方法，其特征在于所述的有機(jī)溶劑為與水不相互溶并且對(duì)格列齊特具有良好溶解性的有機(jī)溶劑。4、根據(jù)權(quán)利要求3所述的檢測(cè)方法，其特征在于所述的有機(jī)溶劑選自三氯甲垸、二氯甲烷或環(huán)己烷。5、根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的檢測(cè)方法，其特征在于所述的堿溶液選自NaOH溶液或KOH溶液。6、根據(jù)權(quán)利要求5所述的檢測(cè)方法，其特征在于所述堿溶液的濃度為0.14mol/L0.18mol/L。7、根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的檢測(cè)方法，其特征在于步驟2)所得到的提取液在加入堿溶液進(jìn)行萃取前，先用孔徑為0.45pm的有機(jī)系微孔濾膜進(jìn)行過(guò)濾；在步驟3)中加入堿溶液進(jìn)行萃取時(shí)，堿溶液與有機(jī)溶劑的體積比為l:1。8、根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的檢測(cè)方法，其特征在于步驟3)所得到的供試品溶液在進(jìn)行步驟4)和步驟5)所述的化學(xué)反應(yīng)前，先用孔徑為0.45pm的有機(jī)系微孔濾膜進(jìn)行過(guò)濾。9、根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的檢測(cè)方法，其特征在于在步驟4)中，供試品溶液與三硝基苯酚飽和水溶液的體積比為l:1.251:3。10、根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的檢測(cè)方法，其特征在于在步驟5)中，供試品溶液與碘化汞鉀試液的體積比為l:0.31:1。全文摘要本發(fā)明公開了一種降糖中成藥中非法添加格列齊特的檢測(cè)方法，該方法包括以下步驟1)待測(cè)樣品的處理；2)經(jīng)處理的待測(cè)樣品用有機(jī)溶劑進(jìn)行提取，得到待測(cè)樣品的提取液；3)所得到的提取液中加入堿溶液進(jìn)行萃取，取堿溶液層萃取液作為供試品溶液；4)取部分供試品溶液，滴入三硝基苯酚飽和水溶液，進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)I；5)另取部分供試品溶液，滴入碘化汞鉀試液，進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)II；6)檢測(cè)結(jié)果的判斷化學(xué)反應(yīng)I和II均產(chǎn)生沉淀或渾濁，則判斷為待測(cè)樣品中含有格列齊特。該方法具有快速、簡(jiǎn)單、靈敏、可靠以及特異性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，可作為現(xiàn)場(chǎng)監(jiān)督檢查時(shí)使用。文檔編號(hào)G01N31/02GK101581710SQ20091004012公開日2009年11月18日申請(qǐng)日期2009年6月10日優(yōu)先權(quán)日2009年6月10日發(fā)明者黃文峰申請(qǐng)人:黃文峰