專(zhuān)利名稱(chēng):一種治療婦科疾病藥物的質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域:
本發(fā)明涉及一種治療婦科疾病藥物的質(zhì)量控制方法,具體涉及婦炎康復(fù)制劑質(zhì)量控制方法。
背景技術(shù):
婦炎康復(fù)制劑原料是由中藥材敗醬草、薏苡仁、川楝子、柴胡、黃芩、赤芍和陳皮組成,為了有效地控制產(chǎn)品質(zhì)量,我們建立了質(zhì)量控制方法,該方法采用照薄層色譜法對(duì)陳皮、黃芩、柴胡、赤芍、薏苡仁、川楝子、敗醬草進(jìn)行鑒別,并照高效液相色譜法以芍藥苷、黃芩苷和橙皮苷為指標(biāo)進(jìn)行含量測(cè)定,該質(zhì)量控制方法保證了藥物質(zhì)量檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)的準(zhǔn)確性和先進(jìn)性,能夠有效確保藥物的質(zhì)量,使該制劑在工業(yè)化大生產(chǎn)中質(zhì)量得以有效控制。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于公開(kāi)一種治療婦科疾病藥物的質(zhì)量控制方法,特別涉及婦炎康復(fù)制劑的質(zhì)量控制方法。
本發(fā)明的質(zhì)量控制方法包括以下鑒別和/或含量測(cè)定方法。
鑒別方法包括以下方法的一種或幾種 ①.取婦炎康復(fù)制劑內(nèi)容物3.8g,加甲醇25~75ml,超聲處理20~40分鐘,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)铀?~15ml使溶解,用乙醚10~30ml提取,棄去乙醚液,水層用正丁醇10~30ml提取,分取正丁醇液,用無(wú)水硫酸鈉脫水,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)状?ml使溶解,作為供試品溶液;另取陳皮對(duì)照藥材1g,加甲醇5~15ml,超聲處理20~40分鐘,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)蛹状?ml使溶解,作為對(duì)照藥材溶液;再取橙皮苷對(duì)照品,加無(wú)水乙醇制成每1ml含1mg的溶液,作為對(duì)照品溶液;照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn);吸取上述三種溶液各5μl,分別點(diǎn)于同一用0.5%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上,以乙酸乙酯-甲醇-水(85~115∶7~27∶3~23)為展開(kāi)劑,展至約8cm,取出,晾干,再以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水(15~25∶5~15∶0.5~1.5∶0.5~1.5)的上層溶液為展開(kāi)劑,展至約12cm,取出,晾干,噴以三氯化鋁試液,置紫外光燈(365nm)下檢視;供試品色譜中,在與對(duì)照藥材及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
②.取婦炎康復(fù)制劑內(nèi)容物3.8g,加乙醚25~75ml,加熱回流0.5~1.5小時(shí),濾過(guò),藥渣揮干,加甲醇20~40ml,超聲處理20~40分鐘,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)铀m量使溶解,加于已處理好的D101型大孔吸附樹(shù)脂(內(nèi)徑1.5cm,填充高度12cm)上,用水25~75ml洗脫,棄去水液,再用70%乙醇25~75ml洗脫,收集洗脫液,蒸干,殘?jiān)蛹状?ml使溶解,濾過(guò),濾液作為供試品溶液;另取黃芩對(duì)照藥材1g,加甲醇5~15ml,超聲處理20~40分鐘,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)蛹状?ml使溶解,作為對(duì)照藥材溶液;再取黃芩苷對(duì)照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作為對(duì)照品溶液;照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn);吸取上述三種溶液各5μl,分別點(diǎn)于同一用0.5%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上,以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(4~6∶2~4∶0.5~1.5∶0.5~1.5)為展開(kāi)劑,展開(kāi),取出,晾干,噴以4%三氯化鐵乙醇溶液;供試品色譜中,在與對(duì)照藥材及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn)。
③.取婦炎康復(fù)制劑內(nèi)容物3.8g,加石油醚(60~90℃)20~40ml,超聲處理20~40分鐘,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)邮兔?60~90℃)1ml使溶解,作為供試品溶液;另取薏苡仁對(duì)照藥材1g,同法制成對(duì)照藥材溶液;照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn),吸取上述兩種溶液各10μl,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以石油醚(60~90℃)-乙酸乙酯-醋酸(9~11∶2~4∶0.05~0.15)為展開(kāi)劑,展開(kāi),取出,晾干,置紫外光燈(365nm)下檢視;供試品色譜中,在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
④.取婦炎康復(fù)制劑內(nèi)容物3.8g,加乙醇20~40ml,超聲處理20~40分鐘,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)右掖?ml使溶解,作為供試品溶液;另取川楝子對(duì)照藥材1g,同法制成對(duì)照藥材溶液;照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn),吸取上述兩種溶液各10μl,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以甲苯-丙酮(8.5~9.5∶0.1~2.0)為展開(kāi)劑,展開(kāi),取出,晾干,置碘蒸汽中熏至斑點(diǎn)顯色清晰;供試品色譜中,在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn)。
⑤.取婦炎康復(fù)制劑內(nèi)容物5g,加乙醇25~75ml、濃氨試液0.5~1.5ml,超聲處理20~40分鐘,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)铀?~15ml水浴上加熱使溶解,加于已處理好的D101型大孔吸附樹(shù)脂(內(nèi)徑1.5cm,填充高度8cm)上,用水75~125ml洗脫,棄去洗脫液,再用40%乙醇75~125ml洗脫,棄去洗脫液,最后用70%乙醇75~125ml洗脫,收集洗脫液,蒸干,殘?jiān)右掖?ml使溶解,作為供試品溶液;另取柴胡對(duì)照藥材2g,加水10~30ml,加熱回流30~50分鐘,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)右掖?ml使溶解,作為對(duì)照藥材溶液;照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn),吸取上述供試品溶液10μl、對(duì)照藥材溶液5μl,分別點(diǎn)于同一用硅膠G薄層板上,以乙酸乙酯-乙醇-水(7~9∶1~3∶0.5~1.5)為展開(kāi)劑,展開(kāi),取出,晾干,噴以2%對(duì)二甲氨基苯甲醛的40%硫酸乙醇溶液,在60℃加熱至斑點(diǎn)清晰,置日光及紫外光燈(365nm)下檢視;供試品色譜中,在與對(duì)照藥材及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn)或熒光斑點(diǎn)。
⑥.取婦炎康復(fù)制劑內(nèi)容物3.8g,加甲醇20~40ml,超聲處理20~40分鐘,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)铀?0~20ml使溶解,用水飽和正丁醇提取1~3次,每次10~30ml,合并正丁醇液,再用正丁醇飽和的水洗滌1~3次,每次10~30ml,棄去水液,正丁醇液蒸干,殘?jiān)蛹状?ml使溶解,作為供試品溶液;另取赤芍對(duì)照藥材1g,加甲醇5~15ml,超聲處理20~40分鐘,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)蛹状?ml使溶解,作為對(duì)照藥材溶液;再取芍藥苷對(duì)照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作為對(duì)照品溶液;照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn),吸取上述三種溶液各4μl,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(39~41∶4~6∶9~11∶0.1~0.3)為展開(kāi)劑,展開(kāi),取出,晾干,噴以5%香草醛硫酸溶液,在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰;供試品色譜中,在與對(duì)照藥材及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn)。
⑦.取婦炎康復(fù)制劑內(nèi)容物5g,加乙醇25~75ml,超聲處理30~50分鐘,濾過(guò),濾液中加鹽酸1~3ml,加熱回流0.5~1.5小時(shí),再濃縮至約5~15ml,再加水5~15ml,用石油醚(60-90℃)提取1~3次,每次10~30ml,合并提取液,通過(guò)適量無(wú)水硫酸鈉脫水,蒸干,殘?jiān)右掖?ml使溶解,作為供試品溶液;另取敗醬草對(duì)照藥材2g,加乙醇25~75ml,加熱回流30~50分鐘,濾過(guò),自“濾液中加鹽酸2ml”后同供試品溶液制備方法制成對(duì)照藥材溶液;照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版~部附錄VI B)試驗(yàn),吸取上述供試品溶液15μl,對(duì)照藥材溶液5μl,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(13~15∶3~5∶0.4~0.6)為展開(kāi)劑,展開(kāi),取出,晾干,噴以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰;供試品色譜中,在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn)。
含量測(cè)定方法包括以下方法的一種或幾種 ①.照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI D)測(cè)定;色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;乙腈-0.1%磷酸(10~20∶80~90)為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm;理論板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3000;對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取芍藥苷對(duì)照品適量,加甲醇制成每1ml含0.06mg的溶液;供試品溶液的制備取裝量差異項(xiàng)下的婦炎康復(fù)制劑內(nèi)容物適量,混勻,取約0.5g,精密稱(chēng)定,置100ml具塞錐形瓶中,精密加入甲醇20~30ml,稱(chēng)定重量,密塞,超聲處理(功率250W,頻率40kHz)20~40分鐘,取出,放冷至室溫,再稱(chēng)定重量,用甲醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,濾過(guò),取續(xù)濾液,作為供試品溶液;測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液及供試品溶液各10μl,注入液相色譜儀,測(cè)定,即得。
②.照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI D)測(cè)定;色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;乙腈-0.1%磷酸(20~30∶70~80)為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm;理論板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3000;對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取黃芩苷、橙皮苷對(duì)照品適量,加甲醇制成每1ml含黃芩苷0.06mg、橙皮苷0.01mg的混合溶液;供試品溶液的制備取裝量差異項(xiàng)下的婦炎康復(fù)制劑內(nèi)容物適量,混勻,取約0.3g,精密稱(chēng)定,置100ml具塞錐形瓶中,精密加入70%乙醇25~75ml,稱(chēng)定重量,密塞,超聲處理(功率250W,頻率40kHz)30~50分鐘,取出,放冷至室溫,再稱(chēng)定重量,用70%乙醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,濾過(guò),取續(xù)濾液5ml,置10ml量瓶中加70%乙醇稀釋至刻度,搖勻,作為供試品溶液;測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液及供試品溶液各10μl,注入液相色譜儀,測(cè)定,即得。
本發(fā)明提供了陳皮、黃芩、柴胡、赤芍、薏苡仁、川楝子、敗醬草的薄層色譜鑒別,選擇了赤芍中有效成分芍藥苷、黃芩中有效成分黃芩苷和陳皮中有效成分橙皮苷作為含量測(cè)定指標(biāo),建立了藥物的含量測(cè)定方法;經(jīng)過(guò)多次重復(fù)試驗(yàn),確認(rèn)方法簡(jiǎn)便、重復(fù)性良好、結(jié)果準(zhǔn)確可靠。
本發(fā)明各實(shí)驗(yàn)例供試品所用制劑均采用實(shí)施例1所述的婦炎康復(fù)膠囊制劑,也可用與實(shí)施例1所述的婦炎康復(fù)膠囊制劑相同原料組成的其他制劑。
實(shí)驗(yàn)例1芍藥苷的含量測(cè)定方法研究 1.儀器、試劑與試藥、對(duì)照品及樣品 1.1儀器DIONEX(美國(guó))高效液相色譜儀;UVD 170U;P680HPLC PUMP;ASI-100自動(dòng)進(jìn)樣器;戴安變色龍色譜工作站(美國(guó));KQ-250型超聲波清洗機(jī)(昆山市超聲儀器有限公司)。
1.2試劑乙腈為色譜純;水為重蒸餾水;其余試劑均為分析純。
1.3對(duì)照品及樣品芍藥苷(批號(hào)110736-200629供含量測(cè)定用)由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供。樣品為實(shí)施例1自制樣品。
芍藥苷采用反相高效液相色譜法測(cè)定,參照《中國(guó)藥典》2005年版一部和有關(guān)文獻(xiàn),經(jīng)多次試驗(yàn)結(jié)果表明,本方法色譜分離效果好,出峰時(shí)間適中,所測(cè)得的含量結(jié)果也有所提高。
2.色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 2.1色譜條件 2.1.1檢測(cè)波長(zhǎng)的確定取芍藥苷對(duì)照品溶液進(jìn)行波長(zhǎng)掃描,結(jié)果在230nm有最大吸收峰,參看中國(guó)藥典及原標(biāo)準(zhǔn),因此選擇230nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。
2.1.2流動(dòng)相的確定文獻(xiàn)報(bào)道測(cè)定芍藥苷采用反相高效液相色譜法,對(duì)多個(gè)流動(dòng)相條件進(jìn)行優(yōu)選。流動(dòng)相①甲醇-0.1%磷酸溶液(40∶65);流動(dòng)相②乙腈-0.1%磷酸溶液(15∶85)。試驗(yàn)結(jié)果表明,采用流動(dòng)相②,供試品主峰與雜質(zhì)峰達(dá)到基線分離,保留時(shí)間適中,所以采用的流動(dòng)相為乙腈-0.1%的磷酸溶液(15∶85)。
2.2系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 理論板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算,理論塔板數(shù)應(yīng)不低于2000。
分離度根據(jù)供試品色譜圖,主峰與雜質(zhì)峰分離度大于1.5,主峰與相鄰峰達(dá)基線分離,符合規(guī)定。
3.溶液的制備 3.1對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取芍藥苷對(duì)照品13.60mg,置10ml量瓶中,加甲醇溶解并稀釋至刻度搖勻,再精密量取5ml,置10ml量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻(濃度為0.68mg/ml);再精密量取5ml,置50ml量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,即得(濃度為0.068mg/ml)。
3.2供試品溶液的制備 3.2.1方法1取裝量差異項(xiàng)下的本樣品內(nèi)容物,研細(xì),取約0.5g,精密稱(chēng)定,置50ml量瓶中,加0.1mol/L鹽酸溶液2ml潤(rùn)濕,加水30ml,搖勻,超聲處理10分鐘,取出,放冷,加水至刻度,搖勻,即得。
3.2.2方法2取裝量差異項(xiàng)下的本品內(nèi)容物適量,研細(xì),取約0.5g,精密稱(chēng)定,置100ml具塞錐形瓶中,精密加入甲醇25ml,稱(chēng)定重量,密塞,超聲處理(功率250W,頻率40kHz)30分鐘,取出,放至室溫,再稱(chēng)定重量,用甲醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,濾過(guò),取續(xù)濾液,即得。
表5不同方法對(duì)芍藥苷含量的影響
結(jié)果表明,方法2所得含量比方法1的含量高,且操作比較簡(jiǎn)單,因此選擇方法2作為供試品溶液的制備方法。
4.方法學(xué)研究 4.1線性關(guān)系考察 精密量取芍藥苷對(duì)照品溶液(濃度為0.068mg/ml)2ml、5ml,分別置10ml量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,即得濃度為0.0136mg/ml、0.034mg/ml的對(duì)照品溶液。再精密量取芍藥苷對(duì)照品溶液(濃度為0.68mg/ml)3、4ml,分別置20ml量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,即得濃度為0.102mg/ml、0.136mg/ml的對(duì)照品溶液。再加上濃度為0.068mg/ml的對(duì)照品溶液,分別精密吸取上述五種不同濃度的對(duì)照品溶液10μl,注入液相色譜儀,測(cè)定峰面積,結(jié)果見(jiàn)表1。以芍藥苷色譜峰面積(Y)為縱坐標(biāo),進(jìn)樣量(X)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并進(jìn)行線性回歸,得回歸方程Y=178436.3307X-525.6617,(r=1)。
表1芍藥苷線性試驗(yàn)結(jié)果
以上結(jié)果表明,芍藥苷在0.136~1.360μg范圍內(nèi)峰面積值與進(jìn)樣量線性關(guān)系良好。
4.2干擾性試驗(yàn) 按處方比例取無(wú)赤芍的其他藥味,按制備工藝制得陰性制劑。同供試品溶液的制備方法制成陰性對(duì)照溶液。精密吸取供試品溶液、對(duì)照品溶液及陰性對(duì)照溶液各10μl,分別注入液相色譜儀,記錄色譜圖,結(jié)果供試品色譜在與對(duì)照品色譜主峰的位置上有保留時(shí)間一致的峰出現(xiàn),而陰性對(duì)照色譜在相應(yīng)位置沒(méi)有峰出現(xiàn),表明該法無(wú)干擾,專(zhuān)屬性強(qiáng)。
4.3精密度試驗(yàn) 精密吸取同一濃度芍藥苷對(duì)照品溶液(濃度為0.068mg/ml)10μl,連續(xù)進(jìn)樣6次,記錄峰面積,結(jié)果見(jiàn)表2。
表2精密度試驗(yàn)結(jié)果
以上結(jié)果表明,本法精密度良好。
4.4穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液(批號(hào)20080224),分別在0、2、4、6、8小時(shí)進(jìn)樣10μl,記錄峰面積,見(jiàn)表3。
表3穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果
結(jié)果表明供試品溶液至少在8小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。
4.5重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱(chēng)取樣品5份(批號(hào)20080224),分別按照供試品溶液的制備方法制備供試品溶液,依法測(cè)定,計(jì)算含量,結(jié)果見(jiàn)表4。
表4重現(xiàn)性試驗(yàn)結(jié)果
以上結(jié)果表明,本法重現(xiàn)性良好。
4.6加樣回收率試驗(yàn) 取已知芍藥苷含量(批號(hào)20080224,4.55mg/g)樣品6份,每份0.25g,精密稱(chēng)定,分別置100ml具塞錐形瓶中,精密加入甲醇50ml,分別精密加入芍藥苷對(duì)照品溶液(0.71mg/ml,2ml)。按照正文中供試品溶液的制備方法制備,依法測(cè)定,計(jì)算總量,以下式計(jì)算回收率,結(jié)果見(jiàn)表5。
表5加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果
以上結(jié)果表明,本方法回收率良好。
4.7范圍試驗(yàn) 分別按正文規(guī)定的樣品取樣量的80%、100%、120%取樣,每種取樣量各平行制備三份樣品,照供試品溶液制備方法制備,依法測(cè)定,計(jì)算含量,結(jié)果見(jiàn)表6。
表6范圍試驗(yàn)結(jié)果
以上結(jié)果表明,三個(gè)不同取樣量所測(cè)得含量均在范圍內(nèi),表明取樣量符合要求。
4.8耐用性試驗(yàn) 為了考察不同色譜柱對(duì)含量測(cè)定的影響,選用兩個(gè)不同廠家的色譜柱對(duì)其進(jìn)行測(cè)定,結(jié)果見(jiàn)表7。
表7耐用性試驗(yàn)結(jié)果
以上結(jié)果表明采用不同的色譜柱對(duì)樣品測(cè)定沒(méi)有影響。
含量測(cè)定小結(jié)以上研究結(jié)果表明線性、精密度、重現(xiàn)性、穩(wěn)定性、加樣回收率試驗(yàn)、范圍試驗(yàn)及耐用性試驗(yàn)的結(jié)果均符合含量測(cè)定方法學(xué)研究的有關(guān)規(guī)定,因此該含量測(cè)定方法的建立能夠有效地控制藥品的質(zhì)量。
5.樣品含量測(cè)定及含量限度的確定 取三批供試品,按含量測(cè)定項(xiàng)下方法制備供試品溶液,分別吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10μl,依次進(jìn)樣,記錄峰面積,計(jì)算含量,結(jié)果見(jiàn)表8。
表8三批樣品含量測(cè)定結(jié)果
含量限度的制定結(jié)合三批樣品含量測(cè)定結(jié)果,考慮到大生產(chǎn)中投料及生產(chǎn)工藝等因素的影響,將含量限度定為本品每粒含赤芍以芍藥苷計(jì)(C23H28O11)不得少于1.20mg。
實(shí)驗(yàn)例2橙皮苷和黃芩苷的含量測(cè)定方法研究 1.儀器、試劑與試藥、對(duì)照品及樣品 1.1儀器DIONEX(美國(guó))高效液相色譜儀;UVD 170U;P680HPLC PUMP;ASI-100自動(dòng)進(jìn)樣器;戴安變色龍色譜工作站(美國(guó));KQ-250型超聲波清洗機(jī)(昆山市超聲儀器有限公司)。
1.2試劑乙腈為色譜純;水為重蒸餾水;其余試劑均為分析純。
1.3對(duì)照品及樣品橙皮苷(批號(hào)110721-200512供含量測(cè)定用)由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供;黃芩苷(批號(hào)110715-200514供含量測(cè)定用)由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供。樣品為實(shí)施例1自制樣品。
2.色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 2.1色譜條件 2.1.1檢測(cè)波長(zhǎng)的確定取橙皮苷和黃芩苷對(duì)照品溶液分別進(jìn)行波長(zhǎng)掃描,結(jié)果橙皮苷在283nm有最大吸收峰,而黃芩苷在280nm有最大吸收峰,參看藥典及文獻(xiàn)報(bào)道,選擇280nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。
2.1.2流動(dòng)相的確定參照文獻(xiàn),對(duì)多個(gè)流動(dòng)相條件進(jìn)行優(yōu)選。流動(dòng)相①甲醇-水-醋酸(35∶61∶4);流動(dòng)相②乙腈-0.1%的磷酸溶液(25∶75)。試驗(yàn)結(jié)果表明,采用流動(dòng)相②,供試品主峰與雜質(zhì)峰達(dá)到基線分離,保留時(shí)間適中,所以采用的流動(dòng)相為乙腈-0.1%的磷酸溶液(25∶75)。
2.2系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 理論板數(shù)按橙皮苷峰計(jì)算,橙皮苷理論塔板數(shù)應(yīng)不低于2000,按黃芩苷峰計(jì)算,黃芩苷理論塔板數(shù)應(yīng)不低于3000。故理論板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。
分離度根據(jù)供試品色譜圖,橙皮苷和黃芩苷的主峰與雜質(zhì)峰分離度均大于1.5,主峰與相鄰峰達(dá)基線分離,符合規(guī)定。
3.溶液的制備 3.1對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取橙皮苷對(duì)照品10.60mg,置100ml量瓶中,加甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻(濃度為0.106mg/ml);精密稱(chēng)取黃芩苷對(duì)照品13.20mg,置20ml量瓶中,加甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻(濃度為0.66mg/ml);再精密量取橙皮苷和黃芩苷對(duì)照品溶液各5ml,至50ml量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,即得(橙皮苷對(duì)照品的濃度為0.0106mg/ml,黃芩苷對(duì)照品的濃度為0.066mg/ml)。
3.2供試品溶液的制備參照文獻(xiàn)擬定的方法為取裝量差異項(xiàng)下的本樣品內(nèi)容物適量,研細(xì),取約0.3g,精密稱(chēng)定,置100ml具塞錐形瓶中,精密加入70%乙醇50ml,稱(chēng)定重量,密塞,超聲處理(功率250W,頻率40kHz)40分鐘,取出,放冷至室溫,再稱(chēng)定重量,用70%乙醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,濾過(guò),取續(xù)濾液5ml,至10ml量瓶中,加70%乙醇至刻度,搖勻,即得。
3.2.1提取溶劑的考察參照文獻(xiàn),橙皮苷的提取一般選用甲醇,而黃芩苷一般70%乙醇對(duì)其進(jìn)行提取,故對(duì)提取溶劑甲醇和70%乙醇進(jìn)行考察,結(jié)果見(jiàn)表9。
表9提取溶劑對(duì)橙皮苷和黃芩苷含量的影響
結(jié)果表明,70%乙醇所提取的橙皮苷和黃芩苷的含量均比甲醇的高,故選用70%乙醇提取。
3.2.2提取方法的考察參照文獻(xiàn),對(duì)兩者的提取一般采用超聲或者回流兩種方法進(jìn)行考察,結(jié)果見(jiàn)表10。
表10提取方法對(duì)橙皮苷和黃芩苷含量的影響
結(jié)果表明,回流和超聲所得橙皮苷和黃芩苷含量基本接近,超聲略高于回流,超聲處理方法簡(jiǎn)單,故選用超聲作為提取方法。
3.2.3提取時(shí)間的考察考察不同的提取時(shí)間對(duì)含量的影響,結(jié)果見(jiàn)表11。
表11提取時(shí)間對(duì)橙皮苷和黃芩苷含量的影響
結(jié)果表明,提取40分鐘和50分鐘的橙皮苷和黃芩苷的含量基本接近,均比30分鐘的高,故選提取時(shí)間為40分鐘。
綜合以上對(duì)提取溶劑、方法及時(shí)間的考察結(jié)果,可確定供試品溶液的制備方法為取裝量差異項(xiàng)下的本樣品內(nèi)容物適量,研細(xì),取約0.3g,精密稱(chēng)定,置100ml具塞錐形瓶中,精密加入70%乙醇50ml,稱(chēng)定重量,密塞,超聲處理(功率250W,頻率40kHz)40分鐘,取出,放冷至室溫,再稱(chēng)定重量,用70%乙醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,濾過(guò),取續(xù)濾液5ml,至10ml量瓶中,加70%乙醇至刻度,搖勻,即得。
4.方法學(xué)研究 4.1線性關(guān)系考察 精密量取橙皮苷和黃芩苷混合對(duì)照品溶液(橙皮苷濃度為0.0106mg/ml,黃芩苷濃度為0.066mg/ml)2ml、5ml,分別置10ml量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,即得橙皮苷濃度為0.00212mg/ml、0.0053mg/ml,黃芩苷濃度為0.0132mg/ml、0.033mg/ml的對(duì)照品溶液。再精密量取橙皮苷(濃度為0.106mg/ml)、黃芩苷(濃度為0.66mg/ml)的對(duì)照品溶液各1.5ml、2ml,分別置10ml量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,即得橙皮苷濃度為0.0159mg/ml、0.0212mg/ml,黃芩苷濃度為0.099mg/ml、0.132mg/ml的對(duì)照品溶液。再加上橙皮苷濃度為0.0106mg/ml、黃芩苷濃度為0.066mg/ml的混合對(duì)照品溶液,分別精密吸取上述五種不同濃度的混合對(duì)照品溶液各10μl,注入液相色譜儀,測(cè)定峰面積,結(jié)果見(jiàn)表12。以橙皮苷色譜峰面積(Y)為縱坐標(biāo),橙皮苷進(jìn)樣量(X)為橫坐標(biāo),繪制橙皮苷的標(biāo)準(zhǔn)曲線并進(jìn)行線性回歸,得橙皮苷的回歸方程Y=300244.8463X+114.0853,(r=0.9999);以黃芩苷色譜峰面積(Y)為縱坐標(biāo),黃芩苷進(jìn)樣量(X)為橫坐標(biāo),繪制黃芩苷的標(biāo)準(zhǔn)曲線并進(jìn)行線性回歸,得黃芩苷的回歸方程Y=550432.2335X-117.9677,(r=1)。
表12橙皮苷和黃芩苷線性試驗(yàn)結(jié)果
以上結(jié)果表明,橙皮苷在0.0212~0.2120μg范圍內(nèi)峰面積值與進(jìn)樣量線性關(guān)系良好;黃芩苷在0.132~1.320μg范圍內(nèi)峰面積值與進(jìn)樣量線性關(guān)系良好。
4.2干擾性試驗(yàn) 按處方比例取無(wú)陳皮的其他藥味,按制備工藝制得缺陳皮陰性制劑;按處方比例取無(wú)黃芩的其他藥味,按制備工藝制得缺黃芩陰性制劑。同供試品溶液的制備方法制成缺陳皮陰性對(duì)照溶液和缺黃芩陰性對(duì)照溶液。精密吸取供試品溶液、對(duì)照品溶液及缺陳皮陰性對(duì)照溶液和缺黃芩對(duì)照溶液各10μl,分別注入液相色譜儀,記錄色譜圖,結(jié)果供試品色譜在與對(duì)照品色譜主峰的位置上有保留時(shí)間一致的峰出現(xiàn),而陰性對(duì)照色譜在相應(yīng)位置沒(méi)有峰出現(xiàn),表明該法無(wú)干擾,專(zhuān)屬性強(qiáng)。
4.3精密度試驗(yàn) 精密吸取橙皮苷和黃芩苷混合對(duì)照品溶液(濃度橙皮苷0.0106mg/ml,黃芩苷0.066mg/ml)10μl,連續(xù)進(jìn)樣6次,記錄峰面積,結(jié)果見(jiàn)表13。
表13精密度試驗(yàn)結(jié)果
以上結(jié)果表明,本法精密度良好。
4.4穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液(批號(hào)20080224),分別在0、2、4、6、8小時(shí)進(jìn)樣10μl,記錄峰面積,結(jié)果見(jiàn)表14。
表14穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果
結(jié)果表明供試品溶液在8小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。
4.5重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱(chēng)取樣品5份(批號(hào)20080224),分別按照正文中供試品溶液的制備方法制備供試品溶液,依法測(cè)定,計(jì)算含量,結(jié)果見(jiàn)表15。
表15重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果
以上結(jié)果表明,本法重復(fù)性良好。
4.6加樣回收率試驗(yàn) 取已知橙皮苷和黃芩苷含量(批號(hào)20080224,橙皮苷3.34mg/g,黃芩苷20.20mg/g)樣品6份,每份0.15g,精密稱(chēng)定,置100ml具塞錐形瓶中,分別精密加入橙皮苷對(duì)照品溶液(0.322mg/ml,2ml)和黃芩苷對(duì)照品溶液(3.15mg/ml,1ml),揮干,再精密加入70%乙醇50ml。按照正文中供試品溶液的制備方法制備,依法測(cè)定,計(jì)算總量,以下式計(jì)算回收率,橙皮苷加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表16,黃芩苷加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表17。
表16橙皮苷加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果
表17黃芩苷加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果
以上結(jié)果表明,本方法中橙皮苷和黃芩苷的回收率均良好。
4.7范圍試驗(yàn) 分別按正文規(guī)定的樣品取樣量的80%、100%、120%取樣,每種取樣量各平行制備三份樣品,照供試品溶液制備方法制備,依法測(cè)定,計(jì)算含量,結(jié)果見(jiàn)表18。
表18范圍試驗(yàn)結(jié)果
以上結(jié)果表明,三個(gè)不同取樣量所測(cè)得含量均在范圍內(nèi),表明取樣量符合要求。
4.8耐用性試驗(yàn) 為了考察不同色譜柱對(duì)含量測(cè)定的影響,選用兩個(gè)不同廠家的色譜柱對(duì)其進(jìn)行測(cè)定,結(jié)果見(jiàn)表19。
表19耐用性試驗(yàn)結(jié)果
以上結(jié)果表明采用不同的色譜柱對(duì)樣品含量測(cè)定沒(méi)有影響。
含量測(cè)定小結(jié)以上研究結(jié)果表明線性、精密度、重現(xiàn)性、穩(wěn)定性、加樣回收率試驗(yàn)、范圍試驗(yàn)及耐用性試驗(yàn)的結(jié)果均符合含量測(cè)定方法學(xué)研究的有關(guān)規(guī)定,因此該含量測(cè)定方法的建立能夠有效地控制藥品的質(zhì)量。
5.樣品含量測(cè)定及含量限度的確定 取三批供試品,按含量測(cè)定項(xiàng)下方法制備供試品溶液,分別吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10μl,依次進(jìn)樣,記錄峰面積,計(jì)算含量,結(jié)果見(jiàn)表20。
表20三批樣品含量測(cè)定結(jié)果
含量限度的制定結(jié)合三批樣品含量測(cè)定結(jié)果,考慮到大生產(chǎn)中投料及生產(chǎn)工藝等因素的影響,將含量限度定為本品每粒含陳皮以橙皮苷(C28H34O15)計(jì),不得少于1.0mg;本品每粒含黃芩以黃芩苷(C21H18O11)計(jì),不得少于5.0mg。
下述實(shí)施例均能達(dá)到上述實(shí)驗(yàn)例的效果。
具體實(shí)施例方式 實(shí)施例1 處方敗醬草320g 薏苡仁160g 川楝子120g 柴胡120g 黃芩120g赤芍120g陳皮60g 制法以上七味,除薏苡仁的一半量粉碎成粗粉外,其余藥材加水煎煮三次,第一、二次各加8倍量的水,煎煮1小時(shí),第三次加6倍量的水,煎煮0.5小時(shí),濾過(guò),合并濾液,濃縮成相對(duì)密度1.35~1.40(60-80℃)的稠膏,加入薏苡仁粗粉,混勻,干燥,粉碎,過(guò)篩,裝成1000粒,即得。
性狀本品為膠囊劑,內(nèi)容物為棕褐色粉末;味微苦。
鑒別(1)取本品,置顯微鏡下觀察淀粉粒極多,聚集成團(tuán),單粒類(lèi)球形或圓或多角形,直徑2~20μm,臍點(diǎn)三叉狀,人字狀,星狀或短縫狀。
(2)取本品內(nèi)容物3.8g,加甲醇50ml,超聲處理30分鐘,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)铀?0ml使溶解,用乙醚20ml提取,棄去乙醚液,水層用正丁醇20ml提取,分取正丁醇液,用無(wú)水硫酸鈉脫水,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)状?ml使溶解,作為供試品溶液。另取陳皮對(duì)照藥材1g,加甲醇10ml,超聲處理30分鐘,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)蛹状?ml使溶解,作為對(duì)照藥材溶液。再取橙皮苷對(duì)照品,加無(wú)水乙醇制成每1ml含1mg的溶液,作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn)。吸取上述三種溶液各5μl,分別點(diǎn)于同一用0.5%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上,以乙酸乙酯-甲醇-水(100∶17∶13)為展開(kāi)劑,展至約8cm,取出,晾干,再以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水(20∶10∶1∶1)的上層溶液為展開(kāi)劑,展至約12cm,取出,晾干,噴以三氯化鋁試液,置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中,在與對(duì)照藥材及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
(3)取本品內(nèi)容物3.8g,加乙醚50ml,加熱回流1小時(shí),濾過(guò),藥渣揮干,加甲醇30ml,超聲處理30分鐘,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)铀m量使溶解,加于已處理好的D101型大孔吸附樹(shù)脂(內(nèi)徑1.5cm,填充高度12cm)上,用水50ml洗脫,棄去水液,再用70%乙醇50ml洗脫,收集洗脫液,蒸干,殘?jiān)蛹状?ml使溶解,濾過(guò),濾液作為供試品溶液。另取黃芩對(duì)照藥材1g,加甲醇10ml,超聲處理30分鐘,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)蛹状?ml使溶解,作為對(duì)照藥材溶液。再取黃芩苷對(duì)照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn)。吸取上述三種溶液各5μl,分別點(diǎn)于同一用0.5%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上,以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)為展開(kāi)劑,展開(kāi),取出,晾干,噴以4%三氯化鐵乙醇溶液。供試品色譜中,在與對(duì)照藥材及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn)。
(4)取本品內(nèi)容物3.8g,加石油醚(60~90℃)30ml,超聲處理30分鐘,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)邮兔?60~90℃)1ml使溶解,作為供試品溶液。另取薏苡仁對(duì)照藥材1g,同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn),吸取上述兩種溶液各10μl,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以石油醚(60~90℃)-乙酸乙酯-醋酸(10∶3∶0.1)為展開(kāi)劑,展開(kāi),取出,晾干,置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中,在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
(5)取本品內(nèi)容物3.8g,加乙醇30ml,超聲處理30分鐘,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)右掖?ml使溶解,作為供試品溶液。另取川楝子對(duì)照藥材1g,同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn),吸取上述兩種溶液各10μl,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以甲苯-丙酮(9∶1)為展開(kāi)劑,展開(kāi),取出,晾干,置碘蒸汽中熏至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中,在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn)。
(6)取本品內(nèi)容物5g,加乙醇50ml、濃氨試液1ml,超聲處理30分鐘,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)铀?0ml水浴上加熱使溶解,加于已處理好的D101型大孔吸附樹(shù)脂(內(nèi)徑1.5cm,填充高度8cm)上,用水100ml洗脫,棄去洗脫液,再用40%乙醇100ml洗脫,棄去洗脫液,最后用70%乙醇100ml洗脫,收集洗脫液,蒸干,殘?jiān)右掖?ml使溶解,作為供試品溶液。另取柴胡對(duì)照藥材2g,加水20ml,加熱回流40分鐘,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)右掖?ml使溶解,作為對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn),吸取上述供試品溶液10μl、對(duì)照藥材溶液5μl,分別點(diǎn)于同一用硅膠G薄層板上,以乙酸乙酯-乙醇-水(8∶2∶1)為展開(kāi)劑,展開(kāi),取出,晾干,噴以2%對(duì)二甲氨基苯甲醛的40%硫酸乙醇溶液,在60℃加熱至斑點(diǎn)清晰,置日光及紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中,在與對(duì)照藥材及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn)或熒光斑點(diǎn)。
(7)取本品內(nèi)容物3.8g,加甲醇30ml,超聲處理30分鐘,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)铀?5ml使溶解,用水飽和正丁醇提取2次,每次20ml,合并正丁醇液,再用正丁醇飽和的水洗滌2次,每次20ml,棄去水液,正丁醇液蒸干,殘?jiān)蛹状?ml使溶解,作為供試品溶液。另取赤芍對(duì)照藥材1g,加甲醇10ml,超聲處理30分鐘,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)蛹状?ml使溶解,作為對(duì)照藥材溶液。再取芍藥苷對(duì)照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn),吸取上述三種溶液各4μl,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40∶5∶10∶0.2)為展開(kāi)劑,展開(kāi),取出,晾干,噴以5%香草醛硫酸溶液,在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中,在與對(duì)照藥材及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn)。
(8)取本品內(nèi)容物5g,加乙醇50ml,超聲處理40分鐘,濾過(guò),濾液中加鹽酸2ml,加熱回流1小時(shí),再濃縮至約10ml,再加水10ml,用石油醚(60-90℃)提取2次,每次20ml,合并提取液,通過(guò)適量無(wú)水硫酸鈉脫水,蒸干,殘?jiān)右掖?ml使溶解,作為供試品溶液。另取敗醬草對(duì)照藥材2g,加乙醇50ml,加熱回流40分鐘,濾過(guò),自“濾液中加鹽酸2ml”后同供試品溶液制備方法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn),吸取上述供試品溶液15μl,對(duì)照藥材溶液5μl,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(14∶4∶0.5)為展開(kāi)劑,展開(kāi),取出,晾干,噴以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中,在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn)。
檢查應(yīng)符合膠囊劑項(xiàng)下有關(guān)的各項(xiàng)規(guī)定(中國(guó)藥典2005年版一部附錄I L)。
含量測(cè)定芍藥苷照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI D)測(cè)定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;乙腈-0.1%磷酸(15∶85)為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm。理論板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。
對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取芍藥苷對(duì)照品適量,加甲醇制成每1ml含0.06mg的溶液,即得。
供試品溶液的制備取裝量差異項(xiàng)下的本品內(nèi)容物適量,混勻,取約0.5g,精密稱(chēng)定,置100ml具塞錐形瓶中,精密加入甲醇25ml,稱(chēng)定重量,密塞,超聲處理(功率250W,頻率40kHz)30分鐘,取出,放冷至室溫,再稱(chēng)定重量,用甲醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,濾過(guò),取續(xù)濾液,即得。
測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液及供試品溶液各10μl,注入液相色譜儀,測(cè)定,即得。
本品每粒含赤芍以芍藥苷(C23H28O11)計(jì),不得少于1.20mg。
黃芩苷和橙皮苷照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI D)測(cè)定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;乙腈-0.1%磷酸(25∶75)為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm。理論板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。
對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取黃芩苷、橙皮苷對(duì)照品適量,加甲醇制成每1ml含黃芩苷0.06mg、橙皮苷0.01mg的混合溶液,即得。
供試品溶液的制備取裝量差異項(xiàng)下的本品內(nèi)容物適量,混勻,取約0.3g,精密稱(chēng)定,置100ml具塞錐形瓶中,精密加入70%乙醇50ml,稱(chēng)定重量,密塞,超聲處理(功率250W,頻率40kHz)40分鐘,取出,放冷至室溫,再稱(chēng)定重量,用70%乙醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,濾過(guò),取續(xù)濾液5ml,置10ml量瓶中加70%乙醇稀釋至刻度,搖勻,即得。
測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液及供試品溶液各10μl,注入液相色譜儀,測(cè)定,即得。
本品每粒含陳皮以橙皮苷(C28H34O15)計(jì),不得少于1.0mg;黃芩以黃芩苷(C21H18O11)計(jì);不得少于5.0mg。
實(shí)施例2 處方敗醬草320g 薏苡仁160g 川楝子120g 柴胡120g 黃芩120g赤芍120g陳皮60g 制法以上七味,除薏苡仁的一半量粉碎成粗粉外,其余藥材加水煎煮三次,第一、二次各加8倍量的水,煎煮1小時(shí),第三次加6倍量的水,煎煮0.5小時(shí),濾過(guò),合并濾液,濃縮成相對(duì)密度1.35~1.40(60-80℃)的稠膏,加入薏苡仁粗粉,混勻,干燥,粉碎,過(guò)篩,制粒,壓制成1000片,即得。
該藥物的質(zhì)量控制方法同實(shí)施例1。
權(quán)利要求
1.婦炎康復(fù)制劑的質(zhì)量控制方法,其中所述制劑由中藥材敗醬草、薏苡仁、川楝子、柴胡、黃芩、赤芍和陳皮組成,其特征在于該方法中的鑒別方法是以下方法的一種或幾種
①.取婦炎康復(fù)制劑內(nèi)容物3.8g,加甲醇25~75ml,超聲處理20~40分鐘,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)铀?~15ml使溶解,用乙醚10~30ml提取,棄去乙醚液,水層用正丁醇10~30ml提取,分取正丁醇液,用無(wú)水硫酸鈉脫水,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)状?ml使溶解,作為供試品溶液;另取陳皮對(duì)照藥材1g,加甲醇5~15ml,超聲處理20~40分鐘,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)蛹状?ml使溶解,作為對(duì)照藥材溶液;再取橙皮苷對(duì)照品,加無(wú)水乙醇制成每1ml含1mg的溶液,作為對(duì)照品溶液;照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn);吸取上述三種溶液各5μl,分別點(diǎn)于同一用0.5%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上,以乙酸乙酯-甲醇-水(85~115∶7~27∶3~23)為展開(kāi)劑,展至約8cm,取出,晾干,再以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水(15~25∶5~15∶0.5~1.5∶0.5~1.5)的上層溶液為展開(kāi)劑,展至約12cm,取出,晾干,噴以三氯化鋁試液,置紫外光燈(365nm)下檢視;供試品色譜中,在與對(duì)照藥材及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的熒光斑點(diǎn);
②.取婦炎康復(fù)制劑內(nèi)容物3.8g,加乙醚25~75ml,加熱回流0.5~1.5小時(shí),濾過(guò),藥渣揮干,加甲醇20~40ml,超聲處理20~40分鐘,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)铀m量使溶解,加于已處理好的D101型大孔吸附樹(shù)脂(內(nèi)徑1.5cm,填充高度12cm)上,用水25~75ml洗脫,棄去水液,再用70%乙醇25~75ml洗脫,收集洗脫液,蒸干,殘?jiān)蛹状?ml使溶解,濾過(guò),濾液作為供試品溶液;另取黃芩對(duì)照藥材1g,加甲醇5~15ml,超聲處理20~40分鐘,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)蛹状?ml使溶解,作為對(duì)照藥材溶液;再取黃芩苷對(duì)照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作為對(duì)照品溶液;照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn);吸取上述三種溶液各5μl,分別點(diǎn)于同一用0.5%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上,以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(4~6∶2~4∶0.5~1.5∶0.5~1.5)為展開(kāi)劑,展開(kāi),取出,晾干,噴以4%三氯化鐵乙醇溶液;供試品色譜中,在與對(duì)照藥材及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn);
③.取婦炎康復(fù)制劑內(nèi)容物3.8g,加石油醚(60~90℃)20~40ml,超聲處理20~40分鐘,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)邮兔?60~90℃)1ml使溶解,作為供試品溶液;另取薏苡仁對(duì)照藥材1g,同法制成對(duì)照藥材溶液;照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn),吸取上述兩種溶液各10μl,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以石油醚(60~90℃)-乙酸乙酯-醋酸(9~11∶2~4∶0.05~0.15)為展開(kāi)劑,展開(kāi),取出,晾干,置紫外光燈(365nm)下檢視;供試品色譜中,在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的熒光斑點(diǎn);
④.取婦炎康復(fù)制劑內(nèi)容物3.8g,加乙醇20~40ml,超聲處理20~40分鐘,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)右掖?ml使溶解,作為供試品溶液;另取川楝子對(duì)照藥材1g,同法制成對(duì)照藥材溶液;照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn),吸取上述兩種溶液各10μl,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以甲苯-丙酮(8.5~9.5∶0.1~2.0)為展開(kāi)劑,展開(kāi),取出,晾干,置碘蒸汽中熏至斑點(diǎn)顯色清晰;供試品色譜中,在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn);
⑤.取婦炎康復(fù)制劑內(nèi)容物5g,加乙醇25~75ml、濃氨試液0.5~1.5ml,超聲處理20~40分鐘,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)铀?~15ml水浴上加熱使溶解,加于已處理好的D101型大孔吸附樹(shù)脂(內(nèi)徑1.5cm,填充高度8cm)上,用水75~125ml洗脫,棄去洗脫液,再用40%乙醇75~125ml洗脫,棄去洗脫液,最后用70%乙醇75~125ml洗脫,收集洗脫液,蒸干,殘?jiān)右掖?ml使溶解,作為供試品溶液;另取柴胡對(duì)照藥材2g,加水10~30ml,加熱回流30~50分鐘,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)右掖?ml使溶解,作為對(duì)照藥材溶液;照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn),吸取上述供試品溶液10μl、對(duì)照藥材溶液5μl,分別點(diǎn)于同一用硅膠G薄層板上,以乙酸乙酯-乙醇-水(7~9∶1~3∶0.5~1.5)為展開(kāi)劑,展開(kāi),取出,晾干,噴以2%對(duì)二甲氨基苯甲醛的40%硫酸乙醇溶液,在60℃加熱至斑點(diǎn)清晰,置日光及紫外光燈(365nm)下檢視;供試品色譜中,在與對(duì)照藥材及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn)或熒光斑點(diǎn);
⑥.取婦炎康復(fù)制劑內(nèi)容物3.8g,加甲醇20~40ml,超聲處理20~40分鐘,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)铀?0~20ml使溶解,用水飽和正丁醇提取1~3次,每次10~30ml,合并正丁醇液,再用正丁醇飽和的水洗滌1~3次,每次10~30ml,棄去水液,正丁醇液蒸干,殘?jiān)蛹状?ml使溶解,作為供試品溶液;另取赤芍對(duì)照藥材1g,加甲醇5~15ml,超聲處理20~40分鐘,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)蛹状?ml使溶解,作為對(duì)照藥材溶液;再取芍藥苷對(duì)照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作為對(duì)照品溶液;照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn),吸取上述三種溶液各4μl,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(39~41∶4~6∶9~11∶0.1~0.3)為展開(kāi)劑,展開(kāi),取出,晾干,噴以5%香草醛硫酸溶液,在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰;供試品色譜中,在與對(duì)照藥材及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn);
⑦.取婦炎康復(fù)制劑內(nèi)容物5g,加乙醇25~75ml,超聲處理30~50分鐘,濾過(guò),濾液中加鹽酸1~3ml,加熱回流0.5~1.5小時(shí),再濃縮至約5~15ml,再加水5~15ml,用石油醚(60-90℃)提取1~3次,每次10~30ml,合并提取液,通過(guò)適量無(wú)水硫酸鈉脫水,蒸干,殘?jiān)右掖?ml使溶解,作為供試品溶液;另取敗醬草對(duì)照藥材2g,加乙醇25~75ml,加熱回流30~50分鐘,濾過(guò),自“濾液中加鹽酸2ml”后同供試品溶液制備方法制成對(duì)照藥材溶液;照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn),吸取上述供試品溶液15μl,對(duì)照藥材溶液5μl,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(13~15∶3~5∶0.4~0.6)為展開(kāi)劑,展開(kāi),取出,晾干,噴以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰;供試品色譜中,在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn)。
2.如權(quán)利要求1所述的婦炎康復(fù)膠囊的質(zhì)量控制方法,其特征在于該方法中的鑒別方法是以下方法的一種或幾種
①.取婦炎康復(fù)膠囊制劑內(nèi)容物3.8g,加甲醇50ml,超聲處理30分鐘,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)铀?0ml使溶解,用乙醚20ml提取,棄去乙醚液,水層用正丁醇20ml提取,分取正丁醇液,用無(wú)水硫酸鈉脫水,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)状?ml使溶解,作為供試品溶液;另取陳皮對(duì)照藥材1g,加甲醇10ml,超聲處理30分鐘,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)蛹状?ml使溶解,作為對(duì)照藥材溶液;再取橙皮苷對(duì)照品,加無(wú)水乙醇制成每1ml含1mg的溶液,作為對(duì)照品溶液;照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn);吸取上述三種溶液各5μl,分別點(diǎn)于同一用0.5%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上,以乙酸乙酯-甲醇-水(100∶17∶13)為展開(kāi)劑,展至約8cm,取出,晾干,再以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水(20∶10∶1∶1)的上層溶液為展開(kāi)劑,展至約12cm,取出,晾干,噴以三氯化鋁試液,置紫外光燈(365nm)下檢視;供試品色譜中,在與對(duì)照藥材及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的熒光斑點(diǎn);
②.取婦炎康復(fù)膠囊制劑內(nèi)容物3.8g,加乙醚50ml,加熱回流1小時(shí),濾過(guò),藥渣揮干,加甲醇30ml,超聲處理30分鐘,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)铀m量使溶解,加于已處理好的D101型大孔吸附樹(shù)脂(內(nèi)徑1.5cm,填充高度12cm)上,用水50ml洗脫,棄去水液,再用70%乙醇50ml洗脫,收集洗脫液,蒸干,殘?jiān)蛹状?ml使溶解,濾過(guò),濾液作為供試品溶液;另取黃芩對(duì)照藥材1g,加甲醇10ml,超聲處理30分鐘,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)蛹状?ml使溶解,作為對(duì)照藥材溶液;再取黃芩苷對(duì)照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作為對(duì)照品溶液;照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn);吸取上述三種溶液各5μl,分別點(diǎn)于同一用0.5%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上,以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)為展開(kāi)劑,展開(kāi),取出,晾干,噴以4%三氯化鐵乙醇溶液;供試品色譜中,在與對(duì)照藥材及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn);
③.取婦炎康復(fù)膠囊制劑內(nèi)容物3.8g,加石油醚(60~90℃)30ml,超聲處理30分鐘,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)邮兔?60~90℃)1ml使溶解,作為供試品溶液;另取薏苡仁對(duì)照藥材1g,同法制成對(duì)照藥材溶液;照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn),吸取上述兩種溶液各10μl,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以石油醚(60~90℃)-乙酸乙酯-醋酸(10∶3∶0.1)為展開(kāi)劑,展開(kāi),取出,晾干,置紫外光燈(365nm)下檢視;供試品色譜中,在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的熒光斑點(diǎn);
④.取婦炎康復(fù)膠囊制劑內(nèi)容物3.8g,加乙醇30ml,超聲處理30分鐘,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)右掖?ml使溶解,作為供試品溶液;另取川楝子對(duì)照藥材1g,同法制成對(duì)照藥材溶液;照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn),吸取上述兩種溶液各10μl,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以甲苯-丙酮(9∶1)為展開(kāi)劑,展開(kāi),取出,晾干,置碘蒸汽中熏至斑點(diǎn)顯色清晰;供試品色譜中,在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn);
⑤.取婦炎康復(fù)膠囊制劑內(nèi)容物5g,加乙醇50ml、濃氨試液1ml,超聲處理30分鐘,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)铀?0ml水浴上加熱使溶解,加于已處理好的D101型大孔吸附樹(shù)脂(內(nèi)徑1.5cm,填充高度8cm)上,用水100ml洗脫,棄去洗脫液,再用40%乙醇100ml洗脫,棄去洗脫液,最后用70%乙醇100ml洗脫,收集洗脫液,蒸干,殘?jiān)右掖?ml使溶解,作為供試品溶液;另取柴胡對(duì)照藥材2g,加水20ml,加熱回流40分鐘,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)右掖?ml使溶解,作為對(duì)照藥材溶液;照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn),吸取上述供試品溶液10μl、對(duì)照藥材溶液5μl,分別點(diǎn)于同一用硅膠G薄層板上,以乙酸乙酯-乙醇-水(8∶2∶1)為展開(kāi)劑,展開(kāi),取出,晾干,噴以2%對(duì)二甲氨基苯甲醛的40%硫酸乙醇溶液,在60℃加熱至斑點(diǎn)清晰,置日光及紫外光燈(365nm)下檢視;供試品色譜中,在與對(duì)照藥材及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn)或熒光斑點(diǎn);
⑥.取婦炎康復(fù)膠囊制劑內(nèi)容物3.8g,加甲醇30ml,超聲處理30分鐘,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)铀?5ml使溶解,用水飽和正丁醇提取2次,每次20ml,合并正丁醇液,再用正丁醇飽和的水洗滌2次,每次20ml,棄去水液,正丁醇液蒸干,殘?jiān)蛹状?ml使溶解,作為供試品溶液;另取赤芍對(duì)照藥材1g,加甲醇10ml,超聲處理30分鐘,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)蛹状?ml使溶解,作為對(duì)照藥材溶液;再取芍藥苷對(duì)照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作為對(duì)照品溶液;照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn),吸取上述三種溶液各4μl,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40∶5∶10∶0.2)為展開(kāi)劑,展開(kāi),取出,晾干,噴以5%香草醛硫酸溶液,在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰;供試品色譜中,在與對(duì)照藥材及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn);
⑦.取婦炎康復(fù)膠囊制劑內(nèi)容物5g,加乙醇50ml,超聲處理40分鐘,濾過(guò),濾液中加鹽酸2ml,加熱回流1小時(shí),再濃縮至約10ml,再加水10ml,用石油醚(60~90℃)提取2次,每次20ml,合并提取液,通過(guò)適量無(wú)水硫酸鈉脫水,蒸干,殘?jiān)右掖?ml使溶解,作為供試品溶液;另取敗醬草對(duì)照藥材2g,加乙醇50ml,加熱回流40分鐘,濾過(guò),自“濾液中加鹽酸2ml”后同供試品溶液制備方法制成對(duì)照藥材溶液;照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn),吸取上述供試品溶液15μl,對(duì)照藥材溶液5μl,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(14∶4∶0.5)為展開(kāi)劑,展開(kāi),取出,晾干,噴以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰;供試品色譜中,在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn)。
3.婦炎康復(fù)制劑的質(zhì)量控制方法,其中所述的制劑由中藥材敗醬草、薏苡仁、川楝子、柴胡、黃芩、赤芍和陳皮組成,其特征在于該方法中的含量測(cè)定方法是以下方法的一種或幾種
①.照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VID)測(cè)定;色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;乙腈-0.1%磷酸(10~20∶80~90)為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm;理論板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3000;對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取芍藥苷對(duì)照品適量,加甲醇制成每1ml含0.06mg的溶液;供試品溶液的制備取裝量差異項(xiàng)下的婦炎康復(fù)制劑內(nèi)容物適量,混勻,取約0.5g,精密稱(chēng)定,置100ml具塞錐形瓶中,精密加入甲醇20~30ml,稱(chēng)定重量,密塞,超聲處理(功率250W,頻率40kHz)20~40分鐘,取出,放冷至室溫,再稱(chēng)定重量,用甲醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,濾過(guò),取續(xù)濾液,作為供試品溶液;測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液及供試品溶液各10μl,注入液相色譜儀,測(cè)定,即得;
②.照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI D)測(cè)定;色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;乙腈-0.1%磷酸(20~30∶70~80)為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm;理論板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3000;對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取黃芩苷、橙皮苷對(duì)照品適量,加甲醇制成每1ml含黃芩苷0.06mg、橙皮苷0.01mg的混合溶液;供試品溶液的制備取裝量差異項(xiàng)下的婦炎康復(fù)制劑內(nèi)容物適量,混勻,取約0.3g,精密稱(chēng)定,置100ml具塞錐形瓶中,精密加入70%乙醇25~75ml,稱(chēng)定重量,密塞,超聲處理(功率250W,頻率40kHz)30~50分鐘,取出,放冷至室溫,再稱(chēng)定重量,用70%乙醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,濾過(guò),取續(xù)濾液5ml,置10ml量瓶中加70%乙醇稀釋至刻度,搖勻,作為供試品溶液;測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液及供試品溶液各10μl,注入液相色譜儀,測(cè)定,即得。
4.如權(quán)利要求3所述的婦炎康復(fù)膠囊的質(zhì)量控制方法,其特征在于該方法中的含量測(cè)定方法是以下方法的一種或幾種
①.照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI D)測(cè)定;色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;乙腈-0.1%磷酸(15∶85)為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm;理論板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3000;對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取芍藥苷對(duì)照品適量,加甲醇制成每1ml含0.06mg的溶液;供試品溶液的制備取裝量差異項(xiàng)下的婦炎康復(fù)膠囊制劑內(nèi)容物適量,混勻,取約0.5g,精密稱(chēng)定,置100ml具塞錐形瓶中,精密加入甲醇25ml,稱(chēng)定重量,密塞,超聲處理(功率250W,頻率40kHz)30分鐘,取出,放冷至室溫,再稱(chēng)定重量,用甲醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,濾過(guò),取續(xù)濾液,作為供試品溶液;測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液及供試品溶液各10μl,注入液相色譜儀,測(cè)定,即得;
②.照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI D)測(cè)定;色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;乙腈-0.1%磷酸(25∶75)為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm;理論板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3000;對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取黃芩苷、橙皮苷對(duì)照品適量,加甲醇制成每1ml含黃芩苷0.06mg、橙皮苷0.01mg的混合溶液;供試品溶液的制備取裝量差異項(xiàng)下的婦炎康復(fù)膠囊制劑內(nèi)容物適量,混勻,取約0.3g,精密稱(chēng)定,置100ml具塞錐形瓶中,精密加入70%乙醇50ml,稱(chēng)定重量,密塞,超聲處理(功率250W,頻率40kHz)40分鐘,取出,放冷至室溫,再稱(chēng)定重量,用70%乙醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,濾過(guò),取續(xù)濾液5ml,置10ml量瓶中加70%乙醇稀釋至刻度,搖勻,作為供試品溶液;測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液及供試品溶液各10μl,注入液相色譜儀,測(cè)定,即得。
5.婦炎康復(fù)制劑的質(zhì)量控制方法,其中所述的制劑由中藥材敗醬草、薏苡仁、川楝子、柴胡、黃芩、赤芍和陳皮組成,其特征在于該方法包括以下方法
鑒別
①.取婦炎康復(fù)制劑內(nèi)容物3.8g,加甲醇25~75ml,超聲處理20~40分鐘,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)铀?~15ml使溶解,用乙醚10~30ml提取,棄去乙醚液,水層用正丁醇10~30ml提取,分取正丁醇液,用無(wú)水硫酸鈉脫水,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)状?ml使溶解,作為供試品溶液;另取陳皮對(duì)照藥材1g,加甲醇5~15ml,超聲處理20~40分鐘,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)蛹状?ml使溶解,作為對(duì)照藥材溶液;再取橙皮苷對(duì)照品,加無(wú)水乙醇制成每1ml含1mg的溶液,作為對(duì)照品溶液;照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn);吸取上述三種溶液各5μl,分別點(diǎn)于同一用0.5%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上,以乙酸乙酯-甲醇-水(85~115∶7~27∶3~23)為展開(kāi)劑,展至約8cm,取出,晾干,再以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水(15~25∶5~15∶0.5~1.5∶0.5~1.5)的上層溶液為展開(kāi)劑,展至約12cm,取出,晾干,噴以三氯化鋁試液,置紫外光燈(365nm)下檢視;供試品色譜中,在與對(duì)照藥材及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的熒光斑點(diǎn);
②.取婦炎康復(fù)制劑內(nèi)容物3.8g,加乙醚25~75ml,加熱回流0.5~1.5小時(shí),濾過(guò),藥渣揮干,加甲醇20~40ml,超聲處理20~40分鐘,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)铀m量使溶解,加于已處理好的D101型大孔吸附樹(shù)脂(內(nèi)徑1.5cm,填充高度12cm)上,用水25~75ml洗脫,棄去水液,再用70%乙醇25~75ml洗脫,收集洗脫液,蒸干,殘?jiān)蛹状?ml使溶解,濾過(guò),濾液作為供試品溶液;另取黃芩對(duì)照藥材1g,加甲醇5~15ml,超聲處理20~40分鐘,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)蛹状?ml使溶解,作為對(duì)照藥材溶液;再取黃芩苷對(duì)照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作為對(duì)照品溶液;照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn);吸取上述三種溶液各5μl,分別點(diǎn)于同一用0.5%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上,以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(46∶24∶0.51.5∶0.5~1.5)為展開(kāi)劑,展開(kāi),取出,晾干,噴以4%三氯化鐵乙醇溶液;供試品色譜中,在與對(duì)照藥材及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn);
③.取婦炎康復(fù)制劑內(nèi)容物3.8g,加石油醚(60~90℃)20~40ml,超聲處理20~40分鐘,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)邮兔?60~90℃)1ml使溶解,作為供試品溶液;另取薏苡仁對(duì)照藥材1g,同法制成對(duì)照藥材溶液;照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn),吸取上述兩種溶液各10μl,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以石油醚(60~90℃)-乙酸乙酯-醋酸(9~11∶2~4∶0.05~0.15)為展開(kāi)劑,展開(kāi),取出,晾干,置紫外光燈(365nm)下檢視;供試品色譜中,在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的熒光斑點(diǎn);
④.取婦炎康復(fù)制劑內(nèi)容物3.8g,加乙醇20~40ml,超聲處理20~40分鐘,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)右掖?ml使溶解,作為供試品溶液;另取川楝子對(duì)照藥材1g,同法制成對(duì)照藥材溶液;照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn),吸取上述兩種溶液各10μl,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以甲苯-丙酮(8.5~9.5∶0.1~2.0)為展開(kāi)劑,展開(kāi),取出,晾干,置碘蒸汽中熏至斑點(diǎn)顯色清晰;供試品色譜中,在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn);
⑤.取婦炎康復(fù)制劑內(nèi)容物5g,加乙醇25~75ml、濃氨試液0.5~1.5ml,超聲處理20~40分鐘,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)铀?~15ml水浴上加熱使溶解,加于已處理好的D101型大孔吸附樹(shù)脂(內(nèi)徑1.5cm,填充高度8cm)上,用水75~125ml洗脫,棄去洗脫液,再用40%乙醇75~125ml洗脫,棄去洗脫液,最后用70%乙醇75~125ml洗脫,收集洗脫液,蒸干,殘?jiān)右掖?ml使溶解,作為供試品溶液;另取柴胡對(duì)照藥材2g,加水10~30ml,加熱回流30~50分鐘,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)右掖?ml使溶解,作為對(duì)照藥材溶液;照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn),吸取上述供試品溶液10μl、對(duì)照藥材溶液5μl,分別點(diǎn)于同一用硅膠G薄層板上,以乙酸乙酯-乙醇-水(7~9∶1~3∶0.5~1.5)為展開(kāi)劑,展開(kāi),取出,晾干,噴以2%對(duì)二甲氨基苯甲醛的40%硫酸乙醇溶液,在60℃加熱至斑點(diǎn)清晰,置日光及紫外光燈(365nm)下檢視;供試品色譜中,在與對(duì)照藥材及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn)或熒光斑點(diǎn);
⑥.取婦炎康復(fù)制劑內(nèi)容物3.8g,加甲醇20~40ml,超聲處理20~40分鐘,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)铀?0~20ml使溶解,用水飽和正丁醇提取1~3次,每次10~30ml,合并正丁醇液,再用正丁醇飽和的水洗滌1~3次,每次10~30ml,棄去水液,正丁醇液蒸干,殘?jiān)蛹状?ml使溶解,作為供試品溶液;另取赤芍對(duì)照藥材1g,加甲醇5~15ml,超聲處理20~40分鐘,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)蛹状?ml使溶解,作為對(duì)照藥材溶液;再取芍藥苷對(duì)照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作為對(duì)照品溶液;照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn),吸取上述三種溶液各4μl,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(39~41∶4~6∶9~11∶0.1~0.3)為展開(kāi)劑,展開(kāi),取出,晾干,噴以5%香草醛硫酸溶液,在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰;供試品色譜中,在與對(duì)照藥材及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn);
⑦.取婦炎康復(fù)制劑內(nèi)容物5g,加乙醇25~75ml,超聲處理30~50分鐘,濾過(guò),濾液中加鹽酸1~3ml,加熱回流0.5~1.5小時(shí),再濃縮至約5~15ml,再加水5~15ml,用石油醚(60-90℃)提取1~3次,每次10~30ml,合并提取液,通過(guò)適量無(wú)水硫酸鈉脫水,蒸干,殘?jiān)右掖?ml使溶解,作為供試品溶液;另取敗醬草對(duì)照藥材2g,加乙醇25~75ml,加熱回流30~50分鐘,濾過(guò),自“濾液中加鹽酸2ml”后同供試品溶液制備方法制成對(duì)照藥材溶液;照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn),吸取上述供試品溶液15μl,對(duì)照藥材溶液5μl,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(13~15∶3~5∶0.4~0.6)為展開(kāi)劑,展開(kāi),取出,晾干,噴以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰;供試品色譜中,在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn);
含量測(cè)定
①.照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VID)測(cè)定;色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;乙腈-0.1%磷酸(10~20∶80~90)為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm;理論板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3000;對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取芍藥苷對(duì)照品適量,加甲醇制成每1ml含0.06mg的溶液;供試品溶液的制備取裝量差異項(xiàng)下的婦炎康復(fù)制劑內(nèi)容物適量,混勻,取約0.5g,精密稱(chēng)定,置100ml具塞錐形瓶中,精密加入甲醇20~30ml,稱(chēng)定重量,密塞,超聲處理(功率250W,頻率40kHz)20~40分鐘,取出,放冷至室溫,再稱(chēng)定重量,用甲醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,濾過(guò),取續(xù)濾液,作為供試品溶液;測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液及供試品溶液各10μl,注入液相色譜儀,測(cè)定,即得;
②.照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI D)測(cè)定;色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;乙腈-0.1%磷酸(20~30∶70~80)為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm;理論板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3000;對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取黃芩苷、橙皮苷對(duì)照品適量,加甲醇制成每1ml含黃芩苷0.06mg、橙皮苷0.01mg的混合溶液;供試品溶液的制備取裝量差異項(xiàng)下的婦炎康復(fù)制劑內(nèi)容物適量,混勻,取約0.3g,精密稱(chēng)定,置100ml具塞錐形瓶中,精密加入70%乙醇25~75ml,稱(chēng)定重量,密塞,超聲處理(功率250W,頻率40kHz)30~50分鐘,取出,放冷至室溫,再稱(chēng)定重量,用70%乙醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,濾過(guò),取續(xù)濾液5ml,置10ml量瓶中加70%乙醇稀釋至刻度,搖勻,作為供試品溶液;測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液及供試品溶液各10μl,注入液相色譜儀,測(cè)定,即得。
6.如權(quán)利要求5所述的婦炎康復(fù)膠囊的質(zhì)量控制方法,其特征在于該方法中包括以下方法
鑒別
①.取婦炎康復(fù)膠囊制劑內(nèi)容物3.8g,加甲醇50ml,超聲處理30分鐘,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)铀?0ml使溶解,用乙醚20ml提取,棄去乙醚液,水層用正丁醇20ml提取,分取正丁醇液,用無(wú)水硫酸鈉脫水,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)状?ml使溶解,作為供試品溶液;另取陳皮對(duì)照藥材1g,加甲醇10ml,超聲處理30分鐘,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)蛹状?ml使溶解,作為對(duì)照藥材溶液;再取橙皮苷對(duì)照品,加無(wú)水乙醇制成每1ml含1mg的溶液,作為對(duì)照品溶液;照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn);吸取上述三種溶液各5μl,分別點(diǎn)于同一用0.5%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上,以乙酸乙酯-甲醇-水(100∶17∶13)為展開(kāi)劑,展至約8cm,取出,晾干,再以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水(20∶10∶1∶1)的上層溶液為展開(kāi)劑,展至約12cm,取出,晾干,噴以三氯化鋁試液,置紫外光燈(365nm)下檢視;供試品色譜中,在與對(duì)照藥材及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的熒光斑點(diǎn);
②.取婦炎康復(fù)膠囊制劑內(nèi)容物3.8g,加乙醚50ml,加熱回流1小時(shí),濾過(guò),藥渣揮干,加甲醇30ml,超聲處理30分鐘,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)铀m量使溶解,加于已處理好的D101型大孔吸附樹(shù)脂(內(nèi)徑1.5cm,填充高度12cm)上,用水50ml洗脫,棄去水液,再用70%乙醇50ml洗脫,收集洗脫液,蒸干,殘?jiān)蛹状?ml使溶解,濾過(guò),濾液作為供試品溶液;另取黃芩對(duì)照藥材1g,加甲醇10ml,超聲處理30分鐘,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)蛹状?ml使溶解,作為對(duì)照藥材溶液;再取黃芩苷對(duì)照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作為對(duì)照品溶液;照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn);吸取上述三種溶液各5μl,分別點(diǎn)于同一用0.5%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上,以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)為展開(kāi)劑,展開(kāi),取出,晾干,噴以4%三氯化鐵乙醇溶液;供試品色譜中,在與對(duì)照藥材及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn);
③.取婦炎康復(fù)膠囊制劑內(nèi)容物3.8g,加石油醚(60~90℃)30ml,超聲處理30分鐘,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)邮兔?60~90℃)1ml使溶解,作為供試品溶液;另取薏苡仁對(duì)照藥材1g,同法制成對(duì)照藥材溶液;照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn),吸取上述兩種溶液各10μl,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以石油醚(60~90℃)-乙酸乙酯-醋酸(10∶3∶0.1)為展開(kāi)劑,展開(kāi),取出,晾干,置紫外光燈(365nm)下檢視;供試品色譜中,在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的熒光斑點(diǎn);
④.取婦炎康復(fù)膠囊制劑內(nèi)容物3.8g,加乙醇30ml,超聲處理30分鐘,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)右掖?ml使溶解,作為供試品溶液;另取川楝子對(duì)照藥材1g,同法制成對(duì)照藥材溶液;照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn),吸取上述兩種溶液各10μl,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以甲苯-丙酮(9∶1)為展開(kāi)劑,展開(kāi),取出,晾干,置碘蒸汽中熏至斑點(diǎn)顯色清晰;供試品色譜中,在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn);
⑤.取婦炎康復(fù)膠囊制劑內(nèi)容物5g,加乙醇50ml、濃氨試液1ml,超聲處理30分鐘,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)铀?0ml水浴上加熱使溶解,加于已處理好的D101型大孔吸附樹(shù)脂(內(nèi)徑1.5cm,填充高度8cm)上,用水100ml洗脫,棄去洗脫液,再用40%乙醇100ml洗脫,棄去洗脫液,最后用70%乙醇100ml洗脫,收集洗脫液,蒸干,殘?jiān)右掖?ml使溶解,作為供試品溶液;另取柴胡對(duì)照藥材2g,加水20ml,加熱回流40分鐘,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)右掖?ml使溶解,作為對(duì)照藥材溶液;照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn),吸取上述供試品溶液10μl、對(duì)照藥材溶液5μl,分別點(diǎn)于同一用硅膠G薄層板上,以乙酸乙酯-乙醇-水(8∶2∶1)為展開(kāi)劑,展開(kāi),取出,晾干,噴以2%對(duì)二甲氨基苯甲醛的40%硫酸乙醇溶液,在60℃加熱至斑點(diǎn)清晰,置日光及紫外光燈(365nm)下檢視;供試品色譜中,在與對(duì)照藥材及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn)或熒光斑點(diǎn);
⑥.取婦炎康復(fù)膠囊制劑內(nèi)容物3.8g,加甲醇30ml,超聲處理30分鐘,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)铀?5ml使溶解,用水飽和正丁醇提取2次,每次20ml,合并正丁醇液,再用正丁醇飽和的水洗滌2次,每次20ml,棄去水液,正丁醇液蒸干,殘?jiān)蛹状?ml使溶解,作為供試品溶液;另取赤芍對(duì)照藥材1g,加甲醇10ml,超聲處理30分鐘,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)蛹状?ml使溶解,作為對(duì)照藥材溶液;再取芍藥苷對(duì)照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作為對(duì)照品溶液;照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn),吸取上述三種溶液各4μl,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40∶5∶10∶0.2)為展開(kāi)劑,展開(kāi),取出,晾干,噴以5%香草醛硫酸溶液,在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰;供試品色譜中,在與對(duì)照藥材及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn);
⑦.取婦炎康復(fù)膠囊制劑內(nèi)容物5g,加乙醇50ml,超聲處理40分鐘,濾過(guò),濾液中加鹽酸2ml,加熱回流1小時(shí),再濃縮至約10ml,再加水10ml,用石油醚(60-90℃)提取2次,每次20ml,合并提取液,通過(guò)適量無(wú)水硫酸鈉脫水,蒸干,殘?jiān)右掖?ml使溶解,作為供試品溶液;另取敗醬草對(duì)照藥材2g,加乙醇50ml,加熱回流40分鐘,濾過(guò),自“濾液中加鹽酸2ml”后同供試品溶液制備方法制成對(duì)照藥材溶液;照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn),吸取上述供試品溶液15μl,對(duì)照藥材溶液5μl,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(14∶4∶0.5)為展開(kāi)劑,展開(kāi),取出,晾干,噴以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰;供試品色譜中,在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn);
含量測(cè)定
①.照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI D)測(cè)定;色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;乙腈-0.1%磷酸(15∶85)為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm;理論板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3000;對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取芍藥苷對(duì)照品適量,加甲醇制成每1ml含0.06mg的溶液;供試品溶液的制備取裝量差異項(xiàng)下的婦炎康復(fù)膠囊制劑內(nèi)容物適量,混勻,取約0.5g,精密稱(chēng)定,置100ml具塞錐形瓶中,精密加入甲醇25ml,稱(chēng)定重量,密塞,超聲處理(功率250W,頻率40kHz)30分鐘,取出,放冷至室溫,再稱(chēng)定重量,用甲醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,濾過(guò),取續(xù)濾液,作為供試品溶液;測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液及供試品溶液各10μl,注入液相色譜儀,測(cè)定,即得;
②.照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI D)測(cè)定;色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;乙腈-0.1%磷酸(25∶75)為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm;理論板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3000;對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取黃芩苷、橙皮苷對(duì)照品適量,加甲醇制成每1ml含黃芩苷0.06mg、橙皮苷0.01mg的混合溶液;供試品溶液的制備取裝量差異項(xiàng)下的婦炎康復(fù)膠囊制劑內(nèi)容物適量,混勻,取約0.3g,精密稱(chēng)定,置100ml具塞錐形瓶中,精密加入70%乙醇50ml,稱(chēng)定重量,密塞,超聲處理(功率250W,頻率40kHz)40分鐘,取出,放冷至室溫,再稱(chēng)定重量,用70%乙醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,濾過(guò),取續(xù)濾液5ml,置10ml量瓶中加70%乙醇稀釋至刻度,搖勻,作為供試品溶液;測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液及供試品溶液各10μl,注入液相色譜儀,測(cè)定,即得。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種治療婦科疾病藥物的質(zhì)量控制方法,具體涉及婦炎康復(fù)制劑質(zhì)量控制方法,其中所述的婦炎康復(fù)制劑由中藥材敗醬草、薏苡仁、川楝子、柴胡、黃芩、赤芍和陳皮組成,該方法采用照薄層色譜法對(duì)陳皮、黃芩、柴胡、赤芍、薏苡仁、川楝子、敗醬草進(jìn)行鑒別,并照高效液相色譜法以芍藥苷、黃芩苷和橙皮苷為指標(biāo)進(jìn)行含量測(cè)定。該方法保證了制劑的質(zhì)量可控性,從而確保該制劑的臨床療效。
文檔編號(hào)G01N30/36GK101766771SQ20091002080
公開(kāi)日2010年7月7日 申請(qǐng)日期2009年1月5日 優(yōu)先權(quán)日2009年1月5日
發(fā)明者王保安 申請(qǐng)人:王保安