專利名稱：：一種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物短途運(yùn)輸應(yīng)激評(píng)價(jià)和干預(yù)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬實(shí)驗(yàn)動(dòng)物領(lǐng)域，涉及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物短途運(yùn)輸，具體涉及一種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物短途運(yùn)輸應(yīng)激評(píng)價(jià)和干預(yù)方法。技術(shù)背景實(shí)驗(yàn)大鼠和小鼠是生命科學(xué)研究和生物醫(yī)藥產(chǎn)品檢定中用量最多、用途最廣泛的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，約占實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用總數(shù)量的80%。據(jù)報(bào)道，美國(guó)、歐洲、日本每年實(shí)驗(yàn)大鼠和小鼠的使用量約2500萬(wàn)只，僅在英國(guó)，2000年實(shí)驗(yàn)大鼠和小鼠的使用量就達(dá)2141，935只。隨著生命科學(xué)的飛速發(fā)展及生物醫(yī)藥支柱產(chǎn)業(yè)的迅猛擴(kuò)張，我國(guó)每年實(shí)驗(yàn)大鼠和小鼠的使用量目前已達(dá)IOOO萬(wàn)只以上。在國(guó)外，由于社會(huì)分工和市場(chǎng)化的日漸成熟，常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物往往是由少數(shù)幾家大型企業(yè)集中規(guī)?；a(chǎn)，然后依據(jù)客戶需求，運(yùn)輸至使用單位以供實(shí)驗(yàn)運(yùn)用。絕大多數(shù)使用單位一般自己不生產(chǎn)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，完全依賴市場(chǎng)外購(gòu)。例如，英國(guó)以BK公司為主，美國(guó)以CharlesRiver公司為主，實(shí)行市場(chǎng)化供應(yīng)。考慮到運(yùn)輸應(yīng)激對(duì)動(dòng)物健康的影響，一些發(fā)達(dá)國(guó)家就如何運(yùn)輸實(shí)驗(yàn)動(dòng)物作出了相應(yīng)規(guī)定或者提出指導(dǎo)性意見(jiàn)，其內(nèi)容主要涉及交通工具、籠具材料、運(yùn)輸空間、長(zhǎng)途運(yùn)輸中食物和水的供應(yīng)以及獸醫(yī)觀察等，且對(duì)象主要為犬、猴等大型實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，對(duì)于用途最廣、用量最大的實(shí)驗(yàn)大鼠和小鼠的常見(jiàn)短途運(yùn)輸問(wèn)題并無(wú)建立在實(shí)驗(yàn)評(píng)估科學(xué)依據(jù)下的具體技術(shù)規(guī)范。在我國(guó)，由于實(shí)行了實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證和使用許可證制度，常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)和使用分離已成大勢(shì)所趨，運(yùn)輸成為銜接生產(chǎn)(上游)和應(yīng)用(下游)的必要環(huán)節(jié)。但是，我國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)僅覆蓋了實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在生產(chǎn)和使用期間的環(huán)境及營(yíng)養(yǎng)控制，對(duì)于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的運(yùn)輸過(guò)程尚無(wú)具體技術(shù)規(guī)范。在此狀況下，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)供應(yīng)機(jī)構(gòu)普遍采用專用運(yùn)輸車和運(yùn)輸包裝箱運(yùn)送實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，以滿足運(yùn)輸期間實(shí)驗(yàn)動(dòng)物對(duì)溫度、濕度和空間等基本要素的需求。事實(shí)上，經(jīng)歷運(yùn)輸?shù)膭?dòng)物不可避免地受到諸多生理性和心理性激源的復(fù)合刺激，由此引發(fā)的相應(yīng)應(yīng)激反應(yīng)不同程度地威脅到動(dòng)物的身心健康。目前，國(guó)內(nèi)外均缺乏運(yùn)輸應(yīng)激對(duì)實(shí)驗(yàn)大鼠和小鼠影響的系統(tǒng)全面科學(xué)評(píng)價(jià)，對(duì)于在運(yùn)輸過(guò)程中及到達(dá)目的地后如何減輕或消除運(yùn)輸應(yīng)激，亦無(wú)相應(yīng)的有效技術(shù)措施。短途運(yùn)輸是實(shí)驗(yàn)動(dòng)物最常見(jiàn)的運(yùn)輸形式，在我國(guó)，每年約有iooo多萬(wàn)只實(shí)驗(yàn)大鼠和小鼠經(jīng)歷短途運(yùn)輸過(guò)程，其中絕大多數(shù)是由占實(shí)驗(yàn)動(dòng)物專業(yè)機(jī)構(gòu)95%以上的使用單位向就近的生產(chǎn)單位購(gòu)買以供實(shí)驗(yàn)使用，約65%的短途運(yùn)輸時(shí)間為1.5小時(shí)左右，隨后依次為1小時(shí)和0.5小時(shí)。由于短途運(yùn)輸應(yīng)激的影響，動(dòng)物的生理狀況和功能指標(biāo)發(fā)生變異，抵達(dá)目的地后需要有相當(dāng)?shù)慕】颠m應(yīng)期(periodofacclimatizationfollowingtransportation)用于休養(yǎng)調(diào)整，待恢復(fù)后才能應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)，否則不僅會(huì)對(duì)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生背景性干擾，影響科學(xué)研究的真實(shí)性和可靠性以及生物醫(yī)藥產(chǎn)品檢定的安全性和有效性，也會(huì)損害實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的福利和健康。由于缺乏相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)和技術(shù)規(guī)范，使用單位對(duì)健康適應(yīng)期限的設(shè)定各不相同，有調(diào)査顯示，約有67%的使用單位把實(shí)驗(yàn)大鼠和小鼠的健康適應(yīng)期定為1天，25%的使用單位定為1周。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物短途運(yùn)輸應(yīng)激評(píng)價(jià)和干預(yù)方法。本發(fā)明能提供評(píng)價(jià)嚙齒類實(shí)驗(yàn)動(dòng)物短途運(yùn)輸應(yīng)激反應(yīng)的技術(shù)指標(biāo)體系和經(jīng)歷短途運(yùn)輸后實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的健康適應(yīng)期以及緩解短途運(yùn)輸應(yīng)激專用營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑。本發(fā)明所述的嚙齒類實(shí)驗(yàn)動(dòng)物優(yōu)選實(shí)驗(yàn)大鼠和小鼠。本發(fā)明的目的通過(guò)下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)本發(fā)明通過(guò)觀察短途運(yùn)輸應(yīng)激對(duì)實(shí)驗(yàn)大鼠和小鼠的影響，建立短途運(yùn)輸應(yīng)激評(píng)價(jià)的技術(shù)指標(biāo)體系，確定實(shí)驗(yàn)大鼠和小鼠經(jīng)歷短途運(yùn)輸應(yīng)激后的健康適應(yīng)期，提供減輕短途運(yùn)輸應(yīng)激不良反應(yīng)的干預(yù)措施。本發(fā)明方法通過(guò)下述步驟提供了評(píng)價(jià)的技術(shù)指標(biāo)體系和健康適應(yīng)期以及緩解短途運(yùn)輸應(yīng)激專用營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑-1)使實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分別經(jīng)歷不同運(yùn)輸時(shí)間，分別為0.5hr、lhr或1.5hr。2)使實(shí)驗(yàn)動(dòng)物經(jīng)歷1.5hr運(yùn)輸時(shí)間到達(dá)實(shí)驗(yàn)室后分別恢復(fù)不同時(shí)間，分別為24hr、48hr、72hr或96hr;或，運(yùn)輸時(shí)進(jìn)行干預(yù)，優(yōu)選營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑進(jìn)行干預(yù)，到達(dá)實(shí)驗(yàn)室后分別恢復(fù)不同時(shí)間，分別為24hr、48hr、72hr或96hr;3)測(cè)定所述實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的生長(zhǎng)代謝、神經(jīng)內(nèi)分泌和免疫功能主要指標(biāo)，與未經(jīng)歷運(yùn)輸?shù)膶?duì)照組比較，觀察分析短途運(yùn)輸應(yīng)激對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的影響；或與未接受干預(yù)的運(yùn)輸對(duì)照組比較，觀察分析營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑對(duì)緩解實(shí)驗(yàn)動(dòng)物短途運(yùn)輸應(yīng)激的作用；4)遴選評(píng)價(jià)的技術(shù)指標(biāo)，建立評(píng)價(jià)技術(shù)指標(biāo)體系，提出健康適應(yīng)期以及確定營(yíng)4養(yǎng)補(bǔ)充劑的干預(yù)效果。結(jié)果表明，本發(fā)明方法提供了由能量代謝標(biāo)志物GLU、免疫功能執(zhí)行者WBC、HPA軸終末效應(yīng)激素CORT、神經(jīng)內(nèi)分泌-免疫網(wǎng)絡(luò)雙向調(diào)控因子P-EP和免疫功能調(diào)節(jié)關(guān)鍵細(xì)胞因子IL-2共同構(gòu)成的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物短途運(yùn)輸應(yīng)激評(píng)價(jià)技術(shù)指標(biāo)體系，以及通過(guò)尾靜脈微量微創(chuàng)采血即刻測(cè)定外周血GLU含量和WBC總數(shù)的快速評(píng)價(jià)方法；實(shí)驗(yàn)大鼠和小鼠在經(jīng)歷1.5hr以內(nèi)短途運(yùn)輸后的健康適應(yīng)期均應(yīng)至少為72hr;所制成的緩解短途運(yùn)輸應(yīng)激專用營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑為凝膠狀營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑，其能夠有效減輕短途運(yùn)輸應(yīng)激對(duì)動(dòng)物代謝和免疫功能造成的不良影響，同樣經(jīng)歷1.5hr運(yùn)輸，運(yùn)輸期間獲得營(yíng)養(yǎng)干預(yù)的動(dòng)物比未獲得營(yíng)養(yǎng)干預(yù)的動(dòng)物提前三分之一的時(shí)間恢復(fù)到正常狀態(tài)，說(shuō)明該營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑具有一定的抗短途運(yùn)輸應(yīng)激作用。本發(fā)明方法可為實(shí)驗(yàn)大鼠和小鼠短途運(yùn)輸科學(xué)化和標(biāo)準(zhǔn)化提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，避免短途運(yùn)輸應(yīng)激對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物健康和福利的損害及對(duì)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的背景性干擾，消除實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)和使用分離所造成的制約瓶頸，實(shí)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量保證的無(wú)縫對(duì)接，解決生產(chǎn)和使用銜接中的實(shí)際問(wèn)題，以確保事關(guān)國(guó)計(jì)民生的生物醫(yī)藥科學(xué)研究和產(chǎn)品檢定的科學(xué)性及有效性。具體實(shí)施方式實(shí)施例l制訂評(píng)價(jià)的技術(shù)指標(biāo)，建立技術(shù)指標(biāo)評(píng)價(jià)體系1、動(dòng)物及日常飼養(yǎng)管理清潔級(jí)封閉群雄性Wistar大鼠80只，體重250士15g，由復(fù)旦大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)部提供[生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK(滬)2007—0002]。實(shí)驗(yàn)在復(fù)旦大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)部屏障環(huán)境設(shè)施內(nèi)進(jìn)行[使用許可證號(hào)SYXK(滬)2007_0002]。動(dòng)物飼養(yǎng)于SS4型大鼠專用飼養(yǎng)籠內(nèi)(尺寸為485mmx350mmx200mm)，每籠5只。飼料釆用經(jīng)121°C20min高溫高壓蒸汽滅菌的全價(jià)顆粒飼料，飼料標(biāo)準(zhǔn)參照《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物小鼠大鼠配合飼料》國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB14924.3-2001，用前篩除碎屑。飲水采用經(jīng)121°C30min高溫高壓蒸汽滅菌后自然冷卻至室溫的自來(lái)水，使用500ml專用聚丙烯PP塑料飲水瓶裝。墊料釆用經(jīng)121°C45min高溫高壓蒸汽滅菌的刨花，用前篩除粉塵。飼育環(huán)境控制按照實(shí)驗(yàn)動(dòng)物環(huán)境國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB14925-2001執(zhí)行，其中，照明采用人工控制10/14明暗光制(照明時(shí)間為8:0018:00)。2、主要儀器、設(shè)備OmnitestEZ血糖儀B.Braun公司；OPTICON2熒光定量PCR儀MJ公司；Bio-TekElx800USA酶標(biāo)儀(美國(guó))；OLYMPUS顯微鏡(日本)；上海精科MP502B型電子秤，量程0500g，精確度0.01g;3、主要試劑大鼠皮質(zhì)酮(CORT)、p-內(nèi)啡肽(P-EP)測(cè)定試劑盒(血清型)，ADL公司產(chǎn)品；大鼠免疫球蛋白g(IgG)、白介素l(il-1)、白介素2(il-2)、y干擾素(IFN-y)測(cè)定試劑盒(血清型)，RapidBio公司產(chǎn)品；Trizol試劑、01igodT18，invitrogen公司產(chǎn)品；M-MLV5xReactionBuffer,RecombinantRnasin，M-MLV，Promega公司產(chǎn)品；dNTPmix，F(xiàn)Q-PCRPremixKit(熒光染料)，Transhold公司產(chǎn)品；OmnitestEZ血糖儀專用試紙，B.Braun公司產(chǎn)品；白細(xì)胞稀釋液按常規(guī)方法配制；DEPC(AR)，EDTA-Na2(AR)，氫氧化鈉(AR)，無(wú)水乙醇(AR)，三氯甲烷(AR),異丙醇(AR)，冰乙酸(AR)均為國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司產(chǎn)品；4方法1)實(shí)驗(yàn)設(shè)經(jīng)歷不同運(yùn)輸時(shí)間、運(yùn)輸后不同恢復(fù)時(shí)間及不經(jīng)歷運(yùn)輸?shù)目瞻讓?duì)照3個(gè)組別經(jīng)歷不同運(yùn)輸時(shí)間組別(T):共3組，每組10只，編組和處理如下丁0.5組經(jīng)歷運(yùn)輸0.5hr后即刻采樣，!Yo組經(jīng)歷運(yùn)輸1.0hr后即刻采樣，TYs組經(jīng)歷運(yùn)輸1.5hr后即刻采樣，運(yùn)輸后不同恢復(fù)時(shí)間組別(R):共4組，每組10只，編組和處理如下R24組經(jīng)歷運(yùn)輸1.5hr后，恢復(fù)適應(yīng)24hr再行采樣，R48組經(jīng)歷運(yùn)輸1.5hr后，恢復(fù)適應(yīng)48hr再行采樣，R72組經(jīng)歷運(yùn)輸1.5hr后，恢復(fù)適應(yīng)72hr再行采樣，R96組經(jīng)歷運(yùn)輸1.5hr后，恢復(fù)適應(yīng)96hr再行采樣，空白對(duì)照組別(C):共10只，常規(guī)飼養(yǎng)，不經(jīng)歷運(yùn)輸。2)動(dòng)物運(yùn)輸和處理使用恒溫實(shí)驗(yàn)動(dòng)物專用運(yùn)輸車為短途運(yùn)輸工具，采用實(shí)驗(yàn)大鼠運(yùn)輸專用包裝箱為運(yùn)輸容器(尺寸為510mmx320mmxl卯mm),每箱裝運(yùn)lO只大鼠，箱內(nèi)預(yù)先放置經(jīng)12rC45min高溫高壓蒸汽滅菌并篩除粉塵的刨花，松散狀態(tài)下刨花厚度約40mm。經(jīng)歷不同運(yùn)輸時(shí)間組別為To.5、T,.o、T,.5的動(dòng)物，于連續(xù)運(yùn)輸0.5hr、lhr、1.5hr時(shí)即刻逐組采樣測(cè)定；運(yùn)輸后不同恢復(fù)時(shí)間組別為R24、R48、R72、R96的動(dòng)物，經(jīng)歷1.5hr的連續(xù)運(yùn)輸后返回實(shí)驗(yàn)室，更換潔凈籠盒，重新放置墊料、飼料和飲水，常規(guī)飼養(yǎng)，于返回后24hr、48hr、72hr、96hr逐組采樣測(cè)定。各組采樣均于11:15-12:30進(jìn)行，每只大鼠的采樣流程為尾靜脈微量采血—眼睚動(dòng)靜脈叢采血—肝臟組織塊采集，對(duì)每只大鼠的采樣處理于3min內(nèi)完成。3)體重測(cè)定經(jīng)歷不同運(yùn)輸時(shí)間(To.s組、Tu)組、Tl5組)的動(dòng)物于運(yùn)輸前、后各測(cè)定一次體重，以運(yùn)輸途中減輕的體重和運(yùn)輸前體重之比(Rbwlost)表示運(yùn)輸過(guò)程對(duì)體重的影響。對(duì)照組(C)的體重測(cè)定和TY5組同時(shí)進(jìn)行。對(duì)經(jīng)歷運(yùn)輸1.5h后恢復(fù)96hr的動(dòng)物(R96組)于運(yùn)輸結(jié)束后即刻(Ohr)、24hr、48hr、72hr、96hr5個(gè)時(shí)間點(diǎn)分別測(cè)定體重，同時(shí)同步測(cè)定對(duì)照組(C)體重，計(jì)算兩組在實(shí)驗(yàn)期間每24hr的體重增長(zhǎng)率。4)血糖(GLU)測(cè)定動(dòng)物清醒安靜狀態(tài)下，從右側(cè)尾靜脈距尾尖1/3處微創(chuàng)法采血5^U,以測(cè)定試紙吸取血液至充滿測(cè)定池后，靜置15s,記錄測(cè)定值。5)外周血白細(xì)胞(WBC)計(jì)數(shù)血糖測(cè)定采樣后，同部位再次采取20pl血樣，將血樣溶于白細(xì)胞稀釋液并振蕩混勻，經(jīng)40倍稀釋后，于3hr內(nèi)置低倍鏡下直接計(jì)4個(gè)大方格內(nèi)白細(xì)胞總數(shù)(N)，按下列公式求得外周白細(xì)胞數(shù)4個(gè)大方格內(nèi)白細(xì)胞總數(shù)(N)，白細(xì)胞數(shù)(WBC)=-x稀釋倍數(shù)xl0746)激素和細(xì)胞因子測(cè)定取眼眶動(dòng)靜脈血2ml，室溫靜置30min，4'C3000轉(zhuǎn)/分離心15min,分離血清，冰上分裝，置-3(TC保存，于30天內(nèi)測(cè)定血清中大鼠皮質(zhì)酮(CORT)、(3-內(nèi)啡肽(p-EP)、免疫球蛋白G(IgG)、白細(xì)胞介素-1(IL-1)、白細(xì)胞介素-2(IL-2)和Y干擾素(IFN-Y)的含量，測(cè)定采用ELISA法，按試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。7)應(yīng)激分子轉(zhuǎn)錄水平測(cè)定按常規(guī)方法采集肝臟標(biāo)本，投入液氮速凍后轉(zhuǎn)-70'C保存，Trizol法提取肝臟總RNA，RT-PCR兩步法合成cDNA，采用熒光染料法行real-timePCR，2^"法對(duì)Hsp72表達(dá)相對(duì)定量。8)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理結(jié)果以均值±標(biāo)準(zhǔn)差表達(dá)，采用STATA軟件統(tǒng)計(jì)，兩組均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)01=0.05，a-O.Ol。結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)期間T0.5組、T1.0組和T1.5組的RBWLOST均極顯著高于C組(PO.Ol)。表l是不同運(yùn)輸時(shí)間對(duì)體重的影響。表1__組別運(yùn)輸時(shí)間"BW々BW2/gABW/gRbwlost/hrT0.50.5254.56±8.51247.70±7.686.86±1.580.0269±0.0059"T101.0255.14±11.32246.93±11.148.20±1.210.0322土0,0047"TL51.5255.22±13.26244.25±13.0210.98±1.940.0430±0.0074"_^_-—254.30±9.21252.20±9.212.10±0.730.0083±0.0029其中①BW,運(yùn)輸前體重；BW2運(yùn)輸后體重；ABW=BW廣BW2;Rbwlost=ABW/BW1;②與C組比較，"P〈0.01;n=10。在運(yùn)輸后024hr、24~48hr、48~72hr3個(gè)恢復(fù)時(shí)段內(nèi)，R96組的體重增長(zhǎng)率均高于C組且差異極顯著(P<0.01)，運(yùn)輸后7296hr，R96組的體重增長(zhǎng)率和對(duì)照組差異不顯著(P>0.05)。表2是運(yùn)輸后不同恢復(fù)時(shí)段體重增長(zhǎng)率的變化。表2組別測(cè)量時(shí)段0~24hr24~48hr48~72hr72~96hrR960.0584土0.016"0.0307±0.0082"0.0348土0.0012"0.0193±0.0063C0.0206±0.00670.0190±0.00590.0232±0.00700.0194±0.0064其中與C組比較，尸O.01;n=108GLU測(cè)定顯示，與空白對(duì)照組(C組)比較，T0.5組顯著升高(P<0.05)，T1.0組和R24組均極顯著升高(PO.Ol),而T1.5組極顯著降低(P<0.01),R48、R72和R963組的GLU水平與C組差異不顯著(P>0.05)。WBC測(cè)定顯示，與空白對(duì)照組(C組)比較，T0.5組、T1.0組和T1.5組均極顯著減少(PO.Ol)，R24組和R48組均顯著減少(P<0.05)，R72組和R96組的WBC與C組差異不顯著(P>0.05)。表3是GLU和WBC的測(cè)定結(jié)果。表3<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>其中和C組比較，><0.05,"O.01;n=10CORT測(cè)定顯示，與空白對(duì)照組(C組)比較，T0.5組和T1.0組血清CORT含量升高，T1.5組血清CORT含量降低，差異均極顯著(P〈0.Q1)，R24、R48、R72、R964組和C組的差異均不顯著(P>0.05)。e-EP測(cè)定顯示，與空白對(duì)照組(C組)比較，T0.5組、T1.0組和T1.5組的血清e(cuò)-EP含量均降低且差異極顯著(PO.Ol)，R24組血清P-EP的含量降低且差異顯著(P<0.05)，R48、R72以及R963組和C組的差異均不顯著(P>0.05)。表4是血清中CORT和e-EP的含量。表4<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>R721.572188.50±34.9815.23±1.83R961.596192.70±38.6214.78±1.76C_==z:__187.43±27.91_14.02±1.79其中和C組比較，'尸<0.05，*><0.01;n=10與空白對(duì)照組(C組)比較，R24組和R48組血清中IgG、IL-2和IFN-Y含量，以及R24組血清中IL-1含量均極顯著降低(P<0.01)，R48組血清中IL-1含量顯著降低(P<0.05),不同運(yùn)輸時(shí)間的3組(T0.5組、Tl.O組、T1.5組)和運(yùn)輸后分別恢復(fù)72hr、96hr的R72組、R96組與C組的差異均不顯著(P〉0.05)。表5是血清中4種免疫因子的含量。表5^尿運(yùn)輸時(shí)間/hr處理恢復(fù)時(shí)間/hrIgG/mg'L.1IL國(guó)2/ng,1/1IFN-Y/ng'L'1IL-l/ng.L"To.50.50643.29±863.81±631.06±99.45330.89±54.5112.67140.281.00650.96±910.98±641.34±58.19345.78±48.74124.78146.55T151.50652.75±847.53±625.73±348.73±75.14118.04162.44120.92R241.524464.67±67.10646.78±456.69±244.33±85.1175.90**38.02**R481.548530.34±68.44699.75±471.69±270.55±47.33*94.58**78.2廣R721.572617.31±63.63916.72±607.15±83.06320.21±53.44185.55R961.596619.68±61.28883.20±626.39±70.37331.23±41.78紙卯C----____633.59±83.09850.36±96.57638.08±321.39±41.45_103.25_其中和C組比較，><0.05，"PO.01;n=10與空白對(duì)照組(C組)比較，不同運(yùn)輸時(shí)間的各組(T0.5、Tl.O、T1.5)以及R24組和R48組的hsp72mRNA表達(dá)量均極顯著上升(P<0.01)，而R72和R962組的表達(dá)量和對(duì)照組差異不顯著(P>0.05)。10表6是肝臟hsp72mRNA的表達(dá)情況。表6處理組別-:-hsp72mRNA運(yùn)輸時(shí)間/hr恢復(fù)時(shí)間/hrT0.50.500.0338±0.0114**Ti.o1.000.0876±0.0266"丁L51.500.3036±0.聽(tīng)**R241.5240.0330士0.0137"R481.5480.0074±0.0019"R721.5720.0059±0.0015R961.5960.0056±0.0015C——0.0052±0細(xì)2注和C組比較，"PO.01;n=10實(shí)驗(yàn)證實(shí)，短途運(yùn)輸應(yīng)激對(duì)實(shí)驗(yàn)大鼠的生長(zhǎng)代謝、神經(jīng)內(nèi)分泌和免疫功能均有不利影響，經(jīng)歷常規(guī)短途運(yùn)輸(1.5hr以內(nèi))的實(shí)驗(yàn)大鼠，到達(dá)目的地后的健康適應(yīng)期至少應(yīng)為72hr;外周血中白細(xì)胞總數(shù)(WBC)、血糖(GLU)、皮質(zhì)酮(CORT)、e-內(nèi)啡肽(P-EP)、免疫球蛋白G(IgG)、白介素2(IL-2)、Y干擾素(IFN-Y)及白介素l(IL-1)的含量可作為評(píng)價(jià)短途運(yùn)輸應(yīng)激的指標(biāo)，本發(fā)明優(yōu)選外周血中白細(xì)胞總數(shù)(WBC)、血糖(GLU)、皮質(zhì)酮(CORT)、P-內(nèi)啡肽(P-EP)、白介素2(IL-2)建立實(shí)驗(yàn)動(dòng)物短途運(yùn)輸應(yīng)激評(píng)價(jià)技術(shù)指標(biāo)體系。實(shí)施例2驗(yàn)證評(píng)價(jià)的技術(shù)指標(biāo)體系，評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)小鼠的短途運(yùn)輸應(yīng)激1、動(dòng)物及日常飼養(yǎng)管理清潔級(jí)雄性近交系BALB/c小鼠80只，體重20士2g;清潔級(jí)雄性封閉群ICR小鼠80只，體重20±2g，均由中國(guó)科學(xué)院上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供[生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK(滬)2007—0005]，實(shí)驗(yàn)在復(fù)旦大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)部屏障環(huán)境設(shè)施內(nèi)進(jìn)行[使用許可證號(hào)SYXK(滬)2007—0002]。動(dòng)物飼養(yǎng)于M1型小鼠專用飼養(yǎng)籠內(nèi)(尺寸為2卯mmX178mmX160mm),每籠飼養(yǎng)4只。飼料采用經(jīng)121°C20min高溫高壓蒸汽滅菌的全價(jià)顆粒飼料，飼料標(biāo)準(zhǔn)參照《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物小鼠大鼠配合飼料》國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB14924.3-2001，用前篩除碎屑。飲水采用經(jīng)121°C30min高溫高壓蒸汽滅菌后自然冷卻至室溫的自來(lái)水，使用200ml專用聚丙烯PP塑料飲水瓶裝。墊料采用經(jīng)121°C45min高溫高壓蒸汽滅菌的刨花，用前篩除粉塵。詞育環(huán)境控制按照實(shí)驗(yàn)動(dòng)物環(huán)境國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB14925-2001執(zhí)行，其中，照明采用人工控制10/14明暗光制(照明時(shí)間為8:00-18:00)。2、主要儀器、設(shè)備Bio-TekElx800USA酶標(biāo)儀(美國(guó))。OmnitestEZ血糖儀(德國(guó))。OLYMPUS顯微鏡(日本)。3、主要試劑小鼠皮質(zhì)酮(CORT)、e-內(nèi)啡肽(e-EP)測(cè)定試劑盒(血清型)，ADL公司產(chǎn)品；小鼠白介素2(IL-2)測(cè)定試劑盒(血清型)，RapidBio公司產(chǎn)品；OmnitestEZ血糖儀專用試紙，B.Braun公司產(chǎn)品；白細(xì)胞稀釋液按常規(guī)方法配制；4方法1)每個(gè)品系(品種)均設(shè)5組，每組16只，編組和處理如下TRO組經(jīng)歷1.5hr運(yùn)輸后即刻采樣，TR24組經(jīng)歷1.5hr運(yùn)輸后，恢復(fù)適應(yīng)24hr再行采樣，TR48組經(jīng)歷1.5hr運(yùn)輸后，恢復(fù)適應(yīng)48hr再行采樣，TR72組經(jīng)歷1.5hr運(yùn)輸后，恢復(fù)適應(yīng)72hr再行采樣，C組不經(jīng)歷運(yùn)輸，常規(guī)飼養(yǎng)，作為空白對(duì)照組。2)運(yùn)輸及采樣處理使用恒溫實(shí)驗(yàn)動(dòng)物專用運(yùn)輸車為短途運(yùn)輸工具，采用實(shí)驗(yàn)小鼠運(yùn)輸專用包裝箱為運(yùn)輸容器(尺寸為510mmX320mmX190mm)，箱內(nèi)預(yù)先放置經(jīng)121'C45min高溫高壓蒸汽滅菌并篩除粉塵的刨花作墊料，松散狀態(tài)下刨花厚度約30mm。動(dòng)物按品系(品種)分開(kāi)裝運(yùn)，每箱32只。連續(xù)運(yùn)輸1.5hr后，即刻對(duì)2個(gè)品系(品種)的TRO組采樣測(cè)定，其余小鼠送入實(shí)驗(yàn)室按組常規(guī)飼養(yǎng)，并于運(yùn)輸后24hr、48hr、72hr逐組采樣測(cè)定?？瞻讓?duì)照C組常規(guī)飼養(yǎng)，采樣處理與各實(shí)驗(yàn)組相同。各組采樣均于11:3(M2:30進(jìn)行，對(duì)每只小鼠采樣處理控制在3min內(nèi)完成。3)血糖(GLU)測(cè)定和外周血白細(xì)胞(WBC)計(jì)數(shù)同實(shí)施例14)激素和細(xì)胞因子測(cè)定12取眼眶動(dòng)靜脈血1.2ml左右，室溫靜置30min，4'C3000轉(zhuǎn)/分離心15min，分離血清，冰上分裝，置-3(TC保存，于30天內(nèi)測(cè)定血清中小鼠皮質(zhì)酮(CORT)、P-內(nèi)啡肽(e-EP)、白細(xì)胞介素-2(IL-2)含量，測(cè)定均采用ELISA法，按試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。5)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理結(jié)果以均值土標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用STATA軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，兩組均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)a=0.05，a=0.01。結(jié)果顯示，BALB/c小鼠和ICR小鼠的TRO組、TR24組GLU均比各自的對(duì)照組(C組)極顯著降低(PO.Ol),TR48組和TR72組與各自對(duì)照組(C組)比較差異不顯著(P>0.05)。表7是運(yùn)輸應(yīng)激小鼠GLU的變化。組別運(yùn)輸后恢復(fù)時(shí)間/hr—aLU/mmd'L-1BALB/cICR其中和C組比較，PO.01;n=16與各自對(duì)照組(C組)比較，BALB/c小鼠的TRO組、TR24組、TR48組，以及ICR小鼠的TRO組WBC均極顯著減少(P<0.01)，ICR小鼠的TR24組WBC顯著減少(P<0.05)。BALB/c小鼠的TR72組、ICR小鼠的TR48組和TR72組與各自對(duì)照組(C組)比較差異均不顯著(P〉0.05)。表8是運(yùn)輸應(yīng)激小鼠WBC的變化。表8_組別運(yùn)輸后恢復(fù)時(shí)間/hr——~~WBC/109'L-1-BALB/cICR其中和C組比較，戶<0.05,PO.01;n=16與各自對(duì)照組(C組)比較，BALB/c小鼠和ICR小鼠的TRO組、TR24組血清IL-2含量均極顯著減少(PO.Ol)，ICR小鼠的TR48組血清IL-2含量顯著減少(P<0.05)。137.41±0.668.21土0.6(T9.01±0.759.01±0.429.15士0.466.29±0.728.34±0.55*9.33±0.959.34±0.679.26±0.6603.68±0.775.63±1.082412.78土4.05"10.85±2.15*4814.80±2.51"11.89±2.297216.78±2.8511.62±2.11——17.93±2.4212.59±1.42D482!c247i力4g2TTTTwM82wRcBALB/c小鼠的TR48組、TR72組以及ICR小鼠的TR72組與各自對(duì)照組(C組)比較差異均不顯著(P>0.05)。表9是運(yùn)輸應(yīng)激小鼠血清IL-2含量的變化。表9其中和C組比較，><0.05，><0.01;n=16與各自對(duì)照組(C組)比較，BALB/c小鼠和ICR小鼠的TR0組血清CORT含量均極顯著減少(PO.Ol)，TR24、TR48、TR72各組與各自對(duì)照組(C組)比較則無(wú)顯著差異(P>0.05)。表10是運(yùn)輸應(yīng)激小鼠血清CORT含量的變化。表10_組別運(yùn)輸后恢復(fù)時(shí)間/hr—CX)RT/nmol'L-lBALB/cICR其中和C組比較，'P<0.05，P〈0.01;n-16與各自對(duì)照組(C組)比較，BALB/c小鼠和ICR小鼠的TRO組、TR24組血清e(cuò)-EP含量均極顯著減少(PO.Ol)，TR48、TR722組與各自對(duì)照組(C組)比較則無(wú)顯著差異(P>0.05)。表ll是運(yùn)輸應(yīng)激小鼠血清e(cuò)-EP含量。表11注和C組比較，尸<0.01;11=16運(yùn)輸后恢復(fù)時(shí)間/hr<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>實(shí)驗(yàn)證實(shí)，短途運(yùn)輸應(yīng)激對(duì)不同遺傳背景實(shí)驗(yàn)小鼠的代謝、神經(jīng)內(nèi)分泌和免疫功能均會(huì)產(chǎn)生不利影響，其中免疫功能所受的影響較大，運(yùn)用本方法建立的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物短途運(yùn)輸應(yīng)激評(píng)價(jià)技術(shù)指標(biāo)體系能夠客觀評(píng)價(jià)這些影響。經(jīng)歷常規(guī)短途運(yùn)輸(1.5hr以內(nèi))的實(shí)驗(yàn)小鼠，到達(dá)目的地后的健康適應(yīng)期至少應(yīng)為72hr。實(shí)施例3制備緩解短途運(yùn)輸應(yīng)激的凝膠狀專用營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑1、動(dòng)物及日常飼養(yǎng)管理清潔級(jí)雄性近交系BALB/c小鼠72只，體重20土2g，由中國(guó)科學(xué)院上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供[生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK(滬)2007—0005]，實(shí)驗(yàn)在復(fù)旦大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)部屏障環(huán)境設(shè)施內(nèi)進(jìn)行[使用許可證號(hào)SYXK(滬)2007—0002]。日常飼養(yǎng)管理同實(shí)施例2。2、主要儀器、設(shè)備和試劑同實(shí)施例23、凝膠狀營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑每支長(zhǎng)約8cm,直徑1.5cm，圓柱狀，重量約12g士lg，具體配方如下氨基酸L-色氨酸(1.25%);L-精氨酸(3%);牛磺酸(5%)。均為分析純?cè)噭?，日本進(jìn)口分裝，由上海伯奧生物科技有限公司提供。維生素Bl(13mg/100g);B2(12mg/100g);B6(12mg膽g);B12(0.022mg/100g);C(1800mg/100g)。上海信誼藥業(yè)有限公司產(chǎn)品。葡萄糖(AR):4%，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司產(chǎn)品。瓊脂(AR):5%，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司產(chǎn)品。生理鹽水81.75%,四川科倫藥業(yè)股份有限公司產(chǎn)品4、方法1)實(shí)驗(yàn)設(shè)營(yíng)養(yǎng)干預(yù)、運(yùn)輸對(duì)照和空白對(duì)照3個(gè)組別，具體如下運(yùn)輸同步營(yíng)養(yǎng)干預(yù)的分組共4組，每組8只，編組和處理如下TIO組經(jīng)歷運(yùn)輸及同步營(yíng)養(yǎng)干預(yù)1.5hr后即刻采樣，TI24組經(jīng)歷運(yùn)輸及同步營(yíng)養(yǎng)干預(yù)1.5hr后，恢復(fù)適應(yīng)24hr再行采樣，TI48組經(jīng)歷運(yùn)輸及同步營(yíng)養(yǎng)干預(yù)1.5hr后，恢復(fù)適應(yīng)48hr再行采樣，TI72組經(jīng)歷運(yùn)輸及同步營(yíng)養(yǎng)干預(yù)1.5hr后，恢復(fù)適應(yīng)72hr再行采樣，運(yùn)輸對(duì)照動(dòng)物的分組共4組，每組8只，編組和處理如下15TR0組經(jīng)歷運(yùn)輸1.5hr后即刻采樣，TR24組經(jīng)歷運(yùn)輸1.5hr后，恢復(fù)適應(yīng)24hr再行采樣，TR48組經(jīng)歷運(yùn)輸1.5hr后，恢復(fù)適應(yīng)48hr再行采樣，TR72組經(jīng)歷運(yùn)輸1.5hr后，恢復(fù)適應(yīng)72hr再行采樣，空白對(duì)照組(C組)共8只小鼠，常規(guī)飼養(yǎng)，不經(jīng)歷運(yùn)輸。2)運(yùn)輸處理及采樣使用恒溫實(shí)驗(yàn)動(dòng)物專用運(yùn)輸車為短途運(yùn)輸工具，采用實(shí)驗(yàn)小鼠運(yùn)輸專用包裝箱為運(yùn)輸容器(尺寸為510mmX320mmX190mm)，箱內(nèi)放置經(jīng)高溫高壓滅菌的刨花作墊料。營(yíng)養(yǎng)干預(yù)和運(yùn)輸對(duì)照的小鼠各裝l箱，每箱均為32只。營(yíng)養(yǎng)干預(yù)組別的包裝箱內(nèi)放置4支營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑，懸空固定，自由取食，運(yùn)輸結(jié)束后即刻取出剩余部分。運(yùn)輸對(duì)照組別的包裝箱按常規(guī)短途運(yùn)輸布置。連續(xù)運(yùn)輸1.5hr后，即刻從營(yíng)養(yǎng)干預(yù)組別的運(yùn)輸箱中隨機(jī)抽取8只小鼠采樣測(cè)定指標(biāo)，作為TIO組，其余小鼠隨機(jī)編入TI24、TI48、TI72各個(gè)實(shí)驗(yàn)組。與此同時(shí)，即刻從運(yùn)輸對(duì)照組別的運(yùn)輸箱中隨機(jī)抽取8只小鼠采樣測(cè)定指標(biāo)，作為TRO組，其余小鼠隨機(jī)編入TR24、TR48、TR72各個(gè)實(shí)驗(yàn)組。于運(yùn)輸結(jié)束后24hr、48hr、72hr，分別對(duì)TI24和TR24、TI48和TR48、TI72和TR72逐組配對(duì)采樣測(cè)定?？瞻讓?duì)照C組飼養(yǎng)管理及采樣處理與各實(shí)驗(yàn)組相同。各組采樣均于11:3012:30進(jìn)行，對(duì)每只小鼠采樣處理控制在3min內(nèi)完成。3)血糖(GLU)測(cè)定、外周血白細(xì)胞(WBC)計(jì)數(shù)、激素和細(xì)胞因子測(cè)定以及統(tǒng)計(jì)學(xué)處理同實(shí)施例2結(jié)果顯示，TIO組的GLU比空白對(duì)照組(C組)極顯著降低(P<0.01)，TI24、TI48、TI723組的GLU和C組比較差異不顯著(P>0.05)。TIO組和TI24組的WBC比空白對(duì)照組(C組)極顯著減少(P<0.01)，TI48組以及TI72組的WBC和C組比較差異不顯著(P>0.05)。表12是營(yíng)養(yǎng)干預(yù)小鼠GLU和WBC的變化。恢復(fù)適應(yīng)時(shí)間/hrGLU/mmol丄-WBC/10y'L-TI0TI24TI48TI72C02448727.04±0.688.46±0.668.69±0.478.96±0.658.84±0.443.66±0.8213.48±2.24"15.46±1.7117.71±2.9917.08±1.84其中和C組比較，"P<0.01;n=8TR0組和TR24組的GLU比空白對(duì)照組(C組)極顯著降低(PO.Ol)，TR48組、TR72組的GLU和C組比較差異不顯著(P>0.05)。TR0組、TR24組的WBC均比空白對(duì)照組(C組)極顯著減少(PO.Ol)，TR48組的WBC比C組顯著減少(P<0.05)，TR72組的WBC和C組比較差異不顯著(P>0.05)。表13是運(yùn)輸對(duì)照小鼠GLU和WBC的變化。表13_<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>注和C組比較，*戶<0.05，"P<0.01;n=8與空白對(duì)照組(C組)比較，TIO組血清CORT、P-EP含量極顯著減少(PO.Ol)，血清IL-2含量顯著減少(P<0.05)。TI24、TI48、TI723組的血清CORT、e-EP、IL-2含量和C組的差異均不顯著(P>0.05)。表14是營(yíng)養(yǎng)干預(yù)小鼠血清CORT、e-EP、IL-2含量的變化。表14<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>其中和C組比較，PO.05,P<0.01;n=8與空白對(duì)照組(C組)比較，TR0組血清CORT、e-EP、IL-2含量，以及TR24組血清e(cuò)-EP含量均極顯著減少(PO.Ol)，TR24組血清IL-2含量顯著減少(P0.05)。TR24組的血清CORT含量，以及TR48組和TR72組血清CORT、e-EP、IL-2的含量均和C組無(wú)顯著差異(P〉0.05)。表15運(yùn)輸對(duì)照小鼠血清CORT、e-EP、IL-2含量的變化。表15注和C組比較，'PO.05，'P<0.01;n=8實(shí)驗(yàn)證實(shí)，凝膠狀營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑能夠減輕短途運(yùn)輸應(yīng)激對(duì)動(dòng)物代謝和免疫功能的不利影響，促使其較快恢復(fù)至正常水平，具有較好的抗短途運(yùn)輸應(yīng)激作用?；謴?fù)適應(yīng)時(shí)間/hrCORT/畫(huà)l.L-1卩-EP/ng.L"IL-2/ng.L"<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>權(quán)利要求1、一種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物短途運(yùn)輸應(yīng)激評(píng)價(jià)和干預(yù)方法，其特征是包括下述步驟1)使實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分別經(jīng)歷不同運(yùn)輸時(shí)間；2)使實(shí)驗(yàn)動(dòng)物經(jīng)歷1.5hr運(yùn)輸時(shí)間到達(dá)實(shí)驗(yàn)室后分別恢復(fù)不同時(shí)間；或，運(yùn)輸時(shí)進(jìn)行干預(yù)，到達(dá)實(shí)驗(yàn)室后分別恢復(fù)不同時(shí)間；3)測(cè)定所述實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的生長(zhǎng)代謝、神經(jīng)內(nèi)分泌和免疫功能指標(biāo)，與未經(jīng)歷運(yùn)輸?shù)膶?duì)照組比較，觀察分析短途運(yùn)輸應(yīng)激對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的影響；或與未接受干預(yù)的運(yùn)輸對(duì)照組比較，觀察分析所述干預(yù)對(duì)緩解實(shí)驗(yàn)動(dòng)物短途運(yùn)輸應(yīng)激的作用；4)遴選評(píng)價(jià)的技術(shù)指標(biāo)，建立評(píng)價(jià)技術(shù)指標(biāo)體系，提出健康適應(yīng)期及確定干預(yù)效果。2、按權(quán)利要求1所述的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物短途運(yùn)輸應(yīng)激評(píng)價(jià)和干預(yù)方法，其特征是所述的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物是實(shí)驗(yàn)大鼠或小鼠。3、按權(quán)利要求1所述的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物短途運(yùn)輸應(yīng)激評(píng)價(jià)和干預(yù)方法，其特征是所述的步驟l)的運(yùn)輸時(shí)間是0.5hr、lhr或1.5hr。4、按權(quán)利要求1所述的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物短途運(yùn)輸應(yīng)激評(píng)價(jià)和干預(yù)方法，其特征是所述的步驟2)的恢復(fù)的不同時(shí)間是24hr、48hr、72hr或96hr。5、按權(quán)利要求1所述的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物短途運(yùn)輸應(yīng)激評(píng)價(jià)和干預(yù)方法，其特征是所述的步驟2)的干預(yù)是營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑的干預(yù)。6、按權(quán)利要求1所述的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物短途運(yùn)輸應(yīng)激評(píng)價(jià)和干預(yù)方法，其特征是所述的步驟4)所述的技術(shù)指標(biāo)體系包括能量代謝標(biāo)志物GLU、免疫功能執(zhí)行者WBC、HPA軸終末效應(yīng)激素CORT、神經(jīng)內(nèi)分泌-免疫網(wǎng)絡(luò)雙向調(diào)控因子p-EP和免疫功能調(diào)節(jié)關(guān)鍵細(xì)胞因子IL-2。7、按權(quán)利要求1所述的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物短途運(yùn)輸應(yīng)激評(píng)價(jià)和干預(yù)方法，其特征是所述的步驟4)所述的健康適應(yīng)期為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在經(jīng)歷1.5hr以內(nèi)短途運(yùn)輸后的健康適應(yīng)期至少為72hr。8、按權(quán)利要求5所述的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物短途運(yùn)輸應(yīng)激評(píng)價(jià)和干預(yù)方法，其特征是所述的營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑為凝膠狀營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑。全文摘要本發(fā)明屬實(shí)驗(yàn)動(dòng)物領(lǐng)域，涉及一種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物短途運(yùn)輸應(yīng)激評(píng)價(jià)和干預(yù)方法。本發(fā)明通過(guò)觀察短途運(yùn)輸應(yīng)激對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的影響，建立了短途運(yùn)輸應(yīng)激評(píng)價(jià)的包括能量代謝標(biāo)志物GLU、免疫功能執(zhí)行者WBC、HPA軸終末效應(yīng)激素CORT等的技術(shù)指標(biāo)體系，確定了短途運(yùn)輸應(yīng)激后的健康適應(yīng)期至少為72hr，并提供了減輕短途運(yùn)輸應(yīng)激不良反應(yīng)的營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑干預(yù)措施。本發(fā)明能為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物短途運(yùn)輸科學(xué)化和標(biāo)準(zhǔn)化提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，避免短途運(yùn)輸應(yīng)激對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物健康和福利的損害及其背景性干擾，解決生產(chǎn)和使用銜接中的實(shí)際問(wèn)題，保證生物醫(yī)藥科學(xué)研究和產(chǎn)品檢定的科學(xué)性及有效性。文檔編號(hào)G01N33/48GK101324553SQ200810040250公開(kāi)日2008年12月17日申請(qǐng)日期2008年7月4日優(yōu)先權(quán)日2008年7月4日發(fā)明者斐楊,櫻胡申請(qǐng)人:復(fù)旦大學(xué)