專利名稱：：使用抗利尿激素原的片段/部分肽、特別是和肽素或后葉激素運(yùn)載蛋白Ⅱ?qū)毙怨跔顒用}...的制作方法使用抗利尿激素原的片段/部分肽、特別是和肽素或后葉激素運(yùn)載蛋白II對急性冠狀動脈綜合征進(jìn)行危險(xiǎn)性分級描述001本發(fā)明涉及急性冠狀動脈綜合征(ACS)，特別是急性心肌梗塞(AMI)和心絞痛(AP)的危險(xiǎn)性分級的方法，其中經(jīng)過體外診斷測定抗利尿激素原(provasopressin，后葉加壓素原，proAVP)或其片段和部分肽，特別是和肽素(copeptin)或后葉激素運(yùn)載蛋白II(neurophysin11)。本發(fā)明進(jìn)一步涉及用于體外診斷的生物標(biāo)志物的適當(dāng)《且合。002危險(xiǎn)'性分級(Riskstratification)在有癥狀的以及無癥狀的心臟病患者中變得日益重要。特別地，對于急性冠狀動脈綜合征，對適當(dāng)危險(xiǎn)性分級有巨大需要。003危險(xiǎn)性分級用于鑒定具有不良預(yù)后的患者，用于重癥(深入，intensive)診斷和治療/處理，以能夠?qū)崿F(xiàn)最佳臨床結(jié)果為目的。因此，適當(dāng)?shù)奈ｋU(xiǎn)性分級的目標(biāo)是利用經(jīng)皮冠脈干預(yù)和最新藥劑，進(jìn)行用于急性冠狀動脈綜合征的有效治療方法。004適當(dāng)?shù)闹委熞蠹毙怨跔顒用}綜合征的早期診斷和鑒別一—甚至在急診室入院(emergencyroomadmission)后，連同臨床決策。由于急性冠狀動脈綜合征中的非特異性癥狀例如胸痛，與其他疾病的區(qū)別和描述以及急性冠狀動脈綜合征的鑒定是必要的。005在現(xiàn)有技術(shù)中，應(yīng)用生物化學(xué)標(biāo)志物，特別是經(jīng)典的標(biāo)志物例如心臟肌鈣蛋白、肌紅蛋白和CK-MB質(zhì)量，已經(jīng)嘗試用于心肌梗塞的預(yù)測(Katus,H.A.;Remppis，A.;Scheffold，T.;Diederich，K.W.，和Kuebler，W.(1991):IntracellularcompartmentationofcardiactroponinTanditsreleasekineticsinpatientswithreperfusedandnonreperfusedmyocardialinfarction,AmJCardiol67(16):13601367)。B型利鈉肽(BNP)連同pro-BNP(NT-ProBNP)(EP1363128Bl、EP1666881A2)已經(jīng)證明是心肌診斷中的另一個有效的生物化學(xué)標(biāo)志物。006和肽素(也稱為C-末端proAVP)已在WO2006/018315(BRAHMSAG)中描述為體外診斷AMI的生物標(biāo)志物。相應(yīng)的和肽素分析在Morgenthaler等(NilsG.Morgenthaler，JoachimStruck,ChristineAlonso,和AndreasBergmann,Assayforthemeasurementofcopeptin，astablepeptidederivedfromtheprecursorofvasopressin,ClinicalChemistry52:112-119，2006)中7>開。007后葉激素運(yùn)載蛋白已被描述為尼古丁攝入(RobinsonA.G.Isolation,assay,andsecretionofindividualhumanneurophysins,JClinInvest1975;55:360367),ADH分泌不當(dāng)綜合征(SIADH)的惡性和非惡性相關(guān)癥狀，和腎性尿崩癥的標(biāo)志物(PullanP.T.,ClappisonB.H.，JohnstonC.I.,Plasmavasopressinandhumanneurophysinsinphysiologicalandpathologicalstatesassociatedwithchangesinvasopressinsecretion,JClinEndocrinolMeUb1979;49:580587;NorthW.G.，LaRochelleF.T.，Jr.,MeltonJ.，MillsR.C.，Isolationandpartialcharacterizationoftwohumanneurophysins:theiruseinthedevelopmentofspecificradioimmunoassays.JClinEndocrinolMetab1980;51:884-891)。008然而，使用迄今為止已知的標(biāo)志物的已知診斷方法的缺點(diǎn)是，沒有實(shí)現(xiàn)對危險(xiǎn)患者(at-riskpatient)的早期和完全鑒定，因此危險(xiǎn)性分級是不充分的。因此，本發(fā)明的目的是開發(fā)用于急性冠狀動脈綜合征的危險(xiǎn)性分級的方法，其能夠進(jìn)行危險(xiǎn)患者的改進(jìn)鑒定。009進(jìn)一步的缺點(diǎn)是，在現(xiàn)有技術(shù)中，通常沒有實(shí)現(xiàn)標(biāo)志物的足夠靈敏度和/或特異性。010因此，進(jìn)一步的目的是提供用于急性冠狀動脈綜合征的危險(xiǎn)性分級的方法，其中至少一種標(biāo)志物或標(biāo)志物的組合在體外診斷中具有足夠的靈敏度和特異性。011因此，本發(fā)明的目的是提供用于急性冠狀動脈綜合征的危險(xiǎn)性分級的方法。該目的通過利用對急性冠狀動脈綜合征進(jìn)行危險(xiǎn)性分級的方法得以實(shí)現(xiàn)，其中抗利尿激素原(proAVP)或其片段和部分肽，特別是和肽素或后葉激素運(yùn)栽蛋白II，經(jīng)過體外診斷(下文稱為"根據(jù)本發(fā)明的方法")測定。012令人吃驚地，抗利尿激素原(proAVP)或其片段和部分肽，特別是和肽素或后葉激素運(yùn)載蛋白II，具有診斷急性冠狀動脈綜合征的高靈敏度和特異性(參見實(shí)施例和附圖)。013術(shù)語"急性冠狀動脈綜合征(acutecoronarysyndrome)"包括不同階段的冠心病，其是直接危及生命的。這與緊急醫(yī)療護(hù)理特別相關(guān)，具體而言，與急性心肌梗塞和/或心絞痛，以及心源性猝死特別相關(guān)。除了急性心肌梗塞——根據(jù)WHO標(biāo)準(zhǔn)(WH0(1979):Nomenclatureandcriteriafordiagnosisofischemicheartdisease,ReportoftheJointInternationalSocietyandFederationofCardiology/WorldHealthOrganizationtaskforceonstandardizationofclinicalnomenclature,Circulation59(3):607609),其被定義為急性胸痛事件持續(xù)20分鐘以上連同ST段升高和/或心肌酶增加——之外，術(shù)語"不穩(wěn)定型心絞痛"(AP)已經(jīng)被確立——其根據(jù)本發(fā)明被解釋為"急性冠狀動脈綜合征"(HammC.W.:Leitlinien:Akutescoronarysyndrome(ACS)-Teil1:ACSohnepersistierendeST-Hebung[Guidelines:Acutecoronarysyndrome(ACS)Parti:ACSwithoutpersistentSTelevation],ZKardiol(2004)93:7290;seealso:Pschyrembel，DeGruyter，Berlin2004)。014根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語"危險(xiǎn)性分級"包括鑒定具有不良預(yù)后的患者，特別是急救護(hù)理和危險(xiǎn)患者，用于急性冠狀動脈綜合征特別是心肌梗塞和心絞痛的深入診斷和治療/處理，以能夠?qū)崿F(xiàn)最佳臨床結(jié)果為目的。因此，根據(jù)本發(fā)明的危險(xiǎn)性分級允許利用經(jīng)皮冠脈干預(yù)和最8新藥劑進(jìn)行急性冠狀動脈綜合征的有效治療方法。015因此，本發(fā)明進(jìn)一步涉及鑒定具有急性冠狀動脈綜合征，特別是心肌梗塞心絞痛的增加危險(xiǎn)和/或不良預(yù)后的患者；和有癥狀的和/或無癥狀的患者，特別是急救護(hù)理患者。016根據(jù)本發(fā)明的方法在緊急和/或重癥醫(yī)療護(hù)理中可以以特別有利的方式使用以提供可靠的分層。因此，根據(jù)本發(fā)明的方法允許臨床決策，這導(dǎo)致快速的治療成功和避免必死性。這樣的臨床決策也包括使用用于急性冠狀動脈綜合征，特別是急性心肌梗塞(AMI)和心絞痛(AP)的處理或治療的藥物，進(jìn)行進(jìn)一步治療。017因此，本發(fā)明進(jìn)一步涉及在具有急性冠狀動脈綜合征的患者中進(jìn)行危險(xiǎn)性分級的方法，用于進(jìn)行臨床決策，例如使用藥物進(jìn)一步處理和治療，優(yōu)選在時間-緊急的重癥的或緊急醫(yī)療護(hù)理中。018在一個進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方式中，根據(jù)本發(fā)明的方法因此涉及急性冠狀動脈綜合征，特別是急性心肌梗塞(AMI)和心絞痛(AP)的治療控制。019在根據(jù)本發(fā)明的方法的一個進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方式中，進(jìn)行危險(xiǎn)性分級，用于預(yù)后、鑒別診斷性早期發(fā)現(xiàn)和鑒定、嚴(yán)重性評定、和伴隨治療的進(jìn)程評估。020在一個進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及體外診斷方法，用于心肌梗塞或心絞痛的早期診斷或鑒別診斷或預(yù)后，其中標(biāo)志物抗利尿激素原(proAVP)或其片段和部分肽，特別是和肽素或后葉激素運(yùn)載蛋白II，在待研究患者中被測定。然而，和肽素或其片段或部分序列，或后葉激素運(yùn)載蛋白II或其片段或部分序列，是特別優(yōu)選的。021本發(fā)明進(jìn)一步涉及根據(jù)上述實(shí)施方式中的一個，對急性冠狀動脈綜合征進(jìn)行危險(xiǎn)性分級的方法，或體外診斷方法，用于心肌梗塞或心絞痛的早期診斷或鑒別診斷或預(yù)后，其中在癥狀出現(xiàn)之后，標(biāo)志物抗利尿激素原(proAVP)或其片段和部分肽，特別是和肽素或后葉激素運(yùn)載蛋白II的6-20pmol/L的截止值(閾值)范圍對于診斷和/或危險(xiǎn)性分級是重要的(特異性的)。也優(yōu)選的是6-20pmol/L,特別是7.5pmol/L的截止值(閾值)范圍，優(yōu)選癥狀出現(xiàn)后達(dá)2小時。022本發(fā)明進(jìn)一步涉及根據(jù)上述實(shí)施方式的一個，對急性冠狀動脈綜合征進(jìn)行危險(xiǎn)性分級的方法，或體外診斷方法，用于心肌梗塞或心絞痛的早期診斷或鑒別診斷或預(yù)后，其中在癥狀出現(xiàn)之后，標(biāo)志物抗利尿激素原(proAVP)或其片段和部分肽，特別是和肽素或后葉激素運(yùn)載蛋白II的10-30pmol/L的截止值(閾值)范圍對于預(yù)測和/或危險(xiǎn)性分級是重要的(特異性的)。也優(yōu)選的是10-20pmol/L的截止值(閾值)。在該基礎(chǔ)上，根據(jù)本發(fā)明的這些方法有利地具有靈敏度。023在根據(jù)本發(fā)明的方法的一個實(shí)施方式中，體液，特別是血液，任選地全血或血清或可收集的血漿，從待研究的患者抽取，并且體外/離體，也就是說在人或動物體外面進(jìn)行診斷。作為測定標(biāo)志物抗利尿激素原(proAVP)或其片段和部分肽，特別是和肽素或后葉激素運(yùn)載蛋白II的結(jié)果，對于急性冠狀動脈綜合征、心肌梗塞和心絞痛的高靈敏度和特異性被實(shí)現(xiàn)，并且可以基于存在于至少一個患者樣品中的數(shù)量進(jìn)行診斷或危險(xiǎn)性分級。然而，標(biāo)志物和肽素(proAVP或前抗利尿激素原的穩(wěn)定片段)或其片段或部分序列是非常特別優(yōu)選的。也特別優(yōu)選的是標(biāo)志物后葉激素運(yùn)載蛋白(proAVP或前抗利尿激素原的穩(wěn)定片段)或其片段或部分序列。024在本發(fā)明的范圍內(nèi)，"抗利尿激素原"被理解為指人蛋白質(zhì)或多肽，其可從前抗利尿激素原中獲得，并且對于前抗利尿激素原包括氨基酸29-164(也參見WO2006/018315和圖3)和從那里可獲得的片段或部分肽，特別是和肽素(片段氨基酸126-164(39個氨基酸SEQ:ASDRSNATQLDGPAGALLLRLVQLAGAPEPFEPAQPDAY)或后葉激素運(yùn)載蛋白II(前抗利尿激素原的片段氨基酸32-124(93個氨基酸SEQ:AMSDLELRQCLPCGPGGKGRCFGPSICCADELGCFVGTAEALRCQEENYLPSPCQSGQKACGSGGRCAAFGVCCNDESCVTEPECREGFHRRA)。才艮據(jù)本發(fā)明的這些多肽也可具有翻譯后修飾，例如糖化、脂化或衍生化。025在一個進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及急性冠狀動脈綜合征，特別是急性心肌梗塞(AMI)和心絞痛(AP)的診斷和/或危險(xiǎn)性分級和/或早期診斷或鑒別診斷和/或預(yù)后，其中后葉激素運(yùn)載蛋白在待研究的患者中被測定。026在一個進(jìn)一步的實(shí)施方式中，抗利尿激素原(proAVP)或其片段和部分肽，特別是和肽素或后葉激素運(yùn)載蛋白II,也可使用另外的標(biāo)志物測定，優(yōu)選已經(jīng)指示急性冠狀動脈綜合征、特別是心肌梗塞或心絞痛的那些標(biāo)志物。027因此，本發(fā)明涉及根據(jù)本發(fā)明的方法的這種實(shí)施方式，其中也使用至少一個另外的標(biāo)志物在待研究的患者中進(jìn)行測定，所述另外的標(biāo)志物選自炎癥標(biāo)志物、心血管標(biāo)志物、神經(jīng)激素標(biāo)志物、或缺血標(biāo)志物0028根據(jù)本發(fā)明，炎癥標(biāo)志物可選自下列集合，包括C-反應(yīng)蛋白(CRP)、細(xì)胞因子如TNF-cc、白介素例如IL-6、原降鈣素(1-116、3-116)、和粘附分子例如VCAM或ICAM;和心血管標(biāo)志物，特別是指示心肌組織壞死的標(biāo)志物和影響血壓的標(biāo)志物可選自下列集合，包括肌酸激酶，肌紅蛋白，髓過氧化物酶，利尿鈉蛋白，特別是ANP(或ANF)、proANP、NT-proANP、BNP、proBNP、NT-proBNP或者在所有情況下其部分序列，心臟肌4丐蛋白或CRP。也包括的是循環(huán)調(diào)節(jié)(pro)激素，特另'j是前胃泌素釋放肽(progastrin-releasingpeptide,proGRP)、內(nèi)皮素-1原(proendothelin-l)、瘦蛋白原(proleptin)、神經(jīng)肽-Y原(proneuropeptide-Y)、生長抑素原(prosomatostatin)、神經(jīng)肽-YY原、阿黑皮素原、腎上腺髄質(zhì)素原(proadrenomedullin)(pro腿)，或在所有情況下其部分序列。缺血標(biāo)志物可選自包括肌鈣蛋白I和T和CK-MB的集合的至少一種標(biāo)志物。另外，神經(jīng)激素標(biāo)志物可以是至少一種利尿鈉蛋白，特別是ANP(或ANF)、proANP、NT-proANP、BNP、proBNP、NT-proBNP或者在所有情況下其部分序列。029在一個特別優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及生物標(biāo)志物和抗利尿激素原(proAVP)或其片段或部分肽的特別有利的組合，特別是和肽素或后葉激素運(yùn)載蛋白II，與利尿鈉蛋白ANP(或ANF)、proANP、NT-proANP、BNP、proBNP、NT-proBNP或者在所有情況下其部分序列。030因此，本發(fā)明涉及體外診斷急性冠狀動脈綜合征、心肌梗塞或心絞痛的方法，其中標(biāo)志物抗利尿激素原(proAVP)或其片段或部分肽，特別是和肽素或后葉激素運(yùn)栽蛋白II，與利尿鈉蛋白特別是ANP(或ANF)、proANP、NT-proANP、BNP、proBNP、或NT-proBNP或者在所有情況下其部分序列組合，在待研究患者中測定。再一次，特別優(yōu)選后葉激素運(yùn)載蛋白II、和肽素與BNP、proBNP、NT-proBNP的組合，特別是和肽素和proBNP的組合。031特別有利的是，所提及的生物標(biāo)志物組合具有協(xié)同作用，這對于的診斷導(dǎo)致提高的特異性和靈敏度(參見實(shí)施例)。032在本發(fā)明的進(jìn)一步實(shí)施方式中，對于體外診斷，根據(jù)本發(fā)明的方法可依靠平行或者同時測定標(biāo)志物的方式來進(jìn)行(例如使用包含96孔或更多孔的多重滴定板，其中對于至少一個患者樣品進(jìn)行測定。033另外，根據(jù)本發(fā)明的方法和因之的測定可以在基于自動分析儀的診斷設(shè)備中進(jìn)行，特別是使用Kryptor系統(tǒng)(http://www.kryptor.net/)a034在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，根據(jù)本發(fā)明的方法和因之的測定可以使用速測法(例如側(cè)流檢測)以單參數(shù)或多參數(shù)測定進(jìn)行。一個特別優(yōu)選的實(shí)施方式包括自檢測或者適于急救護(hù)理診斷的裝置。035本發(fā)明進(jìn)一步涉及應(yīng)用抗利尿激素原(proAVP)或其片段或部分肽，特別是和肽素或后葉激素運(yùn)載蛋白II，進(jìn)行急性冠狀動脈綜合征、心肌梗塞或心絞痛的危險(xiǎn)性分級，和/或用于心肌梗塞或心絞痛的早期或者鑒別診斷或者預(yù)后的體外診斷。036在一個特定的實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及使用抗利尿激素原(proAVP)或其片段或部分肽，特別是和肽素或后葉激素運(yùn)載蛋白II，聯(lián)合利尿鈉蛋白，特別是ANP(或ANF)、proANP、NT-proANP、BNP、proBNP、NT-proBNP或者在所有情況下其部分序列，進(jìn)行急性冠狀動脈綜合征、心肌梗塞或心絞痛的診斷和/或危險(xiǎn)性分級。037進(jìn)一步的目的是提供用于執(zhí)行根據(jù)本發(fā)明的方法的相應(yīng)的診斷設(shè)備。038在本發(fā)明的范圍內(nèi)，這類診斷設(shè)備，特別是陣列或試驗(yàn)(例如，免疫測定法、ELISA等等)，在廣義上被理解為用于執(zhí)行根據(jù)本發(fā)明的方法的設(shè)備。039本發(fā)明進(jìn)一步涉及用于急性冠狀動脈綜合征、心肌梗塞和/或心絞痛的危險(xiǎn)性分級的試劑盒，其包含用于測定抗利尿激素原(proAVP)或其片段或部分肽、特別是和肽素或后葉激素運(yùn)載蛋白II，和任選地上述的另外標(biāo)志物的檢測試劑。例如，這樣的檢測試劑包括抗體。040在一個特定的實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及用于急性冠狀動脈綜合征、心肌梗塞和/或心絞痛的診斷和/或危險(xiǎn)性分級的試劑盒，其包含用于測定抗利尿激素原(proAVP)或其片段或部分肽、特別是和肽素或后葉激素運(yùn)載蛋白II，聯(lián)合利尿鈉蛋白，特別是ANP(或ANF)、proANP、NT-proANP、BNP、proBNP、NT-proBNP或者在所有情況下其部分序列，以及任選地上述另外標(biāo)志物的檢測試劑。例如，這樣的檢測試劑包括抗體。041下列實(shí)施例和附圖被用于更詳細(xì)的解釋本發(fā)明，但是不將本發(fā)明限定于所述實(shí)施例和附圖。042實(shí)施例和附圖具有胸痛原發(fā)癥狀的進(jìn)入醫(yī)院急救護(hù)理的患者在初步檢查期間已釆取血樣。043觀察具有心肌梗塞(MI)的131個患者(平均年齡64.0歲)在180天的總期間急性MI癥狀的出現(xiàn)044在出現(xiàn)癥狀(胸痛)和接受入醫(yī)院后的前6個小時內(nèi)，進(jìn)行3次采樣血，每一次各自在MI癥狀出現(xiàn)后0-2小時、24小時和46小時。045在所有情況中，測定和肽素與NT-ProBNP。046入院后，在治療干預(yù)(標(biāo)準(zhǔn)，參見Braunwald等，2002)后前4天(第2-5天)之內(nèi)，在所有情況下，進(jìn)行一次血液釆樣和隨后的和肽素測定。047在出院后(住院期中位數(shù)7,2天)，在180天的期間內(nèi)，觀察患者。將患者嚴(yán)重心功能不全(cardiacsufficiency)的發(fā)展和/或患者的死亡確定為事件。在觀察的患者中，115個沒有事件(o.E.)并且16個具有事件(+E.)。所述組的年齡中位數(shù)是63.8和64.5歲。048為了評價(jià)用于MI早期診斷和用于危險(xiǎn)性分級的生物標(biāo)志物的診斷效果，將來自單個患者的血液采樣結(jié)果與來自沒有顯示MI癥狀(對照)的200個個體(年齡中位數(shù)65.2歲)的結(jié)果相比較。結(jié)果在表1和圖1和2中顯示。049表1顯示，在出現(xiàn)癥狀后的指定時期MI患者的靈敏度(值>截止值(閾值))，其與對照的相應(yīng)特異性(值〈截止值(閾值))相比較。050在最初的觀察期(0-2小時)內(nèi)，與對照相比和肽素極大提高。例如，僅全部對照的4.5%表現(xiàn)大于7.5pmol/L(實(shí)例截止值(閾值))的和肽素值(特異性=95.5%)，而沒有隨后事件的患者的78.3%,甚至具有事件的患者的87.5%表現(xiàn)大于7.5pmol/L(靈敏度)的和肽素濃度。與在常規(guī)診斷中迄今使用的標(biāo)志物(肌鈣蛋白、肌紅蛋白、CK-MB)相比，這恰如其分的導(dǎo)致靈敏度令人吃驚的增加，這于是允許這些生物標(biāo)志物被用于MI的早期和鑒別診斷，以及用于急性冠狀動脈綜合征的危險(xiǎn)性分級(肌鈣蛋白；CK-MB—般僅在6小時后發(fā)事件后出現(xiàn)，而肌紅蛋白較早出現(xiàn)并具有較低的靈敏度，但是隨后在大約2小時后減少；即，產(chǎn)生不確定的診斷窗(diagnosticwindow))。有利地，和肽素的增加，即采血時刻，對于早期診斷是次級(secondary)重要的(例如，在7.5pmol/L截止值,在0-2/2-4/4-6小時分別為78.3/80.0/73%的靈敏度)。與proBNP或NT-ProBNP聯(lián)合051令人吃驚的，示出和肽素與proBNP(NT-ProBNP)的聯(lián)合使MI早期診斷的靈敏度明顯增加(參見表1)。盡管例如在與相應(yīng)單獨(dú)標(biāo)志物相當(dāng)?shù)拇蠹s95。/。的特異性下，對于和肽素>7.5pmol/L和/或proBNP(NT-ProBNP)>200pmol/mL的評估，proBNP(NT-ProBNP)比和肽素的診斷效果差，但是與和肽素作為單獨(dú)標(biāo)志物相比，其在非事件組中在所有時間使靈敏度增加3-6%，并且在事件組中使靈敏度增加6-9.5%。表l:<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>052樣品回收，生物標(biāo)志物分析使用標(biāo)準(zhǔn)血清monovettes，進(jìn)行采血。在20-40min凝血時間后，在2000g下進(jìn)行離心15分鐘，然后通過傾析進(jìn)行血清分離。將血清樣品在-20C儲存，以進(jìn)一步使用。053根據(jù)Omland等(OmlandT.，PerssonA.，NgL.，etal.，N-terminalpro-B-typenatriureticpeptideandlong—termmortalityinacutecoronarysyndromes,Circulation,2002;106:29132918)，使用熒光免疫分析法，測定NT-ProBNP。054使用BRAHMSAG的和肽素?zé)晒饷庖叻治龇?，測定和肽素。和肽素測定方法在MorgenthalerN.G.etal.，Clin.Chem.2006Jan，52(1)，112119中詳細(xì)描述。概括地說將50-^L升樣品吸入包被和肽素抗體(AB1)的檢測管，并且與200微升吖啶酯標(biāo)記的抗-和肽素抗體(AB2)溶液混合，并在室溫下溫育2小時。在通過用洗滌溶液(Lumitest洗滌溶液，BrahmsAG)洗滌4次除去未結(jié)合(游離)標(biāo)記的抗體后，在Berthold的發(fā)光計(jì)中測定結(jié)合的吖咬酯標(biāo)記抗體。055預(yù)后(預(yù)測事件發(fā)生)令人吃驚地，示出具有事件的MI患者在入院后的180天內(nèi)表現(xiàn)比沒有事件的患者甚至更高的和肽素濃度。在MI癥狀出現(xiàn)后6小時內(nèi)，在30pmol/L的示范性截止值(閾值)下，和肽素示出大約1:2的相對風(fēng)險(xiǎn)(和肽素〉30的患者與〈30pmol/L的患者相比，具有兩倍隨后事件的風(fēng)險(xiǎn))。056如所期望的，在干涉后，濃度下降(第2ff.天，表2b)。在該情況中，令人吃驚地顯示具有隨后事件的患者的生物標(biāo)志物表現(xiàn)少得多的減少。這導(dǎo)致風(fēng)險(xiǎn)急劇的增加，對于和肽素值高于30pmol/L的患者，達(dá)到上至1:7.14的值。表2a<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>057表和附圖中的說明surv.-存活，E.=事件死亡，嚴(yán)重心功能能不全的形成，截止值-閾值，單位為pmol/L，Sens-靈敏度，Spef-特異性，o.=沒有。后葉激素運(yùn)載蛋白058J根據(jù)早期的描述(Pullan(supra)):neurohypophysisneuropysinwasisolatedandquantified(分離和量化神經(jīng)垂體后葉激素運(yùn)載蛋白)，準(zhǔn)備后葉激素運(yùn)載蛋白的放射免疫測定法。以該方式免疫兔，產(chǎn)生高效價(jià)抗-后葉激素運(yùn)載蛋白抗血清的回收。對于免疫測定法，最高效價(jià)抗血清以1:100，000的濃度使用。使用氯胺T方法放射碘化純化的后葉激素運(yùn)栽蛋白，并且將其用作分析中的示蹤劑。在標(biāo)準(zhǔn)馬血清中的純化后葉激素運(yùn)載蛋白稀釋物被用作標(biāo)準(zhǔn)品。該分析如下進(jìn)行將50-pL樣品或標(biāo)準(zhǔn)品與100nL示蹤劑(12，000dpm，每個測定)和100tiL稀釋的抗-后葉激素運(yùn)載蛋白抗血清混合，并在4C下溫育"小時。將100mM磷酸鈉，pH7.5和0.1%BSA用作緩沖液。通過加入60%乙醇然后在4C和5，000g下離心15分鐘，將抗體結(jié)合的示蹤劑與游離示蹤劑分離開。棄去上清液，并且測定沉淀中的剩余放射性。使用Multicalc軟件，進(jìn)行該分析。該分析具有22pg/mL的分析檢測限值。該分析具有上至400pg/mL的測量范圍。使用該分析測量各個患者的血漿樣品，如下所述。測量值>400pg/mL的樣品以適當(dāng)?shù)南♂寽y量，得到在測量范圍內(nèi)的測量值。059心肌梗塞/診斷在患有心肌梗塞的66個患者中，在心肌梗塞出現(xiàn)后不超過6個小時，采取樣品，并測量后葉激素運(yùn)載蛋白。為了比較，在200個健康對照中測定后葉激素運(yùn)載蛋白。進(jìn)行用于心肌梗塞診斷的特征性分析的接收器得到0.95的AUC。對于213pg/mL的截止值，在98%的特異性下，得到62.6%的靈敏度。對于136.1pg/mL的截止值，在95°/。的特異性下，得到84%的靈敏度。060心肌梗塞/預(yù)測(prognosis,預(yù)后)在患有急性心肌梗塞的66個患者中，在心肌梗塞開始后不超過6個小時或梗塞形成后第二天，采取樣品，并測量后葉激素運(yùn)載蛋白。觀察患者3M天的時期。在該時期中，58個患者沒有不良事件，8個患者由于心功能不全而死亡或再次入院。061第一天預(yù)后(梗塞形成發(fā)生后<6小時)使用進(jìn)行特征性分析的接收器，為由于心功能不全造成的死亡率或再入院的預(yù)后確定最佳截止值(定義為產(chǎn)生最大的靈敏度與特異性)777pg/mL。在該截止值，預(yù)后靈敏度為62.5%，特異性為73%。在777pg/mL的截止值下，不良事件的似然比為2.3。062第2天預(yù)后使用進(jìn)行特征性分析的接收器，為由于心功能不全造成的死亡率或再入院的預(yù)后確定最佳截止值(定義為產(chǎn)生最大的靈敏度與特異性)261pg/mL。在該截止值，預(yù)后靈敏度為68.8%，特異性為73%。在261pg/mL的截止值下，不良事件的似然比為2.6。063附圖附圖1:心肌梗塞后，患者的和肽素值。在心肌梗塞后不同時間，從131個患者收集血漿樣品，如所述。也繪制健康對象(對照；200個值)的和肽素值。將各組的和肽素值圖解為盒須圖。064圖2:心肌梗塞后，患者的和肽素值。在心肌梗塞后不同時間收集血漿樣品，如所述。然后，將患者分組，其表示由于心功能不全引起的死亡或再入院的隨后發(fā)生("事件"；16個患者)或沒有發(fā)生("surv";115個患者)。也圖解的是健康對象(對照；200個值)的和肽素值。將各組的和肽素值圖解為盒須圖。065圖3:闡明前抗利尿激素原(164個氨基酸)的氨基酸序列以及proAVP的部分肽或片段(氨基酸29-164)、后葉激素運(yùn)載蛋白II(氨基酸32-124)和和肽素(氨基酸:126-164)。權(quán)利要求1.用于急性冠狀動脈綜合征的危險(xiǎn)性分級的方法，其中抗利尿激素原(proAVP)或其片段和部分肽，特別是和肽素或后葉激素運(yùn)載蛋白II，通過體外診斷被測定。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于急性冠狀動脈綜合征的危險(xiǎn)性分級的方法，其用于鑒定具有急性冠狀動脈綜合征，特別是心肌梗塞和心絞痛的高危和/或不良預(yù)后的患者。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的用于急性冠狀動脈綜合征的危險(xiǎn)性分級的方法，其中所述患者是有癥狀和/或無癥狀的患者，特別是急救護(hù)理患者。4.根據(jù)權(quán)利要求1-3之一所述的用于急性冠狀動脈綜合征的危險(xiǎn)性分級的方法，用于治療性控制急性冠狀動脈綜合征，特別是心肌梗塞(AMI)和心絞痛(AP)，特別是在重癥或急救醫(yī)療護(hù)理中。5.根據(jù)權(quán)利要求1-4之一所述的用于急性冠狀動脈綜合征的危險(xiǎn)性分級的方法，用于進(jìn)行臨床決策，特別用于使用藥物的進(jìn)一步處理和治療，特別是在重癥或急救醫(yī)療護(hù)理中。6.體外診斷方法，用于心肌梗塞或心絞痛的早期診斷或鑒別診斷或預(yù)后，其中標(biāo)志物抗利尿激素原(proAVP)或其片段和部分肽，特別是和肽素或后葉激素運(yùn)載蛋白II，在待研究患者中被測定。7.體外診斷和/或早期診斷或鑒別診斷和/或預(yù)后方法，用于急性冠狀動脈綜合征，特別是心肌梗塞或心絞痛，其中標(biāo)志物后葉激素運(yùn)栽蛋白II或其片段和部分肽，在待研究患者中被測定。8.體外診斷急性冠狀動脈綜合征、心肌梗塞或心絞痛的方法，其中標(biāo)志物抗利尿激素原(proAVP)或其片段或部分肽，特別是和肽素或后葉激素運(yùn)載蛋白II聯(lián)合利尿鈉蛋白，特別是ANP(或ANF)、proANP、NT-proANP、BNP、proBNP、NT-proBNP或者在所有情況下其部分序列，在待研究患者中被測定。9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的體外診斷急性冠狀動脈綜合征、心肌梗塞或心絞痛的方法，其特征在于，進(jìn)行所述診斷用于預(yù)防、預(yù)后、鑒別診斷性早期發(fā)現(xiàn)和鑒定、嚴(yán)重性評估、和伴隨治療的進(jìn)程評估。10.根據(jù)前述權(quán)利要求之一所述的方法，其特征在于，標(biāo)志物抗利尿激素原(proAVP)或其片段和部分肽，特別是和肽素或后葉激素運(yùn)載蛋白II，對于診斷，6-20pmol/L、特別是6-10pmol/L的截止值(閾值)，或?qū)τ陬A(yù)后，10-30pmol/L、特別是10-20pmol/L的截止值(閾值)，是有意義的(特異性的)。11.根據(jù)前述權(quán)利要求之一所述的方法，其特征在于，至少一種另外的標(biāo)志物額外地在體外診斷中進(jìn)行測定，所述另外的標(biāo)志物選自炎癥標(biāo)志物、心血管標(biāo)志物、神經(jīng)激素標(biāo)志物或缺血標(biāo)志物。12.根據(jù)前述權(quán)利要求之一所述的方法，其特征在于，所述炎癥標(biāo)志物選自下組中的至少一種標(biāo)志物C-反應(yīng)蛋白(CRP)、細(xì)胞因子如TNF-ct、白介素例如IL-6、原降鈣素(1-116、3-116)、和粘附分子例如VCAM或ICAM。13.根據(jù)前述權(quán)利要求之一所述的方法，其特征在于，所述心血管標(biāo)志物選自下組中的至少一種標(biāo)志物肌酸激酶，肌紅蛋白，髓過氧化物酶，利尿鈉蛋白，特別是ANP(或ANF)、proANP、NT-proANP、BNP、proBNP、NT-proBNP或者在所有情況下其部分序列，心臟肌鈣蛋白，CRP,以及循環(huán)調(diào)節(jié)激素(原)如前胃泌素釋放肽(proGRP)、內(nèi)皮素-l原、瘦蛋白原、神經(jīng)肽-Y原、生長抑素原、神經(jīng)肽-YY原、阿黑皮素原或腎上腺髓質(zhì)素原(proADM)或在所有情況下其部分序列。14.根據(jù)前述權(quán)利要求之一所述的方法，其特征在于，所述缺血標(biāo)志物選自包括肌鉤蛋白I和T，CK-MB的組的至少一種標(biāo)志物。15.根據(jù)前述權(quán)利要求之一所述的方法，其特征在于，所述神經(jīng)激素標(biāo)志物是至少一種利尿鈉蛋白，特別是ANP(或ANF)、proANP、NT-proANP、BNP、proBNP、NT-proBNP或者在所有情況下其部分序列。16.根據(jù)前述權(quán)利要求之一所述的方法，其特征在于，進(jìn)行所述標(biāo)志物的平^f亍或同時測定。17.根據(jù)前述權(quán)利要求之一所述的方法，其特征在于，在至少一個患者樣品上進(jìn)行所述測定。18.根據(jù)前述權(quán)利要求之一所述的方法，其特征在于，在自動分析儀上進(jìn)行所述測定，特別是^f吏用Kryptor。19.根據(jù)前述權(quán)利要求之一所述的方法，其特征在于，使用速測法進(jìn)行所述測定，特別是單參數(shù)或多參數(shù)測定。20.根據(jù)前述權(quán)利要求之一所迷的方法,其特征在于，進(jìn)行危險(xiǎn)性分級，用于對急性冠狀動脈綜合征進(jìn)行預(yù)后、鑒別診斷性早期發(fā)現(xiàn)和鑒定、嚴(yán)重性評估、和伴隨治療的進(jìn)程評估。21.抗利尿激素原(proAVP)或其片段和部分肽、特別是和肽素或后葉激素運(yùn)載蛋白II的應(yīng)用，其用于急性冠狀動脈綜合征，心肌梗塞或心絞痛的危險(xiǎn)性分級；和/或用于體外診斷，進(jìn)行心肌梗塞或心絞痛的早期診斷或鑒別診斷或預(yù)后。22.抗利尿激素原(proAVP)或其片段和部分肽、特別是和肽素或后葉激素運(yùn)載蛋白II聯(lián)合利尿鈉蛋白，特別是ANP(或ANF)、proANP、NT-proANP、BNP、proBNP、NT-proBNP或者在所有情況下其部分序列的應(yīng)用，用于急性冠狀動脈綜合征，心肌梗塞和/或心絞痛的診斷。23.試劑盒，其用于急性冠狀動脈綜合征、心肌梗塞和/或心絞痛的危險(xiǎn)性分級，包含用于測定抗利尿激素原(proAVP)或其片段和部分肽，特別是和肽素或后葉激素運(yùn)栽蛋白II，和任選根據(jù)權(quán)利要求11到15之一所述的另外的標(biāo)志物的檢測試劑；和助劑。24.實(shí)施根據(jù)權(quán)利要求6到15之一所述的方法的診斷設(shè)備。25.試劑盒，其用于診斷急性冠狀動脈綜合征、心肌梗塞和/或心絞痛，包含用于測定抗利尿激素原(proAVP)或其片段和部分肽、特別是和肽素或后葉激素運(yùn)栽蛋白II，聯(lián)合利尿鈉蛋白，特別是ANP(或ANF)、proANP、NT-proANP、BNP、proBNP、NT-proBNP或者在所有情況下其部分序列，和任選根據(jù)權(quán)利要求11到15之一所述的另外的標(biāo)志物的檢測試劑；和助劑。全文摘要本發(fā)明涉及急性冠狀動脈綜合征(ACS)，特別是急性心肌梗塞(AMI)和心絞痛(AP)的危險(xiǎn)性分級的方法，其中經(jīng)過體外診斷測定抗利尿激素原(proAVP)或其片段和部分肽，特別是和肽素或后葉激素運(yùn)載蛋白II。文檔編號G01N33/74GK101600967SQ200780039987公開日2009年12月9日申請日期2007年10月26日優(yōu)先權(quán)日2006年10月26日發(fā)明者A·貝格曼,J·帕帕佐蒂里奧,J·施特魯克,L·N·利昂,N·莫根塔勒申請人:布拉姆斯股份公司