專利名稱：：一種檢測愈傷靈膠囊有效成分含量的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及傳統(tǒng)中藥的現(xiàn)代化的質(zhì)量控制方法，特別是涉及一種檢測愈傷靈膠囊有效成分含量的方法。
背景技術(shù)：
：愈傷靈膠囊是一種傳統(tǒng)中藥制劑，具有活血散瘀，消腫止痛的功效；用于治療跌打挫傷，筋骨瘀血腫痛，亦可用于骨折的輔助治療。目前，該產(chǎn)品國內(nèi)有十幾家企業(yè)生產(chǎn)，生產(chǎn)廠家都采用傳統(tǒng)的標(biāo)準(zhǔn)控制產(chǎn)品質(zhì)量，只進(jìn)行定性分析，不進(jìn)行定量分析。由于中成藥的質(zhì)量和中藥材的質(zhì)量關(guān)聯(lián)性非常強(qiáng)，而療效取決主要有效成分的含量。中成藥的生產(chǎn)過程中經(jīng)過很多工藝(烘、炒、粉碎等)，無法控制生產(chǎn)過程中藥材中的有效成分是否丟失，因此合格的中藥材未必能成產(chǎn)出合格有效的產(chǎn)品。但是，現(xiàn)有的通用標(biāo)準(zhǔn)只對成品進(jìn)行定性分析，無法控制成品的有效成份含量，無法保證療效。因此，尋找具有可操作性且靈敏度可靠的方法控制愈傷靈膠囊的主要有效成份是保證產(chǎn)品質(zhì)量和療效的有效手段。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種操作簡單、靈敏度可靠、檢出限合理的檢測愈傷靈膠囊有效成分含量的方法。本發(fā)明所提供的檢測愈傷靈膠囊有效成分含量的方法，包括如下步驟1)對照品溶液的制備精密稱取巖白菜素用色譜流動相溶解，搖勻，即得對照品溶液；2)供試品溶液的制備取待測愈傷靈膠囊樣品用色譜流動相溶解、過濾，收集濾液即得供試品溶液；3)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線精密稱取對照品溶液，配制為不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，進(jìn)行高效液相色譜法測定，記錄峰面積，以標(biāo)準(zhǔn)濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；4)測定愈傷靈膠囊有效成分含量取供試品溶液進(jìn)行高效液相色譜法測定，記錄峰面積，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線換算得到愈傷靈膠囊有效成分的含量。其中，進(jìn)行高效液相色譜法測定所用的色譜柱為HypersilODS，以十八垸基鍵合硅膠為填充劑，理論板數(shù)按巖白菜素峰計(jì)算不低于4000。所述色譜流動相為甲醇一水混合溶劑，甲醇與水的體積比為l:3—1:4，優(yōu)選為22:78。本發(fā)明通過大量實(shí)驗(yàn)篩選了愈傷靈膠囊中的有效成分，并篩選了從愈傷靈膠囊成藥中提取巖白菜素的方法并經(jīng)過技術(shù)處理使其適合高效液相色譜檢測，并建立了色譜檢測的條件。本發(fā)明方法可以切實(shí)有效的檢測愈傷靈膠囊有效成分的含量，能有效控制產(chǎn)品的質(zhì)量，保證產(chǎn)品的療效，可以廣泛應(yīng)用于藥廠的生產(chǎn)控制中。具體實(shí)施方式實(shí)施例1、測定愈傷靈膠囊有效成分含量1)儀器與試劑日本島津LC一10ATVP液相色譜儀；ClassVP5.03色譜工作站；超聲波清洗器KQ-250BKUN昆山市超聲儀器廠；巖白菜素對照品批號(0703-200020)，購于中國藥品生物制品檢定所；乙腈和甲醇均為HPLC級。2)色譜條件色譜柱Hypersil0DS,4.6X200mm(snUS41E08619),以十八垸基鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水(22:78)為流動相；流速0.9ml/min;檢測波長為275nm，理論板數(shù)按巖白菜素峰計(jì)算應(yīng)不低于4000。3)溶液的制備對照品溶液的制備精密稱取巖白菜素對照品10mg，放置于10ml容量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液。供試品溶液的制備取愈傷靈膠囊粉末10g，研細(xì)，利用甲醇-水(體積比為22:78)約80ml溶解，超聲30min，定容至100ml，搖勻，過0.45um濾膜，收集濾液即得供試品溶液。4)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線精密稱取對照品溶液，配制成IOOO、500、250、125、62.5|jg/ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別精密吸取對照品溶液各10pl，注入液相色譜儀，照高效液相色譜法(中國藥典2005年版二部附錄VD)測定，記錄峰面積，以對照品濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程為y=3540.8x+4604.7,r2=0.9995，表明275nm條件下檢測，巖白菜素在62.51000jJg/ml之間含量和峰面積具有良好的線性。結(jié)果見表1。表1巖白菜素測定線性關(guān)系實(shí)驗(yàn)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>5)測定愈傷靈膠囊有效成分含量精密吸取供試品溶液10pl，注入液相色譜儀，照高效液相色譜法(中國藥典2005年版二部附錄VD)測定，記錄峰面積，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算巖白菜素的含量，連續(xù)測定5次，結(jié)果如表2。上述方法測得供試品溶液含量不低于18(Vg/ml，可認(rèn)為產(chǎn)品合格。表2愈傷靈膠囊?guī)r白菜素測定重復(fù)性實(shí)驗(yàn)的結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>以上數(shù)據(jù)表示方法的重現(xiàn)性很好。黃瓜子(炒)120g自然銅(煅)30g落新婦50.4g2408粒實(shí)施例2、本發(fā)明檢測方法的準(zhǔn)確性試驗(yàn)一、愈傷靈膠囊的處方三七180g紅花120g土鱉蟲60g當(dāng)歸卯g冰片12g續(xù)斷60g制成所需的中藥材均購自河北安國中藥材市場。二、生產(chǎn)工藝(工藝中除特殊說明，均為常規(guī)操作)1)按照處方量精確秤取三七、紅花、當(dāng)歸、續(xù)斷、落新婦五味藥材混合粉碎粗粉，加70%乙醇回流，第一次加乙醇6倍量，提取2小時(shí)，第二、第三次加乙醇3倍量，各提取2小時(shí)，靜置，濾過，合并濾液，回收乙醇，減壓濃縮至相對密度為1.20-1.28(55°C—6(TC)的清膏，8(TC真空干燥，粉碎至細(xì)粉。2)將黃瓜籽(炒)、自然銅(煅)、土鱉蟲粉碎至細(xì)粉，冰片研細(xì)。3)上述的所有細(xì)粉均需過100目細(xì)篩。4)將以上所得藥粉混勻，裝膠囊即可。三、主要有效成分篩選按照下表3要求變化處方中的單一成分，其他組分不變；減少的量用藥用淀粉補(bǔ)充；按照上述工藝生產(chǎn)，各組藥分開備用。取健康的昆明種一級小白鼠270只(購于遼寧醫(yī)學(xué)院試驗(yàn)動物中心)，體重18~22g，隨機(jī)分為27組，每組10只，雌雄各半。取各組藥，倒出藥粉，按照0.75g/kg體重稱量各種藥粉，用適量水混勻，給小鼠灌胃，每日1次，連續(xù)3d。末次給藥后lh，給小白鼠腹腔內(nèi)注射0.6%的醋酸溶液，劑量為0.2ml/只，觀察小白鼠產(chǎn)生的"歪扭"反應(yīng)，記錄注射后20min內(nèi)小鼠的扭體次數(shù)。結(jié)果如下表3:表3愈傷靈膠囊單一組分變化與小鼠扭體次數(shù)表<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>上表數(shù)據(jù)顯示，愈傷靈膠囊療效對落新婦的變化最為敏感，因此要保證愈傷靈膠囊的療效和質(zhì)量，監(jiān)控落新婦的含量最為便捷有效。巖白菜素為落新婦的特征性成分，選擇巖白菜素含量來表征愈傷靈膠囊的有效成分是可行的。四、本發(fā)明檢測方法的準(zhǔn)確性試驗(yàn)按照實(shí)施例1的檢測方法測定幾組不同來源的愈傷靈膠囊，同時(shí)觀察療效(每組IO只小鼠)結(jié)果如下表4:表4不同愈傷靈膠囊療效結(jié)果表<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>i^果可以看出，隨徵白菜^1:的變1七，樣品的m^出現(xiàn)明M^iJ，^S1高，療效趟子；其中樣品3和樣品4^SKl80Mgtal以上，但二者的^^r沒有明驢別，因此，OT監(jiān)蹄白菜^1^^^控制愈傷MM的療^^可行的，^e離謎示定為180Mgtol以上也是科學(xué)的。權(quán)利要求1、一種檢測愈傷靈膠囊有效成分含量的方法，包括如下步驟1)對照品溶液的制備精密稱取巖白菜素用色譜流動相溶解，搖勻，即得對照品溶液；2)供試品溶液的制備取待測愈傷靈膠囊樣品用色譜流動相溶解、過濾，收集濾液即得供試品溶液；3)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線精密稱取對照品溶液，配制為不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，進(jìn)行高效液相色譜法測定，記錄峰面積，以標(biāo)準(zhǔn)濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；4)測定愈傷靈膠囊有效成分含量取供試品溶液進(jìn)行高效液相色譜法測定，記錄峰面積，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線換算得到愈傷靈膠囊有效成分的含量。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于進(jìn)行高效液相色譜法測定所用的色譜柱為HypersilODS，以十八烷基鍵合硅膠為填充劑，理論板數(shù)按巖白菜素計(jì)算不低于4000。3、根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于所述色譜流動相為甲醇一水混合溶劑。4、根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于甲醇與水的體積比為l:3—1:4。5、根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于甲醇與水的體積比為22:78。全文摘要本發(fā)明公開了一種檢測愈傷靈膠囊有效成分含量的方法，本發(fā)明所提供的，包括如下步驟1)對照品溶液的制備2)供試品溶液的制備3)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線4)測定愈傷靈膠囊有效成分含量。本發(fā)明通過大量實(shí)驗(yàn)篩選了愈傷靈膠囊中的有效成分，并篩選了從愈傷靈膠囊成藥中提取巖白菜素的方法并經(jīng)過技術(shù)處理使其適合高效液相色譜檢測，并建立了色譜檢測的條件。本發(fā)明方法可以切實(shí)有效的檢測愈傷靈膠囊有效成分的含量，能有效控制產(chǎn)品的質(zhì)量，保證產(chǎn)品的療效，可以廣泛應(yīng)用于藥廠的生產(chǎn)控制中。文檔編號G01N30/02GK101153864SQ200710176059公開日2008年4月2日申請日期2007年10月18日優(yōu)先權(quán)日2007年10月18日發(fā)明者宿希武,菁楊,王洪新申請人:錦州奧鴻藥業(yè)有限責(zé)任公司