專利名稱：：威靈仙藥材中有效成分含量的測(cè)定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及了一種威靈仙藥材中有效成分含量的測(cè)定方法，尤其是涉及一種威靈仙藥材中齊墩果酸、常春藤皂苷元含量的測(cè)定方法。
背景技術(shù)：
：威靈仙為毛茛科植物威靈仙ClematischinensisOsbeck、棉團(tuán)鐵線蓮ClematishexapetaaPalI.或東北鐵線蓮ClematismanshuricaRupr.的干燥根及根莖。味辛咸，性溫。有祛風(fēng)除濕、通絡(luò)止痛之功，用于風(fēng)濕痹痛，肢體麻木，筋脈拘攣，屈伸不利，骨哽咽喉。威靈仙藥材中化學(xué)成分較為復(fù)雜?，F(xiàn)代植物化學(xué)和藥理學(xué)研究表明，齊墩果酸及常春藤皂苷元為其多種藥理作用的活性成分它的含量威靈仙藥材中齊墩果酸、常春藤皂苷元的含量是確定威靈仙藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的重要參數(shù)，但目前尚未有一種準(zhǔn)確地測(cè)定威靈仙藥材中齊墩果酸、常春藤皂苷元含量的測(cè)定方法。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種準(zhǔn)確測(cè)定威靈仙藥材中有效成分含量的測(cè)定方法，該方法主要是測(cè)定齊墩果酸、常春藤皂苷元的含量。本發(fā)明的目的是通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)一種威靈仙藥材中有效成分含量的測(cè)定方法，主要步驟如下-(1)對(duì)照品溶液的制備(2)供試品溶液的制備(3)分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液，注入液相色譜儀，采用蒸發(fā)光散射檢測(cè)器進(jìn)行測(cè)定，然后獲到齊墩果酸、常春藤皂苷元兩種有效成分的含量；色譜條件為-以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水-冰醋酸-三乙胺為流動(dòng)相，各溶劑之間的體積比為8095:520:0.010.1:0.010.1;理論板數(shù)按齊墩果酸計(jì)算不低于2000。所述步驟(3)中的流動(dòng)相甲醇-水-冰醋酸-三乙胺的各溶劑間的體積比為85:15:0.05:0,03。所述步驟(3)中采用外標(biāo)兩點(diǎn)法對(duì)數(shù)方程計(jì)算齊墩果酸、常春藤皂苷元含量。所述步驟(l)的具體方法為精密稱取齊墩果酸對(duì)照品、常春藤皂苷元對(duì)照品，加甲醇制成齊墩果酸、常春藤皂苷元濃度均為lml/mg的混合溶液，即為對(duì)照品溶液。所述步驟(2)的具體方法為精密稱定威靈仙藥材粉末，按料液重量體積比1:1050加入甲醇，超聲處理2030分鐘，濾過(guò)，殘?jiān)眉状枷礈?，合并濾液與洗液，回收溶劑至干，殘?jiān)铀芙?，用飽和正丁醇振搖提取24次，每次l(K30ml，合并提取液，蒸干，殘?jiān)蛹状?030ml、鹽酸l3ml，加熱水解35小時(shí)，水解物加水稀釋，用三氯甲烷振搖提取24次，每次1030ml，合并提取液，回收溶劑至干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得到供試品溶液。本發(fā)明公開測(cè)定方法操作簡(jiǎn)單，只需測(cè)定威靈仙藥材中齊墩果酸、常春藤皂苷元的特征峰面積后通過(guò)外標(biāo)兩點(diǎn)法對(duì)數(shù)方程計(jì)算即可準(zhǔn)確得出威靈仙藥材中齊墩果酸、常春藤皂苷元的含量。具體實(shí)施方式以下實(shí)施例僅用于闡述本發(fā)明，而本發(fā)明的保護(hù)范圍并非僅僅局限于以下實(shí)施例。所述
技術(shù)領(lǐng)域：
的普通技術(shù)人員依據(jù)以上本發(fā)明公開的內(nèi)容，均可實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的。實(shí)施例一(1)對(duì)照品溶液的制備精密稱取齊墩果酸對(duì)照品、常春藤皂苷元對(duì)照品適量，加甲醇制成齊墩果酸、常春藤皂苷元濃度均為lml/mg的混合溶液，即為對(duì)照品溶液；(2)供試品溶液的制備取威靈仙藥材粉末2g，精密稱定，加甲醇50ml，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，殘?jiān)眉状歼m量洗滌，合并濾液與洗液，回收溶劑至干，殘?jiān)?0ml水溶解，用飽和正丁醇振搖提取3次，每次20ml，合并提取液，蒸干，殘?jiān)蛹状?0ml、鹽酸2ml，加熱水解4小時(shí)，水解物加水10ml，用三氯甲垸振搖提取2次，每次20ml，合并提取液，回收溶劑至干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得到供試品溶液；(3)精密吸取對(duì)照品溶液5^1、10^1，供試品溶液10pl，注入waters2695-2420高效液相色譜儀，采用蒸發(fā)光散射檢測(cè)器進(jìn)行測(cè)定得到對(duì)照品和供試品溶液中齊墩果酸、常春藤皂苷元的特征峰面積，并根據(jù)外標(biāo)兩點(diǎn)法對(duì)數(shù)方程計(jì)算得出威靈仙樣品中齊墩果酸、常春藤皂苷元的含量，結(jié)果見表l。色譜條件為以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水-冰醋酸-三乙胺為流動(dòng)相，它們之間的體積比為85:15:0.05:0.03，蒸發(fā)光散射檢測(cè)器，理論板數(shù)按齊墩果酸計(jì)算不低于2000?；貧w方程常春藤皂苷元Y=0.0748X+6.6867齊墩果酸Y-0.0829X+6.4278表1:<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>實(shí)施例二與實(shí)施例一不同的是步驟(2)供試品溶液的制備取威靈仙藥材粉末2g，精密稱定，加甲醇20ml，超聲處理20分鐘，濾過(guò)，殘?jiān)眉状歼m量洗滌，合并濾液與洗液，回收溶劑至干，殘?jiān)?0ml水溶解，用飽和正丁醇振搖提取2次，每次10ml，合并提取液，蒸干，殘?jiān)蛹状?0ml、鹽酸lml，加熱水解4小時(shí)，水解物加水10ml，用三氯甲烷振搖提取3次，每次10ml，合并提取液，回收溶劑至干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)'移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得到供試品溶液；(3)精密吸取對(duì)照品溶液5^1、10pl，供試品溶液10nl，注入waters2695-2420高效液相色譜儀，采用蒸發(fā)光散射檢測(cè)器進(jìn)行測(cè)定得到對(duì)照品和供試品溶液中齊墩果酸、常春藤皂苷元的特征峰面積，并根據(jù)外標(biāo)兩點(diǎn)法對(duì)數(shù)方程計(jì)算得出威靈仙樣品中齊墩果酸、常春藤皂苷元的含量，結(jié)果見表2。色譜條件為以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水-冰醋酸-三乙胺為流動(dòng)相，它們之間的體積比為80:20:0.02:0.01，蒸發(fā)光散射檢測(cè)器，理論板數(shù)按齊墩果酸計(jì)算不低于2000。回歸方程常春藤皂苷元Y=0.0791X+6.7115齊墩果酸Y-0.0721X+6.5771表2:<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>實(shí)施例三-與實(shí)施例一不同的是步驟(2)供試品溶液的制備取威靈仙藥材粉末2g，精密稱定，加甲醇100ml，超聲處理25分鐘，濾過(guò)，殘?jiān)眉状歼m量洗滌，合并濾液與洗液，回收溶劑至干，殘?jiān)?0ml水溶解，用飽和正丁醇振搖提取4次，每次30ml，合并提取液，蒸千，殘?jiān)蛹状?0ml、鹽酸3ml，加熱水解4小時(shí)，水解物加水10ml，用三氯甲烷振搖提取4次，每次30ml，合并提取液，回收溶劑至干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得到供試品溶液；(3)精密吸取對(duì)照品溶液5^1、lOjil，供試品溶液1(^1，注入waters2695-2420高效液相色譜儀，采用蒸發(fā)光散射檢測(cè)器進(jìn)行測(cè)定得到對(duì)照品和供試品溶液中齊墩果酸、常春藤皂苷元的特征峰面積，并根據(jù)外標(biāo)兩點(diǎn)法對(duì)數(shù)方程計(jì)算得出威靈仙樣品中齊墩果酸、常春藤皂苷元的含量，結(jié)果見表3。色譜條件為以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水-冰醋酸-三乙胺為流動(dòng)相，它們之間的體積比為90:10:0.07:0.05，蒸發(fā)光散射檢測(cè)器，理論板數(shù)按齊墩果酸計(jì)算不低于2000?；貧w方程常春藤皂苷元Y-0.0738X+6.6891齊墩果酸Y-0.0918X+6.3068表3:<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>權(quán)利要求1、一種威靈仙藥材中有效成分含量的測(cè)定方法，其特征是，其主要步驟是(1)對(duì)照品溶液的制備；(2)供試品溶液的制備；(3)分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液，注入液相色譜儀，采用蒸發(fā)光散射檢測(cè)器進(jìn)行測(cè)定，然后獲到齊墩果酸、常春藤皂苷元兩種有效成分的含量；色譜條件為以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水-冰醋酸-三乙胺為流動(dòng)相，各溶劑間的體積比為80～95∶5～20∶0.01～0.1∶0.01～0.1；理論板數(shù)按齊墩果酸計(jì)算不低于2000。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的測(cè)定方法，其特征是，所述步驟(3)中的流動(dòng)相甲醇-水-冰醋酸-三乙胺的各溶劑間的體積比為85:15:0.05:0.03。3、根據(jù)權(quán)利要求1所述的測(cè)定方法，其特征是，所述步驟(3)中采用外標(biāo)兩點(diǎn)法對(duì)數(shù)方程計(jì)算齊墩果酸、常春藤皂苷元含量。4、根據(jù)權(quán)利要求1所述的測(cè)定方法，其特征是，所述步驟(l)的具體操作步驟為精密稱取齊墩果酸對(duì)照品、常春藤皂苷元對(duì)照品，加甲醇制成齊墩果酸、常春藤皂苷元濃度均為lml/mg的混合溶液，即為對(duì)照品溶液。5、根據(jù)權(quán)利要求1所述的測(cè)定方法，其特征是，所述步驟(2)的具體操作步驟為精密稱定威靈仙藥材粉末，以料液重量體積比1:1050加入甲醇，超聲處理2030分鐘，濾過(guò)，殘?jiān)眉状枷礈?，合并濾液與洗液，回收溶劑至干，殘?jiān)铀芙?，用飽和正丁醇振搖提取24次，每次1030ml，合并提取液，蒸干，殘?jiān)蛹状?0~30ml、鹽酸l3ml，加熱水解35小時(shí)，水解物加水稀釋，用三氯甲烷振搖提取24次，每次10~30ml，合并提取液，回收溶劑至干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得到供試品溶液。全文摘要本發(fā)明公開了一種威靈仙藥材中有效成分含量的測(cè)定方法，其主要步驟是(1)對(duì)照品溶液的制備；(2)供試品溶液的制備；(3)分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液，注入液相色譜儀，采用蒸發(fā)光散射檢測(cè)器進(jìn)行測(cè)定，然后獲到齊墩果酸、常春藤皂苷元兩種有效成分的含量；色譜條件為以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水-冰醋酸-三乙胺為流動(dòng)相，各溶劑間的體積比為80～95∶5～20∶0.01～0.1∶0.01～0.1；理論板數(shù)按齊墩果酸計(jì)算不低于2000。該方法操作簡(jiǎn)單，能夠準(zhǔn)確測(cè)出威靈仙藥材中齊墩果酸、常春藤皂苷元的含量。文檔編號(hào)G01N30/00GK101216462SQ20071003302公開日2008年7月9日申請(qǐng)日期2007年12月29日優(yōu)先權(quán)日2007年12月29日發(fā)明者李衛(wèi)民申請(qǐng)人:廣州中醫(yī)藥大學(xué)科技產(chǎn)業(yè)園有限公司