專利名稱：自動(dòng)化通道分辨化學(xué)發(fā)光多組分免疫檢測(cè)系統(tǒng)及分析方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明為通道分辨多組分化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)，涉及近同時(shí)檢測(cè)同一樣品中多種組分的免疫分析方法，尤其是結(jié)合化學(xué)發(fā)光與流動(dòng)分析技術(shù)，并使用磁珠為免疫反應(yīng)載體的多組分免疫分析方法；本發(fā)明還涉及用于多組分化學(xué)發(fā)光免疫分析的自動(dòng)化檢測(cè)儀器系統(tǒng)。
背景技術(shù)：
免疫分析由于其選擇性高、檢測(cè)限低、普適性好、儀器簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)，在臨床診斷、環(huán)境監(jiān)測(cè)、食品安全、藥物分析與微生物檢驗(yàn)等領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用。在實(shí)際應(yīng)用領(lǐng)域中，經(jīng)常需要測(cè)定復(fù)雜樣品中多種組分的含量，如在疾病診斷中，多種生物標(biāo)記物的聯(lián)合分析為診斷提供了有力的依據(jù)。又如在環(huán)境監(jiān)控中，經(jīng)常需要同時(shí)監(jiān)測(cè)環(huán)境水體中多種殺蟲劑與除草劑的濃度指標(biāo)，以綜合評(píng)價(jià)環(huán)境污染水平。
測(cè)定復(fù)雜體系中多種組分的含量，傳統(tǒng)上多采用平行單組分分析法，即每個(gè)分析流程只測(cè)定其中一種組分含量，多次平行執(zhí)行該流程，最后得到所有所需組分含量。該分析模式所需時(shí)間長(zhǎng)，試劑消耗多，且勞動(dòng)量過(guò)大。近年來(lái)興起的多組分免疫分析技術(shù)可在單個(gè)分析流程中同時(shí)或者近同時(shí)實(shí)現(xiàn)多種組分的檢測(cè)，具有分析通量高、所需時(shí)間短、樣品消耗少、分析成本低等突出優(yōu)點(diǎn)。目前的多組分免疫分析技術(shù)可大致分為兩類，第一類為多標(biāo)記物模式，其基本原理是以不同的示蹤物標(biāo)記不同組分，通過(guò)區(qū)分不同標(biāo)記物的信號(hào)來(lái)實(shí)現(xiàn)不同組分的識(shí)別。如在熒光和吸收光度法檢測(cè)中以波長(zhǎng)識(shí)別；電化學(xué)法中以工作電位識(shí)別；時(shí)間分辨熒光法中既可用波長(zhǎng)識(shí)別，也可用衰減時(shí)間進(jìn)行識(shí)別?；诙鄻?biāo)記物的模式有一個(gè)很大的問(wèn)題，就是不同的標(biāo)記物經(jīng)常有著截然不同的最優(yōu)分析條件，如辣根過(guò)氧化物酶、堿性磷酸酶與半乳糖酶的最優(yōu)pH值分別為5-7、8-10和6-8。簡(jiǎn)單地在同一分析體系中聯(lián)合使用多種標(biāo)記物，只能在不同標(biāo)記物的最優(yōu)分析條件中選擇一個(gè)折衷性條件，這導(dǎo)致了分析效果的降低。標(biāo)記物越多，條件選擇難度越大，因此目前大多數(shù)基于多標(biāo)記物模式的分析方法所測(cè)組分?jǐn)?shù)都不超過(guò)兩個(gè)(Kricka LJ.Multianalyte testing.Clin.Chem.1992；38327)。同時(shí)，不同標(biāo)記物雖然可以波長(zhǎng)或者電位等參數(shù)進(jìn)行分辨，但是其分辨效率往往有限，信號(hào)重疊問(wèn)題有時(shí)候非常突出(Goldman ER，Clapp AR，Anderson GP，Uyeda HT，Mauro JM，Medintz IL，et al.Multiplexed toxin analysisusing four colors of quantum dot fluororeagents.Anal.Chem.2004；76684)。多標(biāo)記物模式最大的問(wèn)題還在于可用的示蹤物有限。雖然免疫分析的檢測(cè)手段很多，但每種手段中真正具有較高靈敏度和較好穩(wěn)定性，在實(shí)際工作中得到廣泛應(yīng)用的示蹤物不過(guò)兩三種，這就大大限制了可同時(shí)檢測(cè)的組分的數(shù)量(Mastichiadis C，Kakabakos SE，Christofidis I，Koupparis MA，Willetts C，Misiakos K.Simultaneous determination of pesticides using afour-band disposable optical capillary immunosensor. Anal.Chem.2002；746064)。第二類多組分免疫分析技術(shù)為空間分辨模式，是在免疫反應(yīng)器的不同區(qū)域固定不同組分相應(yīng)的免疫試劑，使不同組分的免疫反應(yīng)在反應(yīng)器的不同空間位置發(fā)生，然后以陣列檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，實(shí)現(xiàn)多組分的同時(shí)檢測(cè)。本模式多見(jiàn)于陣列法，其換能方式包括光學(xué)(化學(xué)發(fā)光、熒光、紫外-可見(jiàn)吸收光度)和電化學(xué)(安培、電容)方法。本模式通常需要電荷耦合元件(CCD)檢測(cè)器和多通道電化學(xué)工作站等昂貴的陣列檢測(cè)器(Fu ZF，Liu H，Ju HX.Flow-through multianalyte chemiluminescent immunosensing system with designed substratezone-resolved technique for sequential detection of tumor markers.Anal.Chem.2006；786999)。
當(dāng)前常用的免疫分析技術(shù)全過(guò)程通常需要多次加樣、溫育、洗板以及反應(yīng)，最后進(jìn)行儀器檢測(cè)。操作多為手工完成，勞動(dòng)量大，且所需時(shí)間多在2小時(shí)以上，不適合高通量快速分析。流動(dòng)分析技術(shù)具有重現(xiàn)性好，自動(dòng)化程度高，分析速度快等優(yōu)點(diǎn)，是實(shí)現(xiàn)高通量分析最有效的手段之一。而化學(xué)發(fā)光分析是近年來(lái)快速發(fā)展的分析技術(shù)，其儀器便宜，操作簡(jiǎn)便，環(huán)境友好，并且是目前最靈敏的分析技術(shù)之一，特別適合于痕量物質(zhì)的檢測(cè)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是以空間分辨模式為基礎(chǔ)，以免疫磁珠為載體，結(jié)合化學(xué)發(fā)光檢測(cè)和流動(dòng)分析技術(shù)，提供一種自動(dòng)化通道分辨化學(xué)發(fā)光多組分免疫分析方法；本發(fā)明的另一個(gè)目的還在于提供一套自動(dòng)化通道分辨化學(xué)發(fā)光多組分免疫檢測(cè)系統(tǒng)。
本發(fā)明的目的是通過(guò)以下的技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)一種自動(dòng)化通道分辨化學(xué)發(fā)光多組分免疫檢測(cè)系統(tǒng)，其特征在于該系統(tǒng)由溫育系統(tǒng)、溶液傳輸系統(tǒng)、信號(hào)分辨采集系統(tǒng)和計(jì)算機(jī)所構(gòu)成，其中溫育系統(tǒng)由1至6個(gè)內(nèi)置磁珠(7)和微型攪拌子(8)的玻璃試管(6)與磁力攪拌器(9)組成，微型玻璃試管(6)放置在磁力攪拌器(9)上；溶液傳輸系統(tǒng)由多通道蠕動(dòng)泵(11)、連接管(10)和1至6個(gè)多位閥(5)組成，連接管(10)經(jīng)過(guò)多通道蠕動(dòng)泵(11)分別連接到多位閥(5)的三個(gè)閥位入口(1)、(2)、(3)，入口(1)通過(guò)連接管(10)通向溫育系統(tǒng)傳輸磁珠懸浮液，入口(2)通過(guò)連接管(10)傳輸化學(xué)發(fā)光底物液(19)，入口(3)通過(guò)連接管(10)傳輸沖洗緩沖液(18)；信號(hào)分辨采集系統(tǒng)由1至6個(gè)檢測(cè)通道(12)、1至6個(gè)管狀光門(13)、磁鐵(14)與化學(xué)發(fā)光檢測(cè)器(15)組成，檢測(cè)通道(12)的入口與多位閥(5)中心的出口(4)連接，連接管導(dǎo)出檢測(cè)通道(12)中的殘液，該殘液從殘液出口(16)排出，檢測(cè)通道(12)的上方放置磁鐵(14)下方放置化學(xué)發(fā)光檢測(cè)器(15)，溶液傳輸系統(tǒng)和化學(xué)發(fā)光檢測(cè)器(15)均由計(jì)算機(jī)(17)控制。
上述的多通道蠕動(dòng)泵(11)的轉(zhuǎn)速和液體流速是通過(guò)計(jì)算機(jī)(17)進(jìn)行自動(dòng)調(diào)節(jié)。
上述的多位閥(5)可通過(guò)轉(zhuǎn)動(dòng)多位閥實(shí)現(xiàn)不同流路的切換，多位閥(5)上的三個(gè)入口(1)、(2)、(3)分別與中心的多位閥出口(4)相通，多位閥(5)的轉(zhuǎn)動(dòng)由計(jì)算機(jī)(17)自動(dòng)控制。
上述的磁鐵(14)用于截留懸浮液中磁珠顆粒(7)。
上述的管狀光門(13)是可移動(dòng)的，用于遮蔽檢測(cè)通道(12)，實(shí)現(xiàn)不同通道中發(fā)光信號(hào)的分辨。
一種自動(dòng)化通道分辨化學(xué)發(fā)光多組分免疫分析方法，其分析步驟如下①將樣品、待測(cè)組分的抗體包被磁珠(7)與堿性磷酸酶標(biāo)記抗體加入到溫育系統(tǒng)的玻璃試管(6)中，于室溫下攪拌溫育，形成免疫夾心復(fù)合物；②將閥位口切換到入口(1)，用蠕動(dòng)泵(11)把磁珠懸浮液經(jīng)連接管(10)通過(guò)入口(1)流入多位閥出口(4)再通入檢測(cè)通道(12)，以磁鐵(14)截留磁珠(7)，剩余殘液從殘液出口(16)排出；③將閥位口切換到(3)，用蠕動(dòng)泵(11)經(jīng)連接管(10)通入沖洗緩沖液(18)，洗凈磁珠(7)表面吸附的未結(jié)合的免疫試劑；④把閥位口切換到(2)，用蠕動(dòng)泵(11)經(jīng)連接管(10)通入化學(xué)發(fā)光底物液(19)，撤去磁珠(14)的磁場(chǎng)，引發(fā)化學(xué)發(fā)光反應(yīng)；⑤檢測(cè)單個(gè)通道(12)中的化學(xué)發(fā)光，并以管狀光門(13)遮蔽其余檢測(cè)通道(12)，得出該單個(gè)通道中所檢測(cè)組分的濃度，并以同樣方法得到各通道所檢測(cè)組分的濃度；⑥將閥位口切換到(3)，用蠕動(dòng)泵(11)經(jīng)過(guò)連接管(10)通入沖洗緩沖液(18)，把磁珠(7)從檢測(cè)通道(10)排出，完成全檢測(cè)過(guò)程，并進(jìn)入下一分析循環(huán)，統(tǒng)一收集使用過(guò)的磁珠(7)，用再生緩沖液處理以重復(fù)使用。
上述步驟③的沖洗緩沖液(18)為0.01M磷酸鹽緩沖液，pH 7.4，含0.05％吐溫-20。
上述步驟④中所述的化學(xué)發(fā)光底物液(19)為disodium 3-(4-methoxyspiro{1，2-dioxetane-3，2’-(5’-chloro)tricyclo[3.3.1.13，7]decan}-4-yl)phenyl phosphate，CSPD。
上述步驟⑥中所述的再生緩沖液為0.1M甘氨酸/鹽酸緩沖液，pH2.2。
上述的多位閥(5)上的三個(gè)入口(1)、(2)、(3)可通過(guò)切換閥位分別與中心的出口(4)相通，實(shí)現(xiàn)不同流路的切換。上述的連接管(10)可用內(nèi)徑0.8毫米的聚四氟乙烯制成。
上述免疫分析系統(tǒng)所用的免疫反應(yīng)載體為免疫磁珠，表面包被待測(cè)物相應(yīng)的抗體。
整套檢測(cè)系統(tǒng)和全部分析過(guò)程，包括溫育、進(jìn)樣、沖洗、檢測(cè)及排出磁珠皆由計(jì)算機(jī)進(jìn)行自動(dòng)化控制，測(cè)得化學(xué)發(fā)光信號(hào)值亦從計(jì)算機(jī)中輸出。
本檢測(cè)系統(tǒng)的工作原理本檢測(cè)系統(tǒng)是基于傳統(tǒng)的空間分辨模式，結(jié)合流動(dòng)分析與通道分辨技術(shù)，可以在一個(gè)分析流程中測(cè)定多種物質(zhì)。在功能化的磁珠表面分別共價(jià)結(jié)合不同組分的捕獲抗體用作免疫反應(yīng)載體；固定不同抗體的磁珠和樣品及相應(yīng)酶標(biāo)抗體混合后，在室溫下攪拌溫育，形成夾心免疫復(fù)合物；將不同組分相應(yīng)的磁珠懸浮液通入平行的檢測(cè)通道后以磁鐵截留磁珠；以沖洗緩沖液洗去未結(jié)合免疫試劑；沖洗干凈后，通入化學(xué)發(fā)光底物(disodium3-(4-methoxyspiro{1，2-dioxetane-3，2’-(5’-chloro)tricyclo[3.3.1.13，7]decan}-4-yl)phenylphosphate，CSPD)，產(chǎn)生強(qiáng)化學(xué)發(fā)光；化學(xué)發(fā)光信號(hào)的分辨采集借助光門完成，即檢測(cè)其中一個(gè)通道的化學(xué)發(fā)光時(shí)，用管狀光門遮蔽其余檢測(cè)通道，分別記錄各檢測(cè)通道的發(fā)光后即可得到各組分的含量；測(cè)定完成后，通入沖洗緩沖液排出磁珠，以進(jìn)入下一個(gè)測(cè)定循環(huán)；排出的磁珠統(tǒng)一收集后以再生緩沖液處理，可實(shí)現(xiàn)免疫磁珠的反復(fù)使用。
分析過(guò)程中，所有溶液由蠕動(dòng)泵上的連接管傳輸進(jìn)入分析系統(tǒng)，通過(guò)轉(zhuǎn)動(dòng)多位閥實(shí)現(xiàn)不同流路的切換，全過(guò)程由計(jì)算機(jī)進(jìn)行程序化自動(dòng)控制，信號(hào)亦從計(jì)算機(jī)中輸出。
本發(fā)明結(jié)合流動(dòng)分析技術(shù)與化學(xué)發(fā)光檢測(cè)，提出了通道分辨多組分免疫分析系統(tǒng)，在一個(gè)流程中檢測(cè)多種物質(zhì)。相對(duì)于其他多組分免疫分析方法，具有以下特點(diǎn)(1)操作簡(jiǎn)單，全分析過(guò)程均在流動(dòng)體系中完成，以計(jì)算機(jī)進(jìn)行程序化自動(dòng)控制，手工操作極少，無(wú)需熟練操作人員。
(2)分析時(shí)間短，全過(guò)程包括加樣、溫育、沖洗與檢測(cè)僅需18分鐘，不僅是目前最快速的多組分免疫分析方法之一，也大大快于普通的單組分免疫分析方法。
(3)儀器設(shè)備簡(jiǎn)單，成本低廉，無(wú)需多組分免疫分析中常用的昂貴的陣列檢測(cè)器，整個(gè)分析系統(tǒng)由低值的蠕動(dòng)泵、多位選向閥、聚四氟乙烯連接管、磁鐵和化學(xué)發(fā)光檢測(cè)器組成。
(4)抗體包被的磁珠可用再生緩沖液反復(fù)再生使用，與常規(guī)的免疫分析方法相比，大大節(jié)約了昂貴的包被抗體，進(jìn)一步降低了分析成本。
(5)由于其檢測(cè)模式為極靈敏的酶催化化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，本方法可測(cè)出極低濃度的樣品，滿足絕大多數(shù)的分析需求。
(6)由于采用了自動(dòng)化的流動(dòng)分析技術(shù)，使得由操作人員的操作手法與習(xí)慣不同導(dǎo)致的個(gè)體差異大為減小，方法的重現(xiàn)性比傳統(tǒng)的手工操作方法大為提高，有利于制定相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)。
四

圖1自動(dòng)化通道分辨多組分化學(xué)發(fā)光免疫分析檢測(cè)系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)示意圖1-通向溫育系統(tǒng)，2-通化學(xué)發(fā)光底物，3-通沖洗緩沖液，4-多位閥出口，5-多位閥，6-玻璃試管，7-磁珠，8-微型攪拌子，9-磁力攪拌器，10-連接管，11-蠕動(dòng)泵，12-檢測(cè)通道，13-管狀光門，14-磁鐵，15-化學(xué)發(fā)光檢測(cè)器，16-殘液出口，17-計(jì)算機(jī)，18-沖洗緩沖液，19-化學(xué)發(fā)光底物液。
五具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1結(jié)合附圖1對(duì)三組分A、B、C檢測(cè)系統(tǒng)作進(jìn)一步說(shuō)明該檢測(cè)系統(tǒng)由溫育系統(tǒng)、溶液傳輸系統(tǒng)、信號(hào)分辨采集系統(tǒng)和計(jì)算機(jī)所構(gòu)成。對(duì)于三組分檢測(cè)，溫育系統(tǒng)由三個(gè)直徑為0.8厘米，高度為2厘米，內(nèi)置長(zhǎng)度為0.5厘米的微型攪拌子的玻璃試管和磁力攪拌器組成，玻璃試管置于磁力攪拌器上；溶液傳輸系統(tǒng)由一個(gè)轉(zhuǎn)速連續(xù)可調(diào)的多通道蠕動(dòng)泵、三個(gè)三入口一出口的多位閥和若干內(nèi)徑為0.8毫米的聚四氟乙烯連接管組成，多位閥的入口1通向各組分相應(yīng)的溫育系統(tǒng)，入口2通向化學(xué)發(fā)光底物液，入口3通向沖洗緩沖液；信號(hào)分辨采集系統(tǒng)由三個(gè)檢測(cè)通道、三個(gè)可移動(dòng)管狀光門、一個(gè)化學(xué)發(fā)光檢測(cè)器和一塊磁鐵組成，檢測(cè)通道為內(nèi)徑為1毫米，長(zhǎng)度為4厘米的石英管，放置在磁鐵下方，化學(xué)發(fā)光檢測(cè)器上方，石英管旁有可移動(dòng)的黑色管狀光門。全分析系統(tǒng)皆由計(jì)算機(jī)進(jìn)行自動(dòng)化控制。
實(shí)施例2化學(xué)發(fā)光三組分免疫分析方法具體分析過(guò)程如表1所示，所有分析步驟由計(jì)算機(jī)進(jìn)行程序化自動(dòng)控制，測(cè)得化學(xué)發(fā)光信號(hào)從計(jì)算機(jī)中輸出。分析步驟完成后統(tǒng)一收集抗體包被的磁珠，浸泡在pH2.2的甘氨酸/鹽酸緩沖液中10分鐘，并以0.01M磷酸鹽緩沖液(pH7.4)洗滌5次，以達(dá)到再生重復(fù)使用的目的。

實(shí)施例3以三種重要的腫瘤標(biāo)記物甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)與癌抗原125(CA125)為例，說(shuō)明該自動(dòng)化通道分辨化學(xué)發(fā)光多組分免疫分析方法的應(yīng)用。
免疫反應(yīng)載體為羧基活化的磁珠，分別包被了鼠單克隆AFP抗體、鼠單克隆CEA抗體與鼠單克隆CA 125抗體，以牛血清白蛋白封閉殘余活性位點(diǎn)。示蹤抗體為堿性磷酸酶標(biāo)記的羊多克隆AFP，CEA與CA 125抗體。
如表1所示流程，往溫育系統(tǒng)三個(gè)試管中各加入20微升樣品，并分別加入AFP、CEA與CA 125的抗體包被磁珠與酶標(biāo)抗體各20微升，室溫下攪拌溫育10分鐘。將多位閥切換至閥位1，將磁珠懸浮液通入三個(gè)檢測(cè)通道，以磁鐵截留磁珠后，殘液從通道中流出。將多位閥切換至閥位3，以0.4mL/min的流速連續(xù)通入沖洗緩沖液，沖洗磁珠1分50秒，洗去未結(jié)合免疫試劑。將多位閥切換至閥位2，在三個(gè)通道中分別通入化學(xué)發(fā)光底物30微升，撤去磁場(chǎng)，引發(fā)化學(xué)發(fā)光反應(yīng)。反應(yīng)5分鐘后，以光門遮蔽CEA與CA 125對(duì)應(yīng)的檢測(cè)通道，檢測(cè)AFP通道中的化學(xué)發(fā)光，得到AFP的濃度；以光門遮蔽CEA與AFP對(duì)應(yīng)的檢測(cè)通道，檢測(cè)CA 125通道中的化學(xué)發(fā)光，得到CA 125的濃度；以光門遮蔽AFP與CA 125對(duì)應(yīng)的檢測(cè)通道，檢測(cè)CEA通道中的化學(xué)發(fā)光，得到CEA的濃度。將閥位切換到閥位3，以1.0mL/min的流速連續(xù)通入洗液0.5分鐘，將磁珠從通道中排出。至此完成整個(gè)分析流程。所排出的磁珠統(tǒng)一收集后，浸泡在pH 2.2的甘氨酸/HCl緩沖液中10分鐘，并以0.01 M磷酸鹽緩沖液(pH 7.4)洗滌5次，以達(dá)到再生重復(fù)使用的目的。
權(quán)利要求
1.一種自動(dòng)化通道分辨化學(xué)發(fā)光多組分免疫檢測(cè)系統(tǒng)，其特征在于該系統(tǒng)由溫育系統(tǒng)、溶液傳輸系統(tǒng)、信號(hào)分辨采集系統(tǒng)和計(jì)算機(jī)所構(gòu)成，其中溫育系統(tǒng)由1至6個(gè)內(nèi)置磁珠(7)和微型攪拌子(8)的玻璃試管(6)與磁力攪拌器(9)組成，微型玻璃試管(6)放置在磁力攪拌器(9)上；溶液傳輸系統(tǒng)由多通道蠕動(dòng)泵(11)、連接管(10)和1至6個(gè)多位閥(5)組成，連接管(10)經(jīng)過(guò)多通道蠕動(dòng)泵(11)分別連接到多位閥(5)的三個(gè)閥位入口(1)、(2)、(3)，入口(1)通過(guò)連接管(10)通向溫育系統(tǒng)傳輸磁珠懸浮液，入口(2)通過(guò)連接管(10)傳輸化學(xué)發(fā)光底物液(19)，入口(3)通過(guò)連接管(10)傳輸沖洗緩沖液(18)；信號(hào)分辨采集系統(tǒng)由1至6個(gè)檢測(cè)通道(12)、1至6個(gè)管狀光門(13)、磁鐵(14)與化學(xué)發(fā)光檢測(cè)器(15)組成，檢測(cè)通道(12)的入口與多位閥(5)中心的出口(4)連接，連接管導(dǎo)出檢測(cè)通道(12)中的殘液，該殘液從殘液出口(16)排出，檢測(cè)通道(12)的上方放置磁鐵(14)下方放置化學(xué)發(fā)光檢測(cè)器(15)，其中溶液傳輸系統(tǒng)和化學(xué)發(fā)光檢測(cè)器(15)均由計(jì)算機(jī)(17)自動(dòng)控制。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)系統(tǒng)，其特征在于所述的多通道蠕動(dòng)泵(11)的轉(zhuǎn)速和液體流速是通過(guò)計(jì)算機(jī)(17)進(jìn)行自動(dòng)調(diào)節(jié)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)系統(tǒng)，其特征在于所述的多位閥(5)可通過(guò)轉(zhuǎn)動(dòng)多位閥實(shí)現(xiàn)不同流路的切換，多位閥(5)上的三個(gè)入口(1)、(2)、(3)分別與中心的多位閥出口(4)相通，多位閥(5)的轉(zhuǎn)動(dòng)由計(jì)算機(jī)(17)控制。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)系統(tǒng)，其特征在于所述的磁鐵(14)用于截留懸浮液中磁珠顆粒(7)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)系統(tǒng)，其特征在于所述的管狀光門(13)是可移動(dòng)的，用于遮蔽檢測(cè)通道(12)，實(shí)現(xiàn)不同通道中發(fā)光信號(hào)的分辨。
6.一種自動(dòng)化通道分辨化學(xué)發(fā)光多組分免疫分析方法，其分析步驟如下①將樣品、待測(cè)組分的抗體包被磁珠(7)與堿性磷酸酶標(biāo)記抗體加入到溫育系統(tǒng)的玻璃試管(6)中，于室溫下攪拌溫育，形成免疫夾心復(fù)合物；②將閥位口切換到入口(1)，用蠕動(dòng)泵(11)把磁珠懸浮液經(jīng)連接管(10)通過(guò)多位閥(5)的入口(1)流入多位閥出口(4)再通入檢測(cè)通道(12)，以磁鐵(14)截留磁珠(7)，剩余殘液從殘液出口(16)排出；③將閥位口切換到(3)，用蠕動(dòng)泵(11)經(jīng)連接管(10)通入沖洗緩沖液(18)，洗凈磁珠(7)表面吸附的未結(jié)合的免疫試劑；④把閥位口切換到(2)，用蠕動(dòng)泵(11)經(jīng)連接管(10)通入化學(xué)發(fā)光底物液(19)，撤去磁珠(14)的磁場(chǎng)，引發(fā)化學(xué)發(fā)光反應(yīng)；⑤檢測(cè)單個(gè)通道(12)中的化學(xué)發(fā)光，移動(dòng)管狀光門(13)遮蔽其余檢測(cè)通道(12)，得出該單個(gè)通道中所檢測(cè)組分的濃度，并以同樣方法得到各通道所檢測(cè)組分的濃度；⑥將閥位口切換到(3)，用蠕動(dòng)泵(11)經(jīng)連接管(10)通入沖洗緩沖液(18)，把磁珠(7)從檢測(cè)通道(12)中排出，完成全檢測(cè)過(guò)程，并進(jìn)入下一分析循環(huán)，統(tǒng)一收集使用過(guò)的磁珠(7)，用再生緩沖液處理以重復(fù)使用。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的分析方法，其特征在于在步驟(3)中所述的沖洗緩沖液(18)為0.01M磷酸鹽緩沖液，pH7.4，含0.05％吐溫-20。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的分析方法，其特征在于在步驟④中所述的化學(xué)發(fā)光底物液(19)為disodium 3-(4-methoxyspiro{1，2-dioxetane-3，2’-(5’-chloro)tricyclo[3.3.1.13，7]decan}-4-yl)phenyl phosphate，CSPD。
9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的分析方法，其特征在于在步驟⑥中所述的再生緩沖液為0.1M甘氨酸/鹽酸緩沖液，pH 2.2。
全文摘要
一種自動(dòng)化通道分辨化學(xué)發(fā)光多組分免疫檢測(cè)系統(tǒng)及分析方法，該檢測(cè)系統(tǒng)中溫育系統(tǒng)的試管(6)中放置磁珠(7)和攪拌子(8)，并置于磁力攪拌器(9)上；溶液傳輸系統(tǒng)由蠕動(dòng)泵(11)、連接管(10)和多位閥(5)組成；信號(hào)分辨采集系統(tǒng)由檢測(cè)通導(dǎo)(12)、光門(13)、磁鐵(14)和化學(xué)發(fā)光檢測(cè)器(15)組成；該分析方法是在功能化的磁珠表面固定多種組分的包被抗體，和待檢測(cè)物與堿性磷酸酶標(biāo)記的示蹤抗體反應(yīng)形成夾心免疫復(fù)合物；用緩沖液洗凈未結(jié)合的過(guò)量酶標(biāo)抗體后通入化學(xué)發(fā)光底物液，以光門遮蔽檢測(cè)通道，分別檢測(cè)不同通道中組分的濃度，檢測(cè)完成后沖出磁珠進(jìn)入下一分析流程。該方法速度快、成本低、重現(xiàn)性好、靈敏度高，適合于環(huán)境監(jiān)測(cè)、臨床診斷、食品安全等領(lǐng)域。
文檔編號(hào)G01N35/00GK101021530SQ20071002107
公開(kāi)日2007年8月22日 申請(qǐng)日期2007年3月26日 優(yōu)先權(quán)日2007年3月26日
發(fā)明者鞠熀先, 付志鋒 申請(qǐng)人:南京大學(xué)