專利名稱：一種中藥制劑金嗓開音丸的質(zhì)量檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種質(zhì)量檢測方法，特別是涉及一種中藥制劑金嗓開音丸的質(zhì)量檢測方法，屬于中藥領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
以金銀花、連翹、板藍(lán)根、黃芩等制成的復(fù)方中藥制劑金嗓開音丸方中金銀花、連翹疏散風(fēng)熱，清熱解毒，消腫利咽，為君藥。板藍(lán)根、黃芩清熱瀉火，涼血解毒，消腫利咽；桑葉、菊花、胖大海、牛蒡子、蟬蛻疏風(fēng)清熱，化痰解毒，消腫利咽；前胡、僵蠶、苦杏仁清熱化痰，散結(jié)利咽，此十味共為臣藥。澤瀉利濕祛邪，可使邪毒從小便而出；玄參、赤芍去血分之熱，涼血解毒，散結(jié)消腫；木蝴蝶潤肺利咽，開音療啞，為治療咽喉疾病要藥，四藥合用為佐藥。諸藥合用，共奏清熱解毒，疏風(fēng)利咽之效。用于風(fēng)熱邪毒所致的咽喉腫痛，聲音嘶啞；急性咽炎、喉炎見上述證候者，效果明顯。然而中藥成份比較復(fù)雜，含有許多未知成份。目前既能有效控制治療眼疾近視及視疲勞的中藥制劑的產(chǎn)品質(zhì)量，又能操作方便的檢測方法，還沒有報道。為促進(jìn)中藥制劑現(xiàn)代化，中藥制劑研究質(zhì)量檢測方法是必要的。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種能有效控制中藥制劑金嗓開音丸質(zhì)量，準(zhǔn)確度高的質(zhì)量檢測方法。
本發(fā)明的一種復(fù)方中藥制劑金嗓開音丸的質(zhì)量檢測方法，將金銀花、連翹、玄參、板藍(lán)根、赤芍、黃芩、桑葉、菊花、前胡、苦杏仁(燀)、牛蒡子、澤瀉、胖大海、僵蠶(麩炒)、蟬蛻、木蝴蝶十六味藥，粉碎成細(xì)粉，過篩，混勻；每100g粉末加煉蜜35～50g與適量的水，制丸，干燥，用活性炭包衣，制成水蜜丸；或加煉蜜110g～130g制成大蜜丸，其檢測方法包括以下步驟
(1)取本品水蜜丸5g，研碎；或取大蜜丸8g，剪碎，加硅藻土4g，研勻；加甲醇40ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水20ml使溶解，用稀鹽酸調(diào)PH值至約為2，用乙酸乙酯振搖提取2次，每次20ml，合并提取液，蒸干；殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取黃芩苷對照品，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述二種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以5∶3∶1∶1的乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2％三氯化鐵乙醇溶液；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；(2)取本品水蜜丸5g，研碎；或取大蜜丸8g，剪碎，加硅藻土4g，研勻；加2∶1的乙酸乙酯-甲醇的混合溶液40ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取牛蒡苷對照品，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述二種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以40∶10∶1的三氯甲烷-甲醇-水為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；(3)芍藥苷的含量測定對照品溶液的制備取芍藥苷對照品適量，精密稱定，置容量瓶中，加稀乙醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得；供試品溶液的制備取本品水蜜丸適量，研細(xì)，取約2g，精密稱定；或取重量差異項下的大蜜丸，剪碎，混勻，取約3g，精密稱定。置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇15ml，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用稀乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；用高效液相色譜法測定以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以15∶85的乙腈-0.1％磷酸溶液為流動相；檢測波長為232nm；理論板數(shù)按芍藥苷峰計算應(yīng)不低于3000。分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定；計算樣品中芍藥苷的含量。
本發(fā)明通過試驗得出，本品含赤芍以芍藥苷(C23H28O11)計，水蜜丸每1g不得少于0.2mg；大蜜丸每丸不得少于1.0mg。
本發(fā)明質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提高的意義在于本發(fā)明提供了對黃芩苷、牛蒡苷的定性鑒別，制定出了最佳的供試品制備方法，找到了合適的展開劑，能對該制劑進(jìn)行有效的定性鑒別。此外本發(fā)明提供了芍藥苷的含量測定方法，采用高效液相色譜法對芍藥苷進(jìn)行含量測定，制定出了最佳的供試品制備方法和流動相配制方法，大大提高了芍藥苷的含量檢測準(zhǔn)確度。本方法的建立，有利于市場上對該復(fù)方中藥制劑的真?zhèn)蝺?yōu)劣進(jìn)行鑒別。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1將金銀花、連翹、玄參、板藍(lán)根、赤芍、黃芩、桑葉、菊花、前胡、苦杏仁(燀)、牛蒡子、澤瀉、胖大海、僵蠶(麩炒)、蟬蛻、木蝴蝶十六味藥，粉碎成細(xì)粉，過篩，混勻；每100g粉末加煉蜜35～50g與適量的水，制丸，干燥，用活性炭包衣，制成水蜜丸，其檢測方法包括以下步驟(1)取本品水蜜丸5g，研碎；加硅藻土4g，研勻；加甲醇40ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水20ml使溶解，用稀鹽酸調(diào)PH值至約為2，用乙酸乙酯振搖提取2次，每次20ml，合并提取液，蒸干；殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取黃芩苷對照品，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述二種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以5∶3∶1∶1的乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2％三氯化鐵乙醇溶液；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；
(2)取本品水蜜丸5g，研碎；加硅藻土4g，研勻；加2∶1的乙酸乙酯-甲醇的混合溶液40ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取牛蒡苷對照品，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述二種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以40∶10∶1的三氯甲烷-甲醇-水為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；(3)芍藥苷的含量測定對照品溶液的制備取芍藥苷對照品適量，精密稱定，置容量瓶中，加稀乙醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得；供試品溶液的制備取本品水蜜丸適量，研細(xì)，取約2g，精密稱定；置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇15ml，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱重量，用稀乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；用高效液相色譜法測定以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以15∶85的乙腈-0.1％磷酸溶液為流動相；檢測波長為232nm；理論板數(shù)按芍藥苷峰計算應(yīng)不低于3000。分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定；計算樣品中芍藥苷的含量。
重復(fù)上述步驟一次，計算樣品中芍藥苷含量的平均值為0.35mg/g。
實(shí)施例2將金銀花、連翹、玄參、板藍(lán)根、赤芍、黃芩、桑葉、菊花、前胡、苦杏仁(燀)、牛蒡子、澤瀉、胖大海、僵蠶(麩炒)、蟬蛻、木蝴蝶十六味藥，粉碎成細(xì)粉，過篩，混勻；每100g粉末或加煉蜜110g～130g制成大蜜丸，其檢測方法包括以下步驟(1)取大蜜丸8g，剪碎，加硅藻土4g，研勻；加甲醇40ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水20ml使溶解，用稀鹽酸調(diào)PH值至約為2，用乙酸乙酯振搖提取2次，每次20ml，合并提取液，蒸干；殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取黃芩苷對照品，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述二種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以5∶3∶1∶1的乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2％三氯化鐵乙醇溶液；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；(2)取大蜜丸8g，剪碎，加硅藻土4g，研勻；加2∶1的乙酸乙酯-甲醇的混合溶液40ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取牛蒡苷對照品，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述二種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以40∶10∶1的三氯甲烷-甲醇-水為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；(3)芍藥苷的含量測定對照品溶液的制備取芍藥苷對照品適量，精密稱定，置容量瓶中，加稀乙醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得；供試品溶液的制備取重量差異項下的大蜜丸，剪碎，混勻，取約3g，精密稱定。置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇15ml，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用稀乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；用高效液相色譜法測定以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以15∶85的乙腈-0.1％磷酸溶液為流動相；檢測波長為232nm；理論板數(shù)按芍藥苷峰計算應(yīng)不低于3000。分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定；計算樣品中芍藥苷的含量。
重復(fù)上述步驟一次，計算樣品中芍藥苷含量的平均值為1.54mg/丸。
用實(shí)施例1和實(shí)施例2所述的質(zhì)量檢測方法反復(fù)試驗8次，得出水蜜丸中芍藥苷含量(mg/g)的平均值和大蜜丸中芍藥苷含量(mg/丸)的平均值，結(jié)果見下表

實(shí)驗報告1、儀器與試藥儀器TSP2000高效液相色譜儀，P2000二元梯度泵，UV1000紫外檢測器，N2000色譜工作站。
試劑乙睛為色譜試劑，水為重蒸水，其它試劑均為分析純。
對照品芍藥苷，批號為0736-200117，供含量測定用，由中國藥品生物制品檢定所提供。
供試品金嗓開音丸，批號030539；規(guī)格每10粒重1g；包裝塑料瓶，每瓶裝36g，由本公司生產(chǎn)。
2、色譜條件色譜柱5μm，250mm×4.6mm Poaris-ODS柱流動相15∶85的乙睛-0.1％磷酸溶液流速1.0ml/min；柱溫25℃；
檢測波長232nm；3、前處理條件的選擇提取方法的考察精密稱取本品水蜜丸約2g，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇15ml，稱定重量，分別用不同的提取方法提取30分鐘，提取液放冷后，用稀乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，進(jìn)樣，測得其含量。結(jié)果見表1表1不同提取方法的比較

以上結(jié)果表明超聲處理比回流提取的含量稍高，且回流提取雜質(zhì)較多，故確定以超聲提取為提取方法。
提取時間的考察精密稱取本品水蜜丸約2g，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇15ml，稱定重量，分別超聲處理不同時間，放冷，用稀乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，進(jìn)樣，測得其含量。結(jié)果見表2表2不同提取時間的考察

以上結(jié)果表明超聲20分鐘，含量基本不變，但考慮到提取完全，故確定30分鐘為超聲提取時間。
4、方法學(xué)考察線性范圍的考察精密量取芍藥苷對照品溶液(0.2048mg/ml)1、2、4、6、8、10μl進(jìn)樣，記錄色譜圖，測定其峰面積(結(jié)果見表3)；并以峰面積值(A)對進(jìn)樣量(B)進(jìn)行回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程方法。
表3芍藥苷對照品測定結(jié)果

A＝49161.62466 B＝1415901.942r＝0.9993并以峰面積值(A)對進(jìn)樣量(B)作圖，得一直線。
以上結(jié)果表明在0.2048-2.048μg范圍內(nèi)，芍藥苷峰面積值與進(jìn)樣量有良好的線性關(guān)系。
精密度試驗精密吸取芍藥苷對照品溶液10μl，重復(fù)進(jìn)樣5次，測定。結(jié)果見表4表4芍藥苷精密度試驗

結(jié)果表明精密度良好。
空白對照溶液的制備與測定按處方比例及工藝，制備不含赤芍的空白樣品，按供試品溶液的制備方法制備陰性對照溶液，測定?？瞻讓φ丈V中，在與對照品峰保留時間相近處無峰出現(xiàn)。
穩(wěn)定性試驗取樣品(批號030539)及對照品溶液分別于0，0.5，1，2，4小時進(jìn)樣10μl，測定。結(jié)果見表5表5穩(wěn)定性試驗結(jié)果

試驗結(jié)果表明，對照品與樣品溶液均在4小時內(nèi)穩(wěn)定性良好。
重復(fù)性試驗按擬定的含量測定方法，對同批樣品(批號030539)分別制備樣品供試液，測得峰面積并計算含量。結(jié)果見表6表6樣品重現(xiàn)性試驗

結(jié)果表明按擬定的含量測定方法，重現(xiàn)性良好。
加樣回收率試驗精密稱取已知含量的樣品(批號030539)適量，分別加入對照品溶液適量，按上述樣品制備方法和色譜條件制備樣品，進(jìn)樣。以下列公式計算回收率。結(jié)果見表7

表7樣品回收率試驗結(jié)果

試驗結(jié)果表明回收率均在95～105％之間，加樣回收良好。
5、樣品含量測定分別精密吸取對照品溶液與樣品溶液，按正文含量測定項下方法，測定。(結(jié)果見表8)表8樣品中芍藥苷含量測定結(jié)果(n＝2)

根據(jù)上述試驗結(jié)果，考慮到藥材來源，以及制劑生產(chǎn)，貯藏等因素，故暫定本品每克含赤芍以芍藥苷量計，不得少于0.20mg。
6、赤芍藥材的含量測定取本品粉末約0.1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加稀乙醇15ml，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，用稀乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液即得。結(jié)果見表9。
表9不同產(chǎn)地赤芍藥材中芍藥苷含量測定結(jié)果(n＝2)

根據(jù)測定結(jié)果，考慮到藥材產(chǎn)地、加工炮制、貯藏等因素和《中國藥典》中含量限度規(guī)定，暫定含量總量不低于1.8％。
權(quán)利要求
1.一種中藥制劑金嗓開音丸的質(zhì)量檢測方法，將金銀花、連翹、玄參、板藍(lán)根、赤芍、黃芩、桑葉、菊花、前胡、苦杏仁 牛蒡子、澤瀉、胖大海、僵蠶(麩炒)、蟬蛻、木蝴蝶十六味藥，粉碎成細(xì)粉，過篩，混勻；每100g粉末加煉蜜35～50g與適量的水，制丸，干燥，用活性炭包衣，制成水蜜丸；或加煉蜜110g～130g制成大蜜丸，即得，其特征在于包括以下步驟(1)取本品水蜜丸5g，研碎；或取大蜜丸8g，剪碎，加硅藻土4g，研勻；加甲醇40ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水20ml使溶解，用稀鹽酸調(diào)PH值至約為2，用乙酸乙酯振搖提取2次，每次20ml，合并提取液，蒸干；殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取黃芩苷對照品，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述二種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以5∶3∶1∶1的乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2％三氯化鐵乙醇溶液；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；(2)取本品水蜜丸5g，研碎；或取大蜜丸8g，剪碎，加硅藻土4g，研勻；加2∶1的乙酸乙酯-甲醇的混合溶液40ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取牛蒡苷對照品，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述二種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以40∶10∶1的三氯甲烷-甲醇-水為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；(3)芍藥苷的含量測定對照品溶液的制備取芍藥苷對照品適量，精密稱定，置容量瓶中，加稀乙醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得；供試品溶液的制備取本品水蜜丸適量，研細(xì)，取約2g，精密稱定；或取重量差異項下的大蜜丸，剪碎，混勻，取約3g，精密稱定；置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇15ml，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用稀乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；用高效液相色譜法測定以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以15∶85的乙腈-0.1％磷酸溶液為流動相；檢測波長為232nm；理論板數(shù)按芍藥苷峰計算應(yīng)不低于3000；分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定；計算樣品中芍藥苷的含量。
2.如權(quán)利要求1所述的一種中藥制劑金嗓開音丸的質(zhì)量檢測方法，其特征在于所述中藥制劑含赤芍以芍藥苷計，水蜜丸每1g不得少于0.2mg；大蜜丸每丸不得少于1.0mg。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種質(zhì)量檢測方法，特別是涉及一種中藥制劑金嗓開音丸的質(zhì)量檢測方法，屬于中藥領(lǐng)域。本發(fā)明提供了對黃芩苷、牛蒡苷的定性鑒別，制定出了最佳的供試品制備方法，找到了合適的展開劑，能對該制劑進(jìn)行有效的定性鑒別。此外本發(fā)明提供了芍藥苷的含量測定方法，采用高效液相色譜法對芍藥苷進(jìn)行含量測定，制定出了最佳的供試品制備方法和流動相配制方法，大大提高了芍藥苷的含量檢測準(zhǔn)確度。本方法的建立，有利于市場上對該復(fù)方中藥制劑的真?zhèn)蝺?yōu)劣進(jìn)行鑒別。
文檔編號G01N1/28GK101029890SQ20071001762
公開日2007年9月5日 申請日期2007年4月4日 優(yōu)先權(quán)日2007年4月4日
發(fā)明者黃小華, 付彬, 張 浩, 雒西萍 申請人:西安碑林藥業(yè)股份有限公司