專利名稱：：EphA4作為PRC和PDACa的治療靶的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及抗體的用途，具體是抗EphA4基因所編碼蛋白的抗體，或該抗體的片段。這里使用的術(shù)語“抗體”涉及具有特異性結(jié)構(gòu)的免疫球蛋白分子，它僅與用于合成該抗體的抗原(即上調(diào)的基因產(chǎn)物)或與其密切相關(guān)的抗原相互作用(即結(jié)合)。此外，抗體可以是抗體片段或修飾的抗體，只要它結(jié)合標(biāo)志基因所編碼的一個或多個蛋白。例如，抗體片段可以是Fab、F(ab)2、Fv或單鏈Fv(ScFv)，其中來自H和L鏈的Fv片段通過合適的接頭連接(HustonJ.S.etal.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.855879-5883(1988))。更具體地說，通過用酶處理抗體，如木瓜蛋白酶或胃蛋白酶，可以產(chǎn)生抗體片段?？晒┻x擇地，可以構(gòu)建編碼抗體片段的基因，插入表達(dá)載體并在合適的宿主細(xì)胞中表達(dá)(見例如CoM.S.etal.J.Immunol.1522968-2976(1994)；BetterM.andHorwitzA.H.MethodsEnzymol.178476-496(1989)；PluckthunA.andSkerraA.MethodsEnzymol.178497-515(1989)；LamoyiE.MethodsEnzymol.121652-663(1986)；RousseauxJ.etal.MethodsEnzymol.121663-669(1986)；BirdR.E.andWalkerB.W.TrendsBiotechnol.9132-137(1991))?？贵w可以通過與各種分子結(jié)合而被修飾，如聚乙二醇(PEG)。本發(fā)明提供了這種修飾抗體。修飾抗體可以通過化學(xué)修飾抗體獲得。這些修飾方法在本領(lǐng)域是常規(guī)的?？晒┻x擇地，可以獲得作為嵌合抗體的抗體，在來源于非人抗體的可變區(qū)和來源于人抗體恒定區(qū)之間，或作為人源化抗體，包含來源于非人抗體的互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)、來源于人抗體的框架區(qū)(FR)，和恒定區(qū)?？梢允褂靡阎夹g(shù)制備這種抗體。人源化可通過用人抗體的相應(yīng)序列取代嚙齒類CDR或CDR序列進(jìn)行(見例如，Verhoeyenetal.，Science2391534-1536(1988))。因此，所述人源化抗體是嵌合抗體，其中基本上少于完整人抗體可變結(jié)構(gòu)域被來自非人種類的相應(yīng)序列取代。包含人可變區(qū)以及人框架和恒定區(qū)的完整人抗體也可使用。所述抗體可利用本領(lǐng)域已知的各種技術(shù)產(chǎn)生。例如，體外方法涉及使用噬菌體上展示的人抗體片段的重組文庫(例如，Hoogenboom&Winter，J.Mol.Biol.227381(1991)。類似地，人抗體可通過將人免疫球蛋白位點引入轉(zhuǎn)基因動物來制備，所述轉(zhuǎn)基因動物例如其中內(nèi)源免疫球蛋白基因被部分或完全失活的小鼠。所述方法的描述見例如，美國專利6,150,584，5,545,807；5,545,806；5,569,825；5,625,126；5,633,425；5,661,016。針對癌細(xì)胞中所發(fā)生的具體分子改變的癌癥治療已經(jīng)過臨床研究和抗癌藥的調(diào)控性批準(zhǔn)而被證實是有效的，所述抗癌藥諸如用于治療晚期乳癌的曲妥單抗(Herceptin)，用于治療慢性髓細(xì)胞性白血病(chronicmyeloidleukemia)的伊馬替尼甲酯(imatinibmethylate)(Gleevec)，用于治療非小細(xì)胞性肺癌(NSCLC)的吉非替尼(gefitinib)(Iressa)，和用于治療B細(xì)胞淋巴瘤和外套細(xì)胞淋巴瘤(mantlecelllymphoma)的利妥昔單抗(rabimax)(抗CD20mAb)(CiardielloF，TortoraG.Anovelapproachinthetreatmentofcancertargetingtheepidermalgrowthfactorreceptor.ClinCancerRes.2001Oct；7(10)2958-70.Review.；SlamonDJ，Leyland-JonesB，ShakS，F(xiàn)uchsH，PatonV，BajamondeA，F(xiàn)lemingT，EiermannW，WolterJ，PegramM，BaselgaJ，NortonL.UseofchemotherapyplusamonoclonalantibodyagainstHER2formetastaticbreastcancerthatoverexpressesHER2.NEnglJMed.2001Mar15；344(11)783-92.；RehwaldU，SchulzH，ReiserM，SieberM，StEphA4kJO，MorschhauserF，DriessenC，RudigerT，Muller-HermelinkK，DiehlV，EngertA.TreatmentofrelapsedCD20+Hodgkinlymphomawiththemonoclonalantibodyrituximabiseffectiveandwelltoleratedresultsofaphase2trialoftheGermanHodgkinLymphomaStudyGroup.Blood.2003Jan15；101(2)420-424.；FangG，KimCN，PerkinsCL，RamadeviN，WintonE，WittmannS和BhallaKN.(2000).Blood，96，2246-2253.)。這些藥物在臨床上是有效的，由于其僅靶向轉(zhuǎn)化的細(xì)胞，故其耐受性比傳統(tǒng)抗癌劑好。因此，所述藥物不僅改善了癌癥患者的存活率和生活質(zhì)量，還驗證了分子靶向癌癥治療這一概念。此外，在與標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)療法聯(lián)合使用時，經(jīng)靶向的藥物可增強(qiáng)標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)療法的功效(GianniL.(2002).Oncology，63Suppl1，47-56.；KlejmanA，RushenL，MorrioneA，SlupianekA和SkorskiT.(2002).Oncogene，21，5868-5876.)。因此，未來的癌癥治療可涉及傳統(tǒng)藥物與靶特異性藥劑的聯(lián)用，后者針對腫瘤細(xì)胞不同特性諸如血管發(fā)生及侵襲力。這些調(diào)節(jié)方法可離體或在體外實施(例如，通過在存在所述藥劑的條件下培養(yǎng)細(xì)胞)或(可選地)在體內(nèi)實施(例如，通過將藥劑施用于個體)。該方法包括施用蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)的組合或核酸分子或核酸的組合進(jìn)行治療以代償差異性表達(dá)的基因的異常表達(dá)或它們的基因產(chǎn)物的異?；钚?。特征在于基因的表達(dá)水平或基因以及基因產(chǎn)物的生物活性增加(相對于未患有疾病或病癥的個體而言)的疾病或病癥可用拮抗(即，降低或抑制)一或多種過表達(dá)基因的活性的治療劑來進(jìn)行治療。有拮抗活性的治療劑可在治療上或預(yù)防上進(jìn)行施用。因此，可用于本發(fā)明的治療劑包括，例如，(i)過表達(dá)或表達(dá)低下的基因的多肽，或其類似物、衍生物、片段或同源物；(ii)針對所述過表達(dá)的一或多種序列的抗體；(iii)編碼表達(dá)低下的一或多種基因的核酸；(iv)“功能障礙性(dysfunctional)”反義核酸或核酸(即由于一或多種過表達(dá)的序列的編碼序列中的異源插入物)；(v)小干擾RNA(siRNA)；或(vi)調(diào)節(jié)劑(即，改變過表達(dá)/表達(dá)低下的多肽與其結(jié)合配偶體之間相互作用的抑制劑、激動劑和拮抗劑)。該功能障礙性反義分子可用于通過同源重組而“敲除”多肽的內(nèi)源功能(參見，例如，Capecchi，Science2441288-12921989)。通過定量肽和/或RNA可很容易地檢測增加的水平，所述定量可通過獲取患者組織樣品(例如，從活組織檢查組織中)，在體外檢測其RNA或肽水平、表達(dá)的肽的結(jié)構(gòu)和/或活性(或其表達(dá)改變的基因的mRNA)來進(jìn)行。本領(lǐng)域眾所周知的方法包括(但不限于)免疫測定法(例如，通過Western印跡分析，免疫沉淀然后進(jìn)行十二烷基硫酸鈉(SDS)聚丙烯酰胺凝膠電泳，免疫細(xì)胞化學(xué)等)和/或雜交測定法來檢測mRNA的表達(dá)(例如，Northern測定法，斑點印跡，原位雜交等)。預(yù)防藥劑的施用可在異常基因表達(dá)的特征癥狀出現(xiàn)之前進(jìn)行，由此可防止或(可選地)延遲疾病或病癥的進(jìn)程。本發(fā)明的治療方法包括將細(xì)胞與藥劑接觸的步驟，所述藥劑調(diào)節(jié)差異性表達(dá)的基因的基因產(chǎn)物的一種或多種活性。調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)活性的藥劑的實例包括，但不限于核酸，蛋白質(zhì)，這些蛋白質(zhì)、肽、肽模擬物的天然存在的同源配體，或其它小分子。例如，適宜的藥劑刺激一種或多種差異性表達(dá)低下的基因的一種或多種蛋白質(zhì)活性。針對前列腺癌進(jìn)行免疫本發(fā)明還涉及治療或預(yù)防受試者中的PRC的方法，包括給予所述受試者核酸EphA4編碼的多肽或所述多肽的免疫活性片段，或編碼所述多肽或其片段的多核苷酸的步驟。疫苗也可作為核酸組合物給藥，其中編碼EphA4多肽或其片段的DNA或RNA被給藥患者。見，例如，Wolffet.al.(1990)Science2471465-1468；美國專利5,580,859；5,589,466；5,804,566；5,739,118；5,736,524；5,679,647；和WO98/04720?；贒NA的遞送技術(shù)的實例包括“裸露的DNA”，協(xié)助性(bupivicaine，聚合物，肽介導(dǎo)的)遞送，陽離子脂質(zhì)復(fù)合體以及粒子介導(dǎo)的(“基因槍”)或壓力介導(dǎo)的遞送(見，例如，美國專利5,922,687)。本發(fā)明的多肽也可通過病毒或細(xì)菌載體表達(dá)。表達(dá)載體的實例包括減毒病毒宿主，諸如痘病毒或禽痘病毒。該方法涉及使用痘苗病毒，例如作為載體表達(dá)編碼EphA4多肽或多肽片段的核苷酸序列。一旦引入宿主，重組痘苗病毒表達(dá)免疫原性肽，由此激發(fā)免疫反應(yīng)。痘苗病毒以及用于免疫方案中的方法描述于例如，美國專利4,722,848。另一載體為BCG(BacilleCalmetteGuerin)。BCG載體描述于Stover，etal.(1991)Nature351456-460。多種用于治療性給藥或免疫的其它載體例如腺病毒載體和腺伴隨病毒載體，逆轉(zhuǎn)錄病毒載體，傷寒沙門菌(Salmonellatyphi)載體，解毒的炭疽熱毒素載體等是顯而易見的。參見例如，Shata，etal.(2000)Mol.Med.Today666-71；Shedlock，etal.(2000)J.Leukoc.Biol.68793-806；andHipp，etal.(2000)InVivo14571-85。給予該多肽和核酸誘導(dǎo)受試者的抗腫瘤免疫。為了誘導(dǎo)抗腫瘤免疫，給予需要的患者EphA4核酸所編碼多肽或所述多肽的免疫活性片段，或該多核苷酸編碼的多肽或其片段。該多肽或其免疫活性片段可用作抗PRC的疫苗。有些情況下，蛋白或其片段可以以與T細(xì)胞受體(TCR)結(jié)合的形式給予或由抗原呈遞細(xì)胞(APC)呈遞，如巨噬細(xì)胞、樹狀細(xì)胞(DC)或B細(xì)胞。由于DC強(qiáng)烈的抗原呈遞能力，利用DC是APC中最優(yōu)選的。在本發(fā)明中，抗PRC和PIN之一或二者的疫苗涉及接種給動物時具有誘導(dǎo)抗腫瘤免疫的功能的物質(zhì)。根據(jù)本發(fā)明，EphA4核酸或其片段所編碼的多肽或其片段提示是可以誘導(dǎo)抗表達(dá)EphA4的PRC細(xì)胞的有效和特異性免疫應(yīng)答的HLA-A24或HLA-A*0201限制性的表位肽。因此，本發(fā)明也包括使用該多肽誘導(dǎo)抗腫瘤免疫的方法。通常，抗腫瘤免疫包括免疫反應(yīng)如下-誘導(dǎo)抗腫瘤的細(xì)胞毒性淋巴細(xì)胞，-誘導(dǎo)識別腫瘤的抗體，和-誘導(dǎo)抗腫瘤細(xì)胞因子產(chǎn)生。因此，當(dāng)將某一蛋白接種給動物可誘導(dǎo)出這些免疫反應(yīng)中任何一種時，可確定該蛋白具有抗腫瘤免疫誘導(dǎo)作用。蛋白誘導(dǎo)的抗腫瘤免疫可以通過觀察在抗該蛋白宿主中的體內(nèi)或體外免疫系統(tǒng)反應(yīng)來檢測。例如，本領(lǐng)域熟知檢測誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞的方法。進(jìn)入活體的外來物質(zhì)在抗原呈遞細(xì)胞(APCs)作用下被呈遞給T細(xì)胞和B細(xì)胞。對APC呈遞的抗原起反應(yīng)的T細(xì)胞由于受該抗原刺激，以抗原特異性方式分化成為細(xì)胞毒性T細(xì)胞(或細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞；CTLs)，然后增殖(這稱為T細(xì)胞激活)。因此，可以通過APC將肽呈遞給T細(xì)胞，并檢測CTL誘導(dǎo)來評價某些肽誘導(dǎo)的CTL。此外，APC具有激活CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞和自然殺傷淋巴細(xì)胞的作用。由于CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞在抗腫瘤免疫中也很重要，因此可以使用這些細(xì)胞的激活作用作為指示劑評價肽的抗腫瘤免疫的激活作用。本領(lǐng)域熟知使用樹狀細(xì)胞(DCs)作為APC評價CTL誘導(dǎo)活性的方法。DC是APCs中具有最強(qiáng)CTL誘導(dǎo)活動的代表性APC。在這個方法中，使測試多肽最初接觸DC，然后這個DC接觸T細(xì)胞。接觸DC后檢測具有抗該細(xì)胞的細(xì)胞毒性作用的T細(xì)胞證明測試多肽具有誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞的活性?？梢詸z測CTL抗腫瘤活性，例如，使用51Cr標(biāo)記的腫瘤細(xì)胞溶解作為指示?？晒┻x擇地，也熟知使用3H-胸腺嘧啶核苷攝取活性或LDH(乳糖脫氫酶)釋放作為指示評價腫瘤細(xì)胞損害程度的方法。除了DC，外周血單個核細(xì)胞(PBMCs)也可以用作APC。報道了通過在GM-CSF和IL-4存在下培養(yǎng)PBMC可以提高CTL的誘導(dǎo)。類似地，已經(jīng)證明通過在鑰孔血藍(lán)蛋白(KLH)和IL-7存在下培養(yǎng)PBMC可誘導(dǎo)CTL。用這些方法證實具有CTL誘導(dǎo)活性的測試多肽是具有DC激活作用和隨后的CTL誘導(dǎo)活性的多肽。因此，誘導(dǎo)抗腫瘤細(xì)胞的CTL的多肽可有效作為抗腫瘤疫苗。此外，通過接觸多肽獲得誘導(dǎo)抗腫瘤CTL能力的APC也可用作抗腫瘤的疫苗。此外，由于APC呈遞多肽抗原而獲得細(xì)胞毒性的CTL也可以用作抗腫瘤疫苗。這種使用由于APC和CTL的抗腫瘤免疫治療腫瘤的方法稱作細(xì)胞免疫療法。通常，當(dāng)使用多肽進(jìn)行細(xì)胞免疫療法時，通過具有不同結(jié)構(gòu)的多個多肽組合以及它們與DC接觸來增加CTL誘導(dǎo)的效率是已知的。因此，當(dāng)用蛋白片段刺激DC時，使用多種類型片段的混合物是有利的。可供選擇地，可以通過觀察誘導(dǎo)的抗腫瘤抗體產(chǎn)生來證實多肽誘導(dǎo)的抗腫瘤免疫。例如，當(dāng)用多肽免疫的實驗動物中誘導(dǎo)出抗多肽的抗體，以及當(dāng)那些抗體抑制腫瘤細(xì)胞生長時，可以確定該多肽具有誘導(dǎo)抗腫瘤免疫的能力。給予本發(fā)明的疫苗可誘導(dǎo)抗腫瘤免疫，抗腫瘤免疫的誘導(dǎo)能夠治療和預(yù)防PRC?？拱┋煼ɑ蝾A(yù)防癌癥發(fā)生包括任何步驟，如抑制癌細(xì)胞的生長，使癌退化和抑制癌癥的發(fā)生。癌癥的個體死亡率降低、血液中腫瘤標(biāo)志物降低、癌癥伴發(fā)的可檢測癥狀減輕等等也包括在癌癥的治療或預(yù)防中。優(yōu)選這種治療和預(yù)防效果具有統(tǒng)計學(xué)顯著性。例如，在觀察中，在5％或更低的顯著性水平，其中該水平是抗細(xì)胞增殖疾病的疫苗的治療或預(yù)防效果與沒有給予疫苗的對照相比的。例如，Student′st檢驗、Mann-Whitneyu檢驗或ANOVA可以用于統(tǒng)計分析。上面提及的具有免疫活性的蛋白或編碼該蛋白的載體可以與佐劑組合。佐劑是指當(dāng)與具有免疫活性的蛋白一起(或先后)給予時，提高抗該蛋白的免疫反應(yīng)的化合物。佐劑的實例包括霍亂毒素、沙門氏菌毒素、明礬等等，但不限于這些。此外，本發(fā)明的疫苗可以與藥學(xué)可接受載體適當(dāng)組合。這種載體的實例是無菌水、生理鹽水、磷酸鹽緩沖液、培養(yǎng)液等等。此外，根據(jù)需要，該疫苗可以含有穩(wěn)定劑、懸浮劑、防腐劑、表面活性劑等等。該疫苗全身或局部給予。疫苗給藥可以通過單次給予或多次給予加強(qiáng)進(jìn)行。當(dāng)使用APC或CTL作為本發(fā)明的疫苗，例如可以用回體方法治療或預(yù)防腫瘤。更具體地說，收集接受治療或預(yù)防的受試者的PBMCs，該細(xì)胞回體接觸多肽，隨后誘導(dǎo)APC或CTL，該細(xì)胞可以給予受試者。通過編碼該多肽的載體回體導(dǎo)入PBMCs也可以誘導(dǎo)APC。體外誘導(dǎo)的APC或CTL在給藥前可以體外克隆。通過克隆和培養(yǎng)具有高活性破壞靶細(xì)胞的細(xì)胞，可以更有效地進(jìn)行細(xì)胞免疫療法。此外，以這種方式分離的APC和CTL可以用于細(xì)胞免疫療法，不僅抗該細(xì)胞所來源的個體，而且抗來自其他個體的類似腫瘤類型。此外，提供了包含藥物有效量的本發(fā)明多肽的治療或預(yù)防細(xì)胞增生性疾病如癌癥的藥物組合物。該藥物組合物可以用于產(chǎn)生抗腫瘤免疫抑制PRC的藥物組合物本發(fā)明中，適宜的藥學(xué)配制劑包括適于經(jīng)口服，經(jīng)直腸，經(jīng)鼻，局部(包括經(jīng)頰和舌下)，經(jīng)陰道或胃腸外(包括經(jīng)肌內(nèi)，皮下和靜脈內(nèi))投藥，或適于經(jīng)吸入或吹入投藥的那些制劑。所述制劑可選包裝在分散的劑量單位中。適于經(jīng)口投藥的藥物制劑可被合宜地制成分散單位，諸如膠囊劑、扁囊劑或片劑，其各包含預(yù)定量的活性成分；散劑或顆粒劑；或溶液、混懸劑或乳劑?；钚猿煞诌€可制為大丸劑、藥糖劑或糊劑，并可以是純的形式，即無載體。用于經(jīng)口投藥的片劑和膠囊劑可包含常規(guī)賦形劑諸如粘合劑、填充劑、潤滑劑、崩解劑或濕潤劑。片劑可通過壓制(compression)或模制(modeling)，任選地用一種或多種配制性成分來制備。壓制片劑可通過在適宜的機(jī)器中將活性成分壓制成非流動形式諸如粉末或顆粒(任選與粘合劑、潤滑劑、惰性稀釋劑、潤滑的，表面活性或分散劑混合)來制備。模制片劑可通過在適宜的機(jī)器中，將用惰性液體稀釋劑濕潤的粉末化合物的混合物進(jìn)行模塑而制備。片劑可根據(jù)本領(lǐng)域眾所周知的方法進(jìn)行包衣?？诜后w制劑的形式可以是，例如，水性或油性混懸劑、溶液、乳劑、糖漿劑或酏劑，或可以是在使用前用水或其它適宜的載體溶解的干燥產(chǎn)品。所述液體制劑可包含常規(guī)添加劑諸如懸浮劑、乳化劑、非水性載體(可包括食用油)，或防腐劑。片劑可任選地進(jìn)行制備，只要其能緩慢或有控制地釋放其中的活性成分即可。藥片包可含有每月一次服用的一片藥物。用于胃腸外道投藥的制劑包括水性和非水性無菌注射液，其可包含抗氧化劑，緩沖液，抑菌劑和溶質(zhì)，所述成份可使該制劑與目的受體的血液等張；以及包括懸浮劑和增稠劑的水性和非水性無菌混懸劑。所述制劑可被置于單位劑量或多劑量容器，例如密封安瓿和玻璃瓶中，并可以冷凍干燥(凍干)狀態(tài)保存，在使用前僅需要加入無菌液體載體例如鹽水、注射用水?；蛘?，所述制劑可以是連續(xù)輸注劑。臨時注射劑溶液和混懸劑可用先前所述類型的無菌散劑，顆粒劑和片劑進(jìn)行制備。用于直腸投藥的制劑可以是采用常用載體諸如可可脂或聚乙二醇的栓劑。用于在口中局部投藥(例如經(jīng)頰或舌下)的制劑包括在調(diào)味基質(zhì)諸如蔗糖和阿拉伯膠或西黃蓍膠中的、包含活性成分的錠劑，以及在基質(zhì)諸如明膠和甘油或蔗糖和阿拉伯膠中的、包含活性成分的芳香重劑(pastill)。對于經(jīng)鼻內(nèi)施用，本發(fā)明的化合物可以作為液體噴霧劑或分散性粉劑或以滴劑的形式進(jìn)行使用。滴劑可用水性或非水性基質(zhì)制備，所述基質(zhì)中還包含一種或多種分散劑、增溶劑或懸浮劑。液體噴霧劑可適宜地從壓力包中遞送。對于通過吸入的投藥，化合物可適宜地通過噴霧器(insufflator)、霧化器(nebulizer)、壓力包或其它適宜遞送噴霧劑的方式進(jìn)行遞送。壓力包可包含適宜的推進(jìn)劑諸如二氯二氟甲烷，三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它適宜的氣體。在增壓氣霧劑的情況下，劑量單位可通過閥瓣來遞送經(jīng)計量的量來確定?；蛘?，對于通過吸入或吹入的投藥，所述化合物可采用干粉組合物的形式，例如所述化合物與適宜的粉末基質(zhì)諸如乳糖或淀粉的粉末混合物。粉末組合物可以是單位劑量形式，例如，膠囊，藥筒，明膠或發(fā)泡包，其中借助吸入器或吹入器來施用所述粉末。其它配制劑包括可植入的裝置和粘性貼片；其釋放治療劑。需要時，可使用適于持續(xù)釋放活性成分的上述制劑。該藥物組合物還可包含其它活性成分諸如抗微生物劑、免疫抑制劑或防腐劑。應(yīng)當(dāng)理解除上面具體描述的成分外，根據(jù)需要的制劑類型，本發(fā)明的制劑可包括本領(lǐng)域常規(guī)的其它藥劑，例如，適于經(jīng)口服投藥的藥劑可包括調(diào)味劑。優(yōu)選的單位劑量制劑是包含有效劑量的活性成分的那些制劑(如下述)，或其適宜部分。對于上述各種情況來說，組合物以約0.1-約250mg/kg/日的劑量經(jīng)口服或經(jīng)注射進(jìn)行施用。用于成年人的劑量范圍一般是約5mg-約17.5g/日，優(yōu)選約5mg-約10g/日，最優(yōu)選約100mg-約3g/日。分散單位劑量形式的片劑或其它單位劑型可合宜地包含有效劑量或其多劑量形式，例如，包含約5mg-約500mg，通常約100mg-約500mg的單位劑量。施用劑量要依賴多種因素，包括個體的年齡和性別，要進(jìn)行治療的具體疾病及其嚴(yán)重度。投藥途徑也可根據(jù)病癥及其嚴(yán)重度而改變。無論如何，本領(lǐng)域技術(shù)人員可根據(jù)上述因素常規(guī)計算適宜和最佳劑量。本發(fā)明的多個方面在以下實施例中描述，其并非一步限制本發(fā)明權(quán)利要求的范圍。除非另外定義，這里使用的所有專業(yè)和科學(xué)術(shù)語具有與本發(fā)明所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員通常理解的具有相同意思。盡管相似或等同于本文所描述的方法和材料可以用于實施或檢測本發(fā)明，但是合適的方法和材料在下面描述。實施本發(fā)明的最佳模式本發(fā)明將在以下實施例中進(jìn)一步描述，所述實施例不限制本發(fā)明權(quán)利要求的范圍。實施例11.一般方法患者和組織樣品在獲得知情許可的條件下，自26名正在接受根治性前列腺切除術(shù)的癌癥患者獲得組織樣品。所有手術(shù)樣品均處在具有或不具有N1的T2a-T3a臨床期，其Gleason得分為5-9。組織病理血診斷由一名病理學(xué)家利用LMM進(jìn)行。所有樣本自手術(shù)切出后立即埋于TissueTekOCT培養(yǎng)基(Sakura，Tokyo，Japan)中，保存在-80℃?zhèn)溆谩Ｔ?6個PRC組織中，20例癌癥和10例高級PIN具有足以用于微陣列研究的RNA量和質(zhì)。激光微光束顯微解剖和基于T7的RNA擴(kuò)增LMM和基于T7的RNA擴(kuò)增如前所述進(jìn)行。前列腺腫瘤細(xì)胞和正常前列腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞利用具有脈沖的紫外窄光焦激光(pulsedultravioletnarrowbeam-focuslaser)的EZ切割系統(tǒng)(SLMicrotestGmbH，Germany)根據(jù)生產(chǎn)商說明選擇性分離。DNase處理之后，對總RNA進(jìn)行兩輪基于T7的擴(kuò)增，從每種樣品產(chǎn)生50-100μgaRNA。然后如前所述，通過利用Cy5-dCTP(腫瘤細(xì)胞)和Cy3-dCTP(正常細(xì)胞)(AmershamBiosciences，Buckinghamshire，UK)進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，標(biāo)記來自PRC或PIN細(xì)胞以及正常前列腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞的2.5μg等分量的aRNA(Onoetal.2000)。cDNA微陣列分析和數(shù)據(jù)的獲取我們制作了具有選自國家生物技術(shù)信息中心(NationalCenterforBiotechnologyInformation)(NCBI)的UniGene數(shù)據(jù)庫(build#131)的23,040cDNA的全基因組cDNA微陣列。根據(jù)前述方法進(jìn)行構(gòu)建、雜交、洗滌和掃描(Onoetal.2000)。來自23,040個點的Cy3和Cy5的信號強(qiáng)度經(jīng)定量通過取代性背景，所述分析利用ArrayVision軟件(ImagingResearch，Inc.，St.Catharines，Ontario，Canada)進(jìn)行。隨后，調(diào)節(jié)每個靶點的Cy5(腫瘤)和Cy3(對照)的熒光強(qiáng)度使得52種看家基因的平均Cy3/Cy5比值等于1。由于源自最低信號強(qiáng)度的數(shù)據(jù)較不可靠，我們確定了每個載片上的截留值(Onoetal.2000)并從進(jìn)一步分析中排除Cy3和Cy5染色的信號強(qiáng)度低于截留值的基因。對于其它基因。我們利用每種樣品的原始數(shù)據(jù)計算Cy5/Cy3比值。鑒定從PIN到PRC的過程中發(fā)生上調(diào)或下調(diào)的基因根據(jù)以下標(biāo)準(zhǔn)，我們鑒定了20例PRC和10例PIN中表達(dá)改變的基因1)在超過所檢查病例的50％中可獲得其表達(dá)數(shù)據(jù)的基因；和2)在超過50％的可提供信息的病例中，在前列腺癌中的表達(dá)率超過3.0并且在PIN中在0,5-2.0之間(定義為上調(diào)的基因)和在癌癥中的表達(dá)率超過0.33且在PIN中為0.5-2.0之間(定義為下調(diào)的基因)。免疫組化利用兔抗-EphA4(EphA4)多克隆抗體對福爾馬林固定的和石蠟包埋的前列腺腫瘤切片中EphA4的表達(dá)進(jìn)行免疫染色(SantaCruzBiotechnologyInc.，SantaCruz，CA)。前列腺癌組織包括異源的PRC細(xì)胞，PIN細(xì)胞和正常前列腺上皮細(xì)胞。去石蠟的組織切片置于10mM檸檬酸鹽緩沖液，pH6.0中，高壓滅菌加熱到108℃15分鐘用于抗原復(fù)原(antigenretrieval)。切片分別利用稀釋度1∶10或1∶100的EphA4一級抗體在濕潤小室中于室溫保溫1小時，并利用過氧化物酶標(biāo)記的葡聚糖聚合物然后用二氨基聯(lián)苯顯色(DAKOEnvisionPlusSystem；DAKOCorporation，Carpinteria，CA)。利用伊紅對切片進(jìn)行復(fù)染。對于陰性對照，去除一級抗體。2.Northern印跡分析人多組織Northern印跡(Clontech，PaloAlto，CA)與EphA4的dCTP-標(biāo)記的PCR產(chǎn)物雜交。1013-bp的PCR產(chǎn)物利用以下引物通過RT-PCR制備5’-GAAGGCGTGGTCACTAAATGTAA-3’(SEQIDNO3)and5，-TTTAATTTCAGAGGGCGAAGAC-3’(SEQIDNO4).根據(jù)生產(chǎn)商的說明進(jìn)行預(yù)雜交，雜交和洗滌。利用增光屏對印跡進(jìn)行放射自顯影，在-80℃進(jìn)行7天。3.siRNA-構(gòu)建體和集落形成/MTT測定法我們使用siRNA表達(dá)載體(psiU6BX)用于檢測對靶基因的RNAi效應(yīng)。U6啟動子被克隆入基因特異性序列的上游(來自靶轉(zhuǎn)錄物的19nt序列，通過短間隔物TTCAAGAGA(SEQIDNO9)與相同序列的翻轉(zhuǎn)互補(bǔ)體分離)，以5個胸腺嘧啶作為終止信號，整合neo盒從而對遺傳霉素(Sigma)具有抗性。EphA4的靶序列為5’-GCAGCACCATCATCCATTG-3’(SEQIDNO10)(1313si)，和5’-GAAGCAGCACGACTTCTTC-3’(SEQIDNO11)(EGFPsi)作為陰性對照。針對EphA4完整序列長度設(shè)計靶序列。EphA4的核苷酸以及其編碼的氨基酸序列分別顯示為SEQIDNO1和SEQIDNO2(Genbank保藏號NM_004438)。PC3前列腺癌細(xì)胞系鋪于10cm皿(5×105細(xì)胞/皿)并利用含有EGFP靶序列(EGFPsi)的psiU6BX以及含有靶序列的psiU6BX利用Lipofectamine2000(Invitrogen)根據(jù)生產(chǎn)商說明進(jìn)行轉(zhuǎn)染。細(xì)胞利用500mg/ml遺傳霉素選擇一周，轉(zhuǎn)染后8小時收集預(yù)備(preliminary)細(xì)胞并通過RT-PCR分析證實對EphA4的擊倒效應(yīng)。RT-PCR引物與上文所示的一樣。這些細(xì)胞也用Giemsa溶液染色并進(jìn)行MTT測定分別評價集落形成和細(xì)胞數(shù)目。4.鑒定在從PIN到前列腺癌的惡性轉(zhuǎn)化過程中上調(diào)的EphA4基因我們的焦點在于PIN和PRC的差異表達(dá)以搜索可能參與非浸潤性前體PIN向惡性癌癥的轉(zhuǎn)化的基因。通過比較20個PRC的表達(dá)圖譜與10個PIN的表達(dá)圖譜，我們鑒定了1種上調(diào)的基因，EphA4；改變的基因可能與浸潤性PRC細(xì)胞中的細(xì)胞粘附和遷移力有關(guān)。EphA4是一種酪氨酸激酶受體，可能通過調(diào)節(jié)細(xì)胞形狀和遷移力在神經(jīng)回路發(fā)育以及血管生成中起作用并且起在PRC中的過表達(dá)可能與PRC細(xì)胞遷移力有關(guān)(Kullanderetal.2002)。后者中的一些與細(xì)胞粘附以及蛋白酶活性有關(guān)，提示它們的表達(dá)改變可能PIN向PRC的轉(zhuǎn)化過程中通過消除導(dǎo)管結(jié)構(gòu)而對浸潤性表型有貢獻(xiàn)。5.免疫組化為了證實PIN向PRC轉(zhuǎn)化中的基因表達(dá)模式，我們對在我們的數(shù)據(jù)中在PIN向PRC的轉(zhuǎn)化中差異表達(dá)的基因進(jìn)行免疫組化分析。通常，前列腺癌組織包括異源PRC細(xì)胞，PIN細(xì)胞以及正常前列腺上皮，并且我們比較了與同一患者的相同組織的前列腺癌發(fā)生有關(guān)的各種細(xì)胞的染色模式。如圖1所示，EphA4蛋白也在PRC細(xì)胞中強(qiáng)表達(dá)，而來自相同患者的PIN和正常前列腺上皮中EphA4蛋白的表達(dá)很弱或不表達(dá)。結(jié)果表明該表達(dá)圖譜分析高度可信。我們的焦點在于EphA4，因為EphA4是與酪氨酸激酶活性相關(guān)的受體之一，并且是藥物涉及以及抗癌抗體治療的理想分子靶?，F(xiàn)在多種酪氨酸激酶抑制物正在臨床抗癌治療試驗中，包括EGFR(表皮生長因子受體)抑制劑，PDGFR(血小板來源的生長因子受體)抑制劑，和VEGF(血管內(nèi)皮生長因子)抑制劑(DanceyandSausvilleetal.，2003，Morganetal.，2003)。此外，抗酪氨酸激酶受體ERBB2/Her2(表皮生長因子受體2)的人源化單克隆抗體trastuzumab(Herceptin)對轉(zhuǎn)移性乳腺癌的HER2過表達(dá)型亞組有效(DanceyandSausvilleetal.，2003)。這些酪氨酸激酶受體作為癌癥的藥物靶可通過小分子和抗體策略獲得。EphA4是具有酪氨酸激酶活性的受體家族之一。伴隨它們的ephrin配體的功能在神經(jīng)系統(tǒng)中得到很好的研究，其中Eph受體與ephrin分子參與后腦形成過程的規(guī)劃(patterning)、軸突路徑誘導(dǎo)以及指導(dǎo)神經(jīng)嵴細(xì)胞的遷移(Dodeletetal.，2000，KuraiandPasquale，2003)。這些分子也調(diào)節(jié)胚胎血管發(fā)育，并且存在一些有關(guān)Eph/ephrin與腫瘤發(fā)生的相關(guān)性的報道(GaleandYancopoulos，1999，Dodeletetal.，2000)。Eph受體家族由13個成員及其配體ephrins組成，其分成兩個亞種類，A-亞類(A1-A5)和B-亞類(B1-B3)。受體基于序列相似性以及配體親和力分成A亞類(EphA41-A8)，和B亞類(EphB1-B4，B6)。A型受體通常結(jié)合大多數(shù)或全部A型配體，B型受體結(jié)合A型以及大部分B型配體(Dodeletetal.，2000，KuraiandPasquale，2003)。在前列腺癌組織中，EphA4配體未知。Northern印跡分析顯示EphA4在睪丸中很豐富，但在神經(jīng)系統(tǒng)和其它主要器官中則不然(圖2)。最近報道針對其它Eph受體家族成員的抗體，即也在幾種癌癥中過表達(dá)EphA42，可在體外和體內(nèi)抑制乳腺癌細(xì)胞生長(Carles-Kinchetal.，2002，Coffmanetal.，2003)。但是，EphA42在成人組織中遍在表達(dá)，表明抗體治療中毒性的可能性大得多?？紤]到其酪氨酸激酶活性，膜定位及其限制表達(dá)圖譜，EphA4是前列腺癌最理想的分子靶之一。6.前列腺癌細(xì)胞系中siRNA介導(dǎo)的生長抑制為了研究EphA4對前列腺癌的生長或存活的影響，我們具體通過基于哺乳動物載體的RNA干擾(RNAi)技術(shù)敲除了它們的內(nèi)源型表達(dá)。siRNA制備型載體的轉(zhuǎn)染導(dǎo)致一些設(shè)計為針對EphA4的siRNA中的內(nèi)源型表達(dá)降低(圖3A)。siRNA對EphA4轉(zhuǎn)錄物的敲除效應(yīng)導(dǎo)致集落形成試驗以及MTT測定法中生長明顯受抑制(圖3B和3C)。這些發(fā)現(xiàn)證實了EphA4在前列腺癌中的過表達(dá)與癌細(xì)胞生長有關(guān)以及它們可用作前列腺癌治療的有用分子靶。結(jié)論是，我們鑒定了EphA4這種在前列腺癌中過表達(dá)而不在非浸潤性前體PIN中過表達(dá)的酪氨酸激酶受體，其與癌細(xì)胞生長相關(guān)，證實了這種酪氨酸激酶受體是用于前列腺癌治療的小細(xì)胞或抗體的理想分子靶。實施例21.一般方法細(xì)胞系和組織樣品人胰腺細(xì)胞系PK45P，KLM1andMIA-PaCa2(ATCC號CRL-1420)獲自CellResourceCenterforBiomedicalResearch，InstituteofDevelopment，AgingandCancer，TohokuUniversity。所述細(xì)胞是公眾可得的。利用cDNA微陣列分離在PDACa細(xì)胞中過表達(dá)的基因已經(jīng)描述了cDNA微陣列玻片的制作(OnoK，TanakaT，TsunodaT，KitaharaO，KiharaC，OkamotoA，OchiaiK，TakagiT，andNakamuraY.CancerRes.，605007-5011，2000)。對于表達(dá)圖譜的每次分析，制備一式兩份含有大約27000個DNA點的cDNA微陣列玻片。簡言之，自PDACa細(xì)胞純化總RNA，正常胰管上皮自18份胰腺癌組織通過顯微解剖獲得?；谶M(jìn)行T7的RNA擴(kuò)增獲得適合微陣列試驗的RNA。自PDACa細(xì)胞和正常細(xì)胞上皮擴(kuò)增的RNA的等分試樣通過反轉(zhuǎn)錄分別利用Cy5-dCTP和Cy3-dCTP(AmershamBiosciences)標(biāo)記。如前所述進(jìn)行雜交，洗滌和檢測(OnoK，TanakaT，TsunodaT，KitaharaO，KiharaC，OkamotoA，OchiaiK，TakagiT，andNakamuraY.CancerRes.，605007-5011，2000)。隨后，在上調(diào)的基因中，焦點集中在四種基因上，包括EphA4，這是由于根據(jù)我們以前獲自29個政查過那人組織中的基因表達(dá)數(shù)據(jù)，其表達(dá)率在超過50％的信息性癌癥中超過5.0并且其表達(dá)水平在正常主要生命器官中相對較低(Saito-HisaminatoA，KatagiriT，KakiuchiS，NakamuraT，TsunodaT，NakamuraY.Genome-wideprofilingofgeneexpressionin29normalhumantissueswithacDNAmicroarray.DNARes.，935-45，2002)。EphA4的半定量RT-PCR來自顯微解剖的PDACa細(xì)胞以及正常胰管上皮細(xì)胞經(jīng)過兩輪通過基于T7的體外轉(zhuǎn)錄進(jìn)行的擴(kuò)增(EpicentreTechnologies)并被合成為單鏈cDNA。制備稀釋度合適的每種單鏈cDNA用于通過監(jiān)測β-肌動蛋白(ACTB)和β2-MG作為定量對照進(jìn)行隨后的PCR擴(kuò)增。本發(fā)明人使用的引物序列為5’-GAAGGCGTGGTCACTAAATGTAA-3’(SEQIDNO3)和5’-TTTAATTTCAGAGGGCGAAGAC-3’(SEQIDNO4)用于EphA4，5’-CATCCACGAAACTACCTTCAACT-3’(SEQ.ID.NO.5)和5’-TCTCCTTAGAGAGAAGTGGGGTG-3’(SEQ.ID.NO.6)用于ACTB，5’-CACCCCCACTGAAAAAGAGA-3’(SEQIDNO7)和5’-TACCTGTGGAGCAAGGTGC-3’(SEQIDNO8)用于β2-MG。所有反應(yīng)包括在94℃初始變性2min，然后在GeneAmpPCR系統(tǒng)9700(PEAppliedBiosystems)上，于94℃、30s，58℃、30s，和72℃、1min循環(huán)21次(對于ACTB和β2-MG)或28-32次(對于EphA4)。免疫組化利用兔抗-EphA4(EphA4)多克隆抗體對用福爾馬林固定并用石蠟包埋的前列腺腫瘤切片中EphA4的表達(dá)進(jìn)行免疫染色(SantaCruzBiotechnologyInc.，SantaCruz，CA)。前列腺癌組織包括異源的PRC細(xì)胞，PIN細(xì)胞和正常前列腺上皮細(xì)胞。去石蠟的組織切片置于10mM檸檬酸鹽緩沖液，pH6.0中，加熱到108℃15分鐘用于抗原復(fù)原(antigenretrieval)。切片分別利用稀釋度1∶10或1∶100的EphA4一級抗體在濕潤小室中于室溫保溫1小時，并利用過氧化物酶標(biāo)記的葡聚糖聚合物然后用二氨基聯(lián)苯顯色(DAKOEnvisionPlusSystem；DAKOCorporation，Carpinteria，CA)。利用伊紅對切片進(jìn)行復(fù)染。對于陰性對照，去除一級抗體。2.Northern印跡分析人多組織Northern印跡(Clontech，PaloAlto，CA)與EphA4的dCTP-標(biāo)記的PCR產(chǎn)物雜交，所述產(chǎn)物利用前述引物擴(kuò)增。根據(jù)生產(chǎn)商的說明進(jìn)行預(yù)雜交，雜交和洗滌。利用增光屏對印跡進(jìn)行放射自顯影，在-80℃進(jìn)行7天。構(gòu)建psiU6BX質(zhì)粒編碼siRNA的DNA片段被插入GAP的核苷酸85-490，所述核苷酸如下面的質(zhì)粒序列(SEQIDNo15)中(-)所示snRNAU6基因用RNA聚合酶III轉(zhuǎn)錄，產(chǎn)生3’末端具有尿嘧啶的短轉(zhuǎn)錄物。snRNAU6基因含有啟動子區(qū)的基因組片段通過PCR利用以下引物組擴(kuò)增，5’-GGGGATCAGCGTTTGAGTAA-3’(SEQIDNo16)，和5’-TAGGCCCCACCTCCTTCTAT-3’(SEQIDNo17)，其中利用人胎盤DNA作為模板。產(chǎn)物經(jīng)純化利用TA克隆試劑盒根據(jù)生產(chǎn)商的方案(Invitrogen)克隆入pCR質(zhì)粒載體。含有snRNAU6基因的BamHI，XhoI片段經(jīng)純化克隆入pcDNA3.1(+)質(zhì)粒的核苷酸1257-56片段，其通過PCR利用以下引物組擴(kuò)增5’-TGCGGATCCAGAGCAGATTGTACTGAGAGT-3’(SEQIDNo18)和5’-CTCTATCTCGAGTGAGGCGGAAAGAACCA-3’(SEQIDNo19)。連接的DNA用作利用以下引物進(jìn)行PCR的模板，5’-TTTAAGCTTGAAGACTATTTTTACATCAGGTTGTTTTTCT-3’(SEQIDNo20)和5’-TTTAAGCTTGAAGACACGGTGTTTCGTCCTTTCCACA-3’(SEQIDNo21)。產(chǎn)物用HindIII消化，隨后自我連接產(chǎn)生psiU6BX載體質(zhì)粒。為了對照，通過將下示雙鏈核苷酸克隆入psiU6BX載體的BbsI位點來制備psiU6BX-EGFP5’-CACCGAAGCAGCACGACTTCTTCTTCAAGAGAGAAGAAGTCGTGCTGCTTC-3’(SEQIDNo22)和5’-AAAAGAAGCAGCACGACTTCTTCTCTCTTGAAGAAGAAGTCGTGCTGCTTC-3’(SEQIDNo23)。siRNA表達(dá)型構(gòu)建體siRNA的核苷酸序列利用siRNA設(shè)計計算機(jī)程序進(jìn)行設(shè)計，所述程序可得自Ambion網(wǎng)站(http://www.ambion.com/techlib/misc/siRNAfinder.html)。簡言之，用于siRNA合成的核苷酸序列利用以下方案選擇siRNA靶部位的選擇1.從目標(biāo)轉(zhuǎn)錄物的起始密碼子AUG開始，掃描下游的AA二核苷酸序列。記錄每個AA的存在和3′鄰近的19個核苷酸作為潛在的siRNA靶部位。Tuschl等推薦反對設(shè)計siRNA接近5′和3′非翻譯區(qū)(UTRs)和接近起始密碼子的區(qū)域(75個堿基內(nèi))，因為這些可能富含調(diào)節(jié)蛋白結(jié)合部位。UTR結(jié)合蛋白和/或翻譯起始復(fù)合物可能妨礙siINA核酸內(nèi)切酶復(fù)合體的結(jié)合。2.將潛在的靶部位和適宜的基因組數(shù)據(jù)庫(人，小鼠，大鼠等)進(jìn)行比較，并排除考慮與其它編碼序列具有顯著同源性的任何靶序列。3.選擇用于合成的合格靶序列。沿著基因長度可以選擇幾個靶序列用于評估。用于EphA4的siRNA的寡核苷酸顯示如下。每種寡核苷酸是靶序列的有義核苷酸序列和反義核苷酸序列的組合。發(fā)夾環(huán)結(jié)構(gòu)以及靶序列的核苷酸序列分別顯示為SEQIDNO14和SEQIDNO10(內(nèi)切酶識別位點從每個發(fā)夾環(huán)結(jié)構(gòu)序列刪除).EphA4的siRNA插入序列1313si5’-CACCGCAGCACCATCATCCATTGTTCAAGAGACAATGGATGATGGTGCTGC-3’(SEQIDNO12)和5’-AAAAGCAGCACCATCATCCATTGTCTCTTGAACAATGGATGATGGTGCTGC-3’(SEQIDNO13)用于對照的siRNA的插入序列EGFPsi(對照)5’-CACCGAAGCAGCACGACTTCTTCTTCAAGAGAGAAGAAGTCGTGCTGCTTC-3’(SEQIDNO22)和5’-AAAAGAAGCAGCACGACTTCTTCTCTCTTGAAGAAGAAGTCGTGCTGCTTC-3’(SEQIDNO23)每種序列的SEQIDNO列于表1集落形成/MTT測定法人PDACa細(xì)胞系諸如PK45P，KLM1andMIA-PaCa2鋪于10-cm皿(5×105細(xì)胞/皿)，并利用Lipofectamine2000(Invitrogen)或FuGENE6(Roche)，根據(jù)生產(chǎn)商的說明，用含有EGFP靶序列(EGFP)的psiU6BX和含有靶序列的psiU6BX進(jìn)行轉(zhuǎn)染。細(xì)胞利用500mg/ml遺傳霉素選擇一周細(xì)胞利用500mg/ml遺傳霉素選擇一周，轉(zhuǎn)染后8小時收集預(yù)備細(xì)胞并通過RT-PCR分析證實對EphA4的擊倒效應(yīng)。RT-PCR引物與上文所示的一樣。這些細(xì)胞也用Giemsa溶液染色并進(jìn)行MTT測定分別評價集落形成和細(xì)胞數(shù)目。2.siRNA對基因EphA4的表達(dá)的降低以及對癌細(xì)胞的生長抑制在以前的研究中，通過組合激光顯微解剖和具有點樣的27,000基因的全基因組cNDA微陣列產(chǎn)生了PDACa的精確表達(dá)圖譜。研究人鑒定了超過200種基因作為與被認(rèn)為是PDACa來源的正常胰管上皮中的表達(dá)圖譜相比在PDACa細(xì)胞中上調(diào)的基因(NakamuraT，F(xiàn)urukawaY，NakagawaH，TsunodaT，OhigashiH，MurataK，IshikawaO，Ohgaki，KashimuraN，MiyamotoM，HiranoS，KondoS，KatohH，NakamuraY，andKatagiriT.Genome-widecDNAmicroarrayanalysisofgene-expressionprofilesinpancreaticcancersusingpopulationsoftumorcellsandnormalductalepitheliumcellsselectedforpuritybylasermicrodissection.Oncogene，2004Feb9，Epubaheadofprint)?；赑DACa細(xì)胞的這些表達(dá)圖譜，本發(fā)明人選擇了一種過表達(dá)型基因EphA4并通過免疫組化證實了在PDACa中的過表達(dá)(圖1B)。它們的產(chǎn)物是細(xì)胞膜蛋白，是抗癌藥物涉及和抗體治療的理想分子靶。臨床試驗證實抗酪氨酸激酶受體ERBB2/Her2(表皮生長因子受體2)的人源化單克隆抗體trastuzumab(Herceptin)對于轉(zhuǎn)移性乳腺癌的HER2過表達(dá)型亞組有效，介導(dǎo)必要的細(xì)胞功能和保持惡性表型所需的信號途徑的細(xì)胞表面分子是目前最有希望的癌癥治療靶(PegramM，andSlamonDJ.BiologicalrationaleforHer2/neuasatargetformonoclonalantibodytherapy.Semin.Oncology，27(suppl9)13-19，2000)。靶向這些膜分子的藥物涉及可通過阻斷生長促進(jìn)型信號和/或利用Trastuzumab在相同的途徑中調(diào)節(jié)ADCC活性來實現(xiàn)。EphA4(Genbank保藏號NM_004438；SEQIDNo.1，2)本發(fā)明人通過RT-PCR和免疫組化證實了PDACa中EphA4的過表達(dá)(圖1B)，但在胰腺癌組織中，EphA4配體未知。Northern印跡分析(圖2)顯示EphA4在睪丸中富含，但在中樞神經(jīng)系統(tǒng)以及其它主要器官中不然。最近靶向另一Eph受體家族成員EphA42(其在幾種癌癥中過表達(dá))的抗體據(jù)報道在體外和體內(nèi)抑制乳腺癌細(xì)胞(Carles-KinchK，KilpatrickKE，StewartJC，KinchMS.AntibodytargetingoftheEphA42tyrosinekinaseinhibitsmalignantcellbehavior.CancerRes.，622840-2847，2002)。但是，EphA42在成人組織中遍在表達(dá)，表明抗體療法中毒性的可能性大得多。為了研究EphA4對PDACa細(xì)胞的生長或存活的影響，本發(fā)明人具體通過siRNA擊倒了EphA4在PDACa細(xì)胞系中的內(nèi)源性表達(dá)。siRNA誘導(dǎo)型載體的轉(zhuǎn)染明顯導(dǎo)致一種針對EphA4設(shè)計的siRNA即1313si的內(nèi)源表達(dá)的降低(圖3A)。siRNA對EphA4mRNA的擊倒效應(yīng)導(dǎo)致集落形成試驗(圖3B)和MTT測定法(圖3C)中明顯的生長抑制?？紤]到其酪氨酸激酶活性，膜定位以及其特異性表達(dá)模式，EphA4是胰腺癌的最為理想的分子靶之一。結(jié)論是，本發(fā)明人鑒定了在PDACa細(xì)胞中過表達(dá)的四種膜型分子，所有這些分子可能于癌細(xì)胞生長相關(guān)，提示這些膜型分子是致死性胰腺癌的治療的理想分子靶，并且這些膜分子的抗體可用于治療方法中。工業(yè)實用性本發(fā)明所述的方法可用于鑒定用于預(yù)防和治療PRC和PADCa的其它分子靶。本發(fā)明的數(shù)據(jù)有利于全面理解PRC，促進(jìn)新的診斷策略的開發(fā)，并提供治療藥物和預(yù)防藥劑的分子靶。所述信息有利于更加深入了解前列腺癌發(fā)生，并提供開發(fā)診斷、治療和最終預(yù)防PRC的新的策略。本發(fā)明還顯示細(xì)胞生長特異性靶向EphA4基因的小干擾RNA(siRNA)的抑制。因此，siRNA可用于開發(fā)抗癌藥物。例如，阻斷EphA4表達(dá)或預(yù)防其活性的藥劑可用作抗癌劑用于治療，具體是用于治療前列腺癌或胰腺癌諸如胰管腺癌(PDACa)的抗癌劑。本文所引用的全部專利，專利申請，和出版物均為全文引入作為參考。此外，雖然已對照本發(fā)明的具體實施方案對本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)描述，對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說，在不背離本發(fā)明的精神和范圍的情況下可對其進(jìn)行多種改變和修飾是顯而易見的。對比文件Abate-Shen，C.，andShen，M.M.Moleculargeneticsofprostatecancer.Genes&Dev.，142410-2434，2000.Bostwick，D.G.Prostaticintraepithelialneoplasia.Curr.Urol.Rep.，165-70，2000.DeMarzo，A.M.，Nelson，W.G.，Isaacs，W.B.，andEpstein，J.I.Pathologicalandmolecularaspectsofprostatecancer.Lancet，361955-964，2003.Gronberg，H.Prostatecancerepidemiology.Lancet，361859-64，2003.Kullander，K.，andKlein，R.MechanismsandfunctionsofEphandephrinsignalling.Nat.Rev.Mol.Cell.Biol.，375-486，2002.McNeal，J.E.，andBostwick，D.G.Intraductaldysplasiaapremalignantlesionoftheprostate.Hum.Pathol.，1764-71，1986.MontironiR，MazzucchelliR，ScarpelliM.Precancerouslesionsandconditionsoftheprostatefrommorphologicalandbiologicalcharacterizationtochemoprevention.Ann.N.Y.Acad.Sci.，963169-184，2002.Nelson，G.N.，andWilding，G.Prostatecancerpreventionagentcriteriaandpipelineforcandidatechemopreventionagents.Urology，57，56-63，2001.Ono，K.，Tanaka，T.，Tsunoda，T.，Kitahara，O.，Kihara，C.，Okamoto，A.，Ochiai，K.，Takagi，T.，andNakamura，Y.AlterationsofgeneexpressionduringcolorectalcarcinogenesisrevealedbycDNAmicroarraysafterlaser-capturemicrodissectionoftumortissuesandnormalepithelia.CancerRes.，605007-5011，2000.Steiner，M.S.Highgradeprostaticintraepithelialneoplasiaisadisease.Curr.Urol.Rep.，2195-198，2001.vanderKwast，T.H.，Lopes，C.，Santonja，C.，Pihl，C.G.，Neetens，I.，Martikainen，P.，DiLollo，S.，Bubendorf，L.，Hoedemaeker，R.F.；MembersofthepathologycommitteeoftheEuropeanRandomisedStudyofScreeningforProstateCancer.Guidelinesforprocessingandreportingofprostaticneedlebiopsies.JClin.Pathol.，56336-40，2003.Emmert-Buck，M.R.，Bonner，R.F.，Smith，P.D.，Chuaqui，R.F.，Zhuang，Z.，Goldstein，S.R.，Weiss，R.A.，andLiotta，L.A.Lasercapturemicrodissection.Science，274998-1001.，1996.Carles-KinchK，KilpatrickKE，StewartJC，KinchMS.AntibodytargetingoftheEphA42tyrosinekinaseinhibitsmalignantcellbehavior.CancerRes.，622840-2847，2002.CoffmanKT，HuM，Carles-KinchK，TiceD，DonackiN，MunyonK，KifleG，WoodsR，LangermannS，KienerPA，KinchMS.DifferentialEphA42epitopedisplayonnormalversusmalignantcells.CancerRes.637907-7912，2003.DanceyJandSausvilleEA.Issueandprogresswithproteinkinaseinhibitorsforcancertreatment.Nat.Rev.DrugDiscovery2296-313，2003.DodeletVC，PasqualeEB.Ephreceptorsandephrinlignadsembryogenesistotumorigenesis.Oncogene，195614-5619，2000.GaleNWandYancopoulosGD.Growthfactorsactingviaendothelialcell-specificreceptortyrosinekinasesVEGFs，angiopoietins，andephrinsinvasculardevelopment.GeneDev.，131055-1066，1999.HanM，PartinAW，PiantadosiS，EpsteinJI，WalshPC.JUrol，16616-419，2001.KuraiKK，PasqualeEB.‘Eph7ectivesignaling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c1380cgcccattctccgccccatggctgactaattttttttatttatgcagaggccgaggccgc1440ctctgcctctgagctattccagaagtagtgaggaggcttttttggaggcctaggcttttg1500caaaaagctcccgggagcttgtatatccattttcggatctgatcaagagacaggatgagg1560atcgtttcgcatgattgaacaagatggattgcacgcaggttctccggccgcttgggtgga1620gaggctattcggctatgactgggcacaacagacaatcggctgctctgatgccgccgtgtt1680ccggctgtcagcgcaggggcgcccggttctttttgtcaagaccgacctgtccggtgccct1740gaatgaactgcaggacgaggcagcgcggctatcgtggctggccacgacgggcgttccttg1800cgcagctgtgctcgacgttgtcactgaagcgggaagggactggctgctattgggcgaagt1860gccggggcaggatctcctgtcatctcaccttgctcctgccgagaaagtatccatcatggc1920tgatgcaatgcggcggctgcatacgcttgatccggctacctgcccattcgaccaccaagc1980gaaacatcgcatcgagcgagcacgtactcggatggaagccggtcttgtcgatcaggatga2040tctggacgaagagcatcaggggctcgcgccagccgaactgttcgccaggctcaaggcgcg2100catgcccgacggcgaggatctcgtcgtgacccatggcgatgcctgcttgccgaatatcat2160ggtggaaaatggccgcttttctggattcatcgactgtggccggctgggtgtggcggaccg2220ctatcaggacatagcgttggctacccgtgatattgctgaagagcttggcggcgaatgggc2280tgaccgcttcctcgtgctttacggtatcgccgctcccgattcgcagcgcatcgccttcta2340tcgccttcttgacgagttcttctgagcgggactctggggttcgaaatgaccgaccaagcg2400acgcccaacctgccatcacgagatttcgattccaccgccgccttctatgaaaggttgggc2460ttcggaatcgttttccgggacgccggctggatgatcctccagcgcggggatctcatgctg2520gagttcttcgcccaccccaacttgtttattgcagcttataatggttacaaataaagcaat2580agcatcacaaatttcacaaataaagcatttttttcactgcattctagttgtggtttgtcc2640aaactcatcaatgtatcttatcatgtctgtataccgtcgacctctagctagagcttggcg2700taatcatggtcatagctgtttcctgtgtgaaattgttatccgctcacaattccacacaac2760atacgagccggaagcataaagtgtaaagcctggggtgcctaatgagtgagctaactcaca2820ttaattgcgttgcgctcactgcccgctttccagtcgggaaacctgtcgtgccagctgcat2880taatgaatcggccaacgcgcggggagaggcggtttgcgtattgggcgctcttccgcttcc2940tcgctcactgactcgctgcgctcggtcgttcggctgcggcgagcggtatcagctcactca3000aaggcggtaatacggttatccacagaatcaggggataacgcaggaaagaacatgtgagca3060aaaggccagcaaaaggccaggaaccgtaaaaaggccgcgttgctggcgtttttccatagg3120ctccgcccccctgacgagcatcacaaaaatcgacgctcaagtcagaggtggcgaaacccg3180acaggactataaagataccaggcgtttccccctggaagctccctcgtgcgctctcctgtt3240ccgaccctgccgcttaccggatacctgtccgcctttctcccttcgggaagcgtggcgctt3300tctcatagctcacgctgtaggtatctcagttcggtgtaggtcgttcgctccaagctgggc3360tgtgtgcacgaaccccccgttcagcccgaccgctgcgccttatccggtaactatcgtctt3420gagtccaacccggtaagacacgacttatcgccactggcagcagccactggtaacaggatt3480agcagagcgaggtatgtaggcggtgctacagagttcttgaagtggtggcctaactacggc3540tacactagaagaacagtatttggtatctgcgctctgctgaagccagttaccttcggaaaa3600agagttggtagctcttgatccggcaaacaaaccaccgctggtagcggtttttttgtttgc3660aagcagcagattacgcgcagaaaaaaaggatctcaagaagatcctttgatcttttctacg3720gggtctgacgctcagtggaacgaaaactcacgttaagggattttggtcatgagattatca3780aaaaggatcttcacctagatccttttaaattaaaaatgaagttttaaatcaatctaaagt3840atatatgagtaaacttggtctgacagttaccaatgcttaatcagtgaggcacctatctca3900gcgatctgtctatttcgttcatccatagttgcctgactccccgtcgtgtagataactacg3960atacgggagggcttaccatctggccccagtgctgcaatgataccgcgagacccacgctca4020ccggctccagatttatcagcaataaaccagccagccggaagggccgagcgcagaagtggt4080cctgcaactttatccgcctccatccagtctattaattgttgccgggaagctagagtaagt4140agttcgccagttaatagtttgcgcaacgttgttgccattgctacaggcatcgtggtgtca4200cgctcgtcgtttggtatggcttcattcagctccggttcccaacgatcaaggcgagttaca4260tgatcccccatgttgtgcaaaaaagcggttagctccttcggtcctccgatcgttgtcaga4320agtaagttggccgcagtgttatcactcatggttatggcagcactgcataattctcttact4380gtcatgccatccgtaagatgcttttctgtgactggtgagtactcaaccaagtcattctga4440gaatagtgtatgcggcgaccgagttgctcttgcccggcgtcaatacgggataataccgcg4500ccacatagcagaactttaaaagtgctcatcattggaaaacgttcttcggggcgaaaactc4560tcaaggatcttaccgctgttgagatccagttcgatgtaacccactcgtgcacccaactga4620tcttcagcatcttttactttcaccagcgtttctgggtgagcaaaaacaggaaggcaaaat4680gccgcaaaaagggaataagggcgacacggaaatgttgaatactcatactcttccttttt4740caatattattgaagcatttatcagggttattgtctcatgagcggatacatatttgaatgt4800atttagaaaaataaacaaataggggttccgcgcacatttccccgaaaagtgccacctgac4860gtc4863<210>16<211>20<212>DNA<213>人工的<220><223>人工合成的引物序列<400>16ggggatcagcgtttgagtaa20<210>17<211>20<212>DNA<213>人工的<220><223>人工合成的引物序列<400>17taggccccacctccttctat20<210>18<211>30<212>DNA<213>人工的<220><223>人工合成的引物序列<400>18tgcggatccagagcagattgtactgagagt30<210>19<211>29<212>DNA<213>人工的<220><223>人工合成的引物序列<400>19ctctatctcgagtgaggcggaaagaacca29<210>20<211>40<212>DNA<213>人工的<220><223>人工合成的引物序列<400>20tttaagcttgaagactatttttacatcaggttgtttttct40<210>21<211>37<212>DNA<213>人工的<220><223>人工合成的引物序列<400>21tttaagcttgaagacacggtgtttcgtcctttccaca37<210>22<211>51<212>DNA<213>人工的<220><223>siRNA的人工合成的序列<400>22caccgaagcagcacgacttcttcttcaagagagaagaagtcgtgctgcttc51<210>23<211>51<212>DNA<213>人工的<220><223>siRNA的人工合成的序列<400>23aaaagaagcagcacgacttcttctctcttgaagaagaagtcgtgctgcttc5權(quán)利要求1.診斷受試者中的PRC或患PRC的傾向性的方法，包括測定源自患者的生物樣品中EphA4的表達(dá)水平，其中所述水平與所述基因的正常對照水平相比增加表明所述受試者患有或可能患PRC。2.權(quán)利要求的方法1，其中所述增加是超過所述正常對照水平至少10％。3.權(quán)利要求的方法1，其中所述表達(dá)水平通過任何一種選自下組的方法測定(a)檢測EphA4的mRNA，(b)檢測EphA4編碼的蛋白質(zhì)，和(c)檢測EphA4編碼的蛋白質(zhì)的生物活性。4.權(quán)利要求的方法1，其中所述表達(dá)水平通過檢測EphA4探針與所述患者來源的生物樣品的基因轉(zhuǎn)錄物的雜交來測定。5.權(quán)利要求的方法4，其中所述雜交步驟在DNA陣列上進(jìn)行。6.權(quán)利要求的方法1，其中所述生物樣品包含上皮細(xì)胞。7.權(quán)利要求的方法1，其中所述生物樣品包含PRC細(xì)胞。8.權(quán)利要求的方法7，其中所述生物樣品包含來自PRC的上皮細(xì)胞。9.篩選用于治療或預(yù)防PRC的化合物的方法，所述方法包括以下步驟a)使受試化合物與EphA4編碼的多肽接觸；b)檢測所述多肽與受試化合物之間的結(jié)合活性；和c)選擇與所述多肽結(jié)合的化合物。10.篩選用于治療或預(yù)防PRC的化合物的方法，所述方法包括以下步驟a)使候選化合物與表達(dá)EphA4的細(xì)胞接觸；和b)選擇降低EphA4表達(dá)水平的化合物。11.權(quán)利要求10的方法，其中所述細(xì)胞包含前列腺癌細(xì)胞。12.篩選用于治療或預(yù)防PRC的化合物的方法，所述方法包括以下步驟a)使受試化合物與EphA4編碼的多肽接觸；b)檢測步驟(a)的多肽的生物活性；和c)選擇與不存在受試化合物時檢測到的生物活性相比抑制多肽的生物活性的化合物。13.權(quán)利要求12的方法，其中所述生物活性是酪氨酸激酶活性。14.篩選用于治療或預(yù)防PRC的化合物的方法，所述方法包括以下步驟a)使受試化合物與其中導(dǎo)入了載體的細(xì)胞接觸，所述載體包含EphA4基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)區(qū)以及在所述轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)區(qū)的控制下表達(dá)的報道基因，b)測定所述報道基因的表達(dá)或活性；和c)選擇與不存在受試化合物時的水平相比降低所述報道基因的表達(dá)或活性水平的化合物。15.治療或預(yù)防受試者中的PRC的方法，包括給藥所述受試者反義組合物，所述組合物包含與EphA4編碼序列互補(bǔ)的核苷酸序列。16.治療或預(yù)防受試者中的PRC的方法，包括給藥所述受試者siRNA組合物，其中所述組合物降低EphA4的表達(dá)。17.權(quán)利要求16的方法，其中所述siRNA包含EphA4的有義核酸和反義核酸。18.權(quán)利要求17的方法，其中所述siRNA包含對應(yīng)序列SEQIDNO10的核糖核苷酸序列作為靶序列。19.權(quán)利要求18的方法，所述siRNA的通式為5’-[A]-[B]-[A’]-3’，其中[A]是與SEQIDNO10的核苷酸組成的序列對應(yīng)的核糖核苷酸序列，[B]是大約3至大約23個核苷酸組成的核糖核苷酸序列，和[A’]是[A]的互補(bǔ)序列組成的核糖核苷酸序列。20.權(quán)利要求16的方法，其中所述組合物包含轉(zhuǎn)染增強(qiáng)劑。21.治療或預(yù)防受試者中的PRC的方法，包括給藥所述受試者藥物有效量的抗體或其片段，所述抗體或其片段與EphA4編碼的蛋白質(zhì)結(jié)合。22.治療或預(yù)防受試者中的PRC的方法，包括給藥所述受試者疫苗，所述疫苗包含EphA4編碼的多肽或所述多肽的免疫活性片段，或編碼所述多肽的多核苷酸。23.治療或預(yù)防受試者中的PRC的方法，包括給藥通過權(quán)利要求9-14之一的方法獲得的化合物的步驟。24.用于治療或預(yù)防PRC的組合物，所述組合物包含藥物有效量的針對EphA4的反義多核苷酸或siRNA作為活性成分，并包含可藥用的載體。25.權(quán)利要求24的組合物，其中所述siRNA包含SEQIDNO10組成的核苷酸序列作為靶序列。26.用于治療或預(yù)防PRC的組合物，所述組合物包含藥物有效量的抗體或其片段作為活性成分，所述抗體或其片段與EphA4編碼的蛋白質(zhì)結(jié)合，并包含可藥用的載體。27.用于治療或預(yù)防PRC的組合物，所述組合物包含藥物有效量的通過權(quán)利要求9-14之一的方法選出的化合物作為活性成分，并包含可藥用的載體。28.治療或預(yù)防受試者中的胰腺癌的方法，包括給藥所述受試者包含EphA4的siRNA的組合物。29.權(quán)利要求28的方法，其中所述siRNA包含EphA4的有義核酸和反義核酸。30.權(quán)利要求28的方法，其中胰腺癌是胰管腺癌(PDACa)。31.權(quán)利要求29的方法，其中所述siRNA包含對應(yīng)SEQIDNO10組成的序列的核糖核苷酸序列作為靶序列。32.權(quán)利要求31的方法，所述siRNA的通式為5’-[A]-[B]-[A’]-3’，其中[A]是與SEQIDNO10的核苷酸組成的序列相對應(yīng)的核糖核苷酸序列，[B]是大約3至大約23個核苷酸組成的核糖核苷酸序列，和[A’]是[A]的互補(bǔ)序列組成的核糖核苷酸序列。33.權(quán)利要求的方法28，其中所述組合物包含轉(zhuǎn)染增強(qiáng)劑。34.雙鏈分子，其包含有義鏈和反義鏈，其中有義鏈包含對應(yīng)SEQIDNO10組成的靶序列的核糖核苷酸序列，反義鏈包含與所述有義鏈互補(bǔ)的核糖核苷酸序列，其中所述有義鏈和反義鏈相互雜交形成所述雙鏈分子，并且其中所述雙鏈分子被引入表達(dá)EphA4基因的細(xì)胞時抑制所述基因的表達(dá)。35.權(quán)利要求34的雙鏈分子，其中所述靶序列包含來自SEQIDNO1組成的核苷酸序列的至少約10個連續(xù)核苷酸。36.權(quán)利要求35的雙鏈分子，其中所述靶序列包含來自SEQIDNO1組成的核苷酸序列的約19到約25個連續(xù)核苷酸。37.權(quán)利要求36的雙鏈分子，其中所述雙鏈分子是包含經(jīng)由單鏈核糖核苷酸序列連接的有義鏈和反義鏈的單一(single)核糖核苷酸轉(zhuǎn)錄物。38.權(quán)利要求35的雙鏈分子，其中所述雙鏈分子是長度小于大約100個核苷酸的寡核苷酸。39.權(quán)利要求38的雙鏈分子，其中所述雙鏈分子是長度小于大約75個核苷酸的寡核苷酸。40.權(quán)利要求39的雙鏈分子，所述雙鏈分子是長度小于大約50個核苷酸的寡核苷酸。41.權(quán)利要求40的雙鏈分子，所述雙鏈分子是長度小于大約25個核苷酸的寡核苷酸。42.權(quán)利要求41的雙鏈寡核苷酸，其中所述雙鏈分子是長度為大約19個至大約25個核苷酸的寡核苷酸。43.編碼權(quán)利要求35的雙鏈分子的載體。44.權(quán)利要求43的載體，其中所述載體編碼具有二級結(jié)構(gòu)并包含有義鏈和反義鏈的轉(zhuǎn)錄物。45.權(quán)利要求44的載體，其中所述轉(zhuǎn)錄物還包含連接所述有義鏈和所述反義鏈的單鏈核糖核苷酸序列。46.包含含有有義核酸鏈與反義核酸鏈的組合的多核苷酸的載體，其中所述有義核酸包含SEQIDNO10組成的核苷酸序列，并且所述反義鏈核酸由與有義鏈互補(bǔ)的序列組成。47.權(quán)利要求的載體46，其中所述多核苷酸的通式為5’-[A]-[B]-[A’]-3’其中[A]是SEQIDNO10組成的核苷酸序列，[B]是大約3至大約23個核苷酸組成的核苷酸序列，和[A’]是[A]的互補(bǔ)序列組成的核苷酸序列。48用于治療或預(yù)防胰腺癌的藥物組合物，包含藥物有效量的EphA4的小干擾RNA(siRNA)作為活性成分，并包含可藥用的載體。49.權(quán)利要求48的藥物組合物，其中所述siRNA包含SEQIDNO10組成的核苷酸序列作為靶序列。50.權(quán)利要求49的組合物，其中所述siRNA的通式為5’-[A]-[B]-[A’]-3’其中[A]是與SEQIDNO10組成的核苷酸序列相對應(yīng)的核糖核苷酸序列，[B]是3至23個核苷酸組成的核糖核苷酸序列，[A’]是與[A]互補(bǔ)的核糖核苷酸序列。全文摘要本發(fā)明描述了用于診斷患前列腺癌(PRC)傾向性的方法。一個實施方案中所述診斷方法包括測定EphA4的表達(dá)水平。本發(fā)明還提供篩選用于治療PRC的治療劑的方法，治療PRC的方法。本發(fā)明還涉及抑制癌細(xì)胞生長的方法，所述方法通過將細(xì)胞與EPHA4的siRNA的組合物接觸進(jìn)行。本發(fā)明還包括治療癌癥的方法。本發(fā)明還涉及用于所述方法的產(chǎn)品，包括核酸序列和載體，以及包含它們的組合物。本發(fā)明還提供抑制腫瘤細(xì)胞的方法，例如胰腺癌細(xì)胞，具體是胰管腺癌(PDACa)的方法。文檔編號G01N33/574GK1973040SQ200580013558公開日2007年5月30日申請日期2005年2月18日優(yōu)先權(quán)日2004年2月27日發(fā)明者中村佑輔,中川英刀,中鶴修一申請人:腫瘤療法科學(xué)股份有限公司