專利名稱：血細胞比容和分析物濃度測定的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及血細胞比容和分析物濃度測定領(lǐng)域。更確切地說，本發(fā)明涉及通過對相應(yīng)于所述抗凝血漿的血樣和液體試劑混合物進行至少兩次不同的測量以測定抗凝血漿分析物濃度的方法。本發(fā)明也包括用于進行血液、抗凝血和/或抗凝血漿樣品測量的測量和測定裝置，和設(shè)備試劑盒。
背景技術(shù)：
如已提及的，本發(fā)明涉及通過測量血液和液體試劑混合物測定抗凝血漿中分析物濃度。上述測定結(jié)果是進行醫(yī)學(xué)診斷和監(jiān)測醫(yī)學(xué)治療效果所必需的。
醫(yī)學(xué)目的的分析物濃度測定傳統(tǒng)上是在遠離患者的實驗室中進行。而在靠近患者的護理場所處常常需要該測定的結(jié)果。此與空間位置相關(guān)的情形推動了進行接近患者的分析物濃度測定。只有抗凝血可以從護理場所運輸?shù)綄嶒炇?。在實驗室，對抗凝血或制備自該抗凝血的抗凝血漿進行分析物測定。因為抗凝血漿易于操作及貯藏，因此盡可能地對抗凝血漿進行分析物濃度的實驗室測定。在接近患者(near-patient)場所處，情況則不同。血液易于獲得，但抗凝血漿不便或無法制備。就產(chǎn)生了這樣的情況，即對抗凝血漿進行分析物濃度的實驗室測定和對血液進行接近患者的測定。這樣的情況并不令人滿意，因為合理的醫(yī)學(xué)實踐需要在一給定時間處一分析物濃度值和一給定患者之間的關(guān)系。假定進行選擇，臨床醫(yī)生更喜歡抗凝血漿中的分析物濃度值，因為這些值與更多的臨床參考數(shù)據(jù)相關(guān)。除樣品特性之外，本發(fā)明還涉及分析物濃度測定的準確性和可靠性。公認準確性和可靠性是分析物濃度測定醫(yī)學(xué)有效性的基礎(chǔ)。
根據(jù)規(guī)定，如果產(chǎn)生的結(jié)果與對照法的結(jié)果一致，則分析法是準確的。這也適用于測定分析物濃度的接近患者法。為獲得準確的接近患者法，合理的設(shè)計策略是采用對照法或上述被證實是準確的方法的化學(xué)和測定條件。但此直截了當?shù)牟呗詤s難以進行。對照法是代表了在實驗室環(huán)境中長期合作的研究人員努力頂點的實驗室法。這些環(huán)境和臨床實驗室環(huán)境比較相似。可以在這些環(huán)境之一中實現(xiàn)的測定條件也可以在其它環(huán)境中實現(xiàn)。進行接近患者濃度測定的環(huán)境卻與之截然不同。但是通常的實驗室法第一步，混合精確體積的抗凝血漿和精確體積的試劑，卻是在接近患者測定場所處所幾乎無法克服的障礙。在外科手術(shù)室、初級護理中心、醫(yī)生辦公室和患者家，抗凝血漿不便于制備，也難以實現(xiàn)精確的體積。因此，接近患者法的第一步通常是；混合無法精確確定體積的血液和干試劑。接近患者測定法的設(shè)計者不知不覺地偏離了準確的實驗室法的測定條件；是其本身所固有的。而且，偏離了實驗室測定條件還造成了接近患者測定法的準確性缺陷。引起了關(guān)注和不安，并危害醫(yī)學(xué)診斷和治療的安全與有效。因此，改善接近患者分析物濃度測定準確性的謹慎策略是，1)鑒定提升了準確性的實驗室法測定條件的內(nèi)容，和2)在接近患者法設(shè)計中堅持所鑒定的內(nèi)容。
如上所述，對照法和準確的實驗室法通常是濕化學(xué)法。濕化學(xué)法成功的主要原因在于其抗基體效應(yīng)的普遍能力?；旌闲◇w積的樣品和大體積的試劑稀釋了樣品。減少了樣品整體效應(yīng)并為選擇偏愛的分析物效應(yīng)的測定條件作好準備。樣品的非分析物效應(yīng)、基體效應(yīng)，因此不受偏愛，提高了測定的準確性。
通過濕化學(xué)法定量測定分析物濃度需要精確分配預(yù)期的體積，但在接近患者測定的場所處卻很難實現(xiàn)精確的分配。分配應(yīng)當是足夠精確的，但在缺乏用于校驗測定體積設(shè)備的系統(tǒng)、嚴格訓(xùn)練的實驗室人員和良好管理的實驗室的其它方面下，在接近患者場所處體積分配必然是不準確的，如與預(yù)期結(jié)果無法接受的差異?，F(xiàn)有技術(shù)解決該問題的手段是發(fā)明接近患者法可以使用的‘用戶友好的’、便宜的、精確的和準確的測定體積裝置。這樣的手段所經(jīng)歷的成功是有限的。
除上述提及的傳統(tǒng)的接近患者測定場所之外，接近患者測定也在小實驗室和大實驗室的部門中進行。所有接近患者測定的場所都不喜歡制備抗凝血漿，但其在實現(xiàn)精確確定體積的能力上卻有著差別。在下文中，在接近患者測定場所和小實驗室之間存在著差別。它們都偏愛血液，但在精確分配血液和試劑預(yù)期的體積的能力上有著差別。
小實驗室和接近患者測定場所關(guān)注的是分析物濃度測定的可靠性。大實驗室設(shè)定了可靠性標準。在大實驗室中，每年進行數(shù)千個已知類型的分析物濃度測定。晝夜不停的、固定的、自動化的、可靠的測量和測定裝置分配著期望體積的抗凝血漿和試劑，進行著測量和分析物濃度測定。定期分析具有指定分析物濃度值的對照樣品，并由專業(yè)的、受過良好訓(xùn)練的技術(shù)人員指導(dǎo)操作。測量和測定裝置進行定期維護。包括在全程序上建立的校準，根據(jù)需要進行，尤其是只要程序改變就得進行，例如當引入大批新試劑時，因為以上原因，因此高水平的測定可靠性在大實驗室中才能達到。在小實驗室和接近患者測定場所處獲得可比較的測定可靠性并不是容易的任務(wù)。用于可靠性改善的策略包括確定在大實驗室中實行的可靠性-增強規(guī)程，但不是在小實驗室和接近患者測定場所處，并尋找能使這些規(guī)程或等價物也可在后一場所處實施的方法。測量和測定裝置的定期維護是上述方法之一。在引入程序改變的基礎(chǔ)上，在全程序上建立的校準，是第二種方法。對照樣品的定期分析是第三種方法。
鑒于慣例，并為了加速反應(yīng)，實驗室法通常在37℃下進行。就準確性而言，溫度本身通常并不重要。如果在設(shè)計接近患者測定法中可通過在標準的環(huán)境室溫下進行測定并使測量值適用于該測定以獲得有利條件，那么應(yīng)當要考慮溫度。原因在于測量溫度在很大程度上并不苛求其保持在規(guī)定水平上。在接近患者法中對于37℃的要求很可能是不精確和不準確的來源。在小實驗室和接近患者場所處，已知類型分析物濃度的測定僅是零星地進行。因此，測量裝置無法穩(wěn)定運轉(zhuǎn)。對37℃的要求需要測量裝置及與該測量直接相關(guān)的試劑溫度平衡。除了消耗寶貴的時間外，還成為誤差的來源。因為時間是寶貴的，所以到達平衡時間總是要最少的，但總稍顯不夠。該稍顯不夠的溫度到達平衡時間將導(dǎo)致不精確的溫度范圍，帶來了測定的不精確性。該稍顯不夠的溫度平衡也將會傾向于產(chǎn)生較預(yù)期溫度更低的溫度并帶來測定的不準確性。如果避免進行溫度平衡的話，可以減少測定時間、不精確性和不準確性。此外，無需分配恒溫-加熱單元，顯而易見，減少了測量裝置的復(fù)雜性和成本，還能明顯減少其電力消耗。就其本身而言，能給一次性的、半一次性的、輕量化的、便攜的、廠商校準并維護的測定設(shè)備提供了方便，可增加接近患者分析物濃度測定的準確性和可靠性并降低成本。
通過凝血酶原時間(PT)測定的例子對本發(fā)明背景技術(shù)作進一步描述。
根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)，存在兩種PT測定方法。一種描述于Quick A.Theprothrombin time in hemophilia and obstructive jaundice.Journal ofBiological Chemistry 1935；10973-74中。另一種描述于Owren P.Thrombotest.A new method for controlling anticoagulant therapy.Lancet 1959；ii754-758中。兩種方法都是基于細胞膜結(jié)合的組織因子所誘導(dǎo)的凝血。因此，兩種方法的試劑都含有促凝血酶原激酶。但是，存在重要差別。除各種鹽和賦形劑之外，Quick PT試劑僅含有促凝血酶原激酶，而Owren PT試劑還含有耗盡與BaSO4結(jié)合的蛋白的血漿。特別是，該耗盡的血漿耗盡了凝血因子II、VII和X，但并不耗盡其它兩種凝血必需的蛋白組分，凝血因子V和血纖蛋白原。QuickPT法依賴于樣品，作為血纖蛋白原和凝血因子V的來源，因此深受這些物質(zhì)不足及異常的影響。因此，對于感興趣的因子，Owren PT法更特異。因為凝血因子II、VII和X，而非凝血因子V和血纖蛋白原，受使用維生素K拮抗劑醫(yī)學(xué)治療的影響，所以對于上述治療的結(jié)果，Owren PT法更加特異。在預(yù)防血栓形成和其它凝血紊亂及嚴格建立在監(jiān)測這些治療基礎(chǔ)上以保證它們安全與有效的PT測定中，上述治療非常有效。
在PT測定中血纖蛋白原至關(guān)重要。其是形成凝血塊的物質(zhì)。沒有血纖蛋白原就意味著沒有血凝塊，也就沒有凝血時間和PT測定。如果樣品和試劑混合物中血纖蛋白原水平低于約0.1g/L，則凝血塊形成受到嚴重阻礙且凝血終點變得無法確定。因為血纖蛋白原的血漿水平范圍低于1g/L，因此在Quick PT法中禁止血漿與試劑比低于1∶10。而在Owren PT法中則沒有這樣的限制，因為試劑含有血纖蛋白原，并且血漿與試劑比可較1∶10減少得更多。
Quick PT法規(guī)定反應(yīng)混合物由一體積抗凝血漿和兩體積試劑組成。Owren PT法規(guī)定由一體積抗凝血漿和20體積試劑組成。Owren法更大的樣品稀釋度減少了基體效應(yīng)。使得Owren法較Quick法更為準確。
實驗室PT法要適用于小實驗室和接近患者測定場所需要利用血液來代替抗凝血漿。根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)，PT分析物僅存在于抗凝血的血漿部分，而非細胞部分。據(jù)此，取決于抗凝處理和血細胞比容，一體積假定的抗凝血漿中的PT與1.5體積血液中的PT大致一樣。因此，根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)，維持Quick PT法或Owren PT法的測定條件分別需要混合有2體積或20體積試劑的1.5體積血液。
與Quick法相比，對于維生素k依賴型凝血因子更好的特異性和準確性是Owren PT法優(yōu)勢所在。雖然如此，與Owren法比較，Quick法的教導(dǎo)更能影響接近患者PT法的現(xiàn)有技術(shù)設(shè)計人員。此外，由于將血液和干PT試劑混合，大多數(shù)接近患者Quick PT法設(shè)計明顯地違反了Quick PT測定條件。這能明顯降低技術(shù)困難，但要冒準確性進一步減少的風險。接近患者Quick PT法的現(xiàn)有技術(shù)和發(fā)明狀況描述于McMorrow的US 6,402,704 B1、Yassinzadeh等的US 6,103,196、Cusack等的US 5,302,348和Oberhardt的US 4,849,340中。
就接近患者PT法的總體設(shè)計趨勢，例外的是November AG，Erlangen，Germany的novi quickPT法。盡管有其自己的名稱，該novi quickPT法代表的是堅持Owren PT法測定條件的一種嘗試。為解決接近患者法精確體積的困難，novi quick法包括了披露于Bertling等的PCT/DE99/00351和PCT/DE99/01052中的兩種新型液體控制裝置。其中一種是玻璃毛細管和牽引鉤(hook)的組合，能將精確體積的血液添加到試劑中。該毛細管牽引鉤也用于混合血液和試劑，通過牽引鉤的操作來測定凝血時間。novi quickPT的設(shè)計遵循了緊密堅持準確實驗室法的基本原理。但是，盡管具有獨創(chuàng)性效果，但是精確體積的必需條件卻無法廣泛應(yīng)用。
根據(jù)Quick和Owren法PT測定的結(jié)果通常用國際標準化比率(INR)表示。血漿INR是來自于凝血時間除以標準凝血時間的比值，NCT。為獲得INR，將該比值自乘以該測定法所特有的指數(shù)。通過校準測定指數(shù)和NCT。該指數(shù)稱為國際敏感指數(shù)(ISI)?；蛘?，相對于正常血漿的PT表示的PT，在此稱為PT％。Lindahl等給出了用于PT％和INR互相換算的方程式PT％＝1/(0.028×INR-0.018)和INR＝[(1/PT％)+0.018]/0.028。基于PT％和INR之間關(guān)系式的Owren型凝血酶原時間INR校準利用了標準血漿樣品。服從于血栓形成和止血。類似信息見于Gogstad G.The reporting of thrombotest ininternational normalized ratio(INR).Farmakoterapi 1984；4088-92中。
在讓血液PT測定和抗凝血漿PT測定結(jié)果一致的嘗試中遇到的一些困難是由于血細胞比容改變所致。根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)，通過利用一個或多個換算系數(shù)能讓該結(jié)果一致。當血細胞比容處于正常范圍時，就給出了合理結(jié)果，但當血細胞比容處于極值時，則無法給出合理結(jié)果。
血細胞比容是由血細胞組成的血容量的一部分。血細胞比容可通過使裝有血液的容器受離心力作用而得到測定。之后，血細胞在容器底部形成壓緊的塊狀物，測量其體積以測定血細胞比容。對每一個體血細胞體積測量和求和是另一種測定血細胞比容的方法。此外還有光學(xué)法?！t蛋白的紅細胞的事實，可通過光學(xué)法進行測量其光吸收以測定血細胞比容。測定血細胞比容的光學(xué)法是常規(guī)方法并值得特別注意。血細胞比容光學(xué)測定的背景和發(fā)明內(nèi)容由下列出版物給出Lee等的US 6,064,474和Mendelson等的US 5,277,181。第一篇文獻披露了一種用于血液血細胞比容和血紅蛋白含量非侵入性測量的方法，其使用了一個或多個波長，如815nm和915nm。對波長進行選擇以給出血紅蛋白濃度和血漿光散射信息。第二篇文獻也披露了使用雙波長的方法，一個波長在約500nm處，另一個波長在約800nm處。選擇這樣的波長是因為，在此血紅蛋白兩種主要形式，氧耗盡和氧飽和的，顯示出幾乎相同的光吸收。
在小實驗室和接近患者測定場所處，需要準確的濕化學(xué)法通過對相應(yīng)血液分析以測定抗凝血漿中分析物濃度，即需要測定抗凝血漿分析物濃度而無須制備唯一的抗凝血漿，去設(shè)想或假定其存在及其相關(guān)特性。在接近患者測定場所處，需要實施的方法在某種程度上回繞著精確確定血液和試劑體積的要求。對于良好的測定可靠性而言，該方法應(yīng)當使合格的對照材料，通常為具有已知或已測定分析物濃度的對照血漿和對照血清，可被測試。此外，該方法應(yīng)當在校準的分析裝置上進行，該裝置通過分析對照樣品進行定期檢驗，并且所使用的測量和測定裝置應(yīng)當進行定期維護，即保養(yǎng)和檢驗。也需要上述可行的方法。需要上述方法可以可靠進行的測量和測定裝置，還需要用于該測量和測定裝置的設(shè)備試劑盒。具體地說，上述的在用于監(jiān)測使用維生素K拮抗劑抗凝結(jié)治療的PT測定中都是需要的。
發(fā)明概述提供了一種通過對相應(yīng)于抗凝血漿的血液和液體試劑混合物進行至少兩次測量以測定抗凝血漿分析物濃度的方法。如果所述血液和所述試劑以精確確定的體積混合，所述方法也用于所述血液血細胞比容的測定。所述進行精確確定體積的方法可用于對照血漿和/或?qū)φ昭宓臏y試。當不精確確定的所述體積混合時，所述發(fā)明也可用于所述分析物濃度的測定，如果血液的血細胞比容已知的話。
提供了對血液和試劑混合物進行兩次或更多次測量的測量和測定裝置。該裝置包括用于執(zhí)行兩次或更多次測量的裝置、數(shù)據(jù)處理器和用于存儲計算所需數(shù)據(jù)的只讀存儲器。
提供了設(shè)備試劑盒。該設(shè)備試劑盒包括試劑和用于實施本發(fā)明方法的裝置。每個本發(fā)明設(shè)備試劑盒都具有識別標志并優(yōu)選標記失效期。包括在設(shè)備試劑盒中的試劑和裝置具有與本發(fā)明設(shè)備試劑盒識別標志相關(guān)的識別標志。包括在本發(fā)明設(shè)備試劑盒中的試劑和裝置具有和本發(fā)明設(shè)備試劑盒失效期相同的失效期。
發(fā)明詳述本發(fā)明涉及通過對相應(yīng)于抗凝血漿的血樣和液體試劑混合物進行至少兩次不同測量以測定所述抗凝血漿的分析物濃度的方法。該方法包括步驟a)將一體積所述血樣與五倍或更多體積的所述液體試劑混合，b)對所述混合物進行所述至少兩次測量，其中至少一次與所述血樣的血細胞比容相關(guān)，以及其中至少一次與所述分析物濃度相關(guān)，和c)當a)中體積是精確且準確或b)中所述血樣的血細胞比容是已知時，計算測量結(jié)果以測定所述抗凝血漿的所述分析物濃度。
在本發(fā)明該方面一個實施方案中，所述混合物中血液體積為血液預(yù)期體積的50％-150％，b)所述混合物中試劑體積為試劑預(yù)期體積的70％-120％，和c)當血樣的血細胞比容已知時，計算結(jié)果以確定分析物濃度。
在本發(fā)明該方面另一個實施方案中，a)中所述血液預(yù)期體積為5-40μL，且所述試劑預(yù)期體積為100-1000μL，即測量不能精確地和準確地進行，則優(yōu)選a)中所述血液體積為5-20μL，且所述試劑體積為150-600μL。
在本發(fā)明該方面又一個實施方案中，b)中所述的測量在具有至少4mm的最小橫截面尺寸的管狀容器中進行，優(yōu)選最小橫截面尺寸為5mm-15mm。
在本發(fā)明該方面再一個實施方案中，所述方法是用抗凝血漿校準或保證質(zhì)量的，該抗凝血漿可以是已通過添加選自檸檬酸、異檸檬酸、EDTA、草酸、肝素和水蛭素的鈉、鉀和鋰鹽的抗凝劑進行抗凝處理的對照血漿。
在本發(fā)明該方面又一個實施方案中，所述抗凝血漿，其可以是對照血漿、對照血清或來自血液、或細胞、酵母或細菌培養(yǎng)物液體的其它對照物，選自由血清、肝素化的血漿、水蛭素抗凝的血漿、草酸鹽抗凝的血漿、檸檬酸鹽抗凝的血漿、異檸檬酸鹽抗凝的血漿、EDTA-血漿、熱處理的血漿組成的血液來源的液體以及細胞、酵母或細菌的培養(yǎng)液。
在本發(fā)明該方面還一個實施方案中，所述分析物濃度的測定用抗凝血校準，用抗凝血漿中已知的分析物濃度校準，該抗凝血已通過添加選自檸檬酸、異檸檬酸、EDTA、草酸、肝素和水蛭素的鈉、鉀和鋰鹽的抗凝劑進行了抗凝處理。
在本發(fā)明該方面再一個實施方案中，所述分析物選自凝血酶原時間(PT)、血纖蛋白原、血纖蛋白原降解產(chǎn)物、血纖蛋白降解產(chǎn)物(D-二聚體)、活化部分凝血酶原時間(APTT)、活化凝血時間(ACT)、C-反應(yīng)蛋白(CRP)、膽固醇和葡萄糖。
在本發(fā)明該方面又一個實施方案中，所述與b)中所述血細胞比容相關(guān)的測量是基于具有800nm-1100nm波長的光的一次或多次測量。
在本發(fā)明該方面另一個實施方案中，b)中所述兩次或多次測量是在18℃-40℃的室溫下進行。
在本發(fā)明該方面還一個實施方案中，a)中所述的試劑含有0.1g/L或更多的血纖蛋白原。
在本發(fā)明該方面還一個實施方案中，所述分析物濃度為用INR表示的PT，其中，在所述抗凝血漿分析物濃度測定之前，分析物濃度用PT％再表示。
在本發(fā)明該方面再一個實施方案中，a)中所述混合物的凝血時間是與b)中所述分析物濃度相關(guān)的至少一次測量的之一。
除天然血液之外，很清楚本發(fā)明方法中使用的血樣可以是對天然血液進行操作使之含有添加物，例如抗凝劑、殺菌劑和藥物，或已除去除紅細胞的血紅蛋白外的血液成分。
本發(fā)明的另一方面涉及用于對血液、抗凝血和/或抗凝血漿樣品進行測量的測量和測定裝置，包括，優(yōu)選在家中的，a)用于容納含有具體批次液體試劑容器的座，該容器容有在裝置運轉(zhuǎn)中用于與所述液體試劑混合的所述樣品之一，b)能量來源，c)數(shù)據(jù)處理器，d)包含有用于一種或多種所述血液、抗凝血和/或抗凝血漿樣品混合物的計算數(shù)據(jù)集的只讀存儲器，每一計算數(shù)據(jù)集適用于所述的具體批次，e)用于對每一混合物進行兩次或多次測量的測量裝置，f)顯示用戶指令和基于來自d)和e)數(shù)據(jù)計算結(jié)果的顯示器，和g)用于用戶控制裝置的控制裝置，優(yōu)選按鈕。
本發(fā)明的又一方面是涉及標有識別標志的設(shè)備試劑盒，包括用于對血液、抗凝血和/或抗凝血漿樣品進行測量的測量和測定裝置，以及在每個都標有與所述設(shè)備試劑盒的所述識別標志相關(guān)的識別標志的容器中一種或幾種液體試劑。
附圖簡述

圖1是顯示血細胞比容測定的圖，其中血液血細胞比容(HCT)對光吸收作圖。實心方塊是來自將10μL具有已知HCT的不同血液添加到3501μL的PT試劑中。實心三角形是來自將不同體積的具有44.0％的已知HCT的血液添加到上述PT試劑中。
圖2是顯示假定的PT分析物容量的細胞容積級分的圖，其中細胞容積級分對兩組抗凝血樣，低HCT組(實心三角形)和高HCT組(空心方塊)，假定的抗凝血漿INR(％)作圖。
圖3a是顯示根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)的PT的圖，在此所測定的血INR對已知血漿INR作圖并進行線性回歸分析。分為三組低HCT組、高HCT組和中HCT組。中HCT組用作校準物。
圖3b是顯示根據(jù)本發(fā)明的PT的圖，在此利用假定的抗凝血漿INR測定的PT得到測定并對利用抗凝血漿的INR測定的已知PT作圖。凝血時間值和分組與圖3a中一樣。
圖4是根據(jù)本發(fā)明的測量和測定裝置實施方案的示意圖。1A是以一個角度插入到裝置容器座的容器的側(cè)視圖，1B是該容器的頂視圖，帶有用于添加血液、混合血液和試劑以及鉤住檢測血凝塊的開口。2是來自940nm LED光束的橫截面，3是容器座中的空腔，所述空腔容納有熱敏電阻用于測量室溫，4是一塊木頭，帶有用于形成容器座和光路的鉆孔，5是電開關(guān)的按鈕。在儀器內(nèi)部是9V電池、電子電路和可編程集成計算機，PIC。
圖5a和5b顯示的是根據(jù)本發(fā)明的測量和測定裝置實施方案的照片。
附圖詳述圖1.血細胞比容的測定。血液血細胞比容(HCT)對光吸收作圖，即僅穿過試劑透射的光(lo)與穿過血液和試劑混合物透射的光(l)的比值。數(shù)據(jù)來自表1。實心方塊是來自將10μL具有已知HCT的不同血樣添加到350μL的PT試劑中。實心三角形是來自將不同體積的具有44.0％的已知HCT的血液添加到上述PT試劑中。
圖2.為確定含有與血液細胞容量級分相同PT活性的血漿容量，方程式9中的b，用于測定PT假定的分析物容量，根據(jù)本發(fā)明方法通過利用不同的b值測定的抗凝血漿INR間的差異，以及通過準確的實驗室法測定的抗凝血漿的已知INR，對b作圖。顯示的是兩組抗凝血樣的結(jié)果，低HCT組(實心三角形)和高HCT組(空心方塊)。由于計算中的缺陷，根據(jù)本發(fā)明方法測定中的差異表現(xiàn)為誤差。在約0.29的b值處，兩組的誤差處于最小值。在血漿容量和29％的細胞容積之和上確定抗凝血中假定的分析物容量。
圖3a.根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)，利用抗凝血和PT試劑混合物的凝血時間測定了用IRN表示的抗凝血漿的PT。一組40個樣品的抗凝血，所有具有已知INR的其抗凝血漿都考慮到了。樣品的HCT也是已知的，使該組樣品被分為三組低HCT組、高HCT組和中HCT組。中HCT組的樣品用于校準。測定的INR對已知的INR作圖并進行線性回歸分析。低HCT組顯示了低的血液INR(實心方塊)，高HCT組顯示了高的血液INR(實心三角形)，以及中INR組顯示了居中的血液INR(空心圓圈)。
圖3b.也根據(jù)本發(fā)明方法，即根據(jù)本發(fā)明測定的抗凝血漿的PT。分析了相同的具有已知抗凝血漿INR的40個抗凝血樣樣品組。對于每個血液和PT試劑的混合物進行了兩次測量，凝血時間和吸光度。凝血時間值和分組與圖3a中的一樣。根據(jù)本發(fā)明方法，將INR值對抗凝血漿已知的INR值作圖。對于所有的三個組，目前所測定的INR值與已知的INR值大致一樣，這表明本發(fā)明方法是有用的。
圖4.顯示了根據(jù)本發(fā)明的測量和測定裝置當前優(yōu)選的實施方案的示意圖。該圖特征在于1A)容器側(cè)視圖，10mm直徑的聚苯乙烯管以一個角度插入到該裝置的容器座中，1B)容器頂視圖，帶有用于添加血液、混合血液和試劑以及鉤住檢測血凝塊的開口。2)來自940nmLED光束的橫截面，所述光束穿過容器壁到達光電二極管，3)容器座中的空腔，四周用成型的油灰(dough)填實，所述空腔容納有熱敏電阻用于測量室溫，4)一塊木頭，帶有用于形成容器座和光路的鉆孔，5)用于操作者與裝置互動的電開關(guān)按鈕，即啟動光測量，開始和停止計時以及啟動計算和訪問測定值。在儀器內(nèi)部是9V電池、電子電路和可編程集成計算機，PIC。該PIC通過液晶顯示器(LCD)界面與操作者互動。PIC測量時間，將測量的光強度和溫度進行模擬-數(shù)字轉(zhuǎn)換。該PIC也進行所有必需的計算以測定根據(jù)本發(fā)明假定的抗凝血中血液的PT。
圖5a和5b顯示了根據(jù)本發(fā)明的測量和測定裝置實施方案的照片。圖5a顯示了添加樣品到容器座上容器中的試劑中。圖5b顯示了在樣品是抗凝血漿的情況下，顯示器上的測定結(jié)果。該裝置能自動發(fā)現(xiàn)樣品應(yīng)該是血液這一情況，這將事先得到顯示。樣品差異是基于對與血細胞比容相關(guān)的混合物測量的結(jié)果。
當提供數(shù)值范圍時，很清楚每一居中值，除非上下文另有明確規(guī)定，精確到下限整數(shù)值的十分之一，在該上下限范圍之間，并且任何其它規(guī)定的范圍或在規(guī)定范圍內(nèi)的居中值都在本發(fā)明范圍內(nèi)。
必須指出在此使用的和在附加的權(quán)利要求中，除非上下文另有明確規(guī)定，單數(shù)形式“一種”、“一個”和“該”包括復(fù)數(shù)對象。因此，例如，涉及的“一種試劑”包括上述試劑的復(fù)數(shù)，以及涉及的“該裝置”包括所涉及的一種或多種裝置及本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的其等價物等等。
除非另有規(guī)定，所有在此使用的技術(shù)和科學(xué)名詞具有相同的含意，如同本發(fā)明所屬領(lǐng)域普通技術(shù)人員所通常理解的。盡管類似或等效于在此描述的任何方法或材料也可以用于實施或測試本發(fā)明，但現(xiàn)在描述了優(yōu)選的方法和材料。所有在此提及的出版物此處引入作為參考以公開并描述與所引證的出版物相關(guān)的方法和/或材料。
在此討論的出版物只提供其在本申請申請日之前的公開內(nèi)容。在此并不被認為是一種許可，由于在先發(fā)明，本發(fā)明并不被授權(quán)先于上述出版物。此外，所提供的公布日可能不同于實際的出版日期，可能需要單獨進行核實。
在本發(fā)明的進一步描述中，首先描述了本發(fā)明方法。其次，提供了本發(fā)明裝置的描述，后面是本發(fā)明試劑盒的描述，其包括在本發(fā)明裝置中。
方法一種剖視本發(fā)明方法的方式如下。通過對相應(yīng)的血液和液體試劑混合物進行兩次或更多次不同的測量測定血漿中分析物濃度。至少一次測量應(yīng)當與血液的血細胞比容相關(guān)，以及至少一次測量應(yīng)當與血液的分析物濃度相關(guān)。通過計算測定的抗凝血漿的分析物濃度，即如果抗凝血漿已制備自血液并且這些抗凝血漿已通過對照法或準確的實驗室法進行了分析物濃度測定，通過它們給出的事先應(yīng)獲得的結(jié)果，在數(shù)學(xué)上對測定值加和。以下具體披露了如何進行測量，測定值被加和以給出期望的結(jié)果—抗凝血漿的分析物濃度。
如果測量值隨血細胞比容改變而變，該測量與血液的血細胞比容相關(guān)。具有不同血細胞比容的兩個血樣有助于給出至少一次不同的測量的測量值中的差異，并且對于具有不同分析物濃度的兩個血樣也是一樣的。所需要的相關(guān)性不必是線性的，也不必是理想的。強線性相關(guān)將便于發(fā)現(xiàn)測定值的數(shù)學(xué)組合，以給出良好的抗凝血分析物濃度的測定或評估，但非線性和較不強的相關(guān)也可能提供給本發(fā)明一種有用的作法，當然是要在本發(fā)明的范圍內(nèi)。上述推論的結(jié)果是任何與血細胞比容相關(guān)的血液分析物濃度或水平，如血紅蛋白濃度或細胞膜濃度在實施本發(fā)明方法中可以互換用于血細胞比容而不背離本發(fā)明的精神。
本發(fā)明方法可在小實驗室或接近患者場所處實施。取決于本發(fā)明方法的實施，用于幫助本發(fā)明實施的程序?qū)⒂兴兓?，作為實施不同的本發(fā)明方法的先決條件。因此，在本發(fā)明方法的描述中，如果在小實驗室或接近患者場所處實施，只要相應(yīng)的也是如此就要指出。以下，相應(yīng)地用于本發(fā)明方法實施與分析物濃度測定與血液有關(guān)的抗凝處理信息首次描述了。其次是抗凝血中分析物性質(zhì)的相關(guān)信息。繼之以在小實驗室和接近患者場所處實施本發(fā)明方法的概述，以及本發(fā)明方法的進一步詳述。通過對相應(yīng)的血液混合物進行測量以測定抗凝血漿中分析物濃度，對血液進行抗凝處理效果的相關(guān)信息是有用的，與抗凝血中分析物性質(zhì)相關(guān)的信息同樣有用。
在血液和試劑混合物測量中適量抗凝劑對該測量的影響應(yīng)該是可忽略的。對血液和試劑混合物的測量應(yīng)產(chǎn)生與對血液和已添加適量抗凝劑的試劑但其他一切是相同的混合物測量的相同結(jié)果。這并不是實施本發(fā)明絕對的必要條件，但其提供了本發(fā)明優(yōu)選的實施方法，其中該方法是用抗凝血樣、抗凝血漿樣品等進行校準并確保精度的，通過對照法或準確的實驗室法已獲知這些生物流體的分析物濃度。對適量抗凝劑的不敏感性也使得抗凝血漿樣品能用作為對照，對其定期分析對于確定本發(fā)明方法實施的可靠性是重要的。
在本發(fā)明方法實施中，分析物可視為在細胞容量和抗凝血血漿容量之間分布的。假定的抗凝血分析物容量的概念描述了該分布。該假定的分析物容量Vh是一種設(shè)想或假定的包含所有分析物并且具有與抗凝血漿相同的分析物濃度的血液或抗凝血的容量。該Vh一般較血液或抗凝血的血漿容量大，這是因為具有分析物濃度的抗凝血的細胞溶來容量大于零。在本發(fā)明方法實施中，Vh根據(jù)血液的特性來確定，簡而言之或者是事先已知的或者是通過實施本發(fā)明方法測定的。血液的這些特性是容量和血細胞比容，以及可能的分析物濃度。Vh和血液已知或測定的特性之間的關(guān)系是獨立測定的且在本發(fā)明實施之前就已知了。對于分析物濃度PT，用作實施例描述了本發(fā)明，Vh通過血漿容量和29％的抗凝血細胞容量之和確定，見實施例2。在實施本發(fā)明方法中，抗凝的血漿容量和細胞容量利用血容量和血液血細胞比容得到測定。
在本發(fā)明方法的小實驗室實施中，血液預(yù)期體積和試劑預(yù)期體積的分配具有良好精確度。血容量是預(yù)期的血容量，試劑體積是預(yù)期的試劑體積。因此，所測定的血液血細胞比容值和血液分析物濃度值是真實值?？鼓獫{中分析物濃度可以根據(jù)血液中分析物濃度和抗凝血的Vh來確定，如下詳述。
在本發(fā)明方法的接近患者實施中，血液預(yù)期體積和試劑預(yù)期體積并沒有很好地得到精確分配。血容量亦非所預(yù)期的血容量，而試劑體積也不是所預(yù)期的實際體積。因此，所測定的血細胞比容值和分析物濃度值并不是真實值；因此它們被稱為表觀值。為將未知的血容量和表觀的分析物濃度轉(zhuǎn)換為真實的對應(yīng)值，血液的血細胞比容應(yīng)當是已知的。知道血液真實血細胞比容是本發(fā)明方法接近患者實際操作的先決條件。已知和表觀的血細胞比容值用于測定真實的血容量。真實的血容量和真實的血細胞比容則用于測定Vh。通過利用Vh和所測定的(表觀的)分析物濃度測定假定的抗凝血漿的分析物濃度?；蛘?，測定真實的分析物濃度，并通過利用該值、真實的(已知的)血細胞比容和預(yù)期的血容量測定假定的抗凝血漿中分析物濃度。
對于措詞‘預(yù)期的’，在上下文中預(yù)期的血容量和預(yù)期的試劑體積指血液的理想體積以及試劑的理想體積，根據(jù)試驗方案，它們互相混合。在小實驗室環(huán)境中，獲得的該預(yù)期的體積具有足夠的精確度。在接近患者環(huán)境中，血液體積和試劑體積大概在該預(yù)期值得50％-150％。對于這兩個體積，該范圍并不是必然一樣的，且該范圍也不是必然對稱分布在該預(yù)期值周圍。因為混合物的組合總是或多或少地不定，所以通過分析混合物分別測定的血細胞比容和分析物濃度可能總被認為是血液的表觀血細胞比容和血液的表觀分析物濃度。本發(fā)明方法的實施者應(yīng)當回答的問題是達到的血液和試劑的預(yù)期體積是否具有足夠的精確度。如果該回答是沒有，那么對于根據(jù)本發(fā)明方法分析物濃度的測定需要血液的血細胞比容值。在本說明書中，本發(fā)明方法的小實驗室實施假定達到預(yù)期的體積而接近患者實施假定沒有達到預(yù)期的體積。
在本發(fā)明方法實施中，血液和試劑混合物組合的改變被視為由于血容量改變而帶來的改變。試劑體積被假定為預(yù)期的。在本發(fā)明方法的接近患者實施的真實血容量測定中該假設(shè)是關(guān)鍵的。該假設(shè)的基礎(chǔ)是在血液和試劑混合物中僅有血液濃度對分析物濃度測定產(chǎn)生影響。通過兩個推理過程證明這是正確的。一個是在所使用的測定條件下試劑濃度是相對固定的。另一個是試劑被設(shè)計為以便其在反應(yīng)混合物中的濃度幾乎不影響測定反應(yīng)，并因此幾乎不影響測定的分析物濃度。根據(jù)本發(fā)明，試劑體積較血容量大五倍或更多。在極值處，反應(yīng)混合物中的試劑濃度是5/(5+1)或0.83(83％)。如果試劑體積減少到預(yù)期體積的50％，試劑濃度變?yōu)?.5/(2.5+1)或0.71(71％)。因此，在五倍極限處，試劑體積減少50％僅導(dǎo)致試劑濃度減少14％。試劑預(yù)期體積對預(yù)期血容量的比值越高，效果則越小。此外，帶有過量活性物質(zhì)的試劑以及在反應(yīng)混合物中的反應(yīng)幾乎不受試劑濃度的影響。試劑體積與預(yù)期體積的偏差可能會以三種方式影響反應(yīng)混合物。其可能改變混合物的試劑濃度，改變混合物總體積以及改變混合物的血液濃度。這些改變中的兩種并不重要試劑濃度改變和總體積改變。僅有的改變，也就是說重要的改變是血液濃度的改變。血液和試劑混合物的總體積改變值得更加注意。理論上，總體積并不影響分析物濃度測定。只要組合是相同的，小體積和大體積就具有相同的分析物濃度。但是實際上存在著限制。在很大體積下，容器可能溢出。而在很小體積下，測量無法進行。不超過總體積可以改變的極限，就不影響測定，應(yīng)當對本發(fā)明方法的每種方法都確定該極限。
對血液和液體試劑混合物進行的兩次或更多次測量可以是現(xiàn)有技術(shù)所包含的任何類型的測量。該測量可以是電磁的、電的、磁的、流變學(xué)的、測熱學(xué)的、化學(xué)計量的或時間的。電磁測量包括各種各樣的電磁輻射測量可見的紫外線的、紅外光、微波、無線電波等等。電測量包括各種各樣的電學(xué)現(xiàn)象測量例如電阻、阻抗、電壓、電流和電容。熱測量包括溫度和相關(guān)分析物?；瘜W(xué)計量測量包括各種各樣的計數(shù)細胞計數(shù)和放射性核素裂變計數(shù)等等。在優(yōu)選的實施中，對每種分析物選擇一種測量法，但這決不是必要的。兩次光學(xué)測量，如在兩個波長處測量，可以線性組合以獲得兩種分析物濃度測定。或者，在相同波長處進行兩次或更多次的光學(xué)測量，但時間要分開，可用于測定兩種分析物濃度?；旌衔镏袃纱伟l(fā)生事件之間的時間是上述的一種測量。測定兩種分析物濃度需要兩次或更多次測量，而測定三種分析物濃度需要三次或更多次測量，等等。在本發(fā)明方法的實施中，基于流變學(xué)現(xiàn)象對混合物進行光學(xué)測量和時間測量。光學(xué)測量用來測定血細胞比容，流變學(xué)測量用來測定PT。凝血時間使用流變學(xué)測量得到測定。凝血時間可用于測定任何促凝的分析物濃度例如活化部分凝血酶原時間(APTT)或活化凝血時間(ACT)。
在本發(fā)明方法中，短語‘分析物濃度’屬于為物質(zhì)的任何一種特性，也就是說與一些可檢測的或設(shè)想的每一體積單位實體份數(shù)的數(shù)量相關(guān)。因此分析物濃度實際上是化學(xué)計量的。血液中分析物濃度測定與上述每單位體積血液的實體份數(shù)數(shù)量測定有關(guān)。如果血液是稀釋的，則分析物濃度下降。這并不一定適用于給定表達方式的分析物濃度。給定表達方式分析物濃度并不一定與一些可檢測的或設(shè)想的實體濃度成比例。一個例子是酸度。酸度是一種與設(shè)想的每單位體積H+離子數(shù)量相關(guān)的分析物濃度。酸度通常用pH表示。顯然pH表示的酸度并不與H+離子的濃度成比例。通過非成比例表示的分析物濃度可以再表示為成比例的。例如，通過pH表示的酸度可以通過對pH取10次方再表示為酸度，也許能變成為成比例的。分析物濃度的另一個例子是凝血酶原時間(PT)。該分析物與凝血因子的濃度有關(guān)，特別是與凝血因子II、VII和X有關(guān)。因此，PT的測定可視為分析物濃度的測定。PT通常所使用的表示方式是凝血時間和INR。通過凝血時間或INR表示，PT濃度并不與凝血因子的濃度成比例。對于本發(fā)明方法的實施，重要的是按比例表示的血細胞比容；在本發(fā)明方法實施中，其它分析物濃度測定可以通過任何成比例的或不成比例的表示方式表示。某些測定程序，特別是在此所公開的計算程序需要按比例表示的分析物濃度。為確定按比例表示的分析物濃度，應(yīng)當檢測所測定的表觀分析物濃度與反應(yīng)混合物中血液濃度是否成比例。表1中的實驗數(shù)據(jù)提供了對血細胞比容這樣的一種檢測。
在本發(fā)明的接近患者實施中，按比例表示的分析物濃度提供了對血液中分析物濃度直接了當?shù)臏y定。如果血液中表觀的和真實的分析物濃度分別是At和Aa，則表觀的和真實的(已知的)血細胞比容分別是HCTa和HCTt。以下應(yīng)用了
At＝Aa×HCTt/HCTa 方程式1血液中真實的分析物濃度和真實的血細胞比容足以測定抗凝血中分析物濃度，因為在那時血容量可以假定為預(yù)期的。
如果分析物濃度并不按比例表示，則根據(jù)以下方程式計算可用于測定真實的血容量Vbt＝Vbi×K×R/(R-K+1) 方程式2真實的和預(yù)期的血容量分別是Vbt和Vbi。K是HCTa與HCTt的比值，R是預(yù)期的試劑體積Vri與預(yù)期的血容量Vbi的比值。
為檢測分析物濃度是否按比例表示，血液和試劑混合物中的血液濃度是必須的。其與混合物中的其他濃度可用下列方程式來測定X＝(Q+Q×R)/(Q+R) 方程式3在方程式3中，R是Vri/Vbi，同樣地在方程式2中，Q是Vb/Vbi。方程式3給出了標準化的濃度值，即當Q為1時濃度值為1(100％)。當R趨向于無窮大時，方程式3得出X等于Q。在通過利用不同體積的幾種校準血樣以覆蓋大范圍的血細胞比容值的血細胞比容校準中，方程式3是方便使用的，見實施例1。在本發(fā)明方法目前優(yōu)選的實施中，R是35。在該條件下，X和Q之間的差異僅在高Q值處明顯。
一種常用的測定假定的抗凝血漿分析物濃度App的方法是通過使用假定的分析物容量Vh的概念，詳述如下。根據(jù)表示為抗凝血漿中分析物濃度的抗凝血中分析物濃度測定血液中分析物濃度。為做到這一點，使用適量的在其抗凝血漿中具有已知分析物濃度的抗凝血校準物校準分析物濃度測定。這些校準物具有已知的平均假定分析物容量Vhm。適量的校準物是在進行了假定的抗凝處理后血液的預(yù)期體積。測定的分析物濃度對Vh的函數(shù)關(guān)系是作為dA/dVh微分建立的。測定了血液中分析物濃度Ab及其相關(guān)的Vh。在假定的抗凝血漿中所期望的分析物濃度App獲得自App＝Ab+∫(dA/dVh)×dVh 方程式4從Vh到Vhm積分。在實施例3中，根據(jù)方程式4測定App。在實施例中，微分通過ΔA/ΔVh近似，即通過將A，(A2-A1)中的宏觀改變除以Vh，(Vh2-Vh1)中的宏觀改變。
在某種程度上，分析物濃度隨用于其測定的方法而變。因此，方法的特征通常是要標明的。一個例子是分析物濃度—血細胞比容。血細胞比容可以通過測量血細胞體積或通過測量光得到測定。取決于所使用的方法，分析物濃度可以被分別認為是測定體積的血細胞比容或測量光度的血細胞比容。如果對所使用的方法沒有意見，則該解釋可以擴寬或縮窄?？s窄的解釋是對照法已經(jīng)使用了。擴寬的解釋是任何已知的方法已經(jīng)使用了。在本發(fā)明方法中，短語‘分析物濃度’應(yīng)當解釋為擴寬的，最不受限的方式。在本發(fā)明方法的上下文中，如果血液進行了假定抗凝處理并且在該抗凝血漿中測定分析物濃度，短語‘在假定抗凝血漿中的分析物濃度’指通過任何方法所獲得的分析物濃度。上述假定的措辭僅僅表明該物質(zhì)不在手邊，未被制備，僅僅是設(shè)想的。在本文的許多地方中，其已被省略。增加其是為了澄清，但或許失去了其目的。在檢驗本發(fā)明方法準確性和精確度的優(yōu)選實施中，通過準確的實驗室法測定抗凝血漿中分析物濃度。通過實施本發(fā)明方法測定的假定的抗凝血漿中分析物濃度并不一定與該值一致。如果對實際抗凝血漿測定事實上已進行的話，本發(fā)明方法的精神或要點是通過實施本發(fā)明方法測定抗凝血漿分析物濃度獲得的值接近于應(yīng)已獲得的值。
在本發(fā)明方法中，血細胞比容通過任何已知能測定血細胞比容的方法得到測定。在優(yōu)選的實施中，血細胞比容通過測量800nm-1100nm波長的透射光而得到測定。使用具有已知血細胞比容值的血樣對血細胞比容測定進行校準。該血細胞比容值通過準確的實驗室法獲知。如上所指出的，為實施本發(fā)明，測量值不必被轉(zhuǎn)換為血細胞比容，它們可以轉(zhuǎn)換為與血細胞比容相關(guān)的其它分析物濃度或水平，或者它們根本就不需要轉(zhuǎn)換。
在本發(fā)明方法中，短語‘(假定的)抗凝處理對血容量和血細胞比容的影響’屬于該處理特有的或一般的影響。
三種類型的抗凝處理是臨床診法中通常使用的，用EDTA、肝素或檸檬酸鹽抗凝。這些處理中的兩種，用EDTA抗凝和用肝素抗凝，對血容量和血細胞比容僅具有很小的作用。作為通常所采用的檸檬酸鹽抗凝處理則具有明顯的效果。標準的檸檬酸鹽抗凝處理包括增加一體積的0.11M或0.13M三檸檬酸鈉到九體積的血液中。這影響了總血容量和血細胞比容。檸檬酸鹽溶液可能導(dǎo)致血細胞張力過高和收縮，必須要考慮。如果施加檸檬酸鹽到具有一體積Vb和血細胞比容HCT的血液中抗凝，抗凝血體積及其血細胞比容，Vbcit和HCTcit分別由如下方程式給出Vbcit＝Vb×10/9≈1.111×Vb 方程式5HCTcit＝HCT×9/10≈HCT/1.111方程式6該假定的抗凝血的血漿容量和細胞容積，Vpcit和Vccit分別由如下方程式給出Vpcit＝Vb×(1.111-HCT) 方程式7Vccit＝Vb×HCT 方程式8如果已知血細胞出現(xiàn)x％收縮，則血細胞比容減少x％并且血漿體積增加了細胞所縮小的體積。
在本發(fā)明優(yōu)選的實施中，使用適量在其抗凝血漿中具有已知分析物濃度的抗凝血校準物校準血液中分析物濃度測定。在校準程序中，對于每一校準物相應(yīng)的血液，血細胞比容值獲得自該校準物可被測定的血細胞比容。該血細胞比容提供了對每一校準物假定的分析物容量的測定，詳述如下。例如，如果本發(fā)明方法要在具有10μL預(yù)期的血容量和350μL預(yù)期的試劑體積以及假定的抗凝處理是檸檬酸鹽抗凝上進行，則根據(jù)方程式4，該方法通過利用11.11μL的檸檬酸鹽抗凝血校準。獲得了校準物的表觀血細胞比容。因為已使用的是11.11μL而非預(yù)期的10μL，校準物血細胞比容非常接近于表觀血細胞比容除以1.111的值。為了達到最好的準確性，表觀血細胞比容應(yīng)當除以方程式3的標準化濃度。代1.111的Q和35的R產(chǎn)生了標準化濃度，1.108的X值。
測定假定的分析物容量需要可通過獨立實驗獲得的數(shù)據(jù)?？鼓俣ǖ姆治鑫锶萘縑h是包含所有分析物以及具有與抗凝血漿相同濃度的體積。在本發(fā)明優(yōu)選的實施中，Vh模型是血漿容量和抗凝血的血細胞容量級分之和。如果級分是b并且抗凝血體積為Vab，抗凝血的血細胞比容是HCTab，則Vh給出自Vh＝Vab×(1-HCTab+b×HCTab) 方程式9對于檸檬酸鹽抗凝而言，根據(jù)方程式5和6，Vab和HCTab獲得自血容量Vb和血液血細胞比容。在獨立實驗中確定了級分b。實施例2描述了使用檸檬酸鹽抗凝血和分析物濃度PT進行的這樣實驗。在該情況下b被認為是0.29。
如果血液中分析物濃度測定已用適量的在抗凝血漿中具有已知分析物濃度的抗凝血校準物校準，如上所述，所測定的血液中分析物濃度Ab等于假定的抗凝血中分析物濃度，只要其Vh等于該校準物的平均Vh，Vhm。如果Vh不同于Vhm，且分析物濃度按比例表示，假定的抗凝血漿中的分析物濃度App可通過下列表達式測定App＝Ab×Vhm/Vh 方程式10因此，如果分析物濃度按比例表示且假定的分析物容量概念為平均值，則所期望的結(jié)果App能方便地獲得。如果分析物濃度并不是按比例表示的，則其可以再表示為成比例的。真是那樣要求的話，之后方程式9因此能得到應(yīng)用，分析物濃度可又再表示為最初的表達式。上述所描述的獲得假定的抗凝血中分析物濃度的程序恰恰是許多通過實施本發(fā)明方法能獲得的假定的抗凝血漿中分析物濃度的可能程序中的一個例子。本發(fā)明方法的實施利用了一些表達式測定血液血細胞比容和血液分析物濃度。很明顯從上可知，表達式取決于校準程序和校準物。無論是哪一種表達式，本發(fā)明方法的實施提供了一種抗凝血漿中分析物濃度可被測定的方法，而無須制備抗凝血漿。
值得注意的是，在超出一些分析物濃度的范圍外，成比例表示總是可以獲得。血液的分析物濃度或較好地在血漿中具有已知分析物濃度的抗凝血在一些表達式或在測定抗凝血分析物濃度中失效的程序中總是可以得到利用的。通過改變抗凝血體積和將抗凝血濃度，方程式3的X，對分析物濃度表達式作圖，通過給定的表達式抗凝血濃度可以表示為分析物濃度的函數(shù)。在分析物濃度范圍內(nèi)，其包括了抗凝血濃度1，在此抗凝血濃度隨著分析物濃度連續(xù)地或升或降，分析物濃度的函數(shù)被定義為該分析物濃度的比例表達式。
在本發(fā)明方法的小實驗室實施中，血容量是已知的，因為其為預(yù)期的血容量。所測定的表觀血細胞比容和表觀分析物濃度是血液真實的血細胞比容和真實的分析物濃度。利用這些血液的真實值，測定了抗凝血中分析物濃度。在本發(fā)明方法的優(yōu)選實施中，用在其抗凝血漿中具有已知分析物濃度的抗凝血校準物校準分析物濃度測定，如同通過準確的實驗室法所測定的。測定這些校準物與校準相關(guān)的血細胞比容。因此獲知了校準物平均血細胞比容以及血液血細胞比容。通過利用所測定的血液分析物濃度、血液血細胞比容和校準物平均血細胞比容，測定了假定的抗凝血中期望的分析物濃度。假定的分析物容量的概念對于該測定是有用的。根據(jù)所期望的結(jié)果可從血液血細胞比容和血液分析物濃度獲得，存在著無數(shù)程序上的改變。為了使給出這種可能性的概念，提供了例子。另外，需要將血液的已知分析物濃度和血細胞比容轉(zhuǎn)換為假定的抗凝血漿的分析物濃度的數(shù)據(jù)可能有許多種形式，如以表格的形式或以兩個或更多個可變函數(shù)的形式。
在本發(fā)明方法的接近患者實施中，(假定的)抗凝血分析物濃度測定以類似于小實驗室實施來進行。不同之處在于事實上血液和試劑預(yù)期的體積無法實現(xiàn)。因此，血液和試劑混合物的組成是不精確的。為彌補該缺陷，血液的血細胞比容應(yīng)當是已知的。由于有已知的或真實的血細胞比容HCTt以及測定的表觀血細胞比容HCTa，通過利用方程式2測定了真實的血容量。由于有真實的血容量、真實的血細胞比容值以及相應(yīng)的(表觀的)分析物濃度，假定的抗凝血漿中的分析物濃度得到測定。進行該測定優(yōu)選的方法是通過利用如上所述的假定的分析物濃度的概念。如上所指出的，存在著許多進行該操作的方法。方程式3提供了一種可能性；表格和多變量函數(shù)是另一種可能性。如果分析物濃度成比例表示，則假定的抗凝血漿中分析物濃度的測定是直接了當?shù)?。方程?給出了真實的分析物濃度。通過利用方程式9和假定的分析物概念，真實的分析物濃度值、真實的(預(yù)期的)血容量和真實的(已知的)血細胞比容用來測定假定抗凝血中期望的分析物濃度。在本發(fā)明方法的接近患者實施中，通過對血液和試劑相同的混合物進行兩次或更多次測量，測定表觀的血細胞比容和表觀的分析物濃度是關(guān)鍵的。共同的混合物將血細胞比容值和表觀的分析物濃度值連接起來，使得期望的測定可以發(fā)生。除必須做的之外，測定要便于進行。
存在著許多適于利用本發(fā)明方法測定的醫(yī)學(xué)診斷分析物濃度。這些分析物濃度包括，但不限于，包括凝血酶原時間(PT)、血纖蛋白原、血纖蛋白原降解產(chǎn)物、D-二聚體、活化部分凝血酶原時間(APTT)、C-反應(yīng)蛋白(CRP)、膽固醇和葡萄糖的一組分析物濃度的分析物濃度。
抗凝血漿將被解釋為寬的含義。其包括所有類型的獲得自血液的非凝結(jié)液體，被用作分析物濃度測定的樣品。所述液體包含在下面組的液體中，但不限于該組中的成員。該組液體由血清肝素化血漿、用水蛭素防凝血漿、草酸鹽抗凝的血漿、檸檬酸鹽抗凝的血漿、異檸檬酸鹽抗凝的血漿、EDTA-血漿和熱處理過的血漿組成。
在本發(fā)明方法的實施中，血液可以進行(假定的)抗凝處理，包括添加選自檸檬酸、異檸檬酸、EDTA、草酸、肝素和水蛭素的鈉、鉀和鋰鹽的抗凝劑。
在本發(fā)明方法中，對血液和試劑混合物進行的兩次或更多次測量視為在18℃-40℃的室溫下進行的。為達到這一點，校準在該提及范圍之內(nèi)的一些溫度下進行，并且校準參數(shù)被確認為是溫度函數(shù)。
在本發(fā)明方法的小實驗室實施中，除期望的假定抗凝血分析物濃度之外，獲得了血液的血細胞比容。該血細胞比容值可用來增加分析物濃度測定的可靠性。該值可與參考值或先前所測定的值相比較。如果血細胞比容值是不合理的，可作為分析物濃度測定不合格的依據(jù)。
在接近患者場所處，大多數(shù)包含在已知血細胞比容值中的信息被用于確定與預(yù)期體積的試劑混合的血液體積和/或真實的分析物濃度。然而，一些極值可能建立在HCTa和HCTt之間最大的差異上。這樣的極值可用來增加分析物濃度測定的可靠性。越出允許范圍的差異能使分析物濃度測定不合格。同樣地，隨著時間過去的重復(fù)測定能給出具有偏差的患者血細胞比容的指示，于是需要重新測定。
PT是通過實施本發(fā)明方法可在假定的抗凝血漿中測定的分析物濃度。通過對血液和試劑混合物的一次或多次測量測定了用INR表示的PT。通過將非比例INR表示的PT成比例的表示為PT％，測定通過再表示的PT可容易地進行。其可通過方程式PT％＝1/(INR×0.028-0.018)進行。然后，通過一些可選擇的程序測定假定的抗凝血漿的PT％。在公布假定的抗凝血漿PT之前，用PT％表示的PT可再表示為用INR表示的PT。通過使用所提及函數(shù)的反函數(shù)INR＝[(l/PT％)+0.018]/0.028做到這一點。PT的再表示不是必須的。在實施本發(fā)明的優(yōu)選程序中，不進行PT的再表示。假定抗凝血漿中的PT通過利用INR表示的PT和血液血細胞比容測定。這樣的程序可能是優(yōu)選的，因為它們包含很少的計算。
目前工作的主題將進行修改以更好地適應(yīng)進行接近患者試驗所需要的濕化學(xué)法。根據(jù)規(guī)定，濕化學(xué)測定需要樣品在試劑中稀釋。在本發(fā)明方法的所有實施中，樣品是血液并且最小的稀釋度是五倍。為通過光透射測定血細胞比容，血液的稀釋度必需避免短的光程長度。短的光程長度意味著用于血液和試劑混合物的容器小的入口尺寸，其干擾了本發(fā)明方法的實施。本發(fā)明方法預(yù)期的實施包括手工步驟，如血液和試劑的接觸和混合，以及試樣容器尺寸的必要調(diào)節(jié)。容器入口尺寸小于4mm就使得該手工步驟不能實行乃至根本就不可能進行。在本發(fā)明方法優(yōu)選的實施中，使用了帶有8mm圓形截面的管狀容器。在管狀容器中可接受的橫截面即光程在4-16mm。同樣地血樣體積也有其的應(yīng)用極限。在實施本發(fā)明方法中，血液的預(yù)期來源是戳指尖、人工獲取血液并將其轉(zhuǎn)移到容器內(nèi)的試劑中。血樣應(yīng)當在5μL-40μL。容器尺寸和試劑體積瘀血容量的比值限制血容量在100μL-1100μL。就以下所要解釋的，僅在有限的800-1100nm波長范圍內(nèi)光線是可接受的。在最優(yōu)選的實施中，管狀容器的橫截面尺寸在5mm-15mm，血容量在5mL-20mL，試劑體積在150μL-600μL。
在本發(fā)明方法優(yōu)選的實施中，通過測量穿過血液和試劑混合物透射的光強度測定血細胞比容。在目前最優(yōu)選的實施中，也測量了僅穿過試劑透射的光強度，血液血細胞比容確定自所測量的穿過試劑透射的光強度和穿過血液和試劑混合物透射的光強度的比值。通過該優(yōu)選的實施，有助于消除實驗偏差。偏差可能是來源于光源、試劑的光學(xué)性質(zhì)或容器的光學(xué)性質(zhì)。在優(yōu)選的實踐中，光波長在800nm-1100nm。該光位于光譜的近紅外部分，幾乎無法為人眼所檢測到。該波長范圍內(nèi)的光是優(yōu)選的，這是因為氧飽和和氧耗盡形式的血紅蛋白對其的吸收不相上下，且吸光度相對較小。低吸光度是重要的，因為其提供了使用相對長的光程長度，如在本發(fā)明目前最優(yōu)選的實施中用作容器的透明塑料管的直徑，8mm。在超過1100nm的波長處，水對光的吸收明顯增加了血細胞比容光學(xué)測定的困難。在800nm以下波長處，在600nm-800nm，兩種所提及的血紅蛋白形式吸收不同，籍此導(dǎo)入了誤差來源。在更短的波長處，血紅蛋白的吸光度非常強的。這不是排除了優(yōu)選的4mm或更大的光程長度，就是迫使血液在試劑中進行過度的稀釋。
在本發(fā)明方法的實施中，預(yù)期體積血液和預(yù)期體積試劑的混合物能以多種不同的方法獲得。其落入本發(fā)明范圍內(nèi)，血液可以首先被稀釋，如在9g/L的氯化鈉中，然后與試劑混合?；蛘撸噭┛煞殖蓭讉€組分，如第一組分、第二組分等。在本發(fā)明方法的實施中，試劑體積與血容量最終的比值是關(guān)鍵的。血液和試劑的接觸是當血液和試劑之間反應(yīng)所必需的最后組分增加時發(fā)生的。
凝血酶原時間(PT)是通過本發(fā)明方法的實施可以在假定的抗凝血漿中測定的分析物濃度。在下列應(yīng)用的優(yōu)選實施中。血液和PT試劑的接觸意味著為凝結(jié)反應(yīng)所必需的最后組分開始添加入血液和PT試劑的混合物中。該接觸確定了凝結(jié)反應(yīng)的開始和測量時間的開始。當首次檢測到血凝塊時，停止時間測量并獲得凝血時間。根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)，任何用于測定凝血時間的方法都可用于本發(fā)明實施中凝血時間的測定。這些方法包括通過流變學(xué)、機械學(xué)和光學(xué)手段對血凝塊的檢測。在優(yōu)選的實施中，該血凝塊通過牽引鉤檢測。通過該手段提供了簡單自動化的血凝塊檢測。當凝塊安裝在牽引鉤桿上并從透過容器的光束處除去時，到達檢波器的光強度明顯增加了。這些大量增加的光強度是容易得到檢測并且可用于自動記錄凝血時間。其優(yōu)于用具有已知血漿INR值的抗凝血校準的PT測定。通過準確的Owren PT實驗室法測定血漿INR值，是優(yōu)選的。通過Quick PT實驗室法測定的血漿INR值也可以使用，但需要大量的樣品以獲得可比較的準確性。
裝置提供了用于進行本發(fā)明方法的測量和測定裝置。本發(fā)明裝置包括，1)數(shù)據(jù)處理器，2)只讀存儲器，3)血細胞比容校準數(shù)據(jù)，所述血細胞比容校準數(shù)據(jù)存儲在所述只讀存儲器中，4)所述分析物校準數(shù)據(jù)，所述分析物校準數(shù)據(jù)存儲在所述只讀存儲器中，5)對血液和試劑混合物進行兩次或更多次測量的裝置。
數(shù)據(jù)處理器可進行血液血細胞比容、血液分析物濃度以及假定的抗凝血漿分析物濃度測定所必需的所有計算。血液血細胞比容及血液分析物濃度測定所必需的校準數(shù)據(jù)存儲在與處理器相關(guān)的只讀存儲器中。在某種意義上只讀存儲器是一種功能性只讀存儲器，操作人員無法改變所存儲在只讀存儲器中的數(shù)據(jù)。只有廠商能將數(shù)據(jù)存入只讀存儲器中。與使用者相關(guān)的一類數(shù)據(jù)可為該使用者或醫(yī)療中心工作人員所存入。這類數(shù)據(jù)涉及個體血液、血液所屬個體身份、日期以及時間和位置的信息。
一個本發(fā)明裝置優(yōu)選的實施方案，特征在于容器座中插入了裝有血液和試劑混合物的管狀容器。當在適當位置時，管狀容器的縱軸和地球重力方向可形成一個25-65度的角度。在優(yōu)選的實施中，容器是其中凝血時間能通過牽引鉤進行測量的塑料管。當血凝塊安裝在牽引鉤桿上時，如果容器傾斜則能更容易地移動。血凝塊僅需要升起一部分，如同如果該容器是垂直的情況一樣升高以抗地球重力場。這有助于更可靠的手工或自動測量凝血時間。在優(yōu)選的實施方案中，與地球重力場方向相比管狀容器傾斜25-65度。
試劑盒提供了用于假定的抗凝血漿分析物濃度測定的設(shè)備試劑盒。本發(fā)明試劑盒單獨標記有識別標志，其標明每個試劑盒所屬批次。本發(fā)明試劑盒包含試劑和本發(fā)明裝置。本發(fā)明試劑盒的每個試劑盒都包含用于進行本發(fā)明方法的試劑。本發(fā)明試劑盒的每個試劑容器都具有識別標志，其與本發(fā)明試劑盒的識別標志相關(guān)。每個本發(fā)明試劑盒都包含一個或多個本發(fā)明裝置。在一個本發(fā)明試劑盒中的每個本發(fā)明裝置都具有識別標志，該識別標志與本發(fā)明試劑盒上的識別標志相關(guān)。每個本發(fā)明試劑盒都標有失效期；相同的失效期適用于包含在每個本發(fā)明試劑盒中試劑和本發(fā)明裝置。在上下文中，‘相關(guān)的識別標志’意味著這些識別標志在某些方面是相同的。識別標志可以是相同的，或可以具有共同的特征，即標明它們屬于一組。試劑盒的識別標志是其批號或其功能等價物。相關(guān)的識別標志可以是相同的批號或功能等價物，就試劑盒而言，或是批號或是功能等價物包含了相同的數(shù)字和字母符號串等等，以標明該試劑盒、試劑以及本發(fā)明裝置的識別標志，所述試劑盒、試劑和本發(fā)明裝置組成了應(yīng)當共同使用的裝置。相關(guān)的標志甚至可以是完全不同的，并且僅通過標明它們有聯(lián)系的信息而聯(lián)系。該信息能夠在用戶能訪問的寄存器中顯示或標在試劑盒之上或試劑盒內(nèi)部，如對于使用的指令。相關(guān)的識別標志甚至可以是純功能性的。裝置僅和與該裝置具有相同試劑盒批號的試劑起作用。
試劑盒具有失效期。相同的失效期適用于作為試劑盒一部分的試劑和裝置。當過了失效期時，試劑盒不被允許使用，試劑和裝置也不允許使用。
相關(guān)的識別標志和共有的失效期的作用是用于確保裝置已進行維護，即在某個確定的時段內(nèi)已檢驗具有相關(guān)功能。在廠家將試劑盒投放市場待售時，裝置已進行了質(zhì)量保證程序。從那時候起直至失效期，裝置可以使用。
本發(fā)明裝置具有其中校準數(shù)據(jù)用于血細胞比容和分析物濃度測定的只讀存儲器，所使用的試劑是與本發(fā)明裝置相同的本發(fā)明試劑盒的一部分。通過該機制，本發(fā)明裝置和試劑已同時得到校準。
本發(fā)明試劑盒具有允許定期維護的本發(fā)明裝置與已同時校準的試劑一起使用的特點。也就是說，可靠性增強的測量，大實驗室所特有的，被應(yīng)用在接近患者測定場所處。
本發(fā)明試劑盒的使用設(shè)想包括了在接近患者測定場所和小實驗室之間的交流，后者包括了大實驗室的部門。本發(fā)明方法的首次實施，在小實驗室中對某一患者的血液或抗凝血使用了本發(fā)明試劑盒的本發(fā)明裝置和試劑。除假定抗凝血分析物濃度之外，在小實驗室處實施本發(fā)明方法也給出患者血液的血細胞比容。該血細胞比容和患者的身份、日期和時刻存入本發(fā)明裝置存儲器中。因此本發(fā)明試劑盒為進行患者分析物濃度的接近患者分析作準備。所述疑患者血液的接近患者分析可提供分析物濃度的測定，該測定幾乎不受不能精確分配血液和試劑體積的影響，只要血細胞比容的改變是適度的即可。一般地，除非在大量失血和輸血情況下，血細胞比容改變是緩慢的。隨著時間過去給定個體的血細胞比容傾向于穩(wěn)定。為檢驗血細胞比容以及其它理由，推薦在本發(fā)明方法實施者和小實驗室之間進行定期交流。

發(fā)明內(nèi)容
概述通過分析預(yù)期體積的血液和預(yù)期體積的試劑混合物，提供了用于抗凝血漿分析物濃度測定的方法。所述假定的抗凝血漿來自于進行了假定的抗凝處理的血液。所述本發(fā)明方法特點在于a)所述試劑的預(yù)期體積較所述血液的預(yù)期體積大五倍或更多，b)對所述混合物進行兩次或更多次測量，d)測定了所述血液血細胞比容，e)測定了所述血液的的所述分析物濃度。
提供了測量和測定裝置。測量和測定裝置可對血液和試劑混合物進行兩次或更多次測量，還可進行必要的計算以測定假定抗凝血漿分析物濃度。本發(fā)明裝置包括1)數(shù)據(jù)處理器，2)只讀存儲器，3)用于血細胞比容測定的校準數(shù)據(jù)，所述血細胞比容校準數(shù)據(jù)存儲在所述只讀存儲器中，3)用于所述分析物濃度測定的校準數(shù)據(jù)，所述分析物校準數(shù)據(jù)存儲在所述只讀存儲器中，4)對血液和試劑混合物進行兩次或更多次測量的裝置。
提供了用于假定的抗凝血漿分析物濃度測定的設(shè)備試劑盒。一批本發(fā)明試劑盒中的每個都具有識別標志和表示為每個試劑盒所屬批次的失效期。本發(fā)明試劑盒包括1)試劑，所述試劑具有識別標志，所述識別標志與所述設(shè)備試劑盒的所述識別標志有關(guān)，所述試劑具有失效期，其與所述設(shè)備試劑盒的所述失效期相同，2)測量和測定裝置，所述測量和測定裝置具有識別標志，所述識別標志與所述設(shè)備試劑盒的所述識別標志有關(guān)，所述測量和測定裝置具有失效期，其與所述每個設(shè)備試劑盒的所述失效期相同。
很清楚本發(fā)明并不限于特定的實施和所描述的實施方案，因而當然可以改變。也很清楚在此使用的技術(shù)名詞的目的僅是為了描述特定的實施和實施方案，而不是意在限制，因為本發(fā)明的范圍僅由所附加的權(quán)利要求書來限定。
實施例材料和方法制造了一種測量和測定裝置—根據(jù)本發(fā)明的裝置。示意圖參見圖4。該裝置具有其中10mm外徑、63mm長度、聚苯乙烯管的容器能傾斜地插入的容器座。當插入時，約22mm的底部在該容器座內(nèi)。在容器座內(nèi)部，從插入容器的底部起約8mm處，從發(fā)光二極管(940nmLED，Everlight IR204)發(fā)出的一束光直接垂直于該插入的容器，沿著其直徑之一射向光電二極管探測器(900nm最大感光度的光電二極管，Infineon SFH 2030F)。該光電二極管連接有一個運算放大器(在光電壓轉(zhuǎn)換器的插腳2和8之間，Burr Brown OPT 101，其感光區(qū)涂黑)。該放大器將與入射光強度成比例的電壓施加在可編程計算機(Microchip PIC16F873-201/SO)輸入電路的10-比特模擬-數(shù)字轉(zhuǎn)換器(A/D轉(zhuǎn)換器)上。電壓的數(shù)字表示，光的測量，顯示在液晶顯示器(LCD Seiko L167100J)上。該裝置具有一個按鈕，操作人員使用其使PIC與其軟件相互作用。按下該按鈕啟動處理器從軟件的一部分到另一部分的動作或起停動作。在程序的一部分中，該按鈕可以起停PIC的時間函數(shù)，測定凝血時間。存在用于傳送與室溫成比例的電壓到該PIC的另一個模-數(shù)轉(zhuǎn)換器的電路。執(zhí)行該程序相關(guān)的部分，PIC被編程以在LCD上顯示光和凝血時間的測量。PIC存儲了在18-40℃溫度范圍內(nèi)用于PT測定的校準值；NCT和ISI作為溫度函數(shù)。在測定結(jié)束時，顯示血液的血細胞比容和抗凝血的PT活性。在實施例5中，根據(jù)本發(fā)明的測量和測定裝置已重新設(shè)計并備有改良的軟件。當血樣添加并混合時，該裝置具有自動進行起動時間測量的能力。通過光學(xué)裝置自動檢測凝血時間。該裝置在凝塊檢測時自動進行必需的計算，并自動在LCD上顯示分析物濃度測定的結(jié)果。
在本發(fā)明優(yōu)選的實施中，將裝有350μL PT試劑的容器置于樣品座中。測量穿過PT試劑透射的光強度(lo)。將血液添加到試劑中，即與試劑接觸并混合。當接觸時，開始測時。再次測量穿過混合物透射并到達檢測器的光強度(l)。當檢測到血凝塊時，停止測時。在實施例1和3中，精確確定體積的血液添加到PT試劑中。使用了在2μL-20μL范圍內(nèi)可調(diào)整的移液管。在實施例2中，使用了半定量的測定體積裝置platineuse進行添加。在所有的實施例中，使用了精確確定的350μL PT試劑。在所有的實施例中，使用platineuse進行血液試劑的混合以及掛在牽引鉤上檢測血凝塊。在實施例5中，添加20μL的血液或用于校準的抗凝血漿并與400μL PT試劑混合。
帶有10μL環(huán)的塑料的Platineuses，Sevant Oy，Helsinki，F(xiàn)inland是Labora AB，Uplands Vasby，Sweden以貨號007-2510供應(yīng)的。
Owren PT試劑GHI 131來自Global Hemostasis Institute MGRAB，Linkping，Sweden。
解碼的(decoded)血樣、或者用于血細胞比容和血紅蛋白濃度的EDTA抗凝樣品或用于PT測定的檸檬酸鹽抗凝樣品是提交給大學(xué)醫(yī)院(University Hospital)的中心檢驗室，Linkping，Sweden，用于測定的患者血漿樣品。通過準確的實驗室法、所提及的中心檢驗室的常規(guī)程序可獲知EDTA樣品的血細胞比容和血紅蛋白和檸檬酸鹽樣品的PT活性。
臨床實驗，包括解碼的患者樣品的實驗，是與Tomas Lindahl教授合作進行的，并為指定的大學(xué)醫(yī)院的地方倫理委員會所批準。
實施例1使用本發(fā)明裝置分析六個通過準確實驗室法測定的具有已知或真實血細胞比容值HCTt的EDTA抗凝血樣品。每個樣品的血容量(Vb)被添加到350μL預(yù)期體積的PT試劑中并與之混合。預(yù)期的血容量是10μL。在添加及混合血液前后，測量穿過試劑透射的光強度(lo)和穿過混合物透射的光強度(l)。來自于六個樣品中的一個，具44.0％的HCT的樣品6AS也用不同的血容量4、6、8、12、14、16和18μL進行了試驗。這些血樣，分別稱為4S-18S，根據(jù)方程式3基于血液稀釋度賦予HCT值。因此，如4S的HCT為44.0％乘以方程式3中的X，為17.9％。將已知的HCT值對l/lo作圖并進行線性回歸分析。得到了具有r2＝0.98的回歸方程式HCT＝2.03×(lo/l)+9.37。數(shù)據(jù)列于表1及圖1的曲線中。將表1中l(wèi)o/l值代入回歸方程式中得到表觀HCT值。利用方程式2，使用HCTa值和已知的或真實的血細胞比容值測定血容量。所測定的血容量Vbd可與添加的血液的已知體積Vb相比。發(fā)現(xiàn)所測定的血容量是已知血容量的101％±7％(平均±CV)。相同的發(fā)現(xiàn)還出現(xiàn)在HCTa和HCTt的比較中。樣品的血紅蛋白值也是已知的，血紅蛋白(Hb)以克/升對lo/l作圖的線性回歸分析給出了Hb＝7.17×(lo/l)+29.8，具有r2＝0.99，數(shù)據(jù)未給出。在實施例2和實施例3中，方程式HCT＝2.03×(lo/l)+9.37用于產(chǎn)生表觀HCT值。通過利用較預(yù)期體積更小和更大體積的血液，并通過利用方程式3以測定標準化濃度得到應(yīng)用。其僅通過利用有限的樣品就能有權(quán)使用寬的HCT范圍。
實施例2給出了本發(fā)明方法接近患者實施的實施例。兩個檸檬酸鹽抗凝的血樣，樣品1和樣品2，具有已知的HCT值，用于進行根據(jù)本發(fā)明的分析物濃度測定。分析物濃度是PT。該測定在21.5℃的室溫下進行。分別對樣品1和樣品2分析5次和6次。采集血液，使用半定量設(shè)備platineuse與PT試劑接觸并混合。血液體積因此是不精確地分配了。試劑的預(yù)期體積是350μL。patineuse也用于牽引鉤以測定凝血時間。使用樣品2，以濕法進行有目的地采集血液的操作以引起血容量較大的改變，如同在接近患者測定場所處所可能經(jīng)歷的。用INR表示的抗凝血樣抗凝血漿的PT以及其血細胞比容通過準確的實驗室法獲知。對于樣品1該值是INR 1.00和55.3％，對于樣品2是INR2.44。對于抗凝血漿PT的測定HCT值是必需的，因為反應(yīng)混合物的組成不精確。已知的INR值僅用于比較。根據(jù)本發(fā)明抗凝血漿中PT的測定需要對血液和試劑混合物進行兩次或更多次測量。在該實施例中，這些是兩次光學(xué)測量和一次流變學(xué)測量。后者獲得了凝血時間。光學(xué)測量提供了表觀血細胞比容HCTa的測定，如表1中所詳述。流變學(xué)測量提供對PT的測定。通過準確的實驗室法用具有已知的用INR表示的PT的抗凝血校準物校準PT測定。在室溫下，ISI是1.17且NCT是55.2秒。校準物的平均血細胞比容是37.1％?？鼓毎莘e的分析物濃度假定為血漿容量的29％，如在實施例2中所建立的。因此，假定的分析物容量是抗凝血體積乘以(1-HCT+0.29×HCT)。因此，校準物的平均Vh，Vhm，與樣品1的Vh的比值為(1-0.368+0.29×0.368)/(1-0.553+0.29×0.553)或1.23。相應(yīng)地，樣品2的為1.07。假定的抗凝血漿中用INR表示的PT測定如下。通過利用Lindahl等的方程式PT％＝1/(INR×0.028-0.018)，表觀INR值INRa再表示為PT％。通過利用方程式1獲得PT％t表示的血液的真實PT。根據(jù)PT％pcit＝PT％t×Vhm/Vh測定假定的檸檬酸鹽抗凝血漿的PT。通過對樣品2的測定，本發(fā)明的值清楚地得到顯示。在該測定中，血容量波動相當大，因此使得表觀血液PT，(aINR±CV)，為4.21±37.1％。根據(jù)本發(fā)明，假定的抗凝血漿的PT是INR 2.43±2.2％。與通過準確的實驗室法所獲得的INR 2.44幾乎相同。根據(jù)本發(fā)明，樣品1的PT也得到了準確且精確的測定。該實施例以檢測實物模型的方式來實施本發(fā)明。因為實驗簡單，所以測試的血樣是檸檬酸鹽抗凝血。在正式實施本發(fā)明中，血液應(yīng)當是已校正的。并且不使用10μL的檸檬酸鹽抗凝血樣，應(yīng)當使用9μL的血液。減少的血液體積用于彌補由檸檬酸鹽抗凝處理所引起的體積膨脹?；蛘逷T測定應(yīng)當用11.11μL的檸檬酸鹽抗凝血漿和10μL已校正的血液進行校準。眾所周知檸檬酸鹽抗凝處理本身并不影響PT測定。
實施例3從前一天已提交給Linkping大學(xué)醫(yī)院中心檢驗室用于常規(guī)凝血分析的要被丟棄的樣品中隨機選擇一組40個檸檬酸鹽抗凝血樣進行詳細的分析。離心樣品以便血細胞沉淀在血樣管的底部并使血漿在上邊。在兩小時的分析中，通過該中心檢驗室準確的實驗室法測定血漿樣品的INR。將管子蓋上帽子并倒置幾次以再懸浮血細胞。在5分鐘的重懸浮中，通過用350μL的Owren PT試劑與10μL(移液管)的血液接觸，在21.5℃D室溫下分析每個血樣。使用platineuse進行混合和掛牽引鉤。對該混合物進行兩次測量，一次通過光學(xué)測定血細胞比容HCT以及一次通過流變學(xué)(掛牽引鉤)測定凝血時間CT。將該組再分成三組。第一組是由6個樣品組成的低HCT組，具有24.8％的平均HCT。第二組是8個樣品的高HCT組，具有52.9％的平均HCT。第三組是23個樣品的中HCT組，具有33.6％的平均HCT。該中HCT組用來校準本發(fā)明方法的PT測定。其產(chǎn)生了1.11的ISI和48.5秒的NCT。低HCT組和高HCT組的平均血漿INR和血液INR分別是1.81和1.71，及1.68和1.89。與血漿INR相比，對于低HCT組血液INR低5.8％，而在高HCT組中高12.5％。為確定假定的分析物容量Vh的大小，將高和低HCT組的平均血液INR值轉(zhuǎn)換為PT％，一種成比例的PT表示。通過用校準物平均Vh與該組平均Vh的比值乘以平均血液PT％，每組的平均血漿PT％用來測定平均血液PT％。Vh假定為血漿容量與抗凝血細胞容積級分之和。級分在0-1之間變化，以0.1為一級。在每一級分水平處，測定平均血漿INR并與已知平均血漿INR比較。在級分0處，所有的PT按照血漿容量，對于低HCT和高HCT組血漿INR較已知的血漿INR分別大2.5％和小9.1％。對于低HCT組和高HCT組，在0.24和0.33的細胞容積級分處分別存在為零的差。參見圖2。細胞容積級分最優(yōu)值確定為0.29(29％)。當血細胞比容高時，在通過分析血液PT的假定的血漿PT測定中，本發(fā)明的實施在準確性方面產(chǎn)生了可觀的改善。在58.8％的血細胞比容(在抗凝血中相當于52.9％)處，在小實驗室處本發(fā)明的實施可消除12％的根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)通過分析血液的PT測定中產(chǎn)生的系統(tǒng)誤差。在2.5的治療的INR范圍內(nèi)，在55％、60％、65％和70％的血細胞比容處，通過本發(fā)明的實施分別消除了11％、17％、23％和29％的系統(tǒng)誤差。在低血細胞比容處的系統(tǒng)誤差，盡管稍微更少，但通過本發(fā)明的實施也可以消除。在該實施例中，根據(jù)經(jīng)驗在本發(fā)明實施中添加10μL檸檬酸鹽抗凝血而非9μL血液到PT試劑中。在這點上，在該實施例中本發(fā)明的實施是一種實物模型。但是，沒有理由相信結(jié)果與通過利用血液有所不同。
實施例4利用包括方程式4的程序步驟，與實施例3中相同的數(shù)據(jù)組用來實施本發(fā)明。與實施例3一樣也有相同的3組；低HCT組、高HCT組和中HCT組。使用在實施例3中確定的細胞容積級分，每個樣品的Vh確定為10×(1-HCT+0.29×HCT)。對于低、高和中HCT組，平均Vh、Vhm分別為8.24μL、6.25μL和7.62μL。PT測定的校準與實施例3相同。血液PT，INRb，對已知血漿PT，INRp，作三條曲線，每組一條，參見圖3a。對于低和高HCT組，線性最小二乘方回歸分別得到回歸方程式INRb＝0.935×INRp+0.011和INRb＝1.108×INRp+0.021。由此計算差ΔINRb＝-0.173×INRp+0.099。相應(yīng)的平均Vh中的差，ΔVhm，確定為1.99μL。ΔINRb/ΔVhm視為dINRb/dVh的估計值，因此確定為-0.086×INRb+0.005。根據(jù)方程式11其用來測定低HCT組和高HCT組中樣品的血漿INR，參見圖3b。在校正前后對每個樣品測定平均誤差，(INRb-INRp)/INRp。在低HCT組中，誤差變化從-4.8％-0.2％，對于高CHT組，從12.1％-0.8％。在通過利用方程式4以一種非成比例的表示測定分析物濃度中，在此使用的為實施本發(fā)明的程序較先前描述的趨于改變的程序需要很少的和簡單的計算，即其中通過非成比例表示的分析物濃度再表示為通過成比例表示的分析物濃度的程序。在此描述的程序需要較少的計算，當通過利用具有有限處理能力的微處理器實施本發(fā)明方法時，可能是有利的。
實施例5以下給出如何根據(jù)本發(fā)明測定抗凝血漿中的分析物濃度的說明。特別地，其是如何進行計算的實施例。該實施例的分析物濃度是凝血酶原時間PT。分析物濃度用INR表示。
具有通過準確的實驗室法測定的其相應(yīng)抗凝血漿的已知INR值的59個血樣組的每個成員，根據(jù)本發(fā)明的方法對其分析。在零時間處，在室溫下，添加20μL血樣并與聚苯乙烯管狀容器中的400μL PT試劑混合，該管狀容器插入并固定在本發(fā)明測量和測定裝置的容器座中。對混合物進行多于兩次的不同測量。測量從940nm LED發(fā)出穿過混合物透射的光強度(l)、混合物凝結(jié)的時間(CT)以及混合物的溫度(t)。也測量了在添加血液之前僅穿過試劑透射的光強度(lo)。不同測量之一，l，與血液的血細胞比容相關(guān)，用于計算l/lo，對于本領(lǐng)域技術(shù)人員是顯而易見的并示于實施例1和表1中。不同測量之一，CT，與抗凝血的PT相關(guān)，也是顯而易見的且通過表2中數(shù)據(jù)得到反映。通過測量室溫測得與環(huán)境取得熱平衡的混合物溫度。根據(jù)本發(fā)明，抗凝血的PT計算自混合物的多次測量值，即其通過l，CT和t，F(xiàn)l1(1，CT，t)的數(shù)學(xué)函數(shù)進行計算。根據(jù)本發(fā)明通過函數(shù)Fl((l/lo)，CT，t)計算分別相應(yīng)于59個血漿樣品的抗凝血漿的PT。根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)，PT僅通過CT和t，F(xiàn)PA(CT，t)的函數(shù)計算。通過用2個抗凝血漿樣品，具有已知INR值的校準物，校準獲得合適的函數(shù)，該已知INR值是通過標準化組織EQUALS，Uppsala，Sweden組織的多個醫(yī)學(xué)中心運行所確定的。在19-29℃范圍內(nèi)的不同溫度下進行校準。使得標準凝血時間NCT和國際敏感度指數(shù)ISI分別作為溫度的函數(shù)NCT(t)和ISI(t)得到測定。利用計算機，在任意裝置內(nèi)部使用的時間和溫度分別為timeU和tempU。一個tmu約為0.0665秒并根據(jù)t＝80.9-0.109×tempU的關(guān)系式將tepu轉(zhuǎn)換為攝氏度(t)。該換算僅用于人，對計算指令并無影響。函數(shù)為NCT(t)＝-2329-9.547×tempU+0.0113×tempU×tempUISI(t)＝0.8785+0.0007×tempU在指定的溫度范圍內(nèi)，利用計算機溫度單位和ISI(t)的二次多項式首次描述了NCT(t)。在分析抗凝血漿中，計算簡化為INR＝(CT/NCT(t))expISI(t)通過分析抗凝血樣和相應(yīng)的抗凝血漿樣品，在該溫度范圍之內(nèi)的不同溫度處，發(fā)現(xiàn)血液的NCT和ISI豐碑具有溫度函數(shù)1.17×NCT(t)和0.775×ISI(t)。通過測量檸檬酸鹽抗凝血和液體PT試劑混合物的凝結(jié)時間CT可以測定抗凝血漿的PT。因此，如果抗凝血是樣品，則抗凝血漿的INR在此稱為INRcb，因為檸檬酸鹽血是樣品，則其為INRcb＝{CT/[1.17×NCT(t)]}exp
只有當抗凝血的血細胞比容是用于導(dǎo)出該表達式的抗凝血樣平均值時，其才是嚴格地有效的。
如果用血液代替抗凝血以相同的比例與液體試劑混合，添加1.11倍更多的如上所述血樣，可使用假定DE體積的概念和在PT％和INR之間的關(guān)系式計算對NCT和ISI的影響，如上所述Lindahl等描述了該關(guān)系式。NCT將減少到95.4％并且ISI增加到103.4％。實驗測定使用試劑的體積減少10％，給出了基本上相同的結(jié)果。因此，根據(jù)以下相同的方案，抗凝血漿的PT可通過測量血液和PT試劑的凝血時間得到測定。用這種方法測定的抗凝血漿INR稱為INRb，為INRb＝[CT/1.116×NCT(t)]exp0.801×ISI(t)在另一方面，使用相同的方案，通過混合抗凝血或血液測定的抗凝血漿PT通過上述關(guān)系式給出，但只有當血細胞比容為上述計算結(jié)果的平均水平時才是這樣。根據(jù)本發(fā)明，與血細胞比容相關(guān)的至少一次測量是對血液和試劑混合物進行的。穿過混合物透射的光l的測量是這樣的一種測量。對于技術(shù)原因，容器尺寸和性狀的改變、容器座中容器位置、光源的能量來源以及最主要的在給定的批次裝置之間的個體差異，當與血樣血細胞比容相關(guān)的混合物測量時，最好使用l/lo比值而非l。根據(jù)本發(fā)明，為了校正，為了得到樣品血細胞比容改變的影響，建立了INR對l/lo的函數(shù)關(guān)系。為做到這一點，上述所獲得59個INRcb可以表示為對于其抗凝血漿已知的相應(yīng)INR值的級分。該比值稱為K，在59個樣品中范圍在0.85-1.23之間。K與l/lo的函數(shù)關(guān)系，血細胞比容的測量，是通過線性回歸推導(dǎo)出的，存在顯著相關(guān)性?；貧w直線的方程式是K＝0.032×(l/lo)+0.745。根據(jù)本發(fā)明其提供了INRcbi的計算INRcbi＝{CT/[1.17×NCT(t)]}exp
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檢驗已知值顯示59個PT測定的平均絕對偏差為8％，對于根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)測定的PT，觀察到的最大偏差為23％。根據(jù)本發(fā)明該PT測定的相應(yīng)值是6％和14％。顯而易見，與現(xiàn)有技術(shù)相比根據(jù)本發(fā)明的測定在準確性上產(chǎn)生了明顯改善。由上述關(guān)系式，K＝0.032×(lo/l)+0.745，平均血細胞比容看來似乎是7.969的lo/l。如果血液就已經(jīng)是樣品，則平均血細胞比容應(yīng)當為8.846，因此，關(guān)系式為K＝0.032×(lo/l)+0.717。因此，根據(jù)本發(fā)明通過對血液和液體PT試劑混合物進行兩次或更多次測量，下列計算結(jié)果用于抗凝血漿PT測定。測定PT被稱作INRbiINRbi＝{CT/[1.116×NCT(t)]}exp
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所給出的上述實施例顯示了如何實施本發(fā)明。當然，在可能進行的測量和計算方法中存在著無數(shù)的改變而不背離本發(fā)明的范圍，其提供了用于在許多小醫(yī)療中心處進行抗凝血漿分析物濃度測定的方法、裝置和試劑盒，在這些地方抗凝血漿不便制備或無法制備。
表格表1.6個EDTA抗凝樣品，1A-6AS，具有不同的血細胞比容HCT，在本發(fā)明可以實施的分析機構(gòu)分析。血容量Vb添加到350μL的PT試劑中。用樣品之一的樣品6AS進行不同血容量的試驗。通過利用方程式3測定標準化血液濃度。建立在HCT和l/lo間關(guān)系式。使用該關(guān)系式和lo/l比值，為每次試驗測定表觀血細胞比容HCTd。通過利用方程式2，測定添加的血容量Vbd。
樣品HCTVblolHCTaVbdVbd/Vb％1A 39.3 10731 48 40.310.3 1032A 47.7 10757 47 42.18.8883A 45.0 10753 44 44.19.8984A 25.1 10742 110 23.19.2925A 31.5 10809 65 34.611.0 1106AS 44.0 10825 50 42.99.7974S 17.9 4 797 142 20.84.61166S 26.7 6 768 92 26.35.9998S 35.4 8 806 62 35.88.110112S 52.5 12828 38 53.612.3 10214S 60.9 14808 30 64.014.7 10516S 69.2 16749 26 67.815.7 9818S 77.5 18739 22 77.618.0 100表2.本發(fā)明方法接近患者的實施，其中在兩個血樣，樣品1和樣品2中，分析物濃度PT分別測定5次和6次。通過準確的實驗室法，樣品1和樣品2的血漿PT和HCT分別為INR 1.00和55.3％以及INR 2.44和43.5％。lo和l是僅穿過試劑或穿過血液和試劑混合物透射的光強度。CT是凝血時間。HCTa和INRa分別是表觀血細胞比容和PT。PT％是表示為PT％的表觀PT。PT％t是血液的真實PT％。PT％p和INRp是假定的抗凝血漿中表示為PT％和INR的PT。也給出了INRa和INRp的平均值和CV。
樣品1lolCTHCTaINRaPT％aPT％tPT％pINRp817 33 5859.61.0685.8 79.6 98.3 1.01806 30 5563.91.00101.287.6 108.10.97772 36 6052.91.1077.9 81.4 100.51.00791 38 6051.61.1077.9 83.4 103.00.99843 36 5856.91.0685.8 83.4 102.90.99平均 1.06 0.99CV 4.1％ 1.2％樣品2lolCTHCTaINRaPT％aPT％tPT％pINRp787 43 120 46.52.4619.6 18.4 19.7 2.46824 44 120 47.42.4619.6 18.0 19.3 2.49753 45 122 43.42.5119.1 19.2 20.6 2.38794 65 147 34.23.1114.4 18.4 19.7 2.45850 147 193 21.14.279.8 20.3 21.7 2.29817 38 111 53.02.2522.2 18.3 19.6 2.47平均 2.84 2.42CV 26.6％ 3.2％
權(quán)利要求
1.一種通過對相應(yīng)于抗凝血漿的血樣和液體試劑的混合物進行至少兩次不同測量以測定所述抗凝血漿的分析物濃度的方法，包括步驟d)將一體積所述血樣與五倍或更多體積的所述液體試劑混合，e)對所述混合物進行所述的至少兩次測量，其中至少一次與所述血樣的血細胞比容相關(guān)，以及其中至少一次與所述分析物濃度相關(guān)，和f)當a)中體積是精確且準確或b)中所述血樣的血細胞比容是已知時，計算測量所得結(jié)果以確定所述抗凝血漿的所述分析物濃度。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中g(shù))所述混合物中血液體積為血液預(yù)期體積的50％-150％，b)所述混合物中試劑體積為試劑預(yù)期體積的70％-120％，和c)當血樣的血細胞比容已知時，計算結(jié)果以確定分析物濃度。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中a)中所述血液預(yù)期體積為5-40μL以及所述試劑預(yù)期體積為100-1000μL。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中a)中所述血液體積為5-20μL以及所述試劑體積為150-600μL。
5.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中b)中所述測量在具有至少4mm的最小橫截面尺寸的管狀容器中進行。
6.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中b)中所述測量在具有5mm-15mm的最小橫截面尺寸的管狀容器中進行。
7.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述方法用通過已添加選自檸檬酸、異檸檬酸、EDTA、草酸、肝素和水蛭素的鈉、鉀和鋰鹽的抗凝劑進行抗凝處理的抗凝血漿校準。
8.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述抗凝血漿是來自血液的液體，其選自由血清、肝素化的血漿、水蛭素抗凝的血漿、草酸鹽抗凝的血漿、檸檬酸鹽抗凝的血漿、異檸檬酸鹽抗凝的血漿、EDTA-血漿和熱處理的血漿組成的血液來源的液體。
9.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述分析物濃度的測定用在抗凝血漿中具有已知分析物濃度的抗凝血進行校準，所述抗凝血漿已通過添加選自檸檬酸、異檸檬酸、EDTA、草酸、肝素和水蛭素的鈉、鉀和鋰鹽的抗凝劑進行了抗凝處理。
10.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述分析物選自凝血酶原時間(PT)、血纖蛋白原，血纖蛋白原降解產(chǎn)物、血纖蛋白降解產(chǎn)物(D-二聚體)、活化部分凝血酶原時間(APTT)、活化凝血時間(ACT)、C-反應(yīng)蛋白(CRP)、膽固醇和葡萄糖。
11.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述與b)中所述血細胞比容相關(guān)的測量是基于一次或多次使用800nm-1100nm波長的光的測量。
12.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中b)中所述兩次或更多次測量在18℃-40℃的室溫下進行。
13.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中a)中所述試劑含有0.1g/L或更多的血纖蛋白原。
14.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述分析物濃度是用INR表示的PT，其中，在所述抗凝血漿分析物濃度測定前，分析物濃度再表示為PT％。
15.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中a)中所述混合物的凝血時間是與b)中所述分析物濃度相關(guān)的至少一個測量中的一個。
16.一種用于對血液、抗凝血和/或抗凝血漿樣品進行測量的測量和測定裝置，包括a)用于容納含有具體批次液體試劑的容器的座，該容器容有在裝置運轉(zhuǎn)中用于與所述液體試劑混合的所述樣品之一，b)能量來源，c)數(shù)據(jù)處理器，d)包含有用于一種或多種所述血液、抗凝血和/或抗凝血漿樣品混合物的計算數(shù)據(jù)集的只讀存儲器，每一計算數(shù)據(jù)集適用于所述的具體批次，e)用于對每一混合物進行兩次或多次測量的測量裝置，f)顯示用戶指令和基于來自d)和e)數(shù)據(jù)計算結(jié)果的顯示器，以及g)用于用戶控制裝置的控制裝置。
17.一種帶有識別標志的設(shè)備試劑盒，包括用于進行血液、抗凝血和/或抗凝血漿樣品測定的測量和測定裝置，以及一種或幾種在各自帶有與所述設(shè)備試劑盒的所述識別標志相關(guān)的識別標志的容器中的液體試劑。
全文摘要
描述了一種通過對相應(yīng)于抗凝血漿的血樣和液體試劑的混合物進行至少兩次不同測量以測定所述抗凝血漿的分析物濃度的方法。該方法包括a)將一體積所述血樣與五倍或更多體積的所述液體試劑混合，b)對所述混合物進行所述至少兩次測量，其中至少一次與所述血樣的血細胞比容相關(guān)，以及其中至少一次與所述分析物濃度相關(guān)，和c)當a)中體積是精確且準確或b)中所述血樣的血細胞比容是已知時，計算測量所得結(jié)果以確定所述抗凝血漿的所述分析物濃度。此外，描述了用于進行血液、抗凝血和/或抗凝血漿樣品測定的測量和測定裝置，以及設(shè)備試劑盒。
文檔編號G01N33/86GK1914511SQ200480041277
公開日2007年2月14日 申請日期2004年12月2日 優(yōu)先權(quán)日2003年12月2日
發(fā)明者M·龍比 申請人:扎芬納股份公司