專利名稱：六味地黃膏的質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及由中藥材熟地黃、山茱萸(制)、山藥、牡丹皮、茯苓、澤瀉制成的滋陰補腎藥物六味地黃膏的質(zhì)量控制方法，具體的涉及用高效液相色譜法測定該藥物中芍藥苷的含量和薄層色譜法鑒別中藥材山茱萸的六味地黃膏的質(zhì)量控制方法。
背景技術(shù)：
《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》(中藥成方制劑)第三冊(WS3-B-2489-97)中滋陰補腎的藥物六味地黃膏，由中藥材熟地黃320g、山茱萸(制)160g，山藥160g，牡丹皮120g，茯苓120g，澤瀉120g制成的膏滋劑，并頒布了六味地黃膏質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，但衛(wèi)生部頒發(fā)的現(xiàn)有的六味地黃膏質(zhì)量控制方法中，只有牡丹皮中丹皮酚的薄層色譜鑒別且無含量測定方法，局限性很大，難于控制六味地黃膏的質(zhì)量；芍藥苷是牡丹皮中的另一個活性成分，具有鎮(zhèn)痛，解痙，抗菌，抗炎作用；現(xiàn)有藥典及部頒標(biāo)準(zhǔn)中的其他六味地黃制劑(有含量測定的)均為測定牡丹皮中的丹皮酚及山茱萸中的熊果酸；另外，中醫(yī)研究2000年13卷3期劉長河等發(fā)表的文章“六味地黃丸中梓醇的含量測定”中提出以梓醇為指標(biāo)控制該類制劑的質(zhì)量，并指出梓醇有遇熱不穩(wěn)定的性質(zhì)；時珍國醫(yī)國藥1999年10卷12期張忠春等發(fā)表的“高效液相色譜法測定六味地黃膠囊中丹皮酚含量”一文中提出采用高效液相色譜法測定丹皮酚；中成藥2001年23卷1期尤慧蓮等發(fā)表的“六味地黃丸熊果酸含量測定方法的改進”一文中針對藥典中薄層掃描法測定熊果酸含量操作時存在的問題進行了試驗和探討；中國藥業(yè)1999年8卷11期陳賀新等發(fā)表的“RP-HPLC法測定六味地黃丸中馬錢素的含量”為控制該制劑的內(nèi)在質(zhì)量提供了新的可靠的方法。本發(fā)明是根據(jù)本制劑采用的水提工藝，熊果酸微溶于水，水提的提取率低，而丹皮酚的熔點低，具揮發(fā)性，水提含量低，不利于質(zhì)量的控制；芍藥苷具水溶性，水煎提取率高，故以牡丹皮中的芍藥苷作為制劑中含量測定指標(biāo)并建立其檢測方法，雖然熊善麗等在中國中藥雜志2003年28卷8期上發(fā)表的“RP-HPLC測定六味地黃方中苷類成分的含量”一文中建立了六味地黃方水煎液中莫諾苷、馬錢素、芍藥苷含量測定的方法，但其流動相與檢測波長均與本發(fā)明不同；本發(fā)明利用高效液相色譜法測定該藥物中芍藥苷的含量，并增加其中山茱萸藥材的薄層色譜定性鑒別方法，確認方法簡便、結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，現(xiàn)有藥典及文獻中大多采用熊果酸為對照品，而本發(fā)明采用的是山茱萸對照藥材，并經(jīng)方法學(xué)試驗確認方法專屬、可行、陰性無干擾；因此本發(fā)明提高了六味地黃膏的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，更好地保證了本復(fù)方制劑較高的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)水平。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是對采用水提工藝的六味地黃膏質(zhì)量，制定新的六味地黃膏質(zhì)量控制方法，利用高效液相色譜法測定該藥物中芍藥苷的含量，并經(jīng)方法學(xué)考察試驗，確認方法簡便、結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好；用薄層色譜法鑒別該藥物中藥材山茱萸，經(jīng)方法學(xué)試驗，確認方法專屬、可行、陰性無干擾；保證了質(zhì)量檢測標(biāo)準(zhǔn)的準(zhǔn)確性和先進性，能夠有效地控制六味地黃膏的質(zhì)量。
《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》(中藥成方制劑)第三冊(WS3-B-2489-97)中滋陰補腎的藥物六味地黃膏，由中藥材熟地黃320g、山茱萸(制)160g，山藥160g，牡丹皮120g，茯苓120g，澤瀉120g制成的膏滋劑。熟地是方中主要藥味，為生地黃的炮制加工品，生地黃為玄參科植物地黃Rehmannia glutinosa Libosch.的新鮮或干燥塊根，味厚甘溫，具有滋腎填精之功效；主要含有梓醇、地黃甙等環(huán)烯醚萜甙類及多糖等化學(xué)成分；牡丹皮為毛茛科植物牡丹Paeonia suffruticosa Andr.的干燥根皮，具有清熱涼血，活血化瘀之功效，主要含有丹皮酚、芍藥苷等化學(xué)成分；山茱萸為山茱萸科植物山茱萸Cornus officinalis Sieb.et Zucc.的干燥成熟果肉，具有養(yǎng)肝澀精的功效；主要含有馬錢素，熊果酸、齊墩果酸等化學(xué)成分，本發(fā)明所述的滋陰補腎藥物六味地黃膏的制備方法，是按《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》(中藥成方制劑)第三冊(WS3-B-2489-97)中的制備方法采用的水提工藝制成的膏滋劑。方中的有效成份熊果酸微溶于水，水提的提取率低，丹皮酚的熔點低，具揮發(fā)性，水提含量低，不利于六味地黃膏質(zhì)量的控制；而另一有效成份芍藥苷具水溶性，水煎提取率高，故以牡丹皮中的芍藥苷作為制劑中含量測定指標(biāo)，利用高效液相色譜法測定該藥物中芍藥苷的含量，方法簡便、結(jié)果準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，并增加其中山茱萸藥材的薄層色譜定性鑒別方法，采用山茱萸對照藥材，并經(jīng)方法學(xué)試驗確認方法專屬、可行、陰性無干擾；提高了六味地黃膏的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，更好地保證了本復(fù)方制劑較高的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)水平。
完成本發(fā)明通過下述技術(shù)方案予以實現(xiàn)其一用高效液相色譜法測定該藥物中芍藥苷的含量；其二用薄層色譜法鑒別該藥物中藥材由茱萸。
具體的六味地黃膏新的質(zhì)量控制檢測方法，可通過以下步驟預(yù)以實現(xiàn)儀器、藥品及材料儀器Waters 600E型高效液相色譜儀，Waters 486檢測器美國Waters公司江申色譜工作站大連江申分離科學(xué)技術(shù)公司SK5200H超聲波清洗器上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司Mettler AE 240精密分析天平(0.00001)Mettler儀器公司HH-4數(shù)顯恒溫水浴鍋國華電器有限公司101-2型電熱鼓風(fēng)干燥箱上海市實驗儀器總廠對照品及對照藥材芍藥苷對照品購于中國藥品生物制品檢定所。
澤瀉對照藥材購于中國藥品生物制品檢定所。
山茱萸對照藥材 自制各單味藥材均由安徽亳州市中信藥業(yè)有限責(zé)任公司提供。經(jīng)檢測，均符合《中華人民共和國藥典》2000版一部各項下規(guī)定。
供試品六味地黃膏硅膠G薄層板規(guī)格10×20cm 臺州市路橋四甲生化塑料廠出品顯色劑及試液硫酸-醋酐-無水乙醇溶液(1∶1∶1)，硫酸-醋酐-無水乙醇溶液(1∶1∶5)，所用試藥均為分析純，試液均按照《中華人民共和國藥典》2000版一部附錄XV B各項下有關(guān)方法配制。
1、用高效液相色譜法測定該藥物中芍藥苷的含量a.色譜條件 填充劑 十八烷基硅烷鍵合硅膠流動相 乙腈--水檢測波長230±2nm理論板數(shù)按芍藥苷峰計算應(yīng)不低于3000b.對照品溶液的制備精密稱取芍藥苷對照品適量，加有機溶劑或水中的任一種溶解制成溶液；c.供試品溶液的制備取本品，加水稀釋后，用水飽和正丁醇提取，醇液蒸干后，殘渣用有機溶劑或水中的任一種溶解，稀釋并定容；d.芍藥苷的含量測定方法分別精密量取對照品溶液與供試品溶液，注入液相色譜儀，測定芍藥苷的含量；2、該藥物中藥材山茱萸用薄層色譜法鑒別a.對照藥材溶液的制備取山茱萸對照藥材，加乙醇回流提取，濾取提取液，蒸干，殘渣加水溶解，用乙醚萃取，乙醚液蒸干，殘渣溶于乙酸乙酯中，即為對照藥材溶液；b.供試品溶液的制備取本品，加乙醇振搖混勻，置水浴中回流提取，提取液蒸至無醇味，加水稀釋，用乙醚萃取，乙醚液用5％NaHCO3溶液洗滌，再用水洗滌，乙醚液蒸干，殘渣溶于醋酸乙酯中，即為供試品溶液；c.照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液，點于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-氯仿-醋酸乙酯為展開劑，噴以醋酐-濃硫酸-無水乙醇溶液，烘至斑點清晰，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。
上述的六味地黃膏新的質(zhì)量控制檢測方法，優(yōu)選以下具體步驟1、用高效液相色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VID)測定芍藥苷的含量a.色譜條件用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈--水(10-20∶90-80)為流動相，檢測波長為230±2nm，理論板數(shù)按芍藥苷峰計算應(yīng)不低于3000；b.對照品溶液的制備精密稱取芍藥苷對照品適量，加甲醇或乙醇或水中的任一種制成每1ml含5--50μg的溶液；c.供試品溶液的制備取本品0.5--3g，精密稱定，加水10--25ml，攪拌稀釋，移至分液漏斗中，加水飽和正丁醇提取3--6次，每次10--25ml，合并醇液，置水浴上蒸干，殘渣用甲醇或乙醇或水中的任一種適量溶解，移置10--25ml量瓶中，稀釋并定容至刻度，搖勻，即得；d.芍藥苷的含量測定方法分別精密量取對照品溶液與供試品溶液各5--20μl，注入液相色譜儀，測定芍藥苷的含量；
e.每克含牡丹皮以芍藥苷(C23H28O11)計，不得低于0.08mg。
2.該藥物中藥材山茱萸用薄層色譜法鑒別a.對照藥材溶液的制備取山茱萸對照藥材0.5-4g，加乙醇20-100ml回流0.5-2小時，濾過，濾液蒸干，殘渣加水10-30ml溶解，用乙醚30-90ml分次萃取，合并乙醚溶液，蒸干，殘渣溶于0.5ml乙酸乙酯中，即為對照藥材溶液；b.供試品溶液的制備取本品10-50g，加95％乙醇20-100ml，振搖10分鐘使混勻，置水浴中回流0.5-2小時，趁熱過濾，濾液蒸至無醇味，加水10-50ml攪拌稀釋，移至分液漏斗中，用乙醚萃取2-5次，每次10-50ml，合并乙醚溶液，用5％NaHCO3溶液20-50ml分次洗滌，再用水約10-50ml洗滌，乙醚溶液蒸干，殘渣溶于0.5ml醋酸乙酯中，即為供試品溶液；c.照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VIB)試驗，吸取上述兩種溶液各5-20ul，點于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-氯仿-醋酸乙酯(20∶5∶5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以醋酐-濃硫酸-無水乙醇(1∶1∶5)溶液，在105℃烘至斑點清晰，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。
本發(fā)明六味地黃膏新的質(zhì)量控制檢測方法，更優(yōu)選的技術(shù)方案可以按下列測定步驟進行1、用高效液相色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VID)測定芍藥苷的含量a.色譜條件用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈--水(12∶88)為流動相，檢測波長為230nm，理論板數(shù)按芍藥苷峰計算應(yīng)不低于3000；b.對照品溶液的制備精密稱取芍藥苷對照品適量，加甲醇制成每1ml含20μg的溶液；c.供試品溶液的制備取本品1g，精密稱定，加水10ml，攪拌稀釋，移至分液漏斗中，加水飽和正丁醇提取4次，每次10ml，合并醇液，置水浴上蒸干，殘渣用甲醇適量溶解，移置10ml量瓶中，稀釋并定容至刻度，搖勻，即得；d.測定法分別精密量取對照品溶液與供試品溶液各5μl，注入液相色譜儀，測定芍藥苷的含量；每克含牡丹皮以芍藥苷(C23H28O11)計，不得低于0.08mg。
2、該藥物中藥材山茱萸用薄層色譜法鑒別a.對照藥材溶液的制備稱取山茱萸對照藥材2g，加乙醇50ml回流1小時，濾過，濾液蒸干，殘渣加水10ml溶解，用乙醚30ml分次萃取，合并乙醚溶液，蒸干，殘渣溶于0.5ml乙酸乙酯中，即為對照藥材溶液；b.供試品溶液的制備取本品30g，加95％乙醇60ml，振搖10分鐘使混勻，置水浴中回流1小時，趁熱過濾，濾液蒸至無醇味，加水30ml攪拌稀釋，移至分液漏斗中，用乙醚萃取三次，每次20ml，合并乙醚溶液，用5％NaHCO3溶液30ml分次洗滌，再用水約15ml洗滌，乙醚溶液蒸干，殘渣溶于0.5ml醋酸乙酯中，即為供試品溶液；c.照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VIB)試驗，吸取上述兩種溶液各10ul，點于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-氯仿-醋酸乙酯(20∶5∶5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以醋酐-濃硫酸-無水乙醇(1∶1∶5)溶液，在105℃烘至斑點清晰，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。
本發(fā)明所述的滋陰補腎藥物六味地黃膏的制備方法，是按《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》(中藥成方制劑)第三冊(WS3-B-2489-97)中的制備方法制成的膏滋劑。
本發(fā)明提供了山茱萸的TCL鑒別，經(jīng)方法學(xué)試驗確認方法可行，陰性無干擾；選擇了芍藥苷為測定指標(biāo)，并進行了以下方法學(xué)考察試驗，建立了六味地黃膏的HPLC含量測定方法；經(jīng)過多次重復(fù)試驗，確認方法簡便、結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，可作為六味地黃膏質(zhì)量控制和考察工藝的穩(wěn)定性的指標(biāo)。
芍藥苷含量測定的方法學(xué)考察1、線性曲線、回歸方程、相關(guān)系數(shù)及線性范圍①精密稱取在五氧化二磷減壓干燥器中干燥36小時的芍藥苷對照品6.02mg，置25ml量瓶中，加甲醇適量使溶解，稀釋至刻度，搖勻，得芍藥苷貯備液(0.2408mg/ml)，分別精密吸取0.00、0.25、0.50、1.00、1.50、2.00ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得各對照品溶液，分別精密吸取上述各對照品溶液5μl，注入液相色譜儀，測定。如

圖1所示以峰面積(A)為橫坐標(biāo)，芍藥苷含量(M)為縱坐標(biāo)，得回歸方程M＝8.892×10-8A+3.208×10-3(式中A為峰面積，M為芍藥苷含量μg)，r＝0.9994，表明芍藥苷含量在0-0.2408μg之間，呈良好線性關(guān)系，結(jié)果見表1。
表1 芍藥苷線性關(guān)系測定結(jié)果

圖1 線性關(guān)系圖2、重現(xiàn)性試驗精密稱取同一批號樣品約1g，共5份，照本發(fā)明的方法操作，測定峰面積A，并計算各份樣品中芍藥苷的含量，結(jié)果見表2。
表2重現(xiàn)性試驗樣品編號 1 2 3 4 5含量(mg/g) 0.148 0.148 0.1520.149 0.147平均值(mg/g) 0.149RSD(％) 1.263、精密度試驗取同一芍藥苷對照品溶液，連續(xù)測6次，每次精密吸取5μl，注入液相色譜儀，測定峰面積A，試驗表明其精密度RSD＝1.71％，符合規(guī)定，結(jié)果見表3。
表3 精密度試驗編號1 2 3 4 5 6峰面積 1226384 1257754 1275782 1253258 1287385 1248002平均值 1258094.17RSD(％) 1.714、穩(wěn)定性試驗取精密度試驗項下的芍藥苷對照品溶液及供試品溶液，精密吸取5μl，在隔1.5小時，隔6小時后，分別注入液相色譜儀，測定峰面積，結(jié)果表明芍藥苷對照品溶液及供試品溶液均在6小時內(nèi)穩(wěn)定，結(jié)果見表4。
表4 穩(wěn)定性試驗時間(小時) 對照品峰面積 供試品峰面積012263848354690.5 12589408377736.0 1260187833106平均值 1248503.67 835449.3RSD(％) 1.53 0.285.加樣回收率試驗取已知含量的本品0.3-0.7g，精密稱定，共6份，每份各加入精密稱定的芍藥苷對照品30-120μg，照本發(fā)明的方法操作，測定含量，計算回收率，結(jié)果見表5。
表5加樣回收率測定結(jié)果編 樣品含芍藥苷加入芍藥苷 測得芍藥苷量回收率平均回收率號量(mg) 量(mg) (mg) (％)(％)10.1084 0.036120.143797.7320.1014 0.036120.136597.1830.07507 0.072240.147399.99 99.5640.09196 0.072240.1651101.25 RSD＝1.57％50.05561 0.1084 0.1645100.4560.06636 0.1084 0.1756100.77
注具體實施方式
實施例1取中藥材熟地黃320g、山茱萸(制)160g、山藥160g、牡丹皮120g、茯苓120g、澤瀉120g，上述原料加水煎煮三次，第一、二次各加9倍量水，煎煮2小時，第三次加7倍量水，煎煮1小時，合并煎液，濾過，濾液靜置，取上清液減壓濃縮至相對密度為1.28～1.32(85℃)的清膏，每100g清膏加煉蜜300g，混勻，即得。
1、用高效液相色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VID)測定芍藥苷的含量測定及其標(biāo)準(zhǔn)a.色譜條件用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈--水(12∶88)為流動相，檢測波長為230nm，理論板數(shù)按芍藥苷峰計算應(yīng)不低于3000；b.對照品溶液的制備精密稱取芍藥苷對照品適量，加甲醇制成每1ml含20μg的溶液；c.供試品溶液的制備取本品1g，精密稱定，加水10ml，攪拌稀釋，移至分液漏斗中，加水飽和正丁醇提取4次，每次10ml，合并醇液，置水浴上蒸干，殘渣用甲醇適量溶解，移置10ml量瓶中，稀釋并定容至刻度，搖勻，即得。
d.測定法分別精密量取對照品溶液與供試品溶液各5μl，注入液相色譜儀，測定芍藥苷的含量。每克含牡丹皮以芍藥苷(C23H28O11)計，不得低于0.08mg。
(2)、該藥物中藥材山茱萸用薄層色譜法鑒別a.對照藥材溶液的制備稱取山茱萸對照藥材2g，加乙醇50ml回流1小時，濾過，濾液蒸干，殘渣加水10ml溶解，用乙醚30ml分次萃取，合并乙醚溶液，蒸干，殘渣溶于0.5ml乙酸乙酯中，即為對照藥材溶液。
b.供試品溶液的制備取本品30g，加95％乙醇60ml，振搖10分鐘使混勻，置水浴中回流1小時，趁熱過濾，濾液蒸至無醇味，加水30ml攪拌稀釋，移至分液漏斗中，用乙醚萃取三次，每次20ml，合并乙醚溶液，用5％NaHCO3溶液30ml分次洗滌，再用水約15ml洗滌，乙醚溶液蒸干，殘渣溶于0.5ml醋酸乙酯中，即為供試品溶液；c.照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VIB)試驗，吸取上述兩種溶液各10ul，點于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-氯仿-醋酸乙酯(20∶5∶5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以醋酐-濃硫酸-無水乙醇(1∶1∶5)溶液，在105℃烘至斑點清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。用上述方法作為該藥物質(zhì)量控制和考察工藝的穩(wěn)定性的指標(biāo)。
實施例2取中藥材熟地黃320g、山茱萸(制)160g、山藥160g、牡丹皮120g、茯苓120g、澤瀉120g，上述原料加水煎煮三次，第一、二次各加9倍量水，煎煮2小時，第三次加7倍量水，煎煮1小時，合并煎液，濾過，濾液靜置，取上清液減壓濃縮至相對密度為1.28～1.32(85℃)的清膏。每100g清膏加煉蜜300g，混勻，即得。
1、用高效液相色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VID)測定芍藥苷的含量測定及其標(biāo)準(zhǔn)a.色譜條件用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈--水(10∶90)為流動相，檢測波長為230nm；b.對照品溶液的制備精密稱取芍藥苷對照品適量，加甲醇制成每1ml含5μg的溶液；c.供試品溶液的制備取本品0.5g，精密稱定，加水10ml，攪拌稀釋，移至分液漏斗中，加水飽和正丁醇提取6次，每次10ml，合并醇液，置水浴上蒸干，殘渣用甲醇適量溶解，移置10ml量瓶中，稀釋并定容至刻度，搖勻，即得。
d.測定法分別精密量取對照品溶液與供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測定芍藥苷的含量。每克含牡丹皮以芍藥苷(C23H28O11)計，不得低于0.08mg。
(2)、該藥物中藥材山茱萸用薄層色譜法鑒別a.對照藥材溶液的制備稱取山茱萸對照藥材0.5g，加乙醇20ml回流2小時，濾過，濾液蒸干，殘渣加水10ml溶解，用乙醚30ml分次萃取，合并乙醚溶液，蒸干，殘渣溶于0.5ml乙酸乙酯中，即為對照藥材溶液。
b.供試品溶液的制備取本品10g，加95％乙醇20ml，振搖10分鐘使混勻，置水浴中回流2小時，趁熱過濾，濾液蒸至無醇味，加水10ml攪拌稀釋，移至分液漏斗中，用乙醚萃取5次，每次10ml，合并乙醚溶液，用5％NaHCO3溶液20ml分次洗滌，再用水約10ml洗滌，乙醚溶液蒸干，殘渣溶于0.5ml醋酸乙酯中，即為供試品溶液；c.照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VIB)試驗，吸取上述兩種溶液各20ul，點于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-氯仿-醋酸乙酯(20∶5∶5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以醋酐-濃硫酸-無水乙醇(1∶1∶5)溶液，在105℃烘至斑點清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。用上述方法作為該藥物質(zhì)量控制和考察工藝的穩(wěn)定性的指標(biāo)。
實施例3取中藥材熟地黃320g、山茱萸(制)160g、山藥160g、牡丹皮120g、茯苓120g、澤瀉120g，上述原料加水煎煮三次，第一、二次各加9倍量水，煎煮2小時，第三次加7倍量水，煎煮1小時，合并煎液，濾過，濾液靜置，取上清液減壓濃縮至相對密度為1.28～1.32(85℃)的清膏。每100g清膏加煉蜜300g，混勻，即得。
1、用高效液相色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VID)測定芍藥苷的含量測定及其標(biāo)準(zhǔn)a.色譜條件用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈--水(15∶85)為流動相，檢測波長為230nm；b.對照品溶液的制備精密稱取芍藥苷對照品適量，加乙醇制成每1ml含50μg的溶液；c.供試品溶液的制備取本品3.0g，精密稱定，加水25ml，攪拌稀釋，移至分液漏斗中，加水飽和正丁醇提取3次，每次25ml，合并醇液，置水浴上蒸干，殘渣用乙醇適量溶解，移置25ml量瓶中，稀釋并定容至刻度，搖勻，即得。
d.測定法分別精密量取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定芍藥苷的含量。
每克含牡丹皮以芍藥苷(C23H28O11)計，不得低于0.08mg。
(2)、該藥物中藥材山茱萸用薄層色譜法鑒別a.對照藥材溶液的制備稱取山茱萸對照藥材4g，加乙醇100ml回流0.5小時，濾過，濾液蒸干，殘渣加水30ml溶解，用乙醚90ml分次萃取，合并乙醚溶液，蒸干，殘渣溶于0.5ml乙酸乙酯中，即為對照藥材溶液。
b.供試品溶液的制備取本品50g，加95％乙醇100ml，振搖10分鐘使混勻，置水浴中回流0.5小時，趁熱過濾，濾液蒸至無醇味，加水50ml攪拌稀釋，移至分液漏斗中，用乙醚萃取2次，每次50ml，合并乙醚溶液，用5％NaHCO3溶液50ml分次洗滌，再用水約50ml洗滌，乙醚溶液蒸干，殘渣溶于0.5ml醋酸乙酯中，即為供試品溶液；c.照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VIB)試驗，吸取上述兩種溶液各5ul，點于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-氯仿-醋酸乙酯(20∶5∶5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以醋酐-濃硫酸-無水乙醇(1∶1∶5)溶液，在105℃烘至斑點清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。用上述方法作為該藥物質(zhì)量控制和考察工藝的穩(wěn)定性的指標(biāo)。
實施例4取中藥材熟地黃320g、山茱萸(制)160g、山藥160g、牡丹皮120g、茯苓120g、澤瀉120g，上述原料加水煎煮三次，第一、二次各加9倍量水，煎煮2小時，第三次加7倍量水，煎煮1小時，合并煎液，濾過，濾液靜置，取上清液減壓濃縮至相對密度為1.28～1.32(85℃)的清膏。每100g清膏加煉蜜300g，混勻，即得。
1.用高效液相色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VID)測定芍藥苷的含量測定及其標(biāo)準(zhǔn)a.色譜條件用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈--水(20∶8O)為流動相，檢測波長為230nm；b.對照品溶液的制備精密稱取芍藥苷對照品適量，加水制成每1ml含30μg的溶液；c.供試品溶液的制備取本品2g，精密稱定，加水20ml，攪拌稀釋，移至分液漏斗中，加水飽和正丁醇提取5次，每次20ml，合并醇液，置水浴上蒸干，殘渣用水適量溶解，移置10ml量瓶中，稀釋并定容至刻度，搖勻，即得。
d.測定法分別精密量取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定芍藥苷的含量。每克含牡丹皮以芍藥苷(C23H28O11)計，不得低于0.08mg。
(2)、該藥物中藥材山茱萸用薄層色譜法鑒別a.對照藥材溶液的制備稱取山茱萸對照藥材2g，加乙醇50ml回流1.5小時，濾過，濾液蒸干，殘渣加水10ml溶解，用乙醚30ml分次萃取，合并乙醚溶液，蒸干，殘渣溶于0.5ml乙酸乙酯中，即為對照藥材溶液。
b.供試品溶液的制備取本品40g，加95％乙醇80ml，振搖10分鐘使混勻，置水浴中回流1.5小時，趁熱過濾，濾液蒸至無醇味，加水30ml攪拌稀釋，移至分液漏斗中，用乙醚萃取三次，每次20ml，合并乙醚溶液，用5％NaHCO3溶液30ml分次洗滌，再用水約25ml洗滌，乙醚溶液蒸干，殘渣溶于0.5ml醋酸乙酯中，即為供試品溶液；c.照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VIB)試驗，吸取對照藥材溶液10ul，吸取供試品溶液15ul，點于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-氯仿-醋酸乙酯(20∶5∶5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以醋酐-濃硫酸-無水乙醇(1∶1∶5)溶液，在105℃烘至斑點清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。用上述方法作為該藥物質(zhì)量控制和考察工藝的穩(wěn)定性的指標(biāo)。
實施例5取中藥材熟地黃320g、山茱萸(制)160g、山藥160g、牡丹皮120g、茯苓120g、澤瀉120g，上述原料加水煎煮三次，第一、二次各加9倍量水，煎煮2小時，第三次加7倍量水，煎煮1小時，合并煎液，濾過，濾液靜置，取上清液減壓濃縮至相對密度為1.28～1.32(85℃)的清膏。每100g清膏加煉蜜300g，混勻，即得。
1.用高效液相色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VID)測定芍藥苷的含量測定及其標(biāo)準(zhǔn)a.色譜條件用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈--水(15∶85)為流動相，檢測波長為230nm；b.對照品溶液的制備精密稱取芍藥苷對照品適量，加水制成每1ml含40μg的溶液；c.供試品溶液的制備取本品1.5g，精密稱定，加水20ml，攪拌稀釋，移至分液漏斗中，加水飽和正丁醇提取4次，每次20ml，合并醇液，置水浴上蒸干，殘渣用水適量溶解，移置10ml量瓶中，稀釋并定容至刻度，搖勻，即得。
d.測定法分別精密量取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定芍藥苷的含量。每克含牡丹皮以芍藥苷(C23H28O11)計，不得低于0.08mg。
(2)、該藥物中藥材山茱萸用薄層色譜法鑒別a.對照藥材溶液的制備稱取山茱萸對照藥材3g，加乙醇50ml回流1.0小時，濾過，濾液蒸干，殘渣加水20ml溶解，用乙醚60ml分次萃取，合并乙醚溶液，蒸干，殘渣溶于0.5ml乙酸乙酯中，即為對照藥材溶液。
b.供試品溶液的制備取本品30g，加95％乙醇60ml，振搖10分鐘使混勻，置水浴中回流1.0小時，趁熱過濾，濾液蒸至無醇味，加水20ml攪拌稀釋，移至分液漏斗中，用乙醚萃取4次，每次20ml，合并乙醚溶液，用5％NaHCO3溶液30ml分次洗滌，再用水約20ml洗滌，乙醚溶液蒸干，殘渣溶于0.5ml醋酸乙酯中，即為供試品溶液；c.照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VIB)試驗，吸取對照藥材溶液10ul，吸取供試品溶液15ul，點于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-氯仿-醋酸乙酯(20∶5∶5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以醋酐-濃硫酸-無水乙醇(1∶1∶5)溶液，在105℃烘至斑點清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。用上述方法作為該藥物質(zhì)量控制和考察工藝的穩(wěn)定性的指標(biāo)。
實施例6取中藥材熟地黃320g、山茱萸(制)160g、山藥160g、牡丹皮120g、茯苓120g、澤瀉120g，上述原料加水煎煮三次，第一、二次各加9倍量水，煎煮2小時，第三次加7倍量水，煎煮1小時，合并煎液，濾過，濾液靜置，取上清液減壓濃縮至相對密度為1.28～1.32(85℃)的清膏。每100g清膏加煉蜜300g，混勻，即得。
1.用高效液相色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VID)測定芍藥苷的含量測定及其標(biāo)準(zhǔn)a.色譜條件用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈--水(12∶88)為流動相，檢測波長為230nm；b.對照品溶液的制備精密稱取芍藥苷對照品適量，加乙醇制成每1ml含10μg的溶液；c.供試品溶液的制備取本品2.5g，精密稱定，加水20ml，攪拌稀釋，移至分液漏斗中，加水飽和正丁醇提取3次，每次20ml，合并醇液，置水浴上蒸干，殘渣用乙醇適量溶解，移置25ml量瓶中，稀釋并定容至刻度，搖勻，即得。
d.測定法分別精密量取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定芍藥苷的含量。每克含牡丹皮以芍藥苷(C23H28O11)計，不得低于0.08mg。
(2)、該藥物中藥材山茱萸用薄層色譜法鑒別a.對照藥材溶液的制備稱取山茱萸對照藥材1g，加乙醇50ml回流2.0小時，濾過，濾液蒸干，殘渣加水10ml溶解，用乙醚30ml分次萃取，合并乙醚溶液，蒸干，殘渣溶于0.5ml乙酸乙酯中，即為對照藥材溶液。
b.供試品溶液的制備取本品20g，加95％乙醇40ml，振搖10分鐘使混勻，置水浴中回流2.0小時，趁熱過濾，濾液蒸至無醇味，加水20ml攪拌稀釋，移至分液漏斗中，用乙醚萃取三次，每次20ml，合并乙醚溶液，用5％NaHCO3溶液30ml分次洗滌，再用水約15ml洗滌，乙醚溶液蒸干，殘渣溶于0.5ml醋酸乙酯中，即為供試品溶液；c.照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VIB)試驗，吸取對照藥材溶液15ul，吸取供試品溶液20ul，點于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-氯仿-醋酸乙酯(20∶5∶5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以醋酐-濃硫酸-無水乙醇(1∶1∶5)溶液，在105℃烘至斑點清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。用上述方法作為該藥物質(zhì)量控制和考察工藝的穩(wěn)定性的指標(biāo)。
實施例7取中藥材熟地黃320g、山茱萸(制)160g、山藥160g、牡丹皮120g、茯苓120g、澤瀉120g，上述原料加水煎煮三次，第一、二次各加9倍量水，煎煮2小時，第三次加7倍量水，煎煮1小時，合并煎液，濾過，濾液靜置，取上清液減壓濃縮至相對密度為1.28～1.32(85℃)的清膏，每100g清膏加煉蜜300g，混勻，即得。
1、用高效液相色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VID)測定芍藥苷的含量測定及其標(biāo)準(zhǔn)a.色譜條件用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈--水(12∶88)為流動相，檢測波長為230nm，理論板數(shù)按芍藥苷峰計算應(yīng)不低于3000；b.對照品溶液的制備精密稱取芍藥苷對照品適量，加甲醇制成每1ml含20μg的溶液；c.供試品溶液的制備取本品1g，精密稱定，加水10ml，攪拌稀釋，移至分液漏斗中，加水飽和正丁醇提取4次，每次10ml，合并醇液，置水浴上蒸干，殘渣用甲醇適量溶解，移置10ml量瓶中，稀釋并定容至刻度，搖勻，即得。
d.測定法分別精密量取對照品溶液與供試品溶液各5μl，注入液相色譜儀，測定芍藥苷的含量。每克含牡丹皮以芍藥苷(C23H28O11)計，不得低于0.08mg。
(2)、該藥物中藥材山茱萸用薄層色譜法鑒別a.對照藥材溶液的制備稱取山茱萸對照藥材2g，加乙醇50ml回流1小時，濾過，濾液蒸干，殘渣加水10ml溶解，用乙醚30ml分次萃取，合并乙醚溶液，蒸干，殘渣溶于0.5ml乙酸乙酯中，即為對照藥材溶液。
b.供試品溶液的制備取本品30g，加95％乙醇60ml，振搖10分鐘使混勻，置水浴中回流1小時，趁熱過濾，濾液蒸至無醇味，加水30ml攪拌稀釋，移至分液漏斗中，用乙醚萃取三次，每次20ml，合并乙醚溶液，用5％NaHCO3溶液30ml分次洗滌，再用水約15ml洗滌，乙醚溶液蒸干，殘渣溶于0.5ml醋酸乙酯中，即為供試品溶液；c.照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VIB)試驗，吸取上述兩種溶液各10ul，點于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-氯仿-醋酸乙酯(20∶5∶5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以醋酐-濃硫酸-無水乙醇(1∶1∶5)溶液，在105℃烘至斑點清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。
(3)、該藥物中藥材澤瀉用薄層色譜法鑒別a.對照藥材溶液的制備取澤瀉對照藥材4g，加60％乙醇50ml回流提取1小時，濾過，濾液于水浴上蒸干，殘渣加水10ml溶解，用乙醚振搖提取3次，每次10ml，合并乙醚液，蒸干，殘渣加氯仿1.0ml使溶解，作為澤瀉對照藥材溶液。
b.供試品溶液的制備取本品60g，加乙醇120ml，置水浴上加熱回流1小時，放冷，離心20分鐘(4000轉(zhuǎn)/分)，取上清液，于水浴上蒸至無醇味，加水30ml攪拌稀釋，移至分液漏斗中，加乙醚振搖提取3次，每次30ml，合并乙醚液，用水洗，乙醚液蒸干，殘渣加氯仿1.0ml使溶解，作為供試品溶液。
c.照薄層色譜法(附錄VIB)試驗，吸取供試品溶液15ul，對照品溶液10ul，分別點于同一硅膠薄層板上，以石油醚-醋酸乙酯-甲酸(24∶6∶0.5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以硫酸-醋酐-無水乙醇溶液(1∶1∶1)，105℃烘至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。用上述方法作為該藥物質(zhì)量控制和考察工藝的穩(wěn)定性的指標(biāo)。
權(quán)利要求
1.由中藥材熟地黃320g、山茱萸(制)160g、山藥160g、牡丹皮120g、茯苓120g、澤瀉120g制成的六味地黃膏的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法包括(1)、用高效液相色譜法測定該藥物中芍藥苷的含量；(2)、用薄層色譜法鑒別該藥物中藥材山茱萸。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的六味地黃膏的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法包括下列步驟(1)、用高效液相色譜法測定該藥物中芍藥苷的含量a.色譜條件填充劑 十八烷基硅烷鍵合硅膠流動相 乙腈--水檢測波長230±2nmb.對照品溶液的制備精密稱取芍藥苷對照品適量，加有機溶劑或水中的任一種溶解制成溶液；c.供試品溶液的制備取本品，加水稀釋后，用水飽和正丁醇提取，醇液蒸干后，殘渣用有機溶劑或水中的任一種溶解，稀釋并定容；d.芍藥苷的含量測定方法分別精密量取對照品溶液與供試品溶液，注入液相色譜儀，測定芍藥苷的含量；(2)、該藥物中藥材山茱萸用薄層色譜法鑒別a.對照藥材溶液的制備取山茱萸對照藥材，加乙醇回流提取，濾取提取液，蒸干，殘渣加水溶解，用乙醚萃取，乙醚液蒸干，殘渣溶于乙酸乙酯中，即為對照藥材溶液；b.供試品溶液的制備取本品，加乙醇振搖混勻，置水浴中回流提取，提取液蒸至無醇味，加水稀釋，用乙醚萃取，乙醚液用5％NaHCO3溶液洗滌，再用水洗滌，乙醚液蒸干，殘渣溶于醋酸乙酯中，即為供試品溶液；c.照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液，點于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-氯仿-醋酸乙酯為展開劑，噴以醋酐-濃硫酸-無水乙醇溶液，烘至斑點清晰，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。
3.根據(jù)權(quán)利要求2的六味地黃膏的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法包括下列步驟(1)、用高效液相色譜法測定該藥物中芍藥苷的含量a.色譜條件填充劑 十八烷基硅烷鍵合硅膠流動相 乙腈--水(10-20∶90-80)檢測波長230±2nm；b對照品溶液的制備精密稱取芍藥苷對照品適量，加甲醇或乙醇或水中的任一種制成每1ml含5--50μg的溶液；c.供試品溶液的制備取本品0.5--3g，精密稱定，加水10--25ml，攪拌稀釋，移至分液漏斗中，加水飽和正丁醇提取3--6次，每次10--25ml，合并醇液，置水浴上蒸干，殘渣用甲醇或乙醇或水中的任一種適量溶解，移置10--25ml量瓶中，稀釋并定容至刻度，搖勻，即得；d.芍藥苷的含量測定方法分別精密量取對照品溶液與供試品溶液各5--20μl，注入液相色譜儀，測定芍藥苷的含量；e.每克含牡丹皮以芍藥苷(C23H28O11)計，不得低于0.08mg。(2)、該藥物中藥材山茱萸用薄層色譜法鑒別a.對照藥材溶液的制備取山茱萸對照藥材0.5-4g，加乙醇20-100ml回流0.5-2小時，濾過，濾液蒸干，殘渣加水10-30ml溶解，用乙醚30-90ml分次萃取，合并乙醚溶液，蒸干，殘渣溶于0.5ml乙酸乙酯中，即為對照藥材溶液；b.供試品溶液的制備取本品10-50g，加95％乙醇20-100ml，振搖10分鐘使混勻，置水浴中回流0.5-2小時，趁熱過濾，濾液蒸至無醇味，加水10-50ml攪拌稀釋，移至分液漏斗中，用乙醚萃取2-5次，每次10-50ml，合并乙醚溶液，用5％NaHCO3溶液20-50ml分次洗滌，再用水約10-50ml洗滌，乙醚溶液蒸干，殘渣溶于0.5ml醋酸乙酯中，即為供試品溶液；c.照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5-20ul，點于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-氯仿-醋酸乙酯(20∶5∶5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以醋酐-濃硫酸-無水乙醇(1∶1∶5)溶液，在105℃烘至斑點清晰，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的六味地黃膏的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法包括下列步驟(1)、用高效液相色譜法測定該藥物中芍藥苷的含量a.色譜條件填充劑 十八烷基硅烷鍵合硅膠流動相 乙腈--水(12∶88)檢測波長 230nm；b.對照品溶液的制備精密稱取芍藥苷對照品適量，加甲醇制成每1ml含20μg的溶液；c.供試品溶液的制備取本品1g，精密稱定，加水10ml，攪拌稀釋，移至分液漏斗中，加水飽和正丁醇提取4次，每次10ml，合并醇液，置水浴上蒸干，殘渣用甲醇適量溶解，移置10ml量瓶中，稀釋并定容至刻度，搖勻；d.芍藥苷的含量測定方法分別精密量取對照品溶液與供試品溶液各5μl，注入液相色譜儀，測定芍藥苷的含量；e.每克含牡丹皮以芍藥苷(C23H28O11)計，不得低于0.08mg。(2)、該藥物中藥材山茱萸用薄層色譜法鑒別a.對照藥材溶液的制備稱取山茱萸對照藥材2g，加乙醇50ml回流1小時，濾過，濾液蒸干，殘渣加水10ml溶解，用乙醚30ml分次萃取，合并乙醚溶液，蒸干，殘渣溶于0.5ml乙酸乙酯中，即為對照藥材溶液；b.供試品溶液的制備取本品30g，加95％乙醇60ml，振搖10分鐘使混勻，置水浴中回流1小時，趁熱過濾，濾液蒸至無醇味，加水30ml攪拌稀釋，移至分液漏斗中，用乙醚萃取三次，每次20ml，合并乙醚溶液，用5％NaHCO3溶液30ml分次洗滌，再用水約15ml洗滌，乙醚溶液蒸干，殘渣溶于0.5ml醋酸乙酯中；c.照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各10ul，點于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-氯仿-醋酸乙酯(20∶5∶5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以醋酐-濃硫酸-無水乙醇(1∶1∶5)溶液，在105℃烘至斑點清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一所述的六味地黃膏的質(zhì)量控制方法，其特征在于色譜條件選用乙腈--水為流動相。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的六味地黃膏的質(zhì)量控制方法，其特征在于色譜條件選用乙腈--水(10-20∶90-80)為流動相。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的六味地黃膏的質(zhì)量控制方法，其特征在于色譜條件選用乙腈--水(12∶88)為流動相。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一所述的六味地黃膏的質(zhì)量控制方法，其特征在于選定波長230±2nm為測定波長。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的六味地黃膏的質(zhì)量控制方法，其特征在于選定波長230nm為測定波長。
全文摘要
本發(fā)明涉及《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》(中藥成方制劑)第三冊(WS3－B－2489－97)中滋陰補腎藥物六味地黃膏新的質(zhì)量控制方法，該藥物由中藥材熟地黃、山茱萸(制)、山藥、牡丹皮、茯苓、澤瀉制成，具體的是利用高效液相色譜法測定六味地黃膏中芍藥苷的含量，方法簡便、重現(xiàn)性好、結(jié)果準(zhǔn)確；用薄層色譜法鑒別六味地黃膏中中藥材山茱萸，專屬、可行，保證了質(zhì)量檢測標(biāo)準(zhǔn)的準(zhǔn)確性和先進性，能夠有效地控制六味地黃膏的質(zhì)量。
文檔編號G01N30/88GK1609609SQ200410078888
公開日2005年4月27日 申請日期2004年9月23日 優(yōu)先權(quán)日2004年9月23日
發(fā)明者季巧遇, 李詒光, 徐昌瑞 申請人:江西江中藥業(yè)股份有限公司