專利名稱:一種雙標(biāo)記檢測試紙的制作方法
【專利摘要】為了克服現(xiàn)有免疫膠體金檢測技術(shù)只能做定性或者半定量檢測而不能做定量檢測；應(yīng)用免疫膠體金檢測技術(shù)的膠體金免疫檢測試紙檢測靈敏度低，對于含量較低的樣品，易造成假陰性導(dǎo)致檢出率較低的缺點(diǎn)。本實(shí)用新型提出一種雙標(biāo)記檢測試紙，該雙標(biāo)記檢測試紙包括樣品墊和吸水墊，其特征在于：所述樣品墊和吸水墊之間搭接有兩條以上相互獨(dú)立的檢測條；所述檢測條中至少有一個(gè)膠體金免疫檢測條和一個(gè)熒光量子點(diǎn)檢測條。本實(shí)用新型的雙標(biāo)記檢測試紙可以實(shí)現(xiàn)定量和定性檢測，并且靈敏度高，檢出率高?？梢詫?shí)現(xiàn)一項(xiàng)多檢，省時(shí)省力。
【專利說明】一種雙標(biāo)記檢測試紙

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本實(shí)用新型涉及免疫檢測【技術(shù)領(lǐng)域】，特別涉及到一種雙標(biāo)記檢測試紙。

【背景技術(shù)】
[0002]免疫膠體金技術(shù)是上世紀(jì)90年代發(fā)展起來的一種簡便、快速、準(zhǔn)確的檢測技術(shù)，其原理與雙夾心ELISA相似，不同的是使用膠體金結(jié)合蛋白質(zhì)形成的復(fù)合物作為探針，且所使用的試劑事先都被固定在具有微孔的硝酸纖維素膜上。使用時(shí)將一端置于檢測液中，硝酸纖維素膜可被液體穿過，若檢測液中含有相關(guān)的抗原或抗體。在檢測區(qū)就會(huì)出現(xiàn)淡紅色線條。否則為陰性。該技術(shù)問世以來已在臨床上不斷被采用，該方法不依賴于精密的儀器、不依賴于熟練的技術(shù)人員、操作步驟簡捷，比起目前常用的酶聯(lián)免疫法具有更大的優(yōu)點(diǎn)。整個(gè)反應(yīng)過程約在5分鐘內(nèi)就可以完成。但膠體金免疫檢測試紙?jiān)谶\(yùn)用上具有以下缺點(diǎn):單純依靠顯色深淺來判斷結(jié)果的膠體金快速免疫檢測試紙，只能作定性或半定量檢測而不能做定量檢測；由于方法學(xué)的限制，只使用膠體金為標(biāo)記物的快速免疫檢測試紙，其靈敏度較低；對于某些抗原含量較低的樣品，由于膠體金免疫檢測試紙受靈敏度限制，會(huì)造成假陰性，因而檢出率較低。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]為了克服現(xiàn)有免疫膠體金檢測技術(shù)只能做定性或者半定量檢測而不能做定量檢測；應(yīng)用免疫膠體金檢測技術(shù)的膠體金免疫檢測試紙檢測靈敏度低，對于含量較低的樣品，易造成假陰性導(dǎo)致檢出率較低的缺點(diǎn)。本實(shí)用新型提出一種雙標(biāo)記檢測試紙，該雙標(biāo)記檢測試紙可以實(shí)現(xiàn)定量和定性檢測，并且靈敏度高，檢出率高；同時(shí)可以實(shí)現(xiàn)一樣多檢，省時(shí)省力，方便快捷。
[0004]半導(dǎo)體量子點(diǎn)，簡稱量子點(diǎn)(quantum dots，QDs)，顧名思義，即材料的尺寸在三維空間進(jìn)行約束并達(dá)到一定的臨界尺寸(可抽象為一個(gè)點(diǎn))，因此其表現(xiàn)出許多獨(dú)特的光、電特性。1998年，美國加州伯克利大學(xué)的Alivisatos小組和印第安納大學(xué)Nie小組同時(shí)提出熒光量子點(diǎn)可應(yīng)用于生物標(biāo)記這一思想，開創(chuàng)了熒光量子點(diǎn)在生物技術(shù)中研宄應(yīng)用的先河?！读孔狱c(diǎn)的應(yīng)用一一一種新型的熒光檢測技術(shù)》(徐飛，丁雙陽；中國農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院)一文系統(tǒng)的介紹了現(xiàn)階段量子點(diǎn)熒光檢測技術(shù)的研宄進(jìn)展。
[0005]本實(shí)用新型雙標(biāo)記檢測試紙的發(fā)明創(chuàng)造構(gòu)思是在傳統(tǒng)的膠體金免疫半定量檢測的基礎(chǔ)上同時(shí)引入熒光量子點(diǎn)定量檢測。具體實(shí)施內(nèi)容如下:
[0006]本實(shí)用新型一種雙標(biāo)記檢測試紙包括兩條以上相互獨(dú)立的檢測條，檢測條的一端搭接共用一個(gè)樣品墊，檢測條的另一端既可以搭接共用一個(gè)吸水墊，也可以分別搭接有各自獨(dú)立的吸水墊。
[0007]優(yōu)選的，所述檢測條中至少有一個(gè)膠體金免疫檢測條和一個(gè)熒光量子點(diǎn)檢測條。優(yōu)選的，所述檢測條僅由數(shù)個(gè)靈敏度不同的膠體金免疫檢測條組成；更為優(yōu)選的，所述檢測條僅由數(shù)個(gè)靈敏度不同的熒光量子點(diǎn)檢測條組成。
[0008]優(yōu)選的，該雙標(biāo)記檢測試紙包括兩條相互獨(dú)立的檢測條。
[0009]優(yōu)選的，膠體金免疫檢測條具體包括相互搭接的膠體金墊和第一 NC膜，膠體金墊遠(yuǎn)離第一 NC膜的一端與樣品墊搭接，第一 NC膜遠(yuǎn)離膠體金墊的一端與吸水墊搭接；膠體金墊為涂覆有包含抗體一的膠體金溶液的玻璃纖維膜，第一 NC膜上設(shè)置有檢測線，檢測線上涂覆有抗體二；
[0010]熒光量子點(diǎn)檢測條具體包括相互搭接的量子點(diǎn)墊和第二 NC膜，量子點(diǎn)墊遠(yuǎn)離第二 NC膜的一端與樣品墊搭接，第二 NC膜遠(yuǎn)離量子點(diǎn)墊的一端與吸水墊搭接；量子點(diǎn)墊為涂覆有活化后與抗體三共價(jià)結(jié)合的量子點(diǎn)的玻璃纖維膜，第二 NC膜上設(shè)置有檢測線，檢測線上涂覆有抗體四；
[0011]抗體一和抗體二為待檢測目標(biāo)抗原的兩種不同結(jié)合位點(diǎn)的特異性結(jié)合抗體；
[0012]所述抗體三和抗體四為待檢測目標(biāo)抗原的兩種不同結(jié)合位點(diǎn)的特異性結(jié)合抗體。
[0013]更為優(yōu)選的，抗體三替換為抗體一或抗體二。更為優(yōu)選的，抗體四替換為抗體一或抗體二。更為優(yōu)選的，抗體三替換為抗體一，同時(shí)抗體四替換為抗體二。更為優(yōu)選的，抗體三替換為抗體二，同時(shí)抗體四替換為抗體一。
[0014]優(yōu)選的，第一 NC膜和第二 NC膜上分別設(shè)置有第一 NC膜質(zhì)控線和第二 NC膜質(zhì)控線，第一 NC膜質(zhì)控線和第二 NC膜質(zhì)控線上涂覆有監(jiān)控檢測條質(zhì)量的多抗抗體。所述多抗抗體可以與抗體一、二、三、四或目標(biāo)抗原特異性結(jié)合，可以通過質(zhì)控線來判斷該檢測試紙是否已被使用或者是否已經(jīng)失效處于異常狀態(tài)。
[0015]優(yōu)選的，第一 NC膜上兩條并列的檢測線和質(zhì)控線之間的間距為0.8cm，所述第二NC膜上兩條并列的檢測線和質(zhì)控線之間的間距為0.Scm0
[0016]進(jìn)一步優(yōu)選的，樣品墊、膠體金免疫檢測條、熒光量子點(diǎn)檢測條和吸水墊固定在底板上。
[0017]應(yīng)當(dāng)明確的是，本實(shí)用新型的雙標(biāo)記檢測試紙的應(yīng)用不局限于待檢測抗原的種類，而只需要選用與之適配的抗體制備雙標(biāo)記檢測試紙即可。即便如此，經(jīng)過 申請人:的試驗(yàn)，本實(shí)用新型雙標(biāo)記檢測試紙尤其適用于人絨毛膜促性腺激素、艾滋病病毒的檢測。
[0018]還應(yīng)當(dāng)明確的是，本實(shí)用新型技術(shù)方案的實(shí)現(xiàn)不依賴于膠體金免疫檢測條和熒光量子點(diǎn)檢測條的具體制備方法。任意一種現(xiàn)有技術(shù)膠體金免疫檢測條和熒光量子點(diǎn)檢測條的制備方法，只要選用與待檢目標(biāo)抗原適配的抗體即可實(shí)現(xiàn)本實(shí)用新型的技術(shù)方案。即便如此，下文中依然給出一種具體的膠體金免疫檢測條和熒光量子點(diǎn)檢測條的具體制備方法。
[0019]一、膠體金免疫檢測條中膠體金墊的制備
[0020]1、膠體金溶液的制備
[0021]將超純水置磁力攪拌器上攪拌加熱至沸騰，按終質(zhì)量濃度為萬分之一的量迅速加入質(zhì)量濃度為1%的氯金酸溶液，煮沸5分鐘；再按所加入氯金酸溶液等體積量加入質(zhì)量濃度為1%的檸檬酸三鈉溶液，煮沸10分鐘后，冷卻至室溫，用超純水定容至氯金酸終濃度為萬分之一，常溫避光保存?zhèn)溆谩?br> [0022]2、膠體金與抗體結(jié)合
[0023]用2mol/L碳酸鉀溶液調(diào)節(jié)膠體金溶液pH值至7.0。按3Pg抗體/毫升膠體金溶液的比例濃度加入抗體一，混勻，靜置10分鐘；再按2%體積量加入濃度為20%的BSA溶液，混勻，靜置10分鐘；13000rpm離心15分鐘，棄上清，沉淀用標(biāo)記洗滌液洗滌一次，離心后棄上清，沉淀用二十分之一初始膠體金體積的金標(biāo)抗體保存液溶解。
[0024]3、膠體金標(biāo)記抗體一的固定與干燥
[0025]將所述的膠體金標(biāo)記抗體一用百德(B1-Dot)儀的噴頭按每毫升溶液鋪15平方厘米的量涂覆在玻璃纖維膜上，形成膠體金墊，真空干燥2小時(shí)后，置裝有干燥劑的密封袋中保存?zhèn)溆谩?br> [0026]二、熒光量子點(diǎn)檢測條中量子點(diǎn)墊的制備
[0027]1、量子點(diǎn)的制備
[0028]量子點(diǎn)采用有機(jī)相合成，主要是以Cd、Zn的氧化物或鹽等為原料，采用長鏈脂肪酸、脂肪胺和其他種類的磷酸氧化物等充當(dāng)配體，以十八烯、三辛基氧化磷等高熔點(diǎn)有機(jī)化合物為溶劑，在高溫條件下生長得到高質(zhì)量的熒光量子點(diǎn)。有機(jī)相合成量子點(diǎn)的優(yōu)勢在于:反應(yīng)溫度較高，所得量子點(diǎn)熒光量子產(chǎn)率較高，熒光半峰寬較窄。
[0029]2、量子點(diǎn)與抗體結(jié)合以及抗體的固定與干燥
[0030]量子點(diǎn)通過EDC活化與目標(biāo)抗原的抗體一共價(jià)結(jié)合后，將所述的量子點(diǎn)標(biāo)記抗體一用百德(B1-Dot)儀的噴頭按每毫升溶液鋪15平方厘米的量涂覆在玻璃纖維膜上，形成量子點(diǎn)墊，真空干燥2小時(shí)后，置裝有干燥劑的密封袋中保存?zhèn)溆谩?br> [0031]三、膠體金免疫檢測條和熒光量子點(diǎn)檢測條中第一、第二 NC膜的制備
[0032]NC膜即硝酸纖維素膜。將目標(biāo)抗原的另一抗體——抗體二用百德(B1-Dot)儀的噴頭噴到醋酸纖維素膜或硝酸纖維素上形成檢測線；間隔0.8cm將多抗抗體噴上形成質(zhì)控線。形成質(zhì)控線所噴涂的多抗抗體為可以與抗體一、抗體二和/或目標(biāo)抗原特異性結(jié)合的抗體，優(yōu)選羊抗人或兔抗人。
[0033]四、將步驟一二和三準(zhǔn)備好的膠體金墊、量子點(diǎn)墊和第一第二 NC膜，連同樣品墊和吸水墊一起按照前述本實(shí)用新型雙標(biāo)記檢測試紙中記載的結(jié)構(gòu)依序搭接在一起，即可得到本實(shí)用新型的雙標(biāo)記檢測試紙。
[0034]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本實(shí)用新型雙標(biāo)記檢測試紙的有益效果如下:
[0035]其一，本實(shí)用新型雙標(biāo)記檢測試紙?jiān)谀z體金半定量檢測的基礎(chǔ)上引入了熒光量子點(diǎn)檢測技術(shù)，定性檢測方面:與膠體金檢測技術(shù)互補(bǔ)，檢測靈敏度高；熒光量子點(diǎn)檢測條即使對于目標(biāo)抗原含量較低的樣品也能準(zhǔn)確檢出，檢出率高，不易出現(xiàn)假陰性的現(xiàn)象。
[0036]其二，本實(shí)用新型雙標(biāo)記檢測試紙，定量檢測方面:利用熒光量子點(diǎn)檢測的特點(diǎn)，能夠得到更為精確的定量檢測結(jié)果；同時(shí)，膠體金免疫檢測條檢測與熒光量子點(diǎn)檢測條檢測相互配合，可以避免出現(xiàn)因任一檢測條失效而導(dǎo)致的錯(cuò)檢現(xiàn)象，且兩者互相參照也可以得到更為準(zhǔn)確的定量檢測結(jié)果。
[0037]其三，本實(shí)用新型雙標(biāo)記檢測試紙引入了熒光量子點(diǎn)檢測條，熒光量子點(diǎn)檢測除了擁有熒光材料的高靈敏性，同時(shí)具有激發(fā)光譜寬且連續(xù)分布，發(fā)射光譜窄而對稱，顏色可調(diào)，光化學(xué)穩(wěn)定性高，熒光壽命長等優(yōu)點(diǎn)。

【附圖說明】

[0038]附圖1為本實(shí)用新型雙標(biāo)記檢測試紙實(shí)施例1的結(jié)構(gòu)示意圖；
[0039]附圖1中:I為樣品墊，2為膠體金墊，3為第一 NC膜，3-1為第一 NC膜檢測線，3-2為第一 NC膜質(zhì)控線，4為吸水墊，5為第二 NC膜，5-1為第二 NC膜檢測線，5_2為第二 NC膜質(zhì)控線，6為量子點(diǎn)墊。

【具體實(shí)施方式】
[0040]下面結(jié)合附圖及具體實(shí)施例對本實(shí)用新型作進(jìn)一步闡述。
[0041]如附圖1所示，本實(shí)施例1的雙標(biāo)記檢測試紙包括樣品墊I和吸水墊4，其特征在于:所述樣品墊I和吸水墊4之間搭接有兩條相互獨(dú)立的檢測條；所述檢測條中有一個(gè)膠體金免疫檢測條和一個(gè)熒光量子點(diǎn)檢測條。
[0042]膠體金免疫檢測條具體包括相互搭接的膠體金墊2和第一 NC膜3，膠體金墊2遠(yuǎn)離第一 NC膜3的一端與樣品墊搭接，第一 NC膜3遠(yuǎn)離膠體金墊2的一端與吸水墊4搭接；膠體金墊為涂覆有包含抗體一的膠體金溶液的玻璃纖維膜，第一 NC膜3上并列設(shè)置有檢測線3-1和質(zhì)控線3-2，檢測線3-1和質(zhì)控線3-2上分別涂覆有抗體二和多抗抗體，檢測線3_1和質(zhì)控線3-2兩者的間距為0.8cm ；
[0043]焚光量子點(diǎn)檢測條具體包括相互搭接的量子點(diǎn)墊6和第二 NC膜5，量子點(diǎn)墊6遠(yuǎn)離第二 NC膜5的一端與樣品墊I搭接，第二 NC膜5遠(yuǎn)離量子點(diǎn)墊6的一端與吸水墊4搭接；量子點(diǎn)墊6為涂覆有活化后與抗體一共價(jià)結(jié)合的量子點(diǎn)的玻璃纖維膜，第二 NC膜5上并列設(shè)置有檢測線5-1和質(zhì)控線5-2，檢測線5-1和質(zhì)控線5-2上分別涂覆有抗體二和多抗抗體，檢測線5-1和質(zhì)控線5-2兩者的間距為0.8cm ;
[0044]抗體一和抗體二為待檢測目標(biāo)抗原的兩種不同結(jié)合位點(diǎn)的特異性結(jié)合抗體。
[0045]多抗抗體能夠與抗體一、抗體二和目標(biāo)抗原特異性結(jié)合。
[0046]以上通過一個(gè)較佳的實(shí)施例對本實(shí)用新型作了詳盡的闡述，應(yīng)當(dāng)明確的是，所列舉的實(shí)施例不應(yīng)當(dāng)理解成為對本實(shí)用新型保護(hù)范圍的限制。本實(shí)用新型的保護(hù)范圍應(yīng)當(dāng)以權(quán)利要求書限定的內(nèi)容為準(zhǔn)，并且說明書及其附圖可以用來解釋權(quán)利要求書。
【權(quán)利要求】
1.一種雙標(biāo)記檢測試紙，特征在于:包括兩條以上相互獨(dú)立的檢測條，檢測條的一端搭接共用一個(gè)樣品墊(I )，檢測條的另一端搭接有吸水墊(4)。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雙標(biāo)記檢測試紙，其特征在于:所述檢測條中至少有一個(gè)膠體金免疫檢測條和一個(gè)熒光量子點(diǎn)檢測條。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的雙標(biāo)記檢測試紙，其特征在于:該雙標(biāo)記檢測試紙包括兩條相互獨(dú)立的檢測條。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的雙標(biāo)記檢測試紙，其特征在于: 所述膠體金免疫檢測條具體包括相互搭接的膠體金墊(2 )和第一 NC膜(3 )，膠體金墊(2 )遠(yuǎn)離第一 NC膜(3 )的一端與樣品墊(I)搭接，第一 NC膜(3 )遠(yuǎn)離膠體金墊(2 )的一端與吸水墊(4)搭接；膠體金墊(2)為涂覆有包含抗體一的膠體金溶液的玻璃纖維膜，第一 NC膜(3 )上設(shè)置有檢測線(3-1)，檢測線(3-1)上涂覆有抗體二 ； 所述熒光量子點(diǎn)檢測條具體包括相互搭接的量子點(diǎn)墊(6)和第二 NC膜(5)，量子點(diǎn)墊(6 )遠(yuǎn)離第二 NC膜(5 )的一端與樣品墊(I)搭接，第二 NC膜(5 )遠(yuǎn)離量子點(diǎn)墊(6 )的一端與吸水墊(4)搭接；量子點(diǎn)墊(6)為涂覆有活化后與抗體三共價(jià)結(jié)合的量子點(diǎn)的玻璃纖維膜，第二 NC膜(5)上設(shè)置有檢測線(5-1)，檢測線(5-1)上涂覆有抗體四； 所述抗體一和抗體二為待檢測目標(biāo)抗原的兩種不同結(jié)合位點(diǎn)的特異性結(jié)合抗體； 所述抗體三和抗體四為待檢測目標(biāo)抗原的兩種不同結(jié)合位點(diǎn)的特異性結(jié)合抗體。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的雙標(biāo)記檢測試紙，其特征在于:所述抗體三替換為抗體一或抗體二。6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的雙標(biāo)記檢測試紙，其特征在于:所述抗體四替換為抗體一或抗體二。7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的雙標(biāo)記檢測試紙，其特征在于:所述抗體三替換為抗體一，同時(shí)抗體四替換為抗體二 ；或者；抗體三替換為抗體二，同時(shí)抗體四替換為抗體一。8.根據(jù)權(quán)利要求4~7任一權(quán)利要求所述的雙標(biāo)記檢測試紙，其特征在于:所述第一NC膜(3)和第二 NC膜(5)上分別設(shè)置有第一 NC膜質(zhì)控線(3-2)和第二 NC膜質(zhì)控線(5_2)，第一 NC膜質(zhì)控線(3-2)和第二 NC膜質(zhì)控線(5-2)上涂覆有監(jiān)控檢測條質(zhì)量的多抗抗體。9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的雙標(biāo)記檢測試紙，其特征在于:所述第一NC膜(3)上兩條并列的檢測線(3-1)和質(zhì)控線(3-2)之間的間距為0.8cm，所述第二 NC膜(5)上兩條并列的檢測線(5-1)和質(zhì)控線(5-2)之間的間距為0.Scm010.根據(jù)權(quán)利要求9所述的雙標(biāo)記檢測試紙，其特征在于:所述樣品墊(I)、膠體金免疫檢測條、熒光量子點(diǎn)檢測條和吸水墊(4)固定在底板上。
【文檔編號(hào)】G01N33-571GK204287188SQ201420715242
【發(fā)明者】胡麗娜, 高千 [申請人]胡麗娜, 高千