專利名稱：用生化酶標(biāo)多功能分析儀測(cè)試無(wú)機(jī)離子超微量檢測(cè)技術(shù)的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬醫(yī)學(xué)電解質(zhì)檢驗(yàn)領(lǐng)域。具體說(shuō)是一種用生化酶標(biāo)多功能分析儀測(cè)試無(wú)機(jī)離子超微量檢測(cè)技術(shù)的方法。
無(wú)機(jī)離子檢驗(yàn)是醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)的重要組成部分之一。無(wú)機(jī)離子分析朝著微量、快速、準(zhǔn)確、方便的方向發(fā)展是當(dāng)前國(guó)內(nèi)外醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)的必然趨勢(shì)。
目前，國(guó)內(nèi)外生產(chǎn)的先進(jìn)的全自動(dòng)鉀、鈉、氯、鈣分析儀、全自動(dòng)電解質(zhì)分析儀多已微量、快速、準(zhǔn)確、自動(dòng)化程度高，但都脫離不了電極，而電極使用壽命比較短，更換一次成本高。鑒于我國(guó)現(xiàn)狀，由于受經(jīng)濟(jì)、維修、試劑等種種條件的限制，至今尚未能普遍推廣先進(jìn)的全自動(dòng)電解質(zhì)分析儀，多數(shù)實(shí)驗(yàn)室仍使用的是火焰光度分析法和常用的比色法，而這兩法都存在著結(jié)果不穩(wěn)定、重復(fù)性差，且都需人工計(jì)算的不足。火焰光度分析法又因去離子水、標(biāo)本存放要求高和所用的燃料汽油、液化石油氣等有一定的危險(xiǎn)性。常用的比色法又因手工操作比色測(cè)試速度慢等缺點(diǎn)。若能實(shí)現(xiàn)即快速又準(zhǔn)確的比色分析設(shè)備和技術(shù)方法，則具有更大的技術(shù)上的優(yōu)越性和應(yīng)用上的實(shí)際意義。
本發(fā)明的目的在于避免上述現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足之處而采用現(xiàn)有的微孔板代替試管和比色杯，并在孔內(nèi)直接進(jìn)行試驗(yàn)操作，達(dá)到加入多個(gè)已知含量數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)品，經(jīng)測(cè)試給出的含量是否一致的一種用生化酶標(biāo)多功能分析儀測(cè)試無(wú)機(jī)離子超微量檢測(cè)技術(shù)的方法。
本發(fā)明的目的可以通過(guò)以下措施來(lái)達(dá)到一種用生化酶標(biāo)多功能分析儀測(cè)試無(wú)機(jī)離子超微量檢測(cè)技術(shù)的方法，其特征在于a．按末梢血常規(guī)采集方法將微量采血塑料管上端口接觸血滴，下端放低，邊輕擠邊進(jìn)血至需要量后燒熔下端，用鑷子捏緊封固或不封口，將微量采血塑料管折成“V”型插入一次性注射器的針頭塑料套內(nèi)，在針頭塑料套管或采血塑料管上貼上不干膠序號(hào)，離心分離血清備用；b．取潔凈8×12標(biāo)準(zhǔn)96微孔板一塊；c．采用微量定量加樣器，取標(biāo)準(zhǔn)品和被測(cè)樣品，定量加入微孔板各孔內(nèi)；d．用微量可調(diào)移液器，按所需試劑用量，定量加入上述各孔內(nèi)；e．將微孔板置室溫達(dá)到試驗(yàn)所需反應(yīng)時(shí)間；f．將微孔板置生化酶標(biāo)多功能分析儀測(cè)量室內(nèi)，在90s內(nèi)同時(shí)打印出1～90份結(jié)果報(bào)告。
本發(fā)明的目的還可以通過(guò)以下措施來(lái)達(dá)到本發(fā)明采用1μl.2μl.3μl.5μl.10μl.20μl.25μl微量定量加樣器，取標(biāo)準(zhǔn)品于2-4個(gè)孔內(nèi)和被測(cè)樣品定量加入微孔板各孔內(nèi)。
本發(fā)明采用50-250μl、100-500μl微量可調(diào)移液器。
本發(fā)明采用內(nèi)徑2-3mm的聚乙烯塑料管制成5-7cm規(guī)格的微量采血塑料管。
本發(fā)明相比現(xiàn)有技術(shù)方法具有如下優(yōu)點(diǎn)1．無(wú)機(jī)離子測(cè)定的方法有很多，最常用的是比色法。方法可靠，但重復(fù)性差，同一份標(biāo)本多次檢測(cè)往往會(huì)出現(xiàn)不同的結(jié)果。究其原因，除了采樣、加樣、操作因素外，主要是檢測(cè)儀器的精密度和靈敏度不夠。而本發(fā)明采用一整套適應(yīng)無(wú)機(jī)離子超微量檢測(cè)的生化酶標(biāo)多功能分析儀和相應(yīng)的技術(shù)方法，不僅提高了儀器的精密度和靈敏度而且能使同份標(biāo)本、同批標(biāo)本測(cè)試結(jié)果基本保持一致。
2．比色法和火焰光度分析法都需人工進(jìn)行比色、速度慢，存在著比色時(shí)間段之間對(duì)結(jié)果的誤差。而用現(xiàn)有技術(shù)方法在大批量標(biāo)本檢測(cè)中，避免了因標(biāo)準(zhǔn)品與被測(cè)樣品前后比色的時(shí)間過(guò)長(zhǎng)而直接影響測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性。
3．用現(xiàn)有技術(shù)方法比色分析速度快。90份樣品僅用90s即可測(cè)試打印出結(jié)果報(bào)告。
4．各種耗材少。從取血液到發(fā)出報(bào)告，無(wú)需注射器、試管、吸管、比色杯。減少了清洗工作，節(jié)省人力，提高了工作效率。
5．鑒于國(guó)內(nèi)外生產(chǎn)的先進(jìn)的全自動(dòng)電解質(zhì)分析儀，多已微量、快速、準(zhǔn)確、自動(dòng)化程度高。但測(cè)量腔易氣泡、管道易堵塞，更脫離不了電極，而電極使用壽命比較短，更換一次成本高。目前我國(guó)多數(shù)實(shí)驗(yàn)室仍使用的是火焰光度分析法和常用的比色法，火焰光度計(jì)又因所用的燃料汽油、液化石油氣等有一定的危險(xiǎn)性。而本發(fā)明采用一整套適應(yīng)無(wú)機(jī)離子超微量檢測(cè)的生化酶標(biāo)多功能分析儀和相應(yīng)的技術(shù)方法，是以2-4個(gè)已知含量數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)品隨被測(cè)樣品經(jīng)測(cè)試后，每次均能達(dá)到已知含量數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)，來(lái)提高被測(cè)標(biāo)本結(jié)果的準(zhǔn)確性。
實(shí)施例1血清鈣測(cè)定(鄰-甲酚酞絡(luò)合酮直接比色法)1．末梢血采集(1)采血部位成人以左手無(wú)名指為宜，半歲以下嬰幼兒通常以拇指或足跟采血。
(2)輕輕按摩采血部位，使其自然充血，用75％乙醇棉球消毒局部皮膚、待干。
(3)緊捏刺血部位，用無(wú)菌采血針穿刺取血。動(dòng)作應(yīng)迅速，深度約2-3mm，以稍加擠壓血液能流出為宜。
(4)取內(nèi)徑2-3mm長(zhǎng)5-7cm規(guī)格的聚乙烯塑料管(微量采血塑料管)上端口接觸血滴，下端放低，邊輕擠邊進(jìn)血，約采1滴血后燒熔下端，用鑷子捏緊封固或不封口，將微量采血塑料管折成“V”型插入一次性注射器的針頭塑料套內(nèi)，在針頭塑料套管或采血塑料管上貼上不干膠序號(hào)，離心分離血清備用。
2．原理樣品中的鈣離子在堿性條件下與鄰-甲酚酞絡(luò)合酮絡(luò)合，生成紫紅色絡(luò)合物，在580nm波長(zhǎng)下有特異吸收峰，顏色的深淺與鈣的濃度成正比。并加入8-羥基喹啉螯合樣品中的鎂離子以消除干擾，通過(guò)比色測(cè)定求出鈣的含量。
3．試劑(1)、鄰-甲酚酞絡(luò)合酮顯色劑稱取8-羥基喹啉500mg，置燒杯中，加濃鹽酸5ml，使其溶解并轉(zhuǎn)入500ml容量瓶中，再加入鄰-甲酚酞絡(luò)合酮25mg，待完全溶解后，加Tri-tonX-100 lml，混勻，然后加入去離子水至刻度。置聚乙烯瓶?jī)?nèi)保存。
(2)、1mol/L AMP堿性緩沖液稱取2-氨基-2-甲基-1-丙醇89.14g，置1L容量瓶中，加500ml去離子水溶解，待完全溶解后加至刻度。置聚乙烯瓶?jī)?nèi)室溫保存。
(3)、顯色應(yīng)用液應(yīng)用時(shí)，根據(jù)標(biāo)本的多少將上述兩液等量混合。
(4)、鈣標(biāo)準(zhǔn)液2.5mmol/L4．加樣取潔凈8×12標(biāo)準(zhǔn)96微孔板一塊按下表加樣
混勻，置室溫5分鐘。
5．測(cè)試將試驗(yàn)微孔板置生化酶標(biāo)多功能分析儀測(cè)量室內(nèi)，用580nm單波長(zhǎng)、設(shè)空白孔和標(biāo)準(zhǔn)孔位，確認(rèn)Au/As*C公式，設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品單位含量鈣標(biāo)準(zhǔn)品為2.5mmol/L即設(shè)置C=002.5，啟動(dòng)測(cè)量打印各孔血清鈣含量的結(jié)果報(bào)告。
6．結(jié)果血鈣測(cè)定 鄰-甲酚酞絡(luò)合酮-比色法試劑 北京北化精細(xì)化學(xué)品有限責(zé)任公司生產(chǎn)批號(hào) 000110波長(zhǎng)方式 單波長(zhǎng)測(cè)量波長(zhǎng) 580nm標(biāo)準(zhǔn)液(品) 2.5mmol/L報(bào)告方式 1、血鈣測(cè)試結(jié)果2、吸光度測(cè)試結(jié)果使用公式 Au/As*C標(biāo)準(zhǔn)品單位含量設(shè)置 C=0025(2.5mmol/L)兩種報(bào)告方式如下1、血鈣測(cè)定結(jié)果 A行01、02、03孔為空白調(diào)“O”孔，04、05、06、07孔為標(biāo)準(zhǔn)品測(cè)定結(jié)果，其余為標(biāo)本測(cè)定孔結(jié)果。
2、吸光度測(cè)試結(jié)果與生化測(cè)定結(jié)果相對(duì)應(yīng)的各孔吸光度值
實(shí)施例2氯化物測(cè)定(硫氰酸汞比色法)1．末梢血采集同實(shí)施例1。
2．原理待測(cè)物中的氯離子與硫氰酸汞作用，生成難以解離的氯化汞，并釋放出相應(yīng)量的硫氰酸離子，該離子與試劑中鐵離子結(jié)合生成橙紅色的硫氰酸鐵，其色澤與氯的含量成正比。
3．試劑(1)飽和硫氰酸汞溶液稱取硫氰酸汞2.0g，溶于1L蒸餾水中，放室溫48小時(shí)，并經(jīng)常搖動(dòng)，取上清液應(yīng)用。
(2)硝酸汞溶液稱取硝酸汞6.0g，用50ml蒸餾水溶解，加入1ml濃硝酸并稀釋至100ml。
(3)顯色應(yīng)用液稱取硝酸鐵[Fe(No3)3 9H2O]13g，加水約400ml溶解，再加入1.5ml濃硝酸、500ml飽和硫氰酸汞溶液和5.0ml硝酸汞溶液，最后用水稀釋至1000ml。用塑料瓶存放，置室溫保存。
(4)氯化物標(biāo)準(zhǔn)液100mmol/L?？瞻自噭┓Q取硝酸鐵13g，溶于400ml蒸餾水中，加濃硝酸1.5ml，再稀釋至1000ml。
4．加樣取潔凈8×12標(biāo)準(zhǔn)96微孔板一塊按下表加樣
混勻，置室溫10分鐘。
5．測(cè)試將試驗(yàn)微孔板置生化酶標(biāo)多功能分析儀測(cè)量室內(nèi)，用490nm雙波長(zhǎng)、設(shè)空白孔和標(biāo)準(zhǔn)孔位，確認(rèn)Au/As*C公式，設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品單位含量，例如氯標(biāo)準(zhǔn)品為100mmol/L即設(shè)置C=100.0，啟動(dòng)測(cè)量打印各孔氯含量的結(jié)果報(bào)告。
6．結(jié)果氯化物測(cè)定 硫氰酸汞比色法試劑 北京北化精細(xì)化學(xué)品有限責(zé)任公司生產(chǎn)批號(hào) 000202波長(zhǎng)方式 雙波長(zhǎng)測(cè)量波長(zhǎng) 490nm標(biāo)準(zhǔn)液(品) 100mmol/L報(bào)告方式 1、氯化物測(cè)定結(jié)果2、吸光度測(cè)試結(jié)果使用公式 Au/As*C標(biāo)準(zhǔn)品單位含量設(shè)置 C=100.0(100mmol/L)兩種報(bào)告方式如下1、氯化物測(cè)定結(jié)果A行01、02孔為空白調(diào)“0”孔，03、04、05孔為標(biāo)準(zhǔn)品測(cè)定結(jié)果，其余為標(biāo)本測(cè)定孔結(jié)果。
2、吸光度測(cè)試結(jié)果與氯測(cè)定結(jié)果相對(duì)應(yīng)的各孔吸光度值
權(quán)利要求
1．一種用生化酶標(biāo)多功能分析儀測(cè)試無(wú)機(jī)離子超微量檢測(cè)技術(shù)的方法，其特征在于a．按末梢血常規(guī)采集方法將微量采血塑料管上端口接觸血滴，下端放低，邊輕擠邊進(jìn)血至需要量后燒熔下端，用鑷子捏緊封固或不封口，將微量采血塑料管折成“V”型插入一次性注射器的針頭塑料套內(nèi)，在針頭塑料套管或采血塑料管上貼上不干膠序號(hào)，離心分離血清備用；b．取潔凈8×12標(biāo)準(zhǔn)96微孔板一塊；c．采用微量定量加樣器，取標(biāo)準(zhǔn)品和被測(cè)樣品，定量加入微孔板各孔內(nèi)；d．用微量可調(diào)移液器，按所需試劑用量，定量加入上述各孔內(nèi)；e．將微孔板置室溫達(dá)到試驗(yàn)所需反應(yīng)時(shí)間；f．將微孔板置生化酶標(biāo)多功能分析儀測(cè)量室內(nèi)，在90s內(nèi)同時(shí)打印出1～90份結(jié)果報(bào)告。
2．根據(jù)權(quán)利要求1所述的用生化酶標(biāo)多功能分析儀測(cè)試無(wú)機(jī)離子超微量檢測(cè)技術(shù)的方法，其特征在于采用1μl、2μl、3μl、5μl、10μl、20μl、25μl微量定量加樣器，取標(biāo)準(zhǔn)品于2-4個(gè)孔內(nèi)和被測(cè)樣品定量加入微孔板各孔內(nèi)。
3．根據(jù)權(quán)利要求1所述的用生化酶標(biāo)多功能分析儀測(cè)試無(wú)機(jī)離子超微量檢測(cè)技術(shù)的方法，其特征在于采用50-250μl、100-500μl微量可調(diào)移液器。
4．根據(jù)權(quán)利要求1所述的用生化酶標(biāo)多功能分析儀測(cè)試無(wú)機(jī)離子超微量檢測(cè)技術(shù)的方法，其特征在于采用內(nèi)徑2-3mm的聚乙烯塑料管制成5-7cm規(guī)格的微量采血塑料管。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種利用現(xiàn)有的微孔板,并在孔內(nèi)直接進(jìn)行試驗(yàn)操作。采用聚乙烯塑料管制成不同規(guī)格的微量采血塑料管和應(yīng)用定量加樣(移液)器,達(dá)到無(wú)需靜脈抽血。使之在無(wú)機(jī)離子檢測(cè)項(xiàng)目中,以多個(gè)已知含量數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)品隨被測(cè)樣品經(jīng)同時(shí)測(cè)試后,使標(biāo)準(zhǔn)品每次均能達(dá)到已知含量數(shù)的標(biāo)準(zhǔn),來(lái)提高被測(cè)標(biāo)本結(jié)果的準(zhǔn)確性。再結(jié)合相應(yīng)配套的生化酶標(biāo)多功能分析儀測(cè)試打印檢測(cè)報(bào)告。
文檔編號(hào)G01N33/50GK1299969SQ00134389
公開日2001年6月20日 申請(qǐng)日期2000年12月12日 優(yōu)先權(quán)日2000年12月12日
發(fā)明者吳斌, 張紅寧, 梁立森, 韓明倫 申請(qǐng)人:吳斌