專(zhuān)利名稱(chēng)：槐糖脂在制備抗生素藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及槐糖脂在制備抗生素藥物中的應(yīng)用，尤其涉及槐糖脂在制備抑制白色念珠菌或革蘭氏陽(yáng)性菌的抗生素藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
近幾十年來(lái)，濫用抗生素已經(jīng)成為一個(gè)世界性的重大問(wèn)題。濫用抗生素的危害除了造成藥物不良反應(yīng)和增加治療費(fèi)用之外，最主要的是讓細(xì)菌的耐藥性增強(qiáng)，我國(guó)已經(jīng)進(jìn)入了細(xì)菌耐藥性的直線(xiàn)上升時(shí)期。目前的研究顯示，我國(guó)的金黃色葡萄球菌耐青霉素比例已經(jīng)高達(dá)90％，肺炎的病菌在社區(qū)的標(biāo)本中耐藥比例約20％，而在醫(yī)院內(nèi)的標(biāo)本中這一比例可達(dá)到60％。肺炎鏈球菌已有45％耐青霉素，70％耐紅霉素。導(dǎo)致腸道疾病的大腸桿菌有70％耐環(huán)丙沙星?？股剡^(guò)度的使用使得很多抗生素失去了效果。
一種新的抗生素研制的費(fèi)用大約需要十幾億美金和10到15年的過(guò)程，而使用不當(dāng)，3到5年病菌就會(huì)對(duì)這種藥物產(chǎn)生耐藥性，如果再不遏止這種趨勢(shì)，那么很快我們將沒(méi)有對(duì)抗細(xì)菌等有害微生物的有效武器，很多小病也能致命。因此，對(duì)新的抗生素研究，開(kāi)發(fā)，保護(hù)是一迫切任務(wù)，具有重要意義。
槐糖脂是一種重要的生物表面活性劑，對(duì)于它的研究始于二十世紀(jì)五、六十年代，其主要是通過(guò)微生物發(fā)酵獲得。與化學(xué)合成的表面活性劑相比，槐糖脂具有表面性能優(yōu)良、環(huán)境友好等許多優(yōu)點(diǎn)。
近年來(lái)，國(guó)外對(duì)于槐糖脂作為臨床藥物的研究已有了許多文獻(xiàn)報(bào)道，關(guān)于槐糖脂抑菌作用的研究也有提及，但是，根據(jù)文獻(xiàn)和專(zhuān)利檢索，槐糖脂作為抑制白色念珠菌和革蘭氏陽(yáng)性菌類(lèi)抗生素藥物研究與開(kāi)發(fā)未見(jiàn)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)目前臨床上濫用抗生素造成的微生物抗藥性日益增強(qiáng)的嚴(yán)重問(wèn)題，以及對(duì)新抗生素研究、開(kāi)發(fā)的迫切需求，本發(fā)明要解決的問(wèn)題是提供一種生物表面活性劑槐糖脂在制備抗生素藥物中的應(yīng)用，尤其是槐糖脂在制備抑制白色念珠菌或革蘭氏陽(yáng)性菌的抗生素藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明所述槐糖脂在制備抗生素藥物中的應(yīng)用。
上述的槐糖脂在制備抗生素藥物中的應(yīng)用中，所述槐糖脂優(yōu)選在制備抑制白色念珠菌類(lèi)抗生素藥物中的應(yīng)用。
其中，所述抗生素藥物有效抑菌的終濃度是20～60mg/L，優(yōu)選20～50mg/L，最優(yōu)選20～40mg/L。
或者，上述的槐糖脂在制備抗生素藥物中的應(yīng)用中，所述槐糖脂優(yōu)選在制備抑制革蘭氏陽(yáng)性菌類(lèi)抗生素藥物中的應(yīng)用。
其中，所述抗生素藥物有效抑菌的終濃度是20～100mg/L，優(yōu)選20～80mg/L，最優(yōu)選20～50mg/L。
本發(fā)明還包括以槐糖脂為有效成分的組合物在制備抗生素藥物中的應(yīng)用。
利用本發(fā)明所述槐糖脂加入藥學(xué)上可接受的輔料或賦形劑可以制成任何一種藥劑學(xué)上所說(shuō)的劑型。
以本發(fā)明所述槐糖脂為有效成分加入抑菌組分和藥學(xué)上可接受的輔料或賦形劑組成抑菌的藥物組合物，同樣也可以制成任何一種藥劑學(xué)上所說(shuō)的劑型。
在上述槐糖脂在制備抗生素藥物中的應(yīng)用中，所述槐糖脂在制備抑制白色念珠菌類(lèi)抗生素藥物劑型是口服制劑、栓劑、軟膏劑、液體制劑之一。
其中，所述口服制劑優(yōu)選膠囊、片劑、散劑、口服液、顆粒劑、水丸、滴丸之一；最優(yōu)選為膠囊劑或片劑；液體制劑優(yōu)選液體洗劑。
在上述槐糖脂在制備抗生素藥物中的應(yīng)用中，所述槐糖脂在制備抑制革蘭氏陽(yáng)性菌類(lèi)抗生素藥物劑型優(yōu)選是口服制劑。
其中，所述口服制劑優(yōu)選膠囊、片劑、散劑、口服液、顆粒劑、水丸、滴丸之一；最優(yōu)選為膠囊劑或片劑。
上述栓劑、軟膏劑、口服給藥的藥物制劑可以按照本行業(yè)已知的方法制備，在制備過(guò)程中使用可藥用稀釋劑，例如黏合劑(如預(yù)膠化淀粉、聚乙烯吡咯烷酮或羥丙基纖維素)、填料(例如乳糖、蔗糖、甘露醇等)、潤(rùn)滑劑(例如硬脂酸、聚乙二醇、硬脂酸鎂、滑石粉或二氧化硅)、崩解劑(例如淀粉、羧甲基纖維素鈉)或者潤(rùn)濕劑(例如十二烷基硫酸鈉)、片劑可以按照本行業(yè)已知的方法包衣。
為了更好地理解本發(fā)明的實(shí)質(zhì)，下面以槐糖脂的藥理實(shí)驗(yàn)及結(jié)果來(lái)說(shuō)明槐糖脂作為抑制白色念珠菌或革蘭氏陽(yáng)性菌類(lèi)抗生素藥物的應(yīng)用。
槐糖脂的制備(1)菌種選擇擬威克酵母變種Wickerhamiella domercqiae var.sophorolipidCGMCC No.1576；(2)斜面培養(yǎng)將菌種接種于基本無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基，其中添加質(zhì)量體積比為1.5～2.0％的瓊脂，25～35℃條件下，靜止培養(yǎng)24～48小時(shí)；(3)種子培養(yǎng)將步驟(2)培養(yǎng)的菌株，在無(wú)菌條件下用接種環(huán)接1～2環(huán)于20～100mL含有質(zhì)量體積比為4～14％的葡萄糖和1～8％的菜籽油的基本無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基中，25～35℃條件下，振蕩培養(yǎng)24～48小時(shí)，制得種子液；(4)擴(kuò)大培養(yǎng)以5～10％的體積比的接種量，將種子液接種于100～1000mL含有質(zhì)量體積比為4～14％的葡萄糖和1～8％的菜籽油的基本無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基中，25～35℃條件下，振蕩培養(yǎng)96～288小時(shí)；(5)收集發(fā)酵產(chǎn)物將步驟(4)所得的發(fā)酵液靜置，使其自然沉降，收集沉積在搖瓶底部的淺黃色粘稠液體，之后以4000～7000轉(zhuǎn)/分鐘將所述粘稠物質(zhì)離心，收集沉淀部分；即為槐糖脂粗提物；(6)分離產(chǎn)物將上述經(jīng)離心得到的沉淀物中加入其體積量為3～10倍的乙酸乙酯，在25～37℃下，萃取2～8小時(shí)；
(7)過(guò)濾將上述乙酸乙酯萃取液在25～37℃下，用Whatman No.2濾紙過(guò)濾，收集濾渣；(8)洗滌上述步驟(3)得到的濾渣用其體積量為3～10倍的乙酸乙酯在25～37℃下，洗滌2～4次；(9)減壓蒸餾洗滌完畢后收集濾渣，在溫度50～70℃，壓力0.2～0.8Kg/cm2，真空度為0.02～0.08Mpa的條件下進(jìn)行減壓蒸餾，將濾液中的乙酸乙酯蒸發(fā)去除；(10)收集物干燥將上述收集的減壓蒸餾殘?jiān)?，?0～100℃，真空度0.02～0.08Mpa條件下，真空干燥12～24小時(shí)，制得固體槐糖脂。
白色念珠菌的菌體制備將斜面保存的白色念珠菌取一接種環(huán)轉(zhuǎn)接到液體YEPD培養(yǎng)基中，在25～37℃下培養(yǎng)10～20小時(shí)，制成菌懸液。
革蘭氏陽(yáng)性菌(金黃色葡萄球菌和蠟狀芽孢桿菌)的菌體制備將斜面保存的革蘭氏陽(yáng)性菌取一接種環(huán)轉(zhuǎn)接到液體LB培養(yǎng)基中，在25～37℃下培養(yǎng)10～20小時(shí)，制成菌懸液。
白色念珠菌抑菌試驗(yàn)槐糖脂以二甲亞砜溶解制成母液，備用。
取槐糖脂母液加到Y(jié)EPD液體培養(yǎng)基中，使其終濃度為20～60mg/L，取上述白色念珠菌菌懸液0.8mL接種到80mL YEPD液體培養(yǎng)基中，在25～37℃下培養(yǎng)6～24小時(shí)，于波長(zhǎng)560～620下測(cè)定培養(yǎng)液的OD值，以O(shè)D值表示培養(yǎng)液中的菌數(shù)作為縱坐標(biāo)，以時(shí)間作為橫坐標(biāo)繪制抑菌曲線(xiàn)。
革蘭氏陽(yáng)性菌抑菌試驗(yàn)槐糖脂以二甲亞砜溶解制成母液，備用。
取槐糖脂母液加到LB液體培養(yǎng)基中，使其終濃度為20～100mg/L，取上述革蘭氏陽(yáng)性菌(金黃色葡萄球菌和蠟狀芽孢桿菌)菌懸液0.8mL接種到80mL液體LB培養(yǎng)基中，在25～37℃下培養(yǎng)6～24小時(shí)，于波長(zhǎng)560～620nm下測(cè)定培養(yǎng)液的OD值，以O(shè)D值表示培養(yǎng)液中的菌數(shù)作為縱坐標(biāo)，以時(shí)間作為橫坐標(biāo)繪制抑菌曲線(xiàn)。
其中，所述的白色念珠菌抑菌試驗(yàn)中，槐糖脂的終濃度優(yōu)選是20～50mg/L，培養(yǎng)溫度優(yōu)選是28～32℃，培養(yǎng)時(shí)間優(yōu)選是6～15小時(shí)，OD值測(cè)定波長(zhǎng)為580～600nm。
其中，所述的革蘭氏陽(yáng)性菌抑菌試驗(yàn)中，槐糖脂的終濃度優(yōu)選是20～80mg/L，培養(yǎng)溫度優(yōu)選是28～32℃，培養(yǎng)時(shí)間優(yōu)選是8～18小時(shí)，OD值測(cè)定波長(zhǎng)為580～600nm。
上述培養(yǎng)基配方是YEPD培養(yǎng)基(g/L)(用于白色念珠菌培養(yǎng))酵母膏10，蛋白胨20，葡萄糖20，pH6.5。
LB培養(yǎng)基(g/L)(用于革蘭氏陽(yáng)性菌培養(yǎng))蛋白胨10，酵母抽提物5，NaCl10，pH7.4。
結(jié)果顯示極低劑量的槐糖脂在較短的作用時(shí)間(＜24小時(shí))對(duì)白色念珠菌的生長(zhǎng)可以達(dá)到完全抑制(見(jiàn)圖1)，同時(shí)與目前在臨床抑制白色念珠菌的效果最好的苦參堿相比，槐糖脂的用量(20mg/L)只是后者用量(20g/L)的1/1000，并且槐糖脂成本也僅是苦參堿的十幾分之一。
對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌的研究表明，在槐糖脂濃度50mg/L下，槐糖脂可以完全抑制金黃色葡萄球菌和蠟狀芽孢桿菌的生長(zhǎng)。(見(jiàn)圖2，圖3)本發(fā)明利用擬威克酵母變種發(fā)酵產(chǎn)生槐糖脂，具有工藝方法簡(jiǎn)便、成本低、純度高的特點(diǎn)。
本發(fā)明所述槐糖脂在制備抗生素藥物中的應(yīng)用中，價(jià)格低廉，用量少，抑菌效果顯著，對(duì)人體無(wú)任何毒副作用。將其開(kāi)發(fā)為臨床外用洗液、軟膏劑、栓劑或口服制劑等藥物劑型，可以實(shí)現(xiàn)有效抑制在臨床上極其常見(jiàn)的條件性致病菌白色念珠菌和一些革蘭氏陽(yáng)性菌的生長(zhǎng)，甚至在某些方面可全面作為抗生素替代藥物，極具誘人的應(yīng)用前景。


圖1槐糖脂對(duì)白色念珠菌的抑制曲線(xiàn)顯示槐糖脂濃度在20mg/L下，能夠完全抑制白色念珠菌的生長(zhǎng)。
圖2槐糖脂對(duì)金黃色葡萄球菌的抑制曲線(xiàn)顯示槐糖脂濃度在50mg/L下，能夠完全抑制金黃色葡萄球菌的生長(zhǎng)。
圖3槐糖脂對(duì)蠟狀芽孢桿菌的抑制曲線(xiàn)顯示槐糖脂濃度在20mg/L下，能夠完全抑制蠟狀芽孢桿菌的生長(zhǎng)。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明內(nèi)容作進(jìn)一步的說(shuō)明。
實(shí)施例1槐糖脂的制備(1)菌種選擇擬威克酵母變種(Wickerhamiella domercqiae var.sophorolipid)CGMCC No.1576(2)斜面培養(yǎng)將菌種接種于基本無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基，其中添加質(zhì)量體積比為1.6％的瓊脂，25℃條件下，靜止培養(yǎng)24小時(shí)；(3)種子培養(yǎng)將步驟(2)培養(yǎng)的菌株，在無(wú)菌條件下用接種環(huán)接1～2環(huán)于20mL含有質(zhì)量體積比為4％的葡萄糖和1％的菜籽油的培養(yǎng)基中，25℃條件下，振蕩培養(yǎng)24小時(shí)，制得種子液；(4)擴(kuò)大培養(yǎng)以5％的體積比的接種量，將種子液接種于100mL含有質(zhì)量體積比為1％的菜籽油的培養(yǎng)基中，25℃條件下，振蕩培養(yǎng)96小時(shí)；(5)收集發(fā)酵產(chǎn)物將步驟(4)所得的發(fā)酵液靜置，使其自然沉降，收集沉積在搖瓶底部的淺黃色粘稠液體，之后以5000轉(zhuǎn)/分鐘將上述粘稠物質(zhì)離心，收集固態(tài)部分，即為槐糖脂粗提物。
(6)乙酸乙酯萃取將上述經(jīng)離心得到的沉淀物中加入其體積量為5倍的乙酸乙酯，在30℃下，萃取4小時(shí)。
(7)過(guò)濾將上述乙酸乙酯萃取液在30℃下，用Whatman No.2濾紙過(guò)濾，收集濾渣。
(8)洗滌上述得到的濾渣用其體積量為5倍的乙酸乙酯在30℃下，洗滌3次。
(9)減壓蒸餾洗滌完畢后收集濾渣，在溫度70℃，壓力0.4kg/cm2，真空度為0.04Mpa的條件下進(jìn)行減壓蒸餾，將濾液中的乙酸乙酯蒸發(fā)去除；(10)收集物干燥將上述收集的減壓蒸餾殘?jiān)?，?0℃，真空度0.04Mpa條件下，真空干燥16小時(shí)；制得固體槐糖脂。
實(shí)施例2槐糖脂的制備(1)菌種選擇擬威克酵母變種(Wickerhamiella domercqiae var.sophorolipid)CGMCC No.1576(2)斜面培養(yǎng)將菌種接種于基本無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基，其中添加質(zhì)量體積比為1.6％的瓊脂，30℃條件下，靜止培養(yǎng)36小時(shí)；(3)種子培養(yǎng)將步驟(2)培養(yǎng)的菌株，在無(wú)菌條件下用接種環(huán)接1～2環(huán)于50mL含有質(zhì)量體積比為8％的葡萄糖和3％的菜籽油的培養(yǎng)基中，30℃條件下，振蕩培養(yǎng)36小時(shí)，制得種子液；(4)擴(kuò)大培養(yǎng)以7％的體積比的接種量，將種子液接種于500mL含有質(zhì)量體積比為3％的菜籽油的培養(yǎng)基中，30℃條件下，振蕩培養(yǎng)200小時(shí)；(5)收集發(fā)酵產(chǎn)物將步驟(4)所得的發(fā)酵液靜置，使其自然沉降，收集沉積在搖瓶底部的淺黃色粘稠液體，之后以6000轉(zhuǎn)/分鐘將上述粘稠物質(zhì)離心，收集固態(tài)部分，為槐糖脂粗提物。
(6)分離產(chǎn)物將上述經(jīng)離心得到的沉淀物中加入其體積量為7倍的乙酸乙酯，在37℃下，萃取6小時(shí)。
(7)過(guò)濾將上述乙酸乙酯萃取液在37℃下，用Whatman No.2濾紙過(guò)濾，收集濾渣。
(8)洗滌上述得到的濾渣用其體積量為7倍的乙酸乙酯在37℃下，洗滌3次。
(9)減壓蒸餾洗滌完畢后收集濾渣，在溫度70℃，壓力0.8kg/cm2，真空度為0.08Mpa的條件下進(jìn)行減壓蒸餾，將濾液中的乙酸乙酯蒸發(fā)去除；(10)收集物干燥將上述收集的減壓蒸餾殘?jiān)?，?00℃，真空度0.08Mpa條件下，真空干燥24小時(shí)；制得固體槐糖脂。
實(shí)施例3槐糖脂作為抑制白色念珠菌的抗生素藥物的應(yīng)用白色念珠菌的菌體制備將斜面保存的白色念珠菌取一接種環(huán)轉(zhuǎn)接到液體YEPD培養(yǎng)基中，在25℃下培養(yǎng)20小時(shí)，制成菌懸液。
槐糖脂以二甲亞砜溶解制成濃度為5g/L母液，備用。
取槐糖脂母液加到Y(jié)EPD液體培養(yǎng)基中，使其終濃度為20mg/L，取上述白色念珠菌菌懸液0.8mL接種到80mL YEPD液體培養(yǎng)基中，在25℃下培養(yǎng)24小時(shí)，于波長(zhǎng)580下測(cè)定培養(yǎng)液的OD值，以O(shè)D值表示培養(yǎng)液中的菌數(shù)作為縱坐標(biāo)，以時(shí)間作為橫坐標(biāo)繪制抑菌曲線(xiàn)。檢測(cè)白色念珠菌試驗(yàn)抑菌情況。
實(shí)施例4槐糖脂作為抑制白色念珠菌的抗生素藥物的應(yīng)用白色念珠菌的菌體制備將斜面保存的白色念珠菌取一接種環(huán)轉(zhuǎn)接到液體YEPD培養(yǎng)基中，在30℃下培養(yǎng)15小時(shí)，制成菌懸液。
槐糖脂以二甲亞砜溶解制成濃度為5g/L母液，備用。
取槐糖脂母液加到Y(jié)EPD液體培養(yǎng)基中，使其終濃度為30mg/L，取上述白色念珠菌菌懸液0.8mL接種到80mL YEPD液體培養(yǎng)基中，在30℃下培養(yǎng)10小時(shí)，于波長(zhǎng)590下測(cè)定培養(yǎng)液的OD值，以O(shè)D值表示培養(yǎng)液中的菌數(shù)作為縱坐標(biāo)，以時(shí)間作為橫坐標(biāo)繪制抑菌曲線(xiàn)。檢測(cè)白色念珠菌試驗(yàn)抑菌情況。
實(shí)施例5槐糖脂作為抑制白色念珠菌的抗生素藥物的應(yīng)用白色念珠菌的菌體制備將斜面保存的白色念珠菌取一接種環(huán)轉(zhuǎn)接到液體YEPD培養(yǎng)基中，在37℃下培養(yǎng)10小時(shí)，制成菌懸液。
槐糖脂以二甲亞砜溶解制成濃度為5g/L母液，備用。
取槐糖脂母液加到Y(jié)EPD液體培養(yǎng)基中，使其終濃度為50mg/L，取上述白色念珠菌菌懸液0.8mL接種到80mL YEPD液體培養(yǎng)基中，在32℃下培養(yǎng)15小時(shí)，于波長(zhǎng)600下測(cè)定培養(yǎng)液的OD值，以O(shè)D值表示培養(yǎng)液中的菌數(shù)作為縱坐標(biāo)，以時(shí)間作為橫坐標(biāo)繪制抑菌曲線(xiàn)。檢測(cè)白色念珠菌試驗(yàn)抑菌情況。
上述YEPD培養(yǎng)基配方是酵母膏10g/L，蛋白胨20g/L，葡萄糖20g/L，pH6.5。
實(shí)施例6槐糖脂作為抑制革蘭氏陽(yáng)性菌的抗生素藥物的應(yīng)用金黃色葡萄球菌菌體制備將斜面保存的革蘭氏陽(yáng)性菌取一接種環(huán)轉(zhuǎn)接到液體LB培養(yǎng)基中，在25℃下培養(yǎng)20小時(shí)，制成菌懸液。
革蘭氏陽(yáng)性菌抑菌試驗(yàn)槐糖脂以二甲亞砜溶解制成母液，備用。
取槐糖脂母液加到LB液體培養(yǎng)基中，使其終濃度為20mg/L，取上述革蘭氏陽(yáng)性菌(金黃色葡萄球菌)菌懸液0.8mL接種到80mL液體LB培養(yǎng)基中，在28℃下培養(yǎng)20小時(shí)，于波長(zhǎng)580nm下測(cè)定培養(yǎng)液的OD值，以O(shè)D值表示培養(yǎng)液中的菌數(shù)作為縱坐標(biāo)，以時(shí)間作為橫坐標(biāo)繪制抑菌曲線(xiàn)。檢測(cè)槐糖脂抑菌情況。
實(shí)施例7槐糖脂作為抑制革蘭氏陽(yáng)性菌的抗生素藥物的應(yīng)用蠟狀芽孢桿菌菌體制備將斜面保存的革蘭氏陽(yáng)性菌取一接種環(huán)轉(zhuǎn)接到液體LB培養(yǎng)基中，在29℃下培養(yǎng)15小時(shí)，制成菌懸液。
革蘭氏陽(yáng)性菌抑菌試驗(yàn)槐糖脂以二甲亞砜溶解制成母液，備用。
取槐糖脂母液加到LB液體培養(yǎng)基中，使其終濃度為50mg/L，取上述革蘭氏陽(yáng)性菌(蠟狀芽孢桿菌)菌懸液0.8mL接種到80mL液體LB培養(yǎng)基中，在30℃下培養(yǎng)12小時(shí)，于波長(zhǎng)590nm下測(cè)定培養(yǎng)液的OD值，以O(shè)D值表示培養(yǎng)液中的菌數(shù)作為縱坐標(biāo)，以時(shí)間作為橫坐標(biāo)繪制抑菌曲線(xiàn)。檢測(cè)槐糖脂抑菌情況。
實(shí)施例8槐糖脂作為抑制革蘭氏陽(yáng)性菌的抗生素藥物的應(yīng)用金黃色葡萄球菌菌體制備將斜面保存的革蘭氏陽(yáng)性菌取一接種環(huán)轉(zhuǎn)接到液體LB培養(yǎng)基中，在29℃下培養(yǎng)15小時(shí)，制成菌懸液。
革蘭氏陽(yáng)性菌抑菌試驗(yàn)槐糖脂以二甲亞砜溶解制成母液，備用。
取槐糖脂母液加到LB液體培養(yǎng)基中，使其終濃度為80mg/L，取上述革蘭氏陽(yáng)性菌(金黃色葡萄球菌)菌懸液0.8mL接種到80mL液體LB培養(yǎng)基中，在32℃下培養(yǎng)18小時(shí)，于波長(zhǎng)600nm下測(cè)定培養(yǎng)液的OD值，以O(shè)D值表示培養(yǎng)液中的菌數(shù)作為縱坐標(biāo)，以時(shí)間作為橫坐標(biāo)繪制抑菌曲線(xiàn)。檢測(cè)槐糖脂抑菌情況。
上述LB培養(yǎng)基配方是蛋白胨10g/L，酵母抽提物5g/L，NaCl 10g/L，pH 7.4。
實(shí)施例9槐糖脂作為治療白色念珠菌感染的抗生素藥物栓劑的制備取實(shí)施例1制取的槐糖脂40g，以每粒栓劑含槐糖脂50mg的混合量，直接溶解于已加熱熔化的棕櫚油酸甘油酯中，混勻，然后加入預(yù)先用肥皂、甘油各1份與90％乙醇5份制成的潤(rùn)滑劑潤(rùn)滑后的栓劑?？字谐尚?，即得槐糖脂栓劑。每粒栓劑含槐糖脂50mg。
實(shí)施例10槐糖脂作為治療白色念珠菌感染的抗生素藥物軟膏劑的制備取實(shí)施例1制取的槐糖脂40g加入液狀石蠟125g加熱至80℃，另取甘油50g，羥苯乙酯1g，加蒸餾水至835g，也加熱至80℃，然后將油相加入水相中，邊加邊攪拌至冷，裝入塑料軟管，每管裝入量為25g，即得槐糖脂軟膏劑。
實(shí)施例11槐糖脂作為治療白色念珠菌感染的抗生素藥物液體洗劑制備取實(shí)施例1制取的槐糖脂40g，加入二甲亞砜至1000g，使槐糖脂溶解，裝入100mL塑料瓶中，即得。
實(shí)施例12槐糖脂作為治療革蘭氏陽(yáng)性菌感染的抗生素藥物口服膠囊劑的制備以重量份(公斤)計(jì)，稱(chēng)取槐糖脂7份、賦形劑(淀粉)13份。將槐糖脂與賦形劑按所述重量份混合，干燥，制備成粉狀，過(guò)篩得細(xì)粉，裝入明膠硬膠囊，每粒膠囊裝入量是0.143g。其中每粒膠囊含槐糖脂0.05g、賦形劑(淀粉)0.093g。
上述膠囊劑服用方法每次2～3粒，每日三次。
實(shí)施例13以槐糖脂為有效成分的組合物作為抗生素藥物栓劑的制備取實(shí)施例1制取的槐糖脂40g和苦參堿100g，以每粒栓劑含槐糖脂50mg，含苦參堿125mg的混合量，直接溶解于己加熱熔化的棕櫚油酸甘油酯中，混勻。隨后加入預(yù)先用肥皂、甘油各1份與90％乙醇5份制成的潤(rùn)滑劑潤(rùn)滑后的栓劑?？字谐尚危吹盟▌?。每粒栓劑含槐糖脂50mg，含苦參堿125mg。
實(shí)施例14槐糖脂所作的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)取實(shí)施例11中制取的作為治療白色念珠菌感染的槐糖脂抗生素藥物液體洗劑用于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。
取小鼠60只，在每只鼠右前肢腋下切開(kāi)小的創(chuàng)口，接種白色念珠。24h后從傷口處取樣進(jìn)行顯微觀察，發(fā)現(xiàn)有45只小鼠已感染有白色念珠菌。將小鼠分為9組，5組作為處理組，用上述槐糖脂液體制劑每日分三次進(jìn)行涂擦，另外4組作為陰性對(duì)照組，用生理鹽水進(jìn)行相同次數(shù)的涂擦。連續(xù)給藥10天。觀察處理組和對(duì)照組傷口愈合情況，并分別從處理組和對(duì)照組傷口處取樣，用培養(yǎng)酵母的YEPD平板進(jìn)行培養(yǎng)。
從實(shí)驗(yàn)結(jié)果看，處理組在24h內(nèi)無(wú)菌落出現(xiàn)，在24h到48h之間，5組處理組的平板均只有零星菌落出現(xiàn)，平均菌落數(shù)為3。對(duì)照組在24h內(nèi)有大量菌落出現(xiàn)，無(wú)法計(jì)數(shù)。
權(quán)利要求
1.槐糖脂在制備抗生素藥物中的應(yīng)用。
2.如權(quán)利要求1所述的槐糖脂在制備抗生素藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述槐糖脂在制備抑制白色念珠菌類(lèi)抗生素藥物中的應(yīng)用。
3.如權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述抗生素藥物濃度為20～60mg/L。
4.如權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述抗生素藥物劑型是口服制劑、栓劑、軟膏劑、液體制劑之一。
5.如權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于，所述口服制劑為膠囊劑或片劑。
6.如權(quán)利要求1所述的槐糖脂在制備抗生素藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述槐糖脂在制備抑制革蘭氏陽(yáng)性菌類(lèi)抗生素藥物中的應(yīng)用。
7.如權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于，所述抗生素藥物濃度為20～100mg/L。
8.如權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于，所述抗生素藥物劑型是口服制劑。
9.如權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于，所述口服制劑為膠囊劑或片劑。
10.以槐糖脂為有效成分的組合物在制備抗生素藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種槐糖脂或以槐糖脂為有效成分的組合物在制備抗生素藥物中的應(yīng)用，特別涉及其在制備抑制白色念珠菌或革蘭氏陽(yáng)性菌類(lèi)抗生素藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明利用擬威克酵母變種發(fā)酵制備槐糖脂，具有工藝方法簡(jiǎn)便、成本低、純度高的特點(diǎn)，并且涉及的槐糖脂或以槐糖脂為有效成分的組合物抑菌效果顯著，對(duì)人體無(wú)任何毒副作用。將其開(kāi)發(fā)為臨床外用洗液、軟膏劑、栓劑或口服制劑等藥物劑型，可以實(shí)現(xiàn)有效抑制在臨床上極其常見(jiàn)的條件性致病菌白色念珠菌和一些革蘭氏陽(yáng)性菌的生長(zhǎng)，甚至在某些方面可全面作為抗生素替代藥物，極具誘人的應(yīng)用前景。
文檔編號(hào)A61K9/08GK101019875SQ200710013200
公開(kāi)日2007年8月22日 申請(qǐng)日期2007年1月29日 優(yōu)先權(quán)日2007年1月29日
發(fā)明者宋欣, 曲音波, 邵凌健 申請(qǐng)人:山東大學(xué)