專(zhuān)利名稱(chēng)：快速篩選分析物的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及快速篩選大量分析物，包括快速篩選作為有潛力藥物的液體狀化學(xué)化合物的方法。
背景技術(shù)：
目前作為藥物使用的有潛力的化合物候選物的鑒定，是通過(guò)篩選程序和/或合理的藥物設(shè)計(jì)而完成的。此藥物設(shè)計(jì)觀(guān)念起初提供了廣泛的成功期望，但此方法在實(shí)踐上尚未獲成功，這主要是由于對(duì)分子構(gòu)造和受體位點(diǎn)之間的關(guān)系，缺少充分的了解。
因此，化合物篩選仍是快速鑒定和選擇作為候選藥物的先導(dǎo)化合物的所選技術(shù)。目前使用各種高通量篩選(HTS)的方法從化合物中篩選出有潛力的候選藥物。然而，由于無(wú)法取得可同時(shí)處理大量液體化合物的設(shè)備，HTS的速度和成本-效果受到限制。
在目前的HTS中，作為執(zhí)行分析的標(biāo)準(zhǔn)裝置，微滴定盤(pán)(microtitreplate)扮演中心角色。微滴定盤(pán)決定液體處理設(shè)備，例如，可程序化的液體處理工作臺(tái)的設(shè)計(jì)，以及用于過(guò)濾、清洗、讀取及其他涉及HTS的操作的微滴定盤(pán)周邊也得以發(fā)展。
為了滿(mǎn)足不斷增加的高生產(chǎn)量需求，以微滴定盤(pán)為基礎(chǔ)的裝置已與自動(dòng)化的操縱器結(jié)合為一體。微滴定盤(pán)的重要作用和持續(xù)增加的生產(chǎn)量需求，使更大和更復(fù)雜的HTS模件得以產(chǎn)生。該復(fù)雜的模件包括自動(dòng)化的軌道，以接近更寬闊的表面、自動(dòng)化和更大的微滴定盤(pán)培養(yǎng)箱以及儲(chǔ)存丟棄物的裝置。此外，需要復(fù)雜的操作程序及整合軟件，來(lái)恰當(dāng)管理所有的硬件成份。
微滴定盤(pán)的中心角色也決定典型篩選方法的其他方面，例如，化學(xué)資料庫(kù)方面。傳統(tǒng)上，化合物是在中心化學(xué)儲(chǔ)藏庫(kù)中得以合成、儲(chǔ)存及登記，其中，新的化合物是在組織內(nèi)部或外部的生物分析實(shí)驗(yàn)室的要求下得到發(fā)送。通常，每個(gè)新的化合物在每個(gè)新的分析之前，都必須秤重并溶解。因此，能分別得到并常規(guī)地獲得化合物是必要的。因此，能分別得到并常規(guī)地獲得化合物是必要的。受最新HTS系統(tǒng)的設(shè)計(jì)和容量所驅(qū)，正努力使化合物的物理儲(chǔ)存條件適應(yīng)微滴定盤(pán)的格式。因此，溶解于二甲基亞砜(DMSO)的化合物貯存液儲(chǔ)存在微滴定盤(pán)格式中，這樣每個(gè)化合物可通過(guò)其位置而定位。
HTS基礎(chǔ)建設(shè)的基礎(chǔ)仍是96孔的標(biāo)準(zhǔn)微滴定盤(pán)，并且，發(fā)展至今的大多數(shù)篩選系統(tǒng)，都使用此格式。
然而，高密度的微滴定盤(pán)(例如，384-、864-、1536-及9600孔的盤(pán)子)與大部分為96孔盤(pán)所設(shè)計(jì)的裝置并不相容。由于篩選格式未來(lái)可能會(huì)有相當(dāng)大的改變，因此篩選系統(tǒng)必須具有充分的彈性以適應(yīng)這個(gè)挑戰(zhàn)。
至今HTS發(fā)展的進(jìn)度，由快速液體操作系統(tǒng)的發(fā)展決定，其可操作小量的液體，以便在微滴定盤(pán)格式中進(jìn)行小型化分析，為處理不斷增加的待篩選化合物，微滴定盤(pán)孔洞的數(shù)目已急劇增多，然而，隨著孔洞數(shù)目的增加，孔洞的體積容量就會(huì)急劇減少。因此，很明顯由于物理性限制，此趨勢(shì)會(huì)變成一種自我限制的趨勢(shì)，該物理性限制是由涉及一般組織培養(yǎng)的生物化學(xué)平衡所致，其中pH的控制、二氧化碳的交換、濕度和溫度都非常重要，且這些參數(shù)在高密度微滴定盤(pán)所使用的狹小格體積中很難控制。
使用高密度微滴定盤(pán)格式的一個(gè)問(wèn)題是，不可能輕松獲得劑量反應(yīng)曲線(xiàn)所要求的系列稀釋。例如，不可能在這樣的孔洞中進(jìn)行系列稀釋?zhuān)虼讼盗邢♂尡仨氃诳锥吹耐獠窟M(jìn)行。然而，即使以這樣的方式進(jìn)行連續(xù)稀釋時(shí)，操作者仍會(huì)有篩選過(guò)程中液體處理方面的問(wèn)題。因此，對(duì)于連續(xù)稀釋?zhuān)僮髡吣壳皟H能有效地使用96孔的微滴定盤(pán)。另外，即使是在自動(dòng)化控制之下處理化合物，在任何給定時(shí)間處理的化合物的數(shù)目，一般是8或12，最大值是96。
我們迄今沒(méi)有發(fā)現(xiàn)任何可同時(shí)處理大量分析物的系統(tǒng)，以同時(shí)篩選100種或更多或甚至多達(dá)1000種的分析物，此后稱(chēng)為更大量的分析物。
因此，需要同時(shí)篩選大量分析物的方法，并且此方法可消除現(xiàn)今HTS系統(tǒng)的困難和限制。
也需要以簡(jiǎn)化的鑒別和取回HTS分析物的方式同時(shí)操作大量分析物的方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種快速篩選分析物的方法，包括下列步驟(a)同時(shí)將多種要篩選的分析物，加到一種或多種的固體支持物上，使得分析物之間互相分開(kāi)；(b)將該帶有分析物的固體支持物，與半固體或液體培養(yǎng)基中的目標(biāo)物接觸，藉此該分析物從固體支持物中釋放至目標(biāo)物；以及(c)測(cè)量分析物-目標(biāo)物的相互作用。
根據(jù)本發(fā)明的方法，可同時(shí)操作數(shù)千個(gè)不同的分析物。
優(yōu)選地，根據(jù)本發(fā)明的方法，步驟(a)包括(ⅰ)在分別可鑒別的容器中處理分析物；以及(ⅱ)將分析物從容器轉(zhuǎn)移至固體支持物，以這樣的方式使每個(gè)容器的待轉(zhuǎn)移內(nèi)容物，與其他容器的內(nèi)容物分開(kāi)。
分別可鑒別的容器優(yōu)選選自管子(包括毛細(xì)管)、筆(包括繪圖筆)以及列印頭(print nead)，或任何可儲(chǔ)存分析物并可直接將分析物加到所給的固體支持物上的容器。
此外，優(yōu)選地，分別可鑒別的容器是一種毛細(xì)管的陣列(array)，每一個(gè)毛細(xì)管可根據(jù)其在陣列中的位置而鑒別，其中，是通過(guò)經(jīng)毛細(xì)管的開(kāi)口端，將分析物分配來(lái)完成分析物至固體支持物的轉(zhuǎn)移。
特別優(yōu)選的陣列是在同軸或螺旋形陣列中處理的個(gè)別容器。
可通過(guò)將所述分析物從毛細(xì)管開(kāi)口端分配剄固體支持物上來(lái)完成分析物到固體支持物的轉(zhuǎn)移，毛細(xì)管和固體支持物可以直接接觸，也可以不直接接觸。
可以將多種數(shù)量的分析物移至固體支持物。因此，如果需要的話(huà)，通過(guò)改變轉(zhuǎn)移液滴的大小，操作者可完成系列稀釋。
毛細(xì)管中分析物的同時(shí)轉(zhuǎn)移，可通過(guò)用壓電(piezoeletric)元件施以刺激例如壓力的改變來(lái)完成?；蛘?，如果需要的話(huà)，操作者可使用高頻率的條件，將液體柱打斷成可分配至固體支持物的小滴。小滴的大小一般將是毫微升(nanolitre)或微微升(picolitre)的體積。
因此，操作者可根據(jù)本發(fā)明而完成一分析格式，其中，分析物并沒(méi)有以其目前的分配量而吸取，而是從個(gè)別容器中直接加到分析培養(yǎng)基中。
應(yīng)了解的是，此處所述的分別可鑒別的容器，提供了一種儲(chǔ)存原料化合物的方法，該原料化合物可按照需要獲得和使用。因此，分析物的應(yīng)用單元可由組裝在可定位部份中的個(gè)別可鑒別的容器所組成，其可作為一個(gè)整體自動(dòng)收回，并且，分析物可直接從其中加到固體支持物。
例如，可鑒別容器的優(yōu)選實(shí)施方案是毛細(xì)管，并且在溶液中的原料化合物，通過(guò)毛細(xì)管的作用而在多數(shù)這樣的毛細(xì)管中吸收。
以這個(gè)方式，無(wú)限數(shù)目的毛細(xì)管可以不需要特別的能量而得以填滿(mǎn)。用原料化合物溶液填滿(mǎn)的毛細(xì)管，可儲(chǔ)存在所需要的溫度及條件下。
根據(jù)本發(fā)明的方法，可同時(shí)將大量的分析物加到固體支持物上。例如，如此處更詳細(xì)所述，操作者可同時(shí)將大量等體積的10,000個(gè)或更多的化合物，從個(gè)別容器(例如毛細(xì)管)陣列中，加到一固體相上?？赏ㄟ^(guò)毛細(xì)管與固體支持物的接觸時(shí)間來(lái)測(cè)定所傳遞的化合物的量。分析物的容器，也可以適當(dāng)?shù)厥欠謩e可定位的類(lèi)似繪圖筆的裝置，以便在所選擇的固體支持物上，同時(shí)繪制分析物的平行線(xiàn)。
在化合物傳遞之后，可將能以分離的點(diǎn)或線(xiàn)的形式進(jìn)行處理的化合物留在固體相上以干燥。
在一實(shí)施方案中，固體支持物基本上是平坦的，盤(pán)狀-、直角狀-或方塊狀的形式。
固體支持物可包括，當(dāng)分析物加在其上時(shí)，可使分析物自發(fā)性釋放的材料。
或者，固體支持物可包括，當(dāng)分析物加在其上時(shí)，可使分析物控制性釋放的材料。
在每個(gè)例子中，此材料可以是該半固體的培養(yǎng)基。
優(yōu)選地，當(dāng)每個(gè)分析物加到固體支持物上時(shí)，分析物在固體支持物上擴(kuò)散，以便產(chǎn)生一濃度梯度。
以這個(gè)方式，如果對(duì)候選藥物需要?jiǎng)┝糠磻?yīng)曲線(xiàn)的話(huà)，操作者可獲得分析物的連續(xù)稀釋?zhuān)皇侵挥泻?jiǎn)單的陽(yáng)性或陰性(是/否)結(jié)果。
如同通過(guò)被動(dòng)擴(kuò)散產(chǎn)生濃度梯度一樣，需要的話(huà)，利用在半固體的培養(yǎng)基或基質(zhì)中分析物擴(kuò)散延遲，還可消除物理性分離的需要(如在微滴定盤(pán)孔洞的例子)，以及分析物連續(xù)稀釋的必要性。
優(yōu)選地，分析物所加到的固體支持物的表面，其中固體支持物選自聚合物、陶瓷、金屬、纖維素以及玻璃。
此外，優(yōu)選地，該半固體的培養(yǎng)基是在一載體上處理。
在另一實(shí)施方案中，固體支持物是彈性膜或膠布，在其上施加含目標(biāo)物的半固體的培養(yǎng)基，由此，本方法可使用滾輪系統(tǒng)而自動(dòng)化，經(jīng)過(guò)本發(fā)明的各種步驟以使彈性膜或膠布前進(jìn)。
在此實(shí)施方案中，載體可藉由另一層膜或膠布覆蓋，并因此夾在固體支持物及覆蓋層之間。
此外，固體支持物或覆蓋層(如果存在的話(huà))，可提供磁軌以記錄關(guān)于所加的分析物的資料，由此在自動(dòng)化的方法中測(cè)量分析物-目標(biāo)物相互作用的同時(shí)可讀取并處理該資料。
在又一實(shí)施方案中，固體支持物本身是一探測(cè)器，或形成探測(cè)器的一部分。
在此實(shí)施方案中，固體支持物優(yōu)選地是選擇自二氧化硅晶片、帶電荷的裝置以及攝影底片。
固體支持物的表面可涂覆一層膜、分子單層、細(xì)胞單層或Langmuir—Blodgett膜。
所有的這些涂層都可用于控制加到其上的分析物的釋放。
在另一實(shí)施方案中，固體支持物本身是一資料載體，帶有電子、磁性或數(shù)字化形式的資料。
在又一實(shí)施方案中，固體支持物的表面是反射性的。例如，表面可以是光碟(CD)的反射表面。
根據(jù)本發(fā)明的方法，還包括將該光碟復(fù)制到一可寫(xiě)入光碟的步驟。
在另一實(shí)施方案中，半固體的培養(yǎng)基包括提供半固體或粘性液體環(huán)境的物質(zhì)，把該分析物控制地釋放至該目標(biāo)物中。
優(yōu)選地，提供半固體或粘性液體環(huán)境的物質(zhì)，是選擇自明膠(gelatin)、如瓊脂和瓊脂糖的多糖類(lèi)以及如甲基纖維素和聚丙烯酰胺的聚合物或所謂的智能材料(intelligent)。這樣的物質(zhì)也可用于控制加到其上的分析物的釋放。
所謂的智能材料是天然及合成的聚合物膠體，其可發(fā)生相轉(zhuǎn)換及臨界點(diǎn)現(xiàn)象，例如，環(huán)境中發(fā)生極微小的變化時(shí)相轉(zhuǎn)換可伴發(fā)可逆的、不連續(xù)的數(shù)百倍大的體積改變這種反應(yīng)。
所謂的智能材料的例子是聚合膠體形式的材料，更具體地是水合膠(hydrogels)，其可吸收流體，并且遇到化學(xué)或物理刺激或觸發(fā)時(shí)隨即釋放該流體?；瘜W(xué)刺激的例子是pH或離子或溶劑組成物的改變，物理刺激的例子是特定波長(zhǎng)或激光束的光、溫度或小的電場(chǎng)的改變。
例如，含有N-異丙基丙烯酰胺(主成份)和光敏性生色團(tuán)、銅的三鈉鹽的膠體，在可見(jiàn)光誘發(fā)下可發(fā)生相轉(zhuǎn)換(Suzuki,A．及Tanaka,T．自然，1990,346:345-347)。
Snowden,M.J．等人，化學(xué)及工業(yè)雜志，7月，1996,531-534頁(yè)描述了一系列恰當(dāng)?shù)臒崦艟酆衔铩?br> 其他合適的膠體是由Gel Science公司(波士頓，馬薩諸塞，美國(guó))所銷(xiāo)售的膠體，商標(biāo)名為T(mén)HERA GEL。
在又一實(shí)施方案中，步驟(a)及(b)是同時(shí)實(shí)施。
在仍是另一實(shí)施方案中，將每個(gè)分析物加到單一的固體支持物上。
在此實(shí)施方案中，固體支持物優(yōu)選棒狀或球形。
此外，優(yōu)選地，每個(gè)帶有分析物的固體支持物，在步驟(b)中與多隔間裝置中的不同隔間的目標(biāo)物相接觸，更特別地，該隔間是在該裝置中的排列的小孔洞。
在另一優(yōu)選實(shí)施方案中，分析物容器是小的惰性固體支持物，其中分析物加到其表面上。將固體支持物浸泡到液體相或半固體相中，導(dǎo)致分析物從固體支持物中時(shí)間依賴(lài)性地釋放到液體相或半固體相中。這樣可得到分析物在液體相或半固體相中的微量稀釋?zhuān)恍枰褂靡后w操作裝置。釋放至液體相或半固體相分析物的最終濃度，是通過(guò)帶有分析物的固體支持物與液體相或半固體相之間的接觸時(shí)間來(lái)測(cè)定。
根據(jù)本發(fā)明的方法，用于快速篩選的分析物，優(yōu)選選自化學(xué)化合物、抗原、抗體、DNA探針、細(xì)胞以及帶有目標(biāo)分析物的小珠和脂質(zhì)體。
此外，優(yōu)選地，當(dāng)加到固體支持物時(shí)，分析物是溶解在有機(jī)或無(wú)機(jī)的溶劑中。
適合地，此溶劑包括所謂的對(duì)化學(xué)或物理參數(shù)有反應(yīng)的智能材料，使得每個(gè)分析物在加到固體支持物及干燥之后，對(duì)該化學(xué)或物理參數(shù)產(chǎn)生液化反應(yīng)。
一優(yōu)選實(shí)施方案中的分析物是作為潛在的候選藥物來(lái)篩選的化學(xué)化合物。
優(yōu)選地，目標(biāo)物選自原核細(xì)胞、真核細(xì)胞、病毒、分子、受體、及其組合。
此處所使用的化合物指任何合成、半合成或天然化合物或其組合。
在一實(shí)施方案中目標(biāo)物是帶有受體功能的細(xì)胞。
在一優(yōu)選實(shí)施方案中，目標(biāo)物是帶有單一或多個(gè)受體構(gòu)件的哺乳動(dòng)物細(xì)胞。報(bào)告基因的活性及/或表達(dá)，受特定實(shí)驗(yàn)條件的影響，例如，化合物從固體支持物釋放到半固體相的化合物的體外效應(yīng)。
在此實(shí)施方案中所使用的培養(yǎng)單元，典型地是一般用于組織培養(yǎng)的培養(yǎng)箱類(lèi)型。
用于測(cè)量化合物-細(xì)胞的相互作用的探測(cè)器單元，適合地是由結(jié)合有電視攝影機(jī)(例如，dage-MTI CCD72E)的倒置顯微鏡(例如，Zeiss Axiovert 100)，以及具有KS 400基本軟件和KS 400圖解選項(xiàng)的電腦系統(tǒng)(例如，PC 300 MHz Pentium)所組成。倒置顯微鏡還可配備一修飾的掃描臺(tái)，以符合所有結(jié)構(gòu)的培養(yǎng)盤(pán)(從6孔洞到至多9600孔洞的格式)和其他如此所述的類(lèi)型格式，并且配備一步進(jìn)式馬達(dá)(stepper motor)，具有每一周期17,600階的分辨率。KS 400套裝軟件提供簡(jiǎn)易的使用菜單，用以進(jìn)入結(jié)構(gòu)、校準(zhǔn)和分析參數(shù)或資料分析說(shuō)明書(shū)。
其他的探測(cè)工具包括使用電腦輔助的影像分析器。
在使用粘附細(xì)胞作為目標(biāo)物的情況中，使這些細(xì)胞長(zhǎng)滿(mǎn)覆蓋固體支持物的表面，或長(zhǎng)滿(mǎn)小珠的表面，然后均質(zhì)化地懸浮于半固體相中。
此外，優(yōu)選地，該分析物-目標(biāo)物的相互作用，是通過(guò)使用一種或多種下列方法來(lái)測(cè)量顯微鏡、比色法、螢光計(jì)法、發(fā)光計(jì)法、光密度計(jì)法、同位素法以及物理的測(cè)量。
例如，操作者可聯(lián)合使用顯微鏡檢與螢光。因此，顯微鏡可裝配適合于步進(jìn)式馬達(dá)及攝影系統(tǒng)的落射式螢光(epifluorescence)。個(gè)人電腦可控制影像獲取和分析。
應(yīng)了解的是，根據(jù)本發(fā)明的方法，在含有試驗(yàn)性生物系統(tǒng)的半固體培養(yǎng)基中的主要化合物的擴(kuò)散過(guò)程，與影像顯微鏡檢系統(tǒng)是偶聯(lián)的。本發(fā)明也可以觀(guān)察并測(cè)定化合物對(duì)原核及真核細(xì)胞的功能效應(yīng)?？墒褂冒裼诎牍腆w培養(yǎng)基中并且表達(dá)單一或多種報(bào)導(dǎo)基因的基因工程細(xì)胞完成觀(guān)察，其表達(dá)的產(chǎn)物，是一符合高密度螢光影像顯微鏡檢系統(tǒng)的波長(zhǎng)性質(zhì)的帶有特定激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)的細(xì)胞內(nèi)螢光發(fā)色團(tuán)。
通過(guò)實(shí)施例，本發(fā)明的方法一般地包括下列步驟(a)直接將作為有潛力的候選藥物的待篩選化合物，加到一固體支持物上；(b)將含有感興趣的目標(biāo)物的半固體培養(yǎng)基，鋪到帶有化合物的支持物上；(c)使化合物擴(kuò)散至半固體培養(yǎng)基；(d)培養(yǎng)；(e)觀(guān)察和記錄化合物-目標(biāo)物的相互作用。
通過(guò)實(shí)施例，如果操作者想要篩選有潛力的藥物或藥物組合物，用于HIV病毒感染個(gè)體的治療(其具有所有的AIDS或ARC特征)，則根據(jù)本發(fā)明適合的目標(biāo)物是含有長(zhǎng)末端重復(fù)(LTR)啟動(dòng)子(pLTR-EGFP-C1)的表達(dá)綠色螢光蛋白(GFP)的MT4基因工程細(xì)胞，其保藏于BCCM，保藏日1998年8月20日，保藏編號(hào)LMBP 3879。
pLTR-EGFP-C1(4777堿基對(duì))是以pEGFP-C1(Clontech)為基礎(chǔ)。在pEGFP-Cl中，增強(qiáng)的綠色螢光蛋白(EGFP)的表達(dá)，是通過(guò)強(qiáng)大的人類(lèi)巨細(xì)胞病毒(CMV)立早期啟動(dòng)子(589堿基對(duì))控制的。在pLTR-EGFP-C1中，CMV啟動(dòng)子由在U3區(qū)域含有高誘導(dǎo)性啟動(dòng)子的HIV-l長(zhǎng)末端重復(fù)LTR(652堿基對(duì))所取代。
這樣的細(xì)胞感染HIV時(shí)會(huì)由于LTR的活化及GFP的表達(dá)發(fā)出螢光。如果候選藥物抑制HIV，例如，通過(guò)抑制病毒逆轉(zhuǎn)錄酶、蛋白酶或整合酶，螢光會(huì)減弱或完全消失，操作者在化合物-目標(biāo)物相互作用區(qū)看到逐漸變黑的區(qū)域。
根據(jù)本發(fā)明的方法，步驟(b)一般包括適當(dāng)?shù)姆治鰲l件下，維持分析物及目標(biāo)物在足夠使固體支持物釋放分析物并使該分析物擴(kuò)散至含有目標(biāo)物的液體相或半固體相中的時(shí)間內(nèi)。維持適當(dāng)?shù)姆治鰲l件，包括維持正確的溫度、滲透壓、pH、張力及其類(lèi)似的參數(shù)。這些條件還可由目標(biāo)物的特性決定。
一般地，以哺乳動(dòng)物細(xì)胞作為目標(biāo)物時(shí)，溫度的范圍可從大約4℃到大約50℃,pH的范圍可從大約6.5到大約7.5。從細(xì)胞-分析物最佳作用方式來(lái)選擇滲透壓和張力。在物理?xiàng)l件上的唯一限制是，所使用的條件不能對(duì)細(xì)胞存活性產(chǎn)生負(fù)面影響，也不能影響分析物-目標(biāo)物的相互作用。
應(yīng)了解的是，本發(fā)明的方法可在一完全整合的系統(tǒng)中執(zhí)行。
本發(fā)明的方法便于資料處理單元的使用。恰當(dāng)?shù)拇祟?lèi)單元包括具有化合物鑒定的化學(xué)化合物資料庫(kù)數(shù)據(jù)、歷史軌跡以及軟件技術(shù)以便于在任何時(shí)間內(nèi)獲取和鑒別安裝的資料庫(kù)中的化合物。
在另一優(yōu)選實(shí)施方案中，分析物的應(yīng)用、分析物-目標(biāo)物的相互作用、培養(yǎng)、探測(cè)及數(shù)據(jù)分析過(guò)程，是根據(jù)本發(fā)明的完整的篩選方法，由從頭到尾完全自動(dòng)化的方法連結(jié)起來(lái)的。根據(jù)本發(fā)明，快速篩選化合物的自動(dòng)化方法的一典型實(shí)施例，包括下列步驟1．通過(guò)毛細(xì)管傳遞，產(chǎn)生化合物的分離的點(diǎn)或分離的線(xiàn)，而將化合物加到載體表面上，例如，透明膜或盒式磁帶工業(yè)使用的信息載體；2．干燥此載體的表面；3．使包埋在固定厚度的半固體基質(zhì)中的細(xì)胞，在透明膜的表面上形成一層；4．將含有點(diǎn)狀或線(xiàn)狀化合物的載體表面，與作為半固體基質(zhì)載體的膜表面接觸；5．將接觸的膜表面纏繞；6．培養(yǎng)纏繞的膜；7．將膜松開(kāi)，并暴露至探測(cè)和信息讀取單元；8．通過(guò)例如螢光顯微鏡影像分析系統(tǒng)，持續(xù)地讀取暴露的膜；以及9．?dāng)?shù)據(jù)分析。
外表面(不帶有化合物或其沒(méi)有接觸半固體基質(zhì))可包含有關(guān)所加入的化合物性質(zhì)的數(shù)字化資料，可在樣品分析期間按步驟8所述同時(shí)讀取該資料。以這個(gè)方式，可同時(shí)讀取及處理生物性資料及化合物資料。
附圖簡(jiǎn)述

圖1顯示如實(shí)施例1中所說(shuō)明，細(xì)胞密度為105/毫升時(shí)，在半固體基質(zhì)中化合物擴(kuò)散的原理；圖2顯示如實(shí)施例1中所說(shuō)明，細(xì)胞密度為106/毫升時(shí)，在半固體基質(zhì)中化合物擴(kuò)散的原理；圖3顯示如實(shí)施例1中所說(shuō)明，細(xì)胞密度為107/毫升時(shí)，在半固體基質(zhì)中化合物擴(kuò)散的原理；圖4是如實(shí)施例2中所說(shuō)明的毛細(xì)管支架裝置(8×12)；圖5顯示如實(shí)施例3中所說(shuō)明，在不含酚紅、10％FCS(胎牛血清)及1％Pen-Strep(青霉素-鏈霉素)的RPMI(Rosemount ParkMemorial Institute)培養(yǎng)液中，表達(dá)GFP(綠螢光蛋白)的MT-4細(xì)胞(LTR啟動(dòng)子)所示的螢光，(a)不含HIV-1，(b)含有HIV-1；圖6(a)和(b)顯示如實(shí)施例3中所說(shuō)明，在半固體相(不含酚紅、10％FCS、1％Pen-Strep及0.34％瓊脂的RPMI培養(yǎng)液)中，表達(dá)GFP的MT4細(xì)胞(LTR啟動(dòng)子)所示的螢光，(a)不含HIV-1,(b)含有HIV-1；圖7(a)-(e)顯示如實(shí)施例3中所說(shuō)明，在RPMI培養(yǎng)液(不含酚紅，并補(bǔ)充有10％FCS、1％Pen-Strep)中，表達(dá)GFP的MT4細(xì)胞(LTR啟動(dòng)子)所示的螢光，(a)不含HIV-1，(b)含有HIV-1，以及含有HIV-1和終濃度2-5μM，總體積為20μl的逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑AZT(c)、3TC(d)、以及Loviride(e)；圖8(a)-(e)顯示如實(shí)施例3中所說(shuō)明，在RPMI培養(yǎng)液(不含酚紅，并補(bǔ)充10％FCS及1％Pen-Strep)中，0.34％的瓊脂半固體相表達(dá)GFP的MT4細(xì)胞(LTR啟動(dòng)子)所示螢光，(a)不含HIV-1,(b)含有HIV-1，以及含有HIV-1和逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑AZT(c)、3TC(d)、和Loviride(e)，該抑制劑以產(chǎn)生2.5μM的最終濃度點(diǎn)在(1微升的貯存溶液)固體支持物的表面上，假設(shè)化合物在20微升的半固體相中完全擴(kuò)散；圖9顯示在如實(shí)施例3中所說(shuō)明HIV-1感染過(guò)的MT4細(xì)胞與固體支持物混合時(shí)HIV-1感染過(guò)的細(xì)胞在半固體相(含0.34％瓊脂糖的RPMI培養(yǎng)基，不含酚紅，含有1％FCS和1％Pen-Strep中所示的螢光，在使用前該固體支持物加有1μl 2.5μM、250nM和2.5nM的逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑、干燥并置4℃一周。
圖10顯示如實(shí)施例3中所說(shuō)明，當(dāng)把培養(yǎng)基中的HIV-1感染的細(xì)胞，加到分別含有1微升2.5μM、250nM及2.5nM的反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑AZT、3TC及Loviride的384孔組織培養(yǎng)盤(pán)中時(shí)，以HIV-1感染的MT-4細(xì)胞，在培養(yǎng)液(RPMI不含酚紅，并補(bǔ)充10％FCS及1％Pen-Strep)中所示螢光；圖11是根據(jù)本發(fā)明的方法，帶有點(diǎn)狀化合物的固體支持物的示意圖；圖12概要地顯示在陣列中毛細(xì)管之間的距離，是如何地改變及適應(yīng)本發(fā)明的方法的特定需求；圖13是根據(jù)本發(fā)明，在固體支持物上的半固體相中，鈣的擴(kuò)散形式；圖14顯示使用本發(fā)明的方法，自動(dòng)化線(xiàn)上高通量篩選的原理；圖15是一毛細(xì)管整理工具的詳細(xì)分解示意圖；圖16(a)-(e)顯示圖15的毛細(xì)管移動(dòng)至一微滴定盤(pán)，用以充填；圖17顯示圖15毛細(xì)管的充填；圖18顯示一螺旋裝置，用于降低圖15中毛細(xì)管之間的間隔；圖19顯示圖15的個(gè)別毛細(xì)管排成螺旋狀陣列；圖20顯示將圖15的毛細(xì)管中的液體，釋放至一固體支持物上的方式；圖21顯示一樣品沉積形式；圖22是一固體支持物與點(diǎn)在其上的分析物的平面圖；圖23顯示半固體相加到固體支持物上。
本發(fā)明的實(shí)施模式將通過(guò)下列實(shí)施例進(jìn)一步地說(shuō)明本發(fā)明實(shí)施例1化合物擴(kuò)散以及與包埋在半固體培養(yǎng)基中的細(xì)胞的相互作用的原理鈣黃綠素(calcein)，一種細(xì)胞生存的標(biāo)記，以5mM的濃度溶解在二甲基亞砜(DMSO)中。將總體積容量為0.5微升的玻璃毛細(xì)管的頂端與聚苯乙烯表面接觸，使得小滴的鈣黃綠素溶液從毛細(xì)管傳遞到塑料表面。在液滴干燥之后，將半固體培養(yǎng)基中的20μl細(xì)胞懸液懸浮于不含酚紅、補(bǔ)充有10％FCS、1％Pen-Strep和含有0.34％瓊脂的RPMI1640培養(yǎng)基中的MT4細(xì)胞，在干燥的鈣黃綠素位置上鋪成一層。在37℃(潮濕空氣及5％二氧化碳)培養(yǎng)2小時(shí)之后，可通過(guò)螢光顯微鏡及包埋的MT4細(xì)胞所產(chǎn)生的螢光顯像，而觀(guān)察到鈣到半固體相中的擴(kuò)散過(guò)程。圖1、2和3顯示了液滴的傳送、干燥和平鋪含有增加密度的包埋MT4細(xì)胞的半固體基質(zhì)的方法。
根據(jù)這些結(jié)果，在固定密度的半固體基質(zhì)中鈣黃綠素?cái)U(kuò)散的距離，也是通過(guò)包埋細(xì)胞的數(shù)目來(lái)測(cè)定。實(shí)施例2在半固體基質(zhì)中高密度化合物的添加及擴(kuò)散的原理一束以鈣黃綠素充填并如圖4所描繪放置(8×12)在一支架裝置中的毛細(xì)管，與聚苯乙烯的表面接觸，使得鈣黃綠素滴從每個(gè)毛細(xì)管同時(shí)傳遞至聚苯乙烯的表面。支架裝置一般是指10，并包括固定在平面12、13、用以維持毛細(xì)管11相互間所需要的關(guān)系的毛細(xì)管11。干燥之后，把RPMI1640培養(yǎng)基(補(bǔ)充10％FCS、1％Pen-Strep及0.34％瓊脂)中MT4細(xì)胞的均質(zhì)懸浮液，在此位置上鋪成一層。在培養(yǎng)(潮濕空氣及5％二氧化碳)2小時(shí)之后，發(fā)現(xiàn)包埋的MT4細(xì)胞的螢光可反映每個(gè)斑點(diǎn)半固定基質(zhì)中鈣黃綠素?cái)U(kuò)散的距離。實(shí)施例3化合物-目標(biāo)物相互作用-抗HIV化合物對(duì)于半固體相中含有HIV-1的表達(dá)GFP的MT4細(xì)胞(LTR啟動(dòng)子)的螢光效應(yīng)將3種已知具有抗HIV-1活性的化合物(AZT、3TC及Loviride),點(diǎn)在(+/-1微升，如前所述，從貯存溶液中，以毛細(xì)管來(lái)點(diǎn))透明的384孔聚苯乙烯組織培養(yǎng)盤(pán)的孔洞底表面上。將孔洞中的化合物干燥并儲(chǔ)存在4℃。
一星期后，從組織培養(yǎng)瓶中收集MT4細(xì)胞，并以107/毫升(密度)懸浮于RPMI培養(yǎng)基中。再把此細(xì)胞懸浮液平均地分至4個(gè)管子中。然后將這些管子以450×g離心10分鐘。把200微升在RPMI培養(yǎng)基中的HIV懸浮液，加到兩管離心后所得到的細(xì)胞沉淀物中，37℃培養(yǎng)2小時(shí)。以相同的方式處理另外的兩管，但不加入病毒。培養(yǎng)2小時(shí)之后，將瓊脂溶液(39℃)以最終0.34％的濃度，加到含有細(xì)胞及HIV的一管，以及僅含細(xì)胞的一管中。接著，把20微升在瓊脂中的細(xì)胞懸浮液及20微升細(xì)胞/病毒-瓊脂懸浮液，加到如上所述含有點(diǎn)狀化合物的384孔盤(pán)的不同孔洞中。
把200微升培養(yǎng)基和200微升含有病毒的培養(yǎng)基，分別加到剩下的兩管細(xì)胞沉淀物中。在37℃培養(yǎng)2小時(shí)后，調(diào)整最終體積(使其與瓊脂組成物的最終體積相同)，并且將20微升非感染及感染的細(xì)胞懸浮液，加到如上所述含有點(diǎn)狀化合物的384孔盤(pán)的孔洞中。
在加入HIV感染的細(xì)胞之前，將1微升體積的化合物，迅速加到孔洞中?？偡治鲶w積為20微升。
在3天的培養(yǎng)時(shí)間后，表達(dá)GFP的MT4細(xì)胞的螢光，通過(guò)螢光顯微鏡及培養(yǎng)盤(pán)的讀數(shù)而評(píng)估。結(jié)果概述見(jiàn)圖5-10。這些數(shù)據(jù)顯示，把化合物加到固體支持物上(384孔微滴定盤(pán)的孔洞)之后，以及在4℃儲(chǔ)存1星期之后，活性(這些化合物對(duì)HIV-1感染的保護(hù)效應(yīng))并不會(huì)于化合物在液相中的擴(kuò)散過(guò)程相異。
此外，所得到的結(jié)果也顯示，可在半固體相中觀(guān)察到表達(dá)GFP的MT4細(xì)胞所反映出的逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑對(duì)HIV感染的濃度依賴(lài)性效應(yīng)，使用半固體培養(yǎng)基并不會(huì)對(duì)化合物的特性和其對(duì)HIV-1 RT抑制的有效性產(chǎn)生影響。
本發(fā)明將通過(guò)下列僅為舉例的實(shí)施方案的說(shuō)明，并參考附圖而更進(jìn)一步地得到闡明。
參考圖11，顯示帶有化合物21的固體支持物20，已將這些化合物從每束帶有110支毛細(xì)管的196束毛細(xì)管陣列(未顯示)中，點(diǎn)在固體支持物上，這樣有21,560個(gè)化合物點(diǎn)在固體支持物20上。
圖12顯示為滿(mǎn)足本發(fā)明篩選方案的特定需要在陣列中毛細(xì)管之間的距離的變化情況(1.414毫米、1毫米、2.236毫米、2毫米、3.623毫米、3毫米)。
圖13是在固體支持物上的半固體相中，鈣黃綠素的擴(kuò)散形式。通過(guò)使用如圖4所描繪的毛細(xì)管化合物支架裝置，其毛細(xì)管中心點(diǎn)相距2毫米，將鈣黃綠素點(diǎn)在聚苯乙烯的表面上。懸浮在半固體相(RPMI1640培養(yǎng)基，10％FCS、1％Pen-Strep、0.34％瓊脂)中的覆蓋的細(xì)胞密度是107細(xì)胞(MT4)/毫升。在2小時(shí)的培養(yǎng)期之后，通過(guò)螢光顯微鏡進(jìn)行分析。
圖14是根據(jù)本發(fā)明的方法，快速篩選化合物的自動(dòng)化方法的示意圖。帶有以分離的點(diǎn)狀或線(xiàn)狀加在其表面31上的待篩選化合物、形式為膜或膠布的資料載體30與資料載體33的表面32接觸，該載體也是膜或膠布的形式，并具有包埋在半固體基質(zhì)中的目標(biāo)物。接著，將相應(yīng)的載體30、33纏繞，其表面31及32相接觸，并在溫度、濕度及二氧化碳控制的環(huán)境下培養(yǎng)，使化合物釋放到載體33的表面32。接著松開(kāi)載體，然后將載體33送至一般顯示在34的分析和資料讀取單元。
在下列圖15-23中，相似的元件是以相同的參考數(shù)字代表。
參考圖15，一般以40顯示用于供應(yīng)毛細(xì)管41的裝置，從其供給點(diǎn)至帶有固定間距的橫斷溝43的輸送帶42進(jìn)行供應(yīng)。輸送帶45逆時(shí)針移動(dòng)時(shí)，毛細(xì)管41進(jìn)入通道44，后者可容納單層的毛細(xì)管41，并且輸送帶42以順時(shí)針?lè)较蛞苿?dòng)時(shí)，一次傳遞一個(gè)到溝43。毛細(xì)管41通過(guò)重力及輸送帶45的結(jié)合效應(yīng)，單獨(dú)地通過(guò)通道44。每次溝43位于末端46時(shí)，毛細(xì)管41就傳遞到那里。
參考圖16(a)-(c)至圖17，顯示牽涉到將毛細(xì)管41轉(zhuǎn)移至微滴定盤(pán)47用以充填的步驟。通過(guò)顯示在48的夾住裝置，將毛細(xì)管41從輸送帶42舉起。夾住裝置48包括兩個(gè)伸長(zhǎng)結(jié)構(gòu)49，其通過(guò)施加側(cè)力至毛細(xì)管，而從其間夾住多數(shù)毛細(xì)管41。以這個(gè)方式，把毛細(xì)管41從輸送帶42轉(zhuǎn)移至微滴定盤(pán)47用以充填。在輸送帶42上的溝43的間隔，于在微滴定盤(pán)47中孔洞50的間隔是相同的。夾住裝置48舉起并輸送以12管為一組的毛細(xì)管41，此數(shù)目于微滴定盤(pán)47的一列中孔油50的數(shù)目相對(duì)應(yīng)。在輸送步驟期間，夾住裝置48旋轉(zhuǎn)90°，使毛細(xì)管41的一端落到微滴定盤(pán)47的孔洞50中。
夾住裝置48以及毛細(xì)管41可自由地沿著垂直軸移動(dòng)，使毛細(xì)管41落至微滴定盤(pán)47的孔洞50中。毛細(xì)管41在孔洞50中停留的時(shí)間足以使在相應(yīng)孔洞50中的液體通過(guò)毛細(xì)作用而被吸出。一旦給定的充填時(shí)間過(guò)去，毛細(xì)管41即被抽出，并且?jiàn)A住裝置48旋轉(zhuǎn)90°，再次呈現(xiàn)水平方向。
在毛細(xì)管41充填之后，把該毛細(xì)管轉(zhuǎn)移至螺旋或蠕動(dòng)裝置51，后者用于減少如圖18所顯示的毛細(xì)管41之間的間隔。將毛細(xì)管41傳遞至螺旋裝置51的末端52。螺旋裝置51的螺線(xiàn)53具有變化的螺距，在末端52大于末端54。隨著螺旋裝置51的旋轉(zhuǎn)，毛細(xì)管41沿著其長(zhǎng)度，以箭頭的方向前進(jìn)并且由于改變螺距也使其更接近。在末端54，毛細(xì)管41僅是通過(guò)螺線(xiàn)53的壁55而分開(kāi)。
參考圖19，毛細(xì)管41從螺旋裝置51釋放到膠布56上，后者具有一層粘劑，其中毛細(xì)管41與其鄰接的側(cè)邊粘著在該粘劑上。膠布56以于毛細(xì)管41離開(kāi)螺旋裝置51的相同速率前進(jìn)。然后膠布56逐漸地卷成一緊密包裝的圓形陣列，如57所示。
參考圖20，一般以60顯示把陣列57的毛細(xì)管41中的液體，釋放至固體支持物61表面的裝置，并且此裝置是相對(duì)可移動(dòng)的。裝置60包括一適于接受該陣列57的外罩62。外罩62連接到一氣泵63上，并需要的話(huà)，通過(guò)產(chǎn)生一相對(duì)于外罩62外部的正壓區(qū)，而迫使液體高于毛細(xì)管41，到固體支持物61的表面上。
圖21顯示在從毛細(xì)管41中添加分析物液滴之后，裝置在固體支持物61上的毛細(xì)管41的陣列57，以及裝置在該固體支持物61上的分離的點(diǎn)狀斑64的形式。
圖22是固體支持物61的平面圖，顯示所加的液體分析物的分離點(diǎn)狀斑64的圓形排列形式。
參考圖23，一般以70顯示在液體分析物干燥之后，把在半固體相71中的目標(biāo)物細(xì)胞，加到固體支持物61的表面72的裝置。裝置70包括臂73及列印頭74。固體支持物61可自由轉(zhuǎn)動(dòng)，裝置70可自由地在z平面及x或y平面移動(dòng)，這樣，通過(guò)臂73和固體支持物61的聯(lián)合移動(dòng)，對(duì)列印頭74進(jìn)行定位。
權(quán)利要求
1．一種快速篩選分析物的方法，包括下列步驟(a)同時(shí)將多種要篩選的分析物，加到一種或多種固體支持物上，使得分析物之間互相分開(kāi)；(b)將該帶有分析物的固體支持物，與半固體或液體培養(yǎng)基中的目標(biāo)物接觸，藉此該分析物從固體支持物中釋放至目標(biāo)物；以及(c)測(cè)量分析物-目標(biāo)物的相互作用。
2．權(quán)利要求1的方法，其中步驟(a)包括(ⅰ)將分析物置于分別可鑒別的容器中；以及(ⅱ)將分析物從容器轉(zhuǎn)移至固體支持物，以這樣的方式使每個(gè)容器的待轉(zhuǎn)移內(nèi)容物，與其他容器的內(nèi)容物分開(kāi)。
3．權(quán)利要求2的方法，其中分別可鑒別的容器選自管子，如毛細(xì)管；筆，如繪圖筆以及列印頭。
4．權(quán)利要求3的方法，其中該分別可鑒別的容器是一種毛細(xì)管陣列，每一個(gè)可根據(jù)其在陣列中的位置而鑒別，其中，分析物至固體支持物的轉(zhuǎn)移過(guò)程，是通過(guò)經(jīng)毛細(xì)管的開(kāi)口端將其分散而完成的。
5．權(quán)利要求1-4中任何一項(xiàng)的方法，其中該固體支持物是一基本上平坦的，盤(pán)狀-、直角狀-或方塊狀的形狀。
6．權(quán)利要求5的方法，其中該固體支持物包括當(dāng)把分析物加在其上時(shí)，可使分析物自發(fā)性釋放的材料。
7．權(quán)利要求5的方法，其中該固體支持物包括當(dāng)把分析物加在其上時(shí)，使分析物控制性地釋放的材料。
8．權(quán)利要求6或7的方法，其中該材料是該半固體培養(yǎng)基。
9．上述任一項(xiàng)權(quán)利要求的方法，其中當(dāng)把每個(gè)分析物加到固體支持物上時(shí)，分析物在固體支持物上擴(kuò)散，以便產(chǎn)生一濃度梯度。
10．上述任一項(xiàng)權(quán)利要求的方法，其中該分析物所加到的固體支持物的表面選自聚合物、陶瓷、金屬、纖維素以及玻璃。
11．上述任一項(xiàng)權(quán)利要求的方法，其中該半固體的培養(yǎng)基位于一載體上。
12．權(quán)利要求11的方法，其中該固體支持物形式是彈性膜或膠布，在其上，施加含目標(biāo)物的半固體的培養(yǎng)基，藉此，本方法可通過(guò)使用滾輪系統(tǒng)經(jīng)過(guò)本發(fā)明的各種步驟使彈性膜或膠布前進(jìn)而實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化。
13．權(quán)利要求12的方法，其中該載體可由另一層膜或膠布而覆蓋，藉此夾在固體支持物與覆蓋層之間。
14．權(quán)利要求12-13的方法，其中該固體支持物或覆蓋層(如果存在的話(huà))，可提供磁軌以記錄關(guān)于所加的分析物的資料，藉此可在測(cè)量分析物-目標(biāo)物相互作用的同時(shí)自動(dòng)化讀取并處理該資料。
15．權(quán)利要求1-10中任何一項(xiàng)的方法，其中該固體支持物本身是一探測(cè)器，或形成探測(cè)器的一部分。
16．權(quán)利要求15的方法，其中該固體支持物是選自二氧化硅晶片、帶電荷的裝置以及攝影底片。
17．上述任一項(xiàng)權(quán)利要求的方法，其中該固體支持物的表面可涂覆一層膜、分子單層、細(xì)胞單層或Langmuir-Blodgett膜。
18．上述任一項(xiàng)權(quán)利要求的方法，其中該固體支持物本身是一資料載體，其帶有電子、磁性或數(shù)字化形式的資料。
19．上述任一項(xiàng)權(quán)利要求的方法，其中該固體支持物的表面是反射的。
20．權(quán)利要求19的方法，當(dāng)從屬于權(quán)利要求17時(shí)，其中該表面可以是光碟(CD)的反射表面。
21．權(quán)利要求20的方法，還包括將該光碟復(fù)制到一可寫(xiě)入的光碟的步驟。
22．上述任一項(xiàng)權(quán)利要求的方法，其中該半固體的培養(yǎng)基包括提供半固體或粘性液體環(huán)境的物質(zhì)，使得該分析物可控制性地釋放至該目標(biāo)物中。
23．權(quán)利要求22的方法，其中該物質(zhì)是選自明膠、多糖類(lèi)例如瓊脂和瓊脂糖，以及聚合物如甲基纖維素和聚丙烯酰胺，或一所謂的智能材料。
24．上述任一項(xiàng)權(quán)利要求的方法，其中步驟(a)及(b)是同時(shí)地實(shí)施。
25．權(quán)利要求1的方法，其中每個(gè)分析物是加到單個(gè)固體支持物上。
26．權(quán)利要求25的方法，其中該固體支持物是棒狀或球形。
27．權(quán)利要求25或26的方法，其中每個(gè)帶有分析物的固體支持物，在步驟(b)中與一目標(biāo)物，在多隔間裝置的分離的隔間中接觸。
28．權(quán)利要求27的方法，其中該隔間是在該裝置中排列的小孔洞。
29．上述任一項(xiàng)權(quán)利要求的方法，其中該分析物是選自化學(xué)化合物、抗原、抗體、DNA探針、細(xì)胞以及帶有分析物的小珠及脂質(zhì)體。
30．權(quán)利要求29的方法，其中，當(dāng)加到固體支持物時(shí)，分析物是溶解在有機(jī)或無(wú)機(jī)的溶劑中。
31．權(quán)利要求30的方法，其中該溶劑包括所謂的對(duì)化學(xué)或物理參數(shù)有反應(yīng)的智能材料，這樣該化學(xué)或物理參數(shù)使每個(gè)加到固體支持物上并干燥的分析物液化。
32．權(quán)利要求29-31的方法，其中該分析物是一化學(xué)化合物。
33．上述任一項(xiàng)權(quán)利要求的方法，其中該目標(biāo)物是選自原核細(xì)胞、真核細(xì)胞、病毒、分子、受體、小珠及其組合。
34．權(quán)利要求33的方法，其中該目標(biāo)物是帶有報(bào)告功能的細(xì)胞。
35．權(quán)利要求34的方法，其中該分析物-目標(biāo)物的相互作用，可通過(guò)分析物對(duì)細(xì)胞報(bào)告功能的效應(yīng)來(lái)測(cè)量。
36．上述任一項(xiàng)權(quán)利要求的方法，其中該分析物-目標(biāo)物的相互作用，是通過(guò)使用一種或多種下列方法而測(cè)量顯微鏡法、比色法、螢光計(jì)法、發(fā)光計(jì)法、光密度計(jì)法、同位素法以及物理的測(cè)量。
37．權(quán)利要求1的方法，基本上如前所述參考附圖并如附圖所示。
38．權(quán)利要求1的方法，基本上如前所述參考所附的實(shí)施例。
全文摘要
一種快速篩選分析物如有潛力的候選藥物的方法,包括下列步驟:同時(shí)將多種要篩選的分析物,加到一種或多種固體支持物(61)上,使得分析物之間互相分開(kāi);將該帶有分析物的固體支持物,與半固體或液體培養(yǎng)基中的目標(biāo)物接觸,藉此該分析物從固體支持物(61)中釋放至目標(biāo)物中;以及測(cè)量分析物－目標(biāo)物的相互作用。此方法可同時(shí)操作數(shù)千個(gè)不同的分析物。當(dāng)分析物加到固體支持物(61)上時(shí),分析物可在其上擴(kuò)散,以便產(chǎn)生一濃度梯度,以及分析物的系列稀釋,如果對(duì)候選藥物需要?jiǎng)┝糠磻?yīng)曲線(xiàn)的話(huà)。所述方法易自動(dòng)化操作。
文檔編號(hào)B01L3/00GK1315001SQ98814290
公開(kāi)日2001年9月26日 申請(qǐng)日期1998年9月8日 優(yōu)先權(quán)日1998年9月8日
發(fā)明者R·W·J·保維爾斯, C·H·S·雷蘭特, K·L·A·范阿克爾 申請(qǐng)人:泰博特克有限公司