一種真菌菌株lp-20及其在含鎘水體處理中的用途
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種能夠去除或回收水中鎘離子的真菌菌株LP-20（Trichoderma?spirale）、其分離培養(yǎng)基、包含該菌株的菌劑及其制備方法、包含該菌株的鎘離子處理劑以及含鎘廢水的處理方法。本發(fā)明真菌菌株LP-20可以耐受水溶液中高濃度的鎘離子，并能夠去除或回收廢水中的鎘離子，其成本低廉，大規(guī)模生產(chǎn)方便，便于實現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化以及其它各種下游應(yīng)用。
【專利說明】一種真菌菌株LP-20及其在含鎘水體處理中的用途
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及微生物【技術(shù)領(lǐng)域】，尤其涉及一種能夠去除水中鎘離子的真菌菌株LP-20及其在含鎘水體處理中的用途。
【背景技術(shù)】
[0002]隨著工業(yè)的發(fā)展，有毒重金屬對環(huán)境的污染嚴重威脅著人類健康，逐步成為全球性問題。其中鎘是劇毒性物質(zhì)，可使進入體內(nèi)的其他毒物的毒性增大；還可以在人的肝、腎、胰腺和甲狀腺內(nèi)積累，可引起骨、消化道、血管的病變，表現(xiàn)有神經(jīng)痛、骨質(zhì)疏松、骨折、貧血、內(nèi)分泌失調(diào)等癥狀；鎘還有致癌、致畸、致突變作用，歐洲和日本因鎘污染引發(fā)的骨痛病，是鎘污染區(qū)域鎘中毒的常見病。
[0003]電鍍、印染、紡織、采礦等行業(yè)排放大量的含鎘廢水，這些廢水進入環(huán)境后會對人體健康造成嚴重危害。近幾年，我國已經(jīng)有多起重特大重金屬污染事件，嚴重影響群眾健康，例如湖南湘江流域鎘大米事件。目前對含有重金屬鎘離子廢水常用的處理方法有化學(xué)處理法、離子交換法、吸附分離法、膜分離法等。但這些方法在處理過程中存在著產(chǎn)生二次污染、費用過高、重復(fù)利用性不強、工藝復(fù)雜等缺陷，因此研究出一種高效，環(huán)保，低成本的方法是目前鎘治理科技發(fā)展的趨勢。
[0004]除了傳統(tǒng)的物理化學(xué)方法，近年來，生物方法尤其是微生物修復(fù)法在治理重金屬污染領(lǐng)域逐步被人們所認識和接受。微生物修復(fù)法是近幾十年來國內(nèi)外新興的一類治理重金屬污染的方法，這類方法利用細菌或真菌的生理特性及其產(chǎn)生的某些化學(xué)物質(zhì)與重金屬發(fā)生吸附、氧化還原、沉淀、螯 合等化學(xué)反應(yīng)，從而從環(huán)境中去除重金屬或使重金屬無毒無害化。微生物方法具有成本低廉、操作運行簡便、處理效率高、無二次污染、易于回收重金屬等傳統(tǒng)方法不具備的優(yōu)勢。目前，微生物處理技術(shù)已經(jīng)成為世界各國重金屬污染治理研究和應(yīng)用領(lǐng)域的一大熱點。
[0005]國內(nèi)對于耐受和吸附水體中鎘的微生物菌種也進行了一定的研究，張洪勛等(中國專利申請第CN200610057596.4號)公開了一種蠟狀芽孢桿菌為主的生物吸附劑，羅勝聯(lián)等(中國專利申請第CN201010513140.0號)公開一種金黃桿菌(Chryseobacteriumsp.LKS03)接種到龍葵促進其根部吸收水體中鎘離子，楊宏等(中國專利申請第CN201310128886.3號)硫酸鹽還原菌與無機填料結(jié)合制備生物濾池處理鎘廢水，這些方法均有一定的鎘污染水體處理能力，但是目前還未獲得處理鎘污染水體效果良好并且能夠大規(guī)模應(yīng)用于鎘污染水體處理的菌種。
[0006]因此，本領(lǐng)域中存在對于處理含鎘污水效果良好并且能夠進行大規(guī)模工業(yè)應(yīng)用的菌種的需要。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明的第一個目的在于提供一種真菌菌株LP-20 (Trichoderma spirale)。
[0008]本發(fā)明的第二個目的在于提供了上述真菌菌株的分離培養(yǎng)基。[0009]本發(fā)明的第三個目的在于提供一種包含上述真菌菌株的菌劑。
[0010]本發(fā)明的第四個目的在于提供上述菌劑的制備方法。
[0011]本發(fā)明的第五個目的在于提供一種鎘離子處理劑。
[0012]本發(fā)明的第六個目的在于提供一種處理含鎘水體的方法。
[0013]為達此目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案:
[0014]在第一個方面，本發(fā)明提供了一種真菌菌株LP-20 (Trichoderma spirale),保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，地址:北京市朝陽區(qū)北辰西路I號院3號，100101，保藏日期為2013年8月16日，保藏編號為CGMCC N0.8038。
[0015]在第二個方面，本發(fā)明提供了一種如第一方面所述真菌菌株LP-20的分離培養(yǎng)基，用于分離該真菌菌株；所述分離培養(yǎng)基包含0.1~0.4g/L乙酸鈉，0.05~0.2g/L酵母提取物，5 ~25g/L 瓊脂，40 ~60mg/L Cd2+，0.05 ~0.2g/L 氯霉素，0.01 ~0.12g/LMgSO4.7H20 和 0.001 ~0.010g/L K2HPO4,且 ρΗ=7.0。
[0016]優(yōu)選地，所述分離培養(yǎng)基包含0.2~0.3g/L乙酸鈉，0.1~0.2g/L酵母提取物，10 ~20g/L 瓊脂，45 ~55mg/L Cd2+，0.08 ~0.15g/L 氯霉素，0.03 ~0.lg/L MgSO4.7H20和 0.003 ~0.008g/L K2HPO4,且 ρΗ=7.0。
[0017]進一步優(yōu)選地，所述分離培養(yǎng)基包含0.2461g/L乙酸鈉，0.15g/L酵母提取物，15g/L 瓊脂，50mg/L Cd2+，0.lg/L 氯霉素，0.05g/L MgSO4.7H20 和 0.005g/L K2HPO4,且pH=7.0。
[0018]優(yōu)選地,在每升所述分離培養(yǎng)基中還加入2ml微量元素溶液,所述微量元素溶液包含 I ~5g/L CaCl2.2Η20，1 ~5g/L 2.5g H3BO3,0.5 ~1.2g/L ZnCl2.4Η20，0.5 ~1.5g/LFeCl3.6H20,0.3 ~0.6g/L ZnSO4.7H20,0.1 ~0.4g/L Na2MoO4.2H20 和 0.003 ~0.008g/LCuSO4.5H20 ；
[0019]進一步優(yōu)選地，所述微量元素溶液包含2~4g/L CaCl2.2H20、1~3g/L H3BO3>0.7 ~lg/LZnCl2.4Η20、0.8 ~1.2g/L FeCl3.6Η20、0.4 ~0.5g/L ZnSO4.7Η20、0.2 ~0.3g/LNa2Mo04.2H20 和 0.005 ~0.006g/L CuSO4.5H20 ；
[0020]更進一步優(yōu)選地，所述微量元素溶液包含3.7g CaCl2.2Η20、2.5g Η3Β03、0.87gZnCl2.4Η20、1.0g FeCl3.6Η20、0.44g ZnSO4.7Η20、0.29g Na2MoO4.2Η20 和 0.005gCuSO4.5Η20。
[0021]在第三個方面，本發(fā)明提供了一種真菌菌劑，該真菌菌劑包含第一方面所述的真菌菌株LP-20。
[0022]在第四個方面，本發(fā)明提供了如第三方面所述的真菌菌劑的制備方法，所述方法包括:
[0023](I)培養(yǎng)皿培養(yǎng):將如權(quán)利要求1所述的真菌菌株LP-20在無菌條件下接種于固體培養(yǎng)基上，20-30°C、優(yōu)選22-28°C、進一步優(yōu)選25°C下培養(yǎng)4_6天、優(yōu)選4.4-5.5天、進一步優(yōu)選5天；所述固體培養(yǎng)基包括如下組分:馬鈴薯浸粉4-6g/L、優(yōu)選4.5-5.5g/L、進一步優(yōu)選5g/L，葡萄糖或蔗糖15-25g/L、優(yōu)選17-23g/L、進一步優(yōu)選20g/L，瓊脂13_18g/L、優(yōu)選14-17g/L、進一步優(yōu)選 15g/L，氯霉素 0.lg/L ；
[0024](2) 一級種子培養(yǎng):將步驟(1)培養(yǎng)的菌種在無菌條件下接種于液體培養(yǎng)基，20-30 0C，優(yōu)選22-28 °C， 進一步優(yōu)選25°C下培養(yǎng)5_7天，優(yōu)選地5.5-6.5天，更優(yōu)選地6天，制得一級種子；所述液體培養(yǎng)基包括如下組分:馬鈴薯浸粉4-6g/L、優(yōu)選4.5-5.5g/L、進一步優(yōu)選5g/L，葡萄糖或者蔗糖15-25g/L、優(yōu)選17-23g/L、進一步優(yōu)選20g/L，氯霉素0.1g/L ；
[0025](3)二級種子培養(yǎng):按液體培養(yǎng)基的體積比為5-15%、優(yōu)選8-12%、更優(yōu)選10%的接種量，將步驟(2)所得一級種子接種到發(fā)酵罐中，曝氣，培養(yǎng)5-7天、優(yōu)選5.5-6.5天、進一步優(yōu)選6天，制得二級種子；
[0026](4)混合發(fā)酵培養(yǎng):按液體培養(yǎng)基的體積比為10-20%、優(yōu)選12-18%、更優(yōu)選15%的接種量，將二級種子接種到發(fā)酵罐中，進行高密度發(fā)酵培養(yǎng)，獲得菌劑。
[0027]培養(yǎng)皿培養(yǎng)中，培養(yǎng)溫度可以為20°C、21°C、22°C、23°C、24°C、25 V、26°C、27 V、28°C、29°C或30°C;培養(yǎng)時間可以為4天、4.5天、110小時、5天、130小時、5.5天或6天；所用的固體培養(yǎng)基中馬鈴薯浸粉可以為4g/L、4.2g/L、4.5g/L、4.7g/L、4.9g/L、5g/L、5.lg/L、
5.3g/L、5.5g/L、5.8g/L 或 6g/L,葡萄糖或者鹿糖可以為 15g/L、16g/L、17g/L、18g/L、19g/L、20g/L、21g/L、22g/L、23g/L、24g/L 或 25g/L，瓊脂可以為 13g/L、14g/L、15g/L、16g/L、17g/L 或 18g/L。
[0028]一級種子培養(yǎng)中，培養(yǎng)溫度可以為 20°C、21°C、22°C、23°C、24°C、25°C、26°C、27°C、28°C、29°C或30°C;培養(yǎng)時間可以為5天、5.5天、140小時、6天、150小時、6.5天或7天；所用的液體培養(yǎng)基中馬鈴薯浸粉可以為4g/L、4.2g/L、4.5g/L、4.7g/L、4.9g/L、5g/L、5.lg/L、
5.3g/L、5.5g/L、5.8g/L 或 6g/L,葡萄糖或者鹿糖可以為 15g/L、16g/L、17g/L、18g/L、19g/L、20g/L、21g/L、22g/L、23g/L、24g/L 或 25g/L。
[0029]二級種子培養(yǎng)中，接種量按液體培養(yǎng)基的體積比可以為5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%或15% ;培養(yǎng)時間可以為5.5天、140小時、6天、150小時或6.5天。
[0030]混合發(fā)酵培養(yǎng)中，接種量按液體培養(yǎng)基的體積比可以為10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19% 或 20%。
[0031]在第五個方面，本發(fā)明提供了一種鎘離子處理劑，所述鎘離子處理劑包括如第一方面所述的真菌菌株LP-20 ;優(yōu)選地，所述處理為去除或回收。
[0032]在第六個方面，本發(fā)明提供了一種處理含鎘水體的方法，所述方法包括:將如第一方面所述的真菌菌株LP-20、如第三方面所述的真菌菌劑或如第五方面所述的鎘離子處理劑與所述含鎘水體接觸。
[0033]優(yōu)選地，本發(fā)明的處理含鎘水體的方法包括:
[0034](I)將含鎘水體的pH值調(diào)節(jié)至5.0-8.0，優(yōu)選5.5-7，進一步優(yōu)選6.0 ；
[0035](2)向水體中加入如權(quán)利要求1所述的真菌菌株LP-20、如權(quán)利要求4所述的真菌菌劑或如權(quán)利要求6所述的鎘離子處理劑，于10_35°C，優(yōu)選15-30°C，進一步優(yōu)選20°C，震蕩4-8小時，優(yōu)選5-7小時，進一步優(yōu)選6小時，震蕩速度150-220rpm，優(yōu)選160_200rpm，進一步優(yōu)選180rpm ；
[0036](3)靜置8-16小時，優(yōu)選10-14小時，進一步優(yōu)選12小時。
[0037]在本發(fā)明的處理含鎘水體的方法中，含鎘水體的pH值可以為5.0,5.5,5.8,5.9、
6.0,6.1,6.2,6.5,7.0,7.5 或 8.0 ;處理溫度可以為 10 °C、11 °C、12 °C、13 °C、14 °C、15 °C、16 °C、17 °C、18 °C >19 °C >20 °C >21 °C >22 °C >23 °C >24 °C >25 °C >26 °C >27 °C >28 °C >29 °C >30 °C、31°C、32°C、33°C、34°C*35°C ;震蕩時間可以為4小時、4.5小時、5小時、5.5小時、6小時、6.5小時、7小時、7.5小時或8小時；震蕩速度可以為150rpm、160rpm、170rpm、180rpm、190rpm、200rpm、210rpm或220rpm ;靜置時間可以為8小時、8.5小時、9小時、9.5小時、10小時、10.5小時、11小時、11.5小時、12小時、12.5小時、13小時、13.5小時、14小時、14.5小時、15小時、15.5小時或16小時。
[0038]在本發(fā)明的處理含鎘水體的方法中，所述處理為去除或回收所述含鎘水體中的鎘離子。
[0039]在本發(fā)明的處理含鎘水體的方法中，所述含鎘水體可來源于電鍍、冶煉、鑄造、農(nóng)藥、采礦、染料、石油、電池、機械、印刷行業(yè)排放的工業(yè)廢水或空氣中含鎘顆粒物在水體中的沉降。
[0040]在本文中，“高密度培養(yǎng)”又稱高密度發(fā)酵，一般指微生物在液體培養(yǎng)中細胞群體密度超過常規(guī)培養(yǎng)10倍以上時的生長。
[0041 ] 本發(fā)明的有益效果:
[0042]本發(fā)明提供的真菌菌株LP-20可以耐受水溶液中高濃度的鎘離子，并能夠去除或回收污水中的鎘離子，其成本低廉，大規(guī)模生產(chǎn)方便，便于實現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化以及其他各種下游應(yīng)用。
[0043]保藏信息
[0044]保藏日期:2013年8月16日；
[0045]保藏單位:中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱:CGMCC)，地址:北京市朝陽區(qū)北辰西路I號院3號，100101 ；
[0046]保藏編號:CGMCCN0.8038。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0047]圖1是真菌菌株LP-20在不同Cd2+濃度下的生長速率。
【具體實施方式】
[0048]下面通過【具體實施方式】來進一步說明本發(fā)明的技術(shù)方案。
[0049]實施例1真菌菌株LP-20的分離
[0050]本發(fā)明的真菌菌株LP-20的分離包含以下步驟:
[0051](I)將10克含有重金屬污染的新鮮土樣裝入含有90毫升無菌水的三角瓶中；
[0052](2)用玻璃珠打散，攪勻，制成土壤懸液；
[0053](3)利用涂布法將土壤懸液涂布在分離培養(yǎng)基平板上，所述分離培養(yǎng)基的組成為:無水醋酸鈉0.2406g/L，酵母抽提物0.15g/L，瓊脂15g/L，氯霉素0.lg/L, Cd2+50mg/L,
0.05g/L的MgSO4.7H20和(λ 005g/L的K2HPO4,其余為去離子水，且ρΗ=7.0,120°C高溫高壓滅菌30分鐘；
[0054](4)將所涂布的分離培養(yǎng)基在30°C的條件下培養(yǎng)2~4天，獲得單個菌株；
[0055](5)將所述單個菌株接入新鮮的所述分離培養(yǎng)基中繼續(xù)進行分離培養(yǎng)，獲得純化的菌株；
[0056](6)對步驟(5)中得到的純化菌株重復(fù)步驟(5)的操作3~5次，以確保所得到的菌株為完全純化的單個菌株，獲得本發(fā)明的真菌菌株并且于4°C保存。[0057]實施例2菌劑的制備
[0058]本發(fā)明中的菌劑的制備包含以下步驟:
[0059]DPetri Dishes培養(yǎng):將已經(jīng)純化的真菌菌株LP-20原始菌種在無菌條件下分別接種于固體培養(yǎng)基上，室溫(25°C)條件下培養(yǎng)5天；固體培養(yǎng)基具有以下組成:馬鈴薯浸粉5g/L,葡萄糖20g/L,瓊脂15g/L,氯霉素0.lg/L ；
[0060]2)—級種子培養(yǎng):將步驟I)培養(yǎng)的菌種在無菌條件下分別接種于液體培養(yǎng)基，室溫(25°C)條件下培養(yǎng)6天，制得一級種子懸液；液體培養(yǎng)基具有以下組成:馬鈴薯浸粉5g/L,葡萄糖20g/L,氯霉素0.lg/L ；
[0061]3) 二級種子培養(yǎng):按液體培養(yǎng)基的體積比為10%的接種量，將一級種子分別接種到2.5L的發(fā)酵罐中，發(fā)酵罐內(nèi)培養(yǎng)液的總體積為1.5L，適當(dāng)曝氣，培養(yǎng)6天，制得二級種子;
[0062]4)混合發(fā)酵培養(yǎng):按液體培養(yǎng)基的體積比為15%的接種量，將二級種子接種到IOL的發(fā)酵罐中，發(fā)酵罐內(nèi)的培養(yǎng)基總體積為7L，進行高密度發(fā)酵培養(yǎng)，獲得菌劑。
[0063]實施例3 Cd2+濃度對真菌菌株LP-20生長的影響
[0064]在AY 液體培養(yǎng)基中分別添加 0、20、40、60、80、100、200、500mg/LCd2+，將 LP-20 分別接種于以上不同濃度Cd2+的培養(yǎng)基上，室溫條件下培養(yǎng)15天后，稱量菌體重量，菌體生長變化如圖1所示。
[0065]由圖1可見， LP-20在Cd2+濃度為Omg/L時生物量達到最大，Omg/L達到峰值
7.2334g，之后呈現(xiàn)明顯的下降趨勢。在20mg/L至500mg/L，菌體重量減少2.lg。當(dāng)Cd2+濃度為500mg/L時，菌體量為1.46g。從上分析得出，雖然隨Cd2+濃度的升高，菌體生長受到一定的抑制作用，但在高Cd2+濃度下，真菌LP-20還是表現(xiàn)出菌體生長迅速及很好的耐受性。
[0066]實施例4 pH值對真菌LP-20吸附Cd2+能力的影響
[0067]配制含有60mg/L Cd2+的pH值分別為3.0,4.0,5.0,6.0,7.0的溶液，溶液體積為IOOmL,裝入250mL三角瓶中。分別在這5瓶溶液中添加等量2g的真菌LP-20菌體，反應(yīng)溫度為25°C，搖床震蕩時間為5h，震蕩速度180rpm，震蕩后靜置12h。將含菌體的溶液離心(11000rpm，5min)，之后取上清液，測定上清液中Cd2+的濃度，結(jié)果見表1。
[0068]表1、pH值對菌株吸附Cd2+能力的影響
[0069]
【權(quán)利要求】
1.一種真菌菌株LP-20 (Trichoderma spirale),保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，保藏日期為2013年8月16日，保藏編號為CGMCC N0.8038。
2.一種用于分離如權(quán)利要求1所述真菌菌株LP-20的分離培養(yǎng)基，其特征在于，所述分離培養(yǎng)基包含0.1~0.4g/L乙酸鈉，0.05~0.2g/L酵母提取物，5~25g/L瓊脂，40~60mg/L Cd2+，0.05 ~0.2g/L 氯霉素，0.01 ~0.12g/L MgSO4.7H20 和 0.001 ~0.010g/LK2HPO4，且 pH=7.0 ； 優(yōu)選地，所述分離培養(yǎng)基包含0.2~0.3g/L乙酸鈉，0.1~0.2g/L酵母提取物，10~20g/L 瓊脂，45 ~55mg/L Cd2+，0.08 ~0.15g/L 氯霉素，0.03 ~0.1g/L MgSO4.7H20 和0.003 ~0.008g/L K2HPO4,且 ρΗ=7.0 ； 更優(yōu)選地，所述分離培養(yǎng)基包含0.2461 g/L的乙酸鈉，0.15g/L酵母提取物，15g/L瓊脂，50mg/L Cd2+，0.lg/L 氯霉素，0.05g/L MgSO4.7H20 和 0.005g/L K2HPO4，且 pH=7.0。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的分離培養(yǎng)基，其特征在于，在每升所述分離培養(yǎng)基中還加入2ml微量元素溶液，所述微量元素溶液包含I~5g/L CaCl2.2H20，I~5g/L 2.5g H3BO3,0.5 ~1.2g/L ZnCl2.4Η20，0.5 ~1.5g/L FeCl3.6Η20，0.3 ~0.6g/L ZnSO4.7Η20，0.I ~0.4g/L Na2MoO4.2H20 和 0.003 ~0.008g/LCuS04.5H20 ； 優(yōu)選地，所述微量元素溶液包含2~4g/L CaCl2.2H20、1~3g/L Η3Β03、0.7~lg/LZnCl2.4Η20、0.8 ~1.2g/L FeCl3.6Η20、0.4 ~0.5g/L ZnSO4.7Η20、0.2 ~0.3g/LNa2MoO4.2H20 和 0.005 ~0.006g/L CuSO4.5H20 ； 更優(yōu)選地，所述微量元素溶液包含3.7g CaCl2.2Η20、2.5g Η3Β03、0.87g ZnCl2.4Η20、1.0g FeCl3.6Η20、0.44g ZnSO4.7Η20、0.29g Na2MoO4.2Η20 和 0.005g CuSO4.5Η20。
4.一種真菌菌劑，其特征在于，包含權(quán)利要求1所述的真菌菌株LP-20。
5.如權(quán)利要求4所述的真菌菌劑的制備方法，其特征在于，所述方法包括: (1)培養(yǎng)皿培養(yǎng):將如權(quán)利要求1所述的真菌菌株LP-20在無菌條件下接種于固體培養(yǎng)基上，20-30°C、優(yōu)選22-28°C、進一步優(yōu)選25°C下培養(yǎng)4_6天、優(yōu)選4.4-5.5天、進一步優(yōu)選5天；所述固體培養(yǎng)基包括如下組分:馬鈴薯浸粉4-6g/L、優(yōu)選4.5-5.5g/L、進一步優(yōu)選5g/L，葡萄糖或蔗糖15-25g/L、優(yōu)選17-23g/L、進一步優(yōu)選20g/L，瓊脂13_18g/L、優(yōu)選14-17g/L、進一步優(yōu)選 15g/L，氯霉素 0.lg/L ； (2)—級種子培養(yǎng):將步驟(1)培養(yǎng)的菌種在無菌條件下接種于液體培養(yǎng)基，20-30°C，優(yōu)選22-28 °C，進一步優(yōu)選25°C下培養(yǎng)5_7天，優(yōu)選地5.5-6.5天，更優(yōu)選地6天，制得一級種子；所述液體培養(yǎng)基包括如下組分:馬鈴薯浸粉4-6g/L、優(yōu)選4.5-5.5g/L、進一步優(yōu)選5g/L，葡萄糖或者蔗糖15-25g/L、優(yōu)選17-23g/L、進一步優(yōu)選20g/L，氯霉素0.lg/L ； (3)二級種子培養(yǎng):按液體培養(yǎng)基的體積比為5-15%、優(yōu)選8-12%、更優(yōu)選10%的接種量，將步驟(2)所得一級種子接種到發(fā)酵罐中，曝氣，培養(yǎng)5-7天、優(yōu)選5.5-6.5天、進一步優(yōu)選6天，制得二級種子； (4)混合發(fā)酵培養(yǎng):按液體培養(yǎng)基的體積比為10-20%、優(yōu)選12-18%、更優(yōu)選15%的接種量，將二級種子接種到發(fā)酵罐中，進行高密度發(fā)酵培養(yǎng)，獲得菌劑。
6.一種鎘離子處理劑，其特征在于，所述鎘離子處理劑包括如權(quán)利要求1所述的真菌菌株LP-20 ;優(yōu)選地，所述處理為去除或回收。
7.—種處理含鎘水體的方法，其特征在于，所述方法包括:將如權(quán)利要求1所述的真菌菌株LP-20、如權(quán)利要求4所述的真菌菌劑或如權(quán)利要求6所述的鎘離子處理劑與所述含鎘水體接觸。
8.如權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，所述方法包括: (1)將含鎘水體的PH值調(diào)節(jié)至5.0-8.0，優(yōu)選5.5-7，進一步優(yōu)選6.0 ； (2)向水體中加入如權(quán)利要求1所述的真菌菌株LP-20、如權(quán)利要求4所述的真菌菌劑或如權(quán)利要求6所述的鎘離子處理劑，于10_35°C，優(yōu)選15-30°C，進一步優(yōu)選20°C，震蕩4-8小時，優(yōu)選5-7小時，進一步優(yōu)選6小時，震蕩速度150-220rpm，優(yōu)選160_200rpm，進一步優(yōu)選180rpm ； (3)靜置8-16小時，優(yōu)選10-14小時，進一步優(yōu)選12小時。
9.如權(quán)利要求7或8 所述的方法，其中所述處理為去除或回收所述含鎘水體中的鎘離子。
【文檔編號】C02F3/34GK103614305SQ201310654018
【公開日】2014年3月5日 申請日期:2013年12月5日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月5日
【發(fā)明者】李 雨, 孫璐, 胡剛, 張梅華, 姚一夫, 劉穎, 王浩, 姚晨 申請人:中節(jié)能六合天融環(huán)?？萍加邢薰?br>