專利名稱：一種工業(yè)廢水降解微生物菌株的培養(yǎng)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種微生物菌株的培養(yǎng)方法，具體地說涉及一種工業(yè)廢水降解微生物 菌株的培養(yǎng)方法；屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
工業(yè)廢水污染是治理當前生態(tài)保護中一項非常重要和極具挑戰(zhàn)性的工作。來自 印染、制藥、農(nóng)藥、制革、石油化工和食品工業(yè)等生產(chǎn)過程中的有機廢水成分復(fù)雜、可生化性 差，嚴重污染水環(huán)境，甚至將削弱水生生物等的長期繁殖能力。現(xiàn)有的工業(yè)廢水的凈化處理 技術(shù)可歸納為生物法、化學法、物理_化學耦合法和物化_生物耦合法等。其中生物法具有 經(jīng)濟性好，無二次污染等優(yōu)點。 現(xiàn)有的工業(yè)廢水中對環(huán)境污染嚴重的主要有苯酚、苯胺和硝基苯類化合物等。其 中苯酚是造紙、煉焦、煉油、塑料、紡織等工業(yè)廢水中的主要污染物。硝基苯類化合物廣泛應(yīng) 用于農(nóng)藥、染料、炸藥、橡膠以及其它化工產(chǎn)品的生產(chǎn)。環(huán)境中的硝基苯類污染物主要包括 硝基苯、硝基氯苯、硝基甲苯、硝基苯酚、硝基苯胺等化合物。利用微生物降解苯酚、苯胺和 硝基苯類化合物是一種既經(jīng)濟且不會產(chǎn)生二次污染的方法，近年來，從工業(yè)廢水污染的環(huán)
境中分離到許多可以降解苯酚、苯胺和硝基苯類化合物的微生物菌株。盛連喜等人在應(yīng)用 生態(tài)學報，2007年7月，第18巻，第7期中對硝基苯類化合物微生物降解研究進展，并從硝 基苯類化合物降解菌的馴化篩選，降解途徑、降解激勵、共代謝、趨化性和分子遺傳學角度， 闡述了硝基苯類化合物生物降解的最近研究進展。溫洪宇等人在徐州師范大學學報(自然 科學版)2003年12月，第21巻，第4期中敘述了降解苯酚細菌的分離及生理學特性研究， 雖然它通過菌株培養(yǎng)、馴化與篩選從工業(yè)廢水中分離出兩株可以降解苯酚的細菌，但是該 菌株僅僅對苯酚具有降解作用，對工業(yè)廢水中同時具有苯胺和硝基苯類化合物的復(fù)合污染 物卻不具有降解能力。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明針對現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷，提供一種對復(fù)合污染物具有降解能力的工業(yè)廢 水降解微生物菌株的培養(yǎng)方法。 本發(fā)明的目的是通過下列技術(shù)方案來實現(xiàn)的一種工業(yè)廢水降解微生物菌株的培 養(yǎng)方法，該方法包括以下步驟 A、針對工業(yè)廢水中的苯胺、苯酚和硝基苯類化合物，分別配制含不同濃度梯度的 目標化合物的液體培養(yǎng)基，其中苯胺和硝基苯類化合物以其為唯一的碳源和氮源，苯酚另 外添加氮源，所述的液體培養(yǎng)基中還添加微生物菌株生長所需要的其它化學基質(zhì)成分，將 部分液體培養(yǎng)基轉(zhuǎn)化成選擇性固體培養(yǎng)基； B、將工業(yè)廢水中的活性污泥加入到牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基中進行富集，然后接 種到含不同濃度梯度的目標化合物的液體培養(yǎng)基進行馴化培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為15-45°C ，培養(yǎng) 時間6-25天，反復(fù)馴化培養(yǎng)2-12次，將馴化培養(yǎng)的菌株用選擇性固體培養(yǎng)基進行平板劃線分離，并進行質(zhì)粒抽提，獲取分別以苯胺或硝基苯化合物為唯一碳源和氮源，以苯酚為唯一 碳源的含質(zhì)粒菌株； C、將假單胞菌株接種到牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基中進行富集，富集后將其制成感 受態(tài)細胞，將步驟B中得到的三種質(zhì)粒菌株和所述的感受態(tài)細胞重懸于LB液體培養(yǎng)基，在 溫度為10-4(TC的條件下孵育10-45小時；再加入到含不同濃度梯度的三種目標化合物的 液體培養(yǎng)基進行馴化培養(yǎng)，馴化培養(yǎng)溫度為15-45t:，馴化培養(yǎng)時間6-25天，反復(fù)馴化培養(yǎng) 2-12次，馴化培養(yǎng)后涂布于選擇性固體培養(yǎng)基，在溫度為10-4(TC的條件下孵育10-45小 時，然后進行質(zhì)粒及降解能力鑒定； D、將步驟C中獲得菌株進行純化后，即獲得含質(zhì)粒的工業(yè)廢水降解微生物菌株。 本發(fā)明針對廢水中污染物的種類，采用含不同污染物種類的液體培養(yǎng)基對活性污
泥微生物進行馴化培養(yǎng)，再采用平板分離法獲取可以污染物為唯一碳源、氮源和能源的含
質(zhì)粒細菌。再加入感受態(tài)的宿主菌，采用不同濃度的廢水進行馴化，促進質(zhì)粒轉(zhuǎn)移，并選擇
優(yōu)勢菌種，純化后最終得到具有復(fù)合污染物降解能力的含質(zhì)粒的微生物菌種。 其中步驟A中配制不同濃度梯度的目標化合物的液體培養(yǎng)基，主要配制目標化合
物的濃度為0， 0. 5g/L， 1. Og/L， 1. 5g/L， 2. Og/L， 2. 5g/L， 3. Og/L， 3. 5g/L。不同濃度梯度的目
標化合物的液體培養(yǎng)基可以統(tǒng)計出工業(yè)廢水降解微生物菌株隨目標化合物濃度變化的生
長變化情況以及對目標化合物的降解率；微生物菌種生長所需要的其它化學基質(zhì)成分主要
有磷、鐵、鉀、氧、鈉、氯、鈣、鎂等元素。將部分液體培養(yǎng)基添加15-20g瓊脂(按1000ml水
計算)后就轉(zhuǎn)化成選擇性固體培養(yǎng)基。 步驟B中采用的是常規(guī)的牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基，培養(yǎng)基的配方為牛肉膏3克， 蛋白胨10克，氯化鈉5克，瓊脂15克，水1000ml。采用分子生物學方法進行質(zhì)粒抽提，主要 通過離心集菌、堿裂解、酚抽提或氯化銫加溴化乙錠離心后用乙醇沉淀得到以苯胺或硝基 苯化合物為唯一碳源和氮源，以苯酚為唯一碳源的含質(zhì)粒菌株。 步驟C中的假單胞菌株(Pseudomonas)主要是惡臭假單胞菌株，將它接種到 常規(guī)的牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基中進行富集，富集后把細胞懸浮在P朋.O的100mmo1/ L CaCl2中，在冰浴條件下，放置過夜，讓其轉(zhuǎn)化成感受態(tài)細胞。然后將細菌濃度為 1 X 107-3 X 109cfu/mL的三種含質(zhì)粒菌株及細菌濃度為1 X 107_3 X 109cfu/mL的感受態(tài)細胞 重懸于LB液體培養(yǎng)基中，其中LB液體培養(yǎng)基用來預(yù)培養(yǎng)菌種，使菌種成倍擴增，達到使用 要求.培養(yǎng)的菌種一般是經(jīng)過改造的無法在外界環(huán)境單獨存活和擴增的工程菌。LB液體培 養(yǎng)基的配方如下胰蛋白胨(Tryptone) 10g/L ;酵母提取物(Yeast extract) 5g/L ;氯化鈉 (NaCl) 10g/L ;用NaOH調(diào)節(jié)該培養(yǎng)基的pH，使其達到7. 4。
步驟D中采用劃線平板分離法對獲得菌株進行純化。 在上述的工業(yè)廢水降解微生物菌株的培養(yǎng)方法中，步驟A中所述的苯酚液體培養(yǎng) 基中的氮源為濃度為500mg-1500mg/L硝酸銨或濃度為500mg-1500mg/L蛋白胨中的一種。 在苯酚液體培養(yǎng)基中加入濃度為500mg-1500mg/L硝酸銨或濃度為500mg-1500mg/L蛋白胨 作為氮源可以提高菌株對苯酚的降解效率，其中加入濃度為500mg-1500mg/L蛋白胨降解 效率高于加入濃度為500mg-1500mg/L硝酸銨。 在上述的工業(yè)廢水降解微生物菌株的培養(yǎng)方法中，步驟A中所述的液體培養(yǎng)基中 其它化學基質(zhì)組分為硝酸鉀0. 5-1. 5g/L ;氯化鈉0. 1-lg/L ;K2HP04 3H20 :0. 2g_0. 8g/L ;MgS04 7H20 :0. 2g-0. 8g/L ;FeS04 7H20 0. 005—0. 015g/L。 作為優(yōu)選，步驟B中馴化培養(yǎng)的培養(yǎng)溫度為20-4(TC，培養(yǎng)時間7-21天，反復(fù)馴化 培養(yǎng)3-10次。 作為優(yōu)選，步驟C中在LB液體培養(yǎng)基中孵育溫度為15-35t:，孵育時間為12_36小 時。 作為優(yōu)選，步驟C中馴化培養(yǎng)的培養(yǎng)溫度為20-4(TC，培養(yǎng)時間7-21天，反復(fù)馴化 培養(yǎng)3-10次。 作為優(yōu)選，步驟C中菌株涂布于選擇性固體培養(yǎng)基孵育溫度為15-35t:，孵育時間 為12-36小時。 綜上所述，本發(fā)明具有以下優(yōu)點 1、本發(fā)明的培養(yǎng)方法獲得的菌株對復(fù)合污染物具有降解能力，應(yīng)用比較方便且范 圍較廣，便于進行大規(guī)模的工業(yè)化推廣。 2、本發(fā)明的培養(yǎng)方法工藝流程簡單，使用原料的成本較低，培養(yǎng)的菌株對工業(yè)廢 水中的苯胺、苯酚和硝基苯類化合物降解效率較高。


圖1是實施例1培養(yǎng)的工業(yè)廢水降解微生物菌株生長曲線圖。 圖2是實施例1培養(yǎng)的工業(yè)廢水降解微生物菌株與pH值對應(yīng)關(guān)系圖。 圖3是實施例1培養(yǎng)的工業(yè)廢水降解微生物菌株對有機物的耐受性曲線圖。 圖4是實施例1培養(yǎng)的工業(yè)廢水降解微生物菌株對工業(yè)廢水中有機物的降解的曲線圖。 圖5是實施例2培養(yǎng)的工業(yè)廢水降解微生物菌株生長曲線圖。 圖6是實施例2培養(yǎng)的工業(yè)廢水降解微生物菌株與pH值對應(yīng)關(guān)系圖。 圖7是實施例2培養(yǎng)的工業(yè)廢水降解微生物菌株對有機物的耐受性曲線圖。 圖8是實施例2培養(yǎng)的工業(yè)廢水降解微生物菌株對工業(yè)廢水中有機物的降解的曲線圖。
具體實施例方式
下面通過具體實施例并結(jié)合附圖，對本發(fā)明的技術(shù)方案作進一步具體的說明；但
是本發(fā)明并不限于這些實施例。
實施例1 針對工業(yè)廢水中的苯胺、苯酚和硝基苯類化合物，分別配制含濃度為Og/L，0. 5g/ L， 1. Og/L， 1. 5g/L， 2. Og/L， 2. 5g/L， 3. Og/L， 3. 5g/L不同濃度梯度的目標化合物苯胺、苯酚 和硝基苯類化合物液體培養(yǎng)基，其中苯胺和硝基苯類化合物以其為唯一的碳源和氮源，苯 酚另外添加氮源蛋白胨1000mg/L，所述的液體培養(yǎng)基中還添加微生物菌株生長所需要的其 它化學基質(zhì)配方硝酸鉀0. 5g/L ;氯化鈉:lg/L ;K2HP04 3H20 :0. 8g/L ;MgS04 7H20 :0. 2g/ L ;FeS04 7H20 0. 010g/L，并將部分液體培養(yǎng)基加入添加15g瓊脂(按1000ml水計算)后 轉(zhuǎn)化成選擇性固體培養(yǎng)基。 將工業(yè)廢水中的活性污泥加入到常規(guī)的牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基中進行富集，然
5后接種到含濃度為0g/L， 0. 5g/L， 1. Og/L， 1. 5g/L， 2. Og/L， 2. 5g/L， 3. Og/L， 3. 5g/L不同濃 度梯度的目標化合物苯胺、苯酚和硝基苯類化合物液體培養(yǎng)基進行馴化培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為 20°C ，培養(yǎng)時間21天，反復(fù)馴化培養(yǎng)3次，將馴化培養(yǎng)的菌株涂布于選擇性固體培養(yǎng)基進行 平板劃線分離，并采用分子生物學方法進行質(zhì)粒抽提，主要通過離心集菌、堿裂解、酚抽提 或氯化銫加溴化乙錠離心后用乙醇沉淀得到以苯胺或硝基苯化合物為唯一碳源和氮源，以 苯酚為唯一碳源的含質(zhì)粒菌株。 將假單胞菌株接種到常規(guī)的牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基中進行富集，富集后把細胞 懸浮在P朋.O的10Ommol/L CaCl2中，在冰浴條件下，放置過夜，讓其轉(zhuǎn)化成感受態(tài)細胞。 將上述得到的三種質(zhì)粒菌株和所述的感受態(tài)細胞重懸于LB液體培養(yǎng)基，在溫度為15t:的 條件下孵育36小時；再加入到含含濃度為Og/L，0. 5g/L， 1. Og/L， 1. 5g/L，2. 0g/L，2. 5g/L， 3. 0g/L，3. 5g/L不同濃度梯度的三種目標化合物的液體培養(yǎng)基進行馴化培養(yǎng)，馴化培養(yǎng)溫 度為2(TC，馴化培養(yǎng)時間21天，反復(fù)馴化培養(yǎng)3次，馴化培養(yǎng)后涂布于選擇性固體培養(yǎng)基， 在溫度為15°C的條件下孵育36小時，挑選單菌落采用常規(guī)的方法進行質(zhì)粒鑒定，并對其 隨苯胺濃度的生長變化情況，隨廢水濃度的生長變化情況，降解能力鑒定；分別對其生長性 能，對pH值的適應(yīng)性能，對廢水中的有機物耐受性能和對廢水中有機物的降解性能進行鑒 定，鑒定結(jié)果如圖1、圖2、圖3和圖4所示。 將上述經(jīng)過鑒定后符合標準的菌株采用劃線平板分離法進行純化后，即獲得含質(zhì)
粒的工業(yè)廢水降解微生物菌株。 實施例2 針對工業(yè)廢水中的苯胺、苯酚和硝基苯類化合物，分別配制含濃度為Og/L，0. 5g/ L， 1. Og/L， 1. 5g/L， 2. Og/L， 2. 5g/L， 3. Og/L， 3. 5g/L不同濃度梯度的目標化合物苯胺、苯酚 和硝基苯類化合物的液體培養(yǎng)基，其中苯胺和硝基苯類化合物以其為唯一的碳源和氮源， 苯酚另外添加氮源硝酸銨1000mg/L，所述的液體培養(yǎng)基中還添加微生物菌株生長所需要 的其它化學基質(zhì)配方硝酸鉀1. Og/L ;氯化鈉0. 5g/L ;K2HP04 3H20 :0. 5g/L ;MgS04 7H20 : 0. 5g/L ;FeS04 7H20 0. 005g/L，并將部分液體培養(yǎng)基加入添加20g瓊脂(按1000ml水計 算)后轉(zhuǎn)化成選擇性固體培養(yǎng)基。 將工業(yè)廢水中的活性污泥加入到常規(guī)的牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基中進行富集，然 后接種到含濃度為Og/L， 0. 5g/L， 1. Og/L， 1. 5g/L， 2. Og/L， 2. 5g/L， 3. Og/L， 3. 5g/L不同濃 度梯度的目標化合物苯胺、苯酚和硝基苯類化合物的液體培養(yǎng)基進行馴化培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度 為30°C ，培養(yǎng)時間14天，反復(fù)馴化培養(yǎng)6次，將馴化培養(yǎng)的菌株涂布于選擇性固體培養(yǎng)基進 行平板劃線分離，并采用分子生物學方法進行質(zhì)粒抽提，主要通過離心集菌、堿裂解、酚抽 提或氯化銫加溴化乙錠離心后用乙醇沉淀得到以苯胺或硝基苯化合物為唯一碳源和氮源， 以苯酚為唯一碳源的含質(zhì)粒菌株。 將假單胞菌株接種到常規(guī)的牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基中進行富集，富集后把細胞 懸浮在P朋.O的lOOmmol/L CaCl2中，在冰浴條件下，放置過夜，讓其轉(zhuǎn)化成感受態(tài)細胞。 將上述得到的三種質(zhì)粒菌株和所述的感受態(tài)細胞重懸于LB液體培養(yǎng)基，在溫度為25t:的 條件下孵育24小時；再加入到含含濃度為Og/L，0. 5g/L， 1. Og/L， 1. 5g/L，2. 0g/L，2. 5g/L， 3. Og/L， 3. 5g/L不同濃度梯度的三種目標化合物的液體培養(yǎng)基進行馴化培養(yǎng)，馴化培養(yǎng)溫 度為3(TC，馴化培養(yǎng)時間14天，反復(fù)馴化培養(yǎng)6次，馴化培養(yǎng)后涂布于選擇性固體培養(yǎng)基，5/5頁
在溫度為25t:的條件下孵育24小時，挑選單菌落采用常規(guī)的方法進行質(zhì)粒鑒定，分別對其 生長性能，對PH值的適應(yīng)性能，對廢水中的有機物耐受性能和對廢水中有機物的降解性能 進行鑒定，鑒定結(jié)果如圖5、圖6、圖7和圖8所示。 將上述經(jīng)過鑒定后符合標準的菌株采用劃線平板分離法進行純化后，即獲得含質(zhì)
粒的工業(yè)廢水降解微生物菌株。 實施例3 針對工業(yè)廢水中的苯胺、苯酚和硝基苯類化合物，分別配制含濃度為0g/L，0. 5g/ L， 1. 0g/L， 1. 5g/L， 2. Og/L， 2. 5g/L， 3. Og/L， 3. 5g/L不同濃度梯度的目標化合物苯胺、苯酚 和硝基苯類化合物的液體培養(yǎng)基，其中苯胺和硝基苯類化合物以其為唯一的碳源和氮源， 苯酚另外添加氮源蛋白胨1000mg/L，所述的液體培養(yǎng)基中還添加微生物菌株生長所需要 的其它化學基質(zhì)配方硝酸鉀1. 5g/L ;氯化鈉0. lg/L ;K2HP04 3H20 :0. 2g/L ;MgS04 7H20 : 0. 8g/L ;FeS04 7H20 0. 015g/L，并將部分液體培養(yǎng)基加入添加20g瓊脂(按1000ml水計 算)后轉(zhuǎn)化成選擇性固體培養(yǎng)基。 將工業(yè)廢水中的活性污泥加入到常規(guī)的牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基中進行富集，然 后接種到含濃度為Og/L， 0. 5g/L， 1. Og/L， 1. 5g/L， 2. Og/L， 2. 5g/L， 3. Og/L， 3. 5g/L不同濃 度梯度的目標化合物苯胺、苯酚和硝基苯類化合物的液體培養(yǎng)基進行馴化培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度 為4(TC，培養(yǎng)時間7天，反復(fù)馴化培養(yǎng)8次，將馴化培養(yǎng)的菌株涂布于選擇性固體培養(yǎng)基進 行平板劃線分離，并采用分子生物學方法進行質(zhì)粒抽提，主要通過離心集菌、堿裂解、酚抽 提或氯化銫加溴化乙錠離心后用乙醇沉淀得到以苯胺或硝基苯化合物為唯一碳源和氮源， 以苯酚為唯一碳源的含質(zhì)粒菌株。 將假單胞菌株接種到常規(guī)的牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基中進行富集，富集后把細胞 懸浮在P朋.O的lOOmmol/L CaCl2中，在冰浴條件下，放置過夜，讓其轉(zhuǎn)化成感受態(tài)細胞。 將上述得到的三種質(zhì)粒菌株和所述的感受態(tài)細胞重懸于LB液體培養(yǎng)基，在溫度為35t:的 條件下孵育12小時；再加入到含含濃度為Og/L，0. 5g/L， 1. Og/L， 1. 5g/L，2. 0g/L，2. 5g/L， 3. Og/L， 3. 5g/L不同濃度梯度的三種目標化合物的液體培養(yǎng)基進行馴化培養(yǎng)，馴化培養(yǎng)溫 度為40°C ，馴化培養(yǎng)時間7天，反復(fù)馴化培養(yǎng)8次，馴化培養(yǎng)后涂布于選擇性固體培養(yǎng)基，在 溫度為35t:的條件下孵育12小時，挑選單菌落采用常規(guī)的方法進行質(zhì)粒鑒定，分別對其生 長性能，對pH值的適應(yīng)性能，對廢水中的有機物耐受性能和對廢水中有機物的降解性能進 行鑒定。 將上述經(jīng)過鑒定后符合標準的菌株采用劃線平板分離法進行純化后，即獲得含質(zhì) 粒的工業(yè)廢水降解微生物菌株。 本發(fā)明中所描述的具體實施例僅是對本發(fā)明精神作舉例說明。本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)
域的技術(shù)人員可以對所描述的具體實施例做各種各樣的修改或補充或采用類似的方式替
代，但并不會偏離本發(fā)明的精神或者超越所附權(quán)利要求書所定義的范圍。 盡管對本發(fā)明已作出了詳細的說明并引證了一些具體實施例，但是對本領(lǐng)域熟練
技術(shù)人員來說，只要不離開本發(fā)明的精神和范圍可作各種變化或修正是顯然的。
權(quán)利要求
一種工業(yè)廢水降解微生物菌株的培養(yǎng)方法，該方法包括以下步驟A、針對工業(yè)廢水中的苯胺、苯酚和硝基苯類化合物，分別配制含不同濃度梯度的目標化合物的液體培養(yǎng)基，其中苯胺和硝基苯類化合物以其為唯一的碳源和氮源，苯酚另外添加氮源，所述的液體培養(yǎng)基中還添加微生物菌株生長所需要的其它化學基質(zhì)成分，將部分液體培養(yǎng)基轉(zhuǎn)化成選擇性固體培養(yǎng)基；B、將工業(yè)廢水中的活性污泥加入到牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基中進行富集，然后接種到含不同濃度梯度的目標化合物的液體培養(yǎng)基進行馴化培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為15-45℃，培養(yǎng)時間6-25天，反復(fù)馴化培養(yǎng)2-12次，將馴化培養(yǎng)的菌株涂布于選擇性固體培養(yǎng)基進行平板劃線分離，并進行質(zhì)粒抽提，獲取分別以苯胺或硝基苯化合物為唯一碳源和氮源，以苯酚為唯一碳源的含質(zhì)粒菌株；C、將假單胞菌株接種到牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基中進行富集，富集后將其制成感受態(tài)細胞，將步驟B中得到的三種質(zhì)粒菌株和所述的感受態(tài)細胞重懸于LB液體培養(yǎng)基，在溫度為10-40℃的條件下孵育10-45小時；再加入到含不同濃度梯度的三種目標化合物的液體培養(yǎng)基進行馴化培養(yǎng)，馴化培養(yǎng)溫度為15-45℃，馴化培養(yǎng)時間6-25天，反復(fù)馴化培養(yǎng)2-12次，馴化培養(yǎng)后涂布于選擇性固體培養(yǎng)基，在溫度為10-40℃的條件下孵育10-45小時，然后進行質(zhì)粒及降解能力鑒定；D、將步驟C中獲得菌株進行純化后，即獲得含質(zhì)粒的工業(yè)廢水降解微生物菌株。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的工業(yè)廢水降解微生物菌株的培養(yǎng)方法，其特征在于步 驟A中所述的苯酚液體培養(yǎng)基中的氮源為濃度為500mg-l500mg/L硝酸銨或濃度為 500mg-1500mg/L蛋白胨中的一種。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的工業(yè)廢水降解微生物菌株的培養(yǎng)方法，其特征在于步驟A中所述的液體培養(yǎng)基中其它化學基質(zhì)組分為硝酸鉀0. 5-1. 5g/L ;氯化鈉0. l_lg/L ;K2HP04 3H20 :0. 2g-0. 8g/L ;MgS04 7H20 :0. 2g_0. 8g/L ;FeS04 7H200. 005—0. 015g/L。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的工業(yè)廢水降解微生物菌株的培養(yǎng)方法，其特征在于步驟B 中馴化培養(yǎng)的培養(yǎng)溫度為20-4(TC，培養(yǎng)時間7-21天，反復(fù)馴化培養(yǎng)3-10次。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的工業(yè)廢水降解微生物菌株的培養(yǎng)方法，其特征在于步驟C 中在LB液體培養(yǎng)基中孵育溫度為15-35t:，孵育時間為12-36小時。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的工業(yè)廢水降解微生物菌株的培養(yǎng)方法，其特征在于步驟C 中馴化培養(yǎng)的培養(yǎng)溫度為20-4(TC，培養(yǎng)時間7-21天，反復(fù)馴化培養(yǎng)3-10次。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1或5或6所述的工業(yè)廢水降解微生物菌株的培養(yǎng)方法，其特征在于 步驟C中菌株涂布于選擇性固體培養(yǎng)基孵育溫度為15-35t:，孵育時間為12-36小時。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種工業(yè)廢水降解微生物菌株的培養(yǎng)方法，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。它解決了現(xiàn)有的用于降解工業(yè)廢水的菌株降解作用單一，對復(fù)合污染物不具降解能力的問題。本工業(yè)廢水降解微生物菌株的培養(yǎng)方法，包括以下步驟配制含不同濃度梯度的目標化合物的液體培養(yǎng)基；獲取分別以苯胺或硝基苯化合物為唯一碳源和氮源，以苯酚為唯一碳源的含質(zhì)粒菌株；馴化培養(yǎng)和進行質(zhì)粒及降解能力鑒定；純化獲得含質(zhì)粒的工業(yè)廢水降解微生物菌株。本發(fā)明的培養(yǎng)方法工藝流程簡單，使用原料的成本較低，培養(yǎng)的菌株對復(fù)合污染物具有降解能力，對工業(yè)廢水中的苯胺、苯酚和硝基苯類化合物降解效率較高。
文檔編號C02F101/36GK101701189SQ20091022375
公開日2010年5月5日 申請日期2009年11月19日 優(yōu)先權(quán)日2009年11月19日
發(fā)明者李鈞敏 申請人:李鈞敏