專利名稱：：誘導(dǎo)材料成核的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種成核方法，更具體地，涉及一種誘導(dǎo)材料中相變成核的方法，其中最初使材料達(dá)到接近或低于相變溫度的溫度，隨后減壓以便誘導(dǎo)材料的成核。
背景技術(shù)：
：控制凍干或冷凍干燥法冷凍階段中成核的通常隨機(jī)過程以同時(shí)減少完成冷凍干燥所需處理時(shí)間和增加成品中瓶與瓶之間產(chǎn)品均勻性在本領(lǐng)域中是非常希望的。在典型的藥物冷凍干燥法中，將包含普通水溶液的多個(gè)瓶放在架上，架通常以控制速度被冷卻到低溫。每個(gè)瓶中的水溶液被冷卻到低于溶液的熱力學(xué)凍結(jié)溫度并保持在過冷亞穩(wěn)液態(tài)直到成核發(fā)生。瓶上成核溫度范圍隨機(jī)分布在接近熱力學(xué)凍結(jié)溫度的溫度和明顯低于熱力學(xué)凍結(jié)溫度(例如，直到約30°C)的一些值之間。這種成核溫度分布導(dǎo)致冰晶結(jié)構(gòu)和最終凍干產(chǎn)品的物理性質(zhì)的瓶與瓶差異。另外，冷凍千燥法的干燥階段必須非常長(zhǎng)以適應(yīng)自然隨機(jī)成核現(xiàn)象產(chǎn)生的冰晶尺寸范圍和結(jié)構(gòu)。已使用添加劑增加過冷溶液的成核溫度。這些添加劑可呈現(xiàn)多種形式。眾所周知，某些細(xì)菌(例如丁香假單胞菌)合成能在過冷水溶液中幫助有核冰形成的蛋白質(zhì)。可將細(xì)菌或它們的分離蛋白加入到溶液中提高成核溫度。幾種無(wú)機(jī)添加劑也表現(xiàn)出成核作用；最常見的這類添加劑為^f輿化4艮Agl。通常，任何添加劑或污染物都具有用作成核劑的可能。在包含高的顆粒物水平的環(huán)境中制備的凍干瓶通常在比低顆粒物環(huán)境中制備的瓶低的過冷程度下成核和凍結(jié)。所有上述成核劑都被列為"添加劑"，因?yàn)樗鼈兏淖兞怂鼈兿嘧兂珊怂诮橘|(zhì)的組成。對(duì)于FDA規(guī)定和認(rèn)可的凍干藥物產(chǎn)品，這些添加劑一般不能被接受。當(dāng)瓶成核和凍結(jié)時(shí)，這些添加劑也不能提供對(duì)時(shí)間和溫度的控制。相反，添加劑僅僅對(duì)提高瓶的平均成核溫度起作用。冰晶可自身用作過冷水溶液中冰形成的成核劑。在"水霧"方法中，濕的冷凍干燥機(jī)充滿冷氣體以產(chǎn)生小冰粒的氣相懸浮體。冰粒被轉(zhuǎn)移到瓶?jī)?nèi)并在它們接觸流體界面時(shí)引發(fā)成核。"冰霧"方法不能以控制的時(shí)間和溫度同時(shí)控制多個(gè)瓶的成核。換句話說，當(dāng)引入冷蒸汽到凍干機(jī)內(nèi)時(shí)，成核事件不能在所有瓶?jī)?nèi)同時(shí)或瞬時(shí)發(fā)生。冰晶將用一定時(shí)間進(jìn)入每個(gè)瓶以引發(fā)成核，并且對(duì)于凍干機(jī)內(nèi)不同位置的瓶，遷移時(shí)間可能不同。對(duì)于大型工業(yè)凍干機(jī)，"冰霧"方法的實(shí)施將要求系統(tǒng)設(shè)計(jì)變化，因?yàn)榭赡苄枰獌?nèi)部對(duì)流裝置來(lái)幫助"冰霧"在整個(gè)凍千機(jī)內(nèi)內(nèi)的更均勻分布。當(dāng)凍干機(jī)架被連續(xù)冷卻時(shí)，第一個(gè)瓶?jī)鼋Y(jié)時(shí)和最后一個(gè)瓶?jī)鼋Y(jié)時(shí)之間的時(shí)間差將在瓶之間產(chǎn)生溫度差異，這將增加凍干產(chǎn)品中瓶與瓶之間不均勻性。利用刻劃、刮擦或粗糙化的瓶預(yù)處理也用于降低成核所需要的過冷程度。同其它現(xiàn)有技術(shù)方法一樣，瓶預(yù)處理也不能在單個(gè)瓶成核和凍結(jié)時(shí)提供對(duì)時(shí)間和溫度的任何程度控制，而是僅僅提高了所有瓶的平均成核溫度。振動(dòng)也用于亞穩(wěn)材料中的相變成核。足以誘導(dǎo)成核的振動(dòng)發(fā)生在超過10kHz的頻率下，并可使用各種設(shè)備產(chǎn)生。通常這種頻率范圍內(nèi)的振動(dòng)被稱為"超聲"，但在10kHz-20kHz范圍內(nèi)的頻率一般在人的聽覺范圍內(nèi)。超聲振動(dòng)經(jīng)常在過冷溶液中產(chǎn)生氣穴現(xiàn)象或形成小氣泡。在瞬時(shí)或慣性氣穴現(xiàn)象狀態(tài)下，氣泡迅速長(zhǎng)大并破裂，導(dǎo)致非常高的局部壓力和溫度波動(dòng)。超聲振動(dòng)誘導(dǎo)亞穩(wěn)材料成核的能力通常歸因于瞬時(shí)氣穴現(xiàn)象引起的擾動(dòng)。命名為穩(wěn)定或非慣性的其它氣穴現(xiàn)象狀態(tài)特征在于表現(xiàn)出穩(wěn)定體積或形狀振蕩而不破裂的氣泡。美國(guó)專利申請(qǐng)20020031577Al公開了超聲振動(dòng)可誘導(dǎo)成核，即使在穩(wěn)定氣穴現(xiàn)象狀態(tài)下，但沒有提供這種現(xiàn)象的解釋。GB專利申請(qǐng)2400901A也公開了可通過降低溶液附近的環(huán)境壓力或在溶液中溶解揮發(fā)性流體來(lái)增加使用頻率超過10kHz的振動(dòng)在溶液中引起氣穴現(xiàn)象并因此成核的可能性。過去還使用電冷凍法誘導(dǎo)過冷液體中的成核。通常通過在浸沒于過冷液體或溶液中的間隔窄的電極之間以連續(xù)或脈沖方式輸送相對(duì)高的電場(chǎng)(~1V/nm)實(shí)現(xiàn)電冷凍。與典型凍干應(yīng)用中的電冷凍方法有關(guān)的不足包括實(shí)施和維護(hù)的相對(duì)復(fù)雜性和成本，尤其對(duì)于使用多個(gè)瓶或容器的凍干應(yīng)用。而且，電冷凍不能直接應(yīng)用于包含離子物種的溶液(例如NaCl)。最近，存在檢查"真空誘導(dǎo)表面冷凍，，原理的研究(參見例如美國(guó)專利6684524)。在這種"真空誘導(dǎo)表面冷凍"中，將包含水溶液的瓶裝載在冷凍干燥機(jī)中的溫度控制架上并最初保持在約l(TC下。然后對(duì)冷凍干燥室抽真空至近真空壓力(例如lmbar)，這使水溶液表面凍結(jié)至幾毫米的深度。隨后釋放真空和降低架溫度到溶液凝固點(diǎn)以下允許通過溶液的剩余部分從預(yù)凍結(jié)的表面層生長(zhǎng)冰晶。在典型凍結(jié)應(yīng)用中實(shí)施這種"真空誘導(dǎo)表面冷凍"方法的主要缺陷在于在指定條件下使溶液劇烈沸騰或脫氣的高風(fēng)險(xiǎn)。對(duì)成核方法的改進(jìn)控制能使冷凍干燥機(jī)中所有解凍藥物溶液瓶的凍結(jié)在更窄的溫度和時(shí)間范圍內(nèi)發(fā)生，從而產(chǎn)生在瓶與瓶之間具有更大均勻性的凍干產(chǎn)品?？刂谱钚〕珊藴囟饶苡绊懫?jī)?nèi)形成的冰晶結(jié)構(gòu)并允許大大加速的冷凍干燥過程。因此，需要在包括冷凍干燥的冷凍階段的各種冷凍過程或凍干過程中控制成核隨機(jī)過程以減少完成冷凍干燥所需的處理時(shí)間和提高最終產(chǎn)品中瓶與瓶之間的產(chǎn)品均勻性。因此希望提供具有部分或優(yōu)選全部上述特征的方法。發(fā)明積克述本發(fā)明特征在于誘導(dǎo)材料中相變成核的方法，方法包括使材料達(dá)到接近或低于材料相變溫度的溫度和降低壓力誘導(dǎo)材料中相變成核的步驟。本發(fā)明特征還在于控制溶液冷凍過程的方法，包括步驟以指定的冷卻速度冷卻溶液；快速降j氐壓力以i秀導(dǎo)溶液成核；和繼續(xù)冷卻成核的溶液到指定最終溫度以冷凍溶液。當(dāng)溶液達(dá)到所需的成核溫度或在開始冷卻步驟后在所需的時(shí)間開始減壓。本發(fā)明特征又在于一種凝固方法，包括步驟冷卻材料到接近或低于相變溫度的溫度；快速降低材料附近的壓力以誘導(dǎo)材料成核；和繼續(xù)冷卻成核的材料到指定最終溫度以促進(jìn)材料凝固。最后，本發(fā)明特征在于一種控制氣體冷凝過程的方法，包括步驟冷卻氣體到接近或低于相變溫度的溫度；快速降低壓力以誘導(dǎo)氣體內(nèi)的成核；和繼續(xù)冷卻成核的氣體到指定最終溫度以冷凝氣體。附圖簡(jiǎn)述從結(jié)合附圖提供的以下更詳細(xì)描述中將更清楚本發(fā)明的上述和其它方面、特征和優(yōu)點(diǎn)，其中圖1為描紹示溶液成核溫度范圍的圖2為描繪根據(jù)本發(fā)曰/液的溫度對(duì)時(shí)間曲線的圖；和圖3為描液的溫度對(duì)時(shí)間曲線的圖發(fā)明詳述成核是材料小區(qū)域中相變的開始。例如，相變可為從液體形成晶體。通常與溶液冷凍有關(guān)的結(jié)晶過程(即由溶液形成固體晶體)以成核事件開始然后是晶體生長(zhǎng)。在結(jié)晶過程中，成核為其中溶液或其它材料中分散的所選分子開始聚集形成納米尺度的簇以便在當(dāng)前操作條件下變得穩(wěn)定的步驟。這些穩(wěn)定的簇構(gòu)成核。簇需要達(dá)到臨界尺寸以便變成穩(wěn)定的核。這種臨界尺寸通常用操作條件如溫度、污染物、過飽和程度等來(lái)指示，并可在一個(gè)溶液樣品到另一個(gè)之間變化。正是在成核事件中，溶液中的原子以限定晶體結(jié)構(gòu)的規(guī)定周期方式排列。晶體生長(zhǎng)為成功獲得臨界簇尺寸的核的后續(xù)生長(zhǎng)。取決于條件，成核或晶體生長(zhǎng)可互相占優(yōu)勢(shì)，結(jié)果，得到具有不同尺寸和形狀的晶體。晶體尺寸和形狀的控制構(gòu)成工業(yè)制造如藥物工業(yè)制造中的主要挑戰(zhàn)。本發(fā)明方法涉及一種控制材料中發(fā)生成核相變的時(shí)間和/或溫度的方法。在冷凍應(yīng)用中，材料能自發(fā)成核并開始改變相的概率與材料的過冷程度和是否存在提供成核部位或表面的污染物、添加劑、結(jié)構(gòu)iU尤動(dòng)物有關(guān)。冷凍或凝固步驟在現(xiàn)有技術(shù)于大量瓶或容器上產(chǎn)生成核溫度差異的冷凍干燥方法中尤其重要。成核溫度差異往往產(chǎn)生不均勻的產(chǎn)品和過長(zhǎng)的干燥時(shí)間。另一方面，本發(fā)明的方法在間歇凝固過程(例如冷凍干燥)中提高更高程度的過程控制和產(chǎn)生具有更均勻結(jié)構(gòu)和性質(zhì)的產(chǎn)品。與誘導(dǎo)成核的一些現(xiàn)有技術(shù)不同，本發(fā)明方法要求最少的設(shè)備和操作變化用于實(shí)施。這類it程的例子包括液^冷:凍、由水溶液結(jié)晶冰:由°熔體結(jié)晶聚合物和金屬、由過飽和溶液結(jié)晶無(wú)機(jī)材料、蛋白質(zhì)的結(jié)晶、人工造雪、由蒸汽沉積冰、食物冷凍、冷凍濃縮、分級(jí)結(jié)晶、超低溫保存或蒸汽凝結(jié)成液體。從原理角度出發(fā)，本發(fā)明方法還適用于相變?nèi)缛刍头序v。本文公開的方法表示對(duì)當(dāng)前藥物凍干法的改進(jìn)。例如，在大的工業(yè)冷凍干燥機(jī)內(nèi)，存在100000個(gè)包含需要冷凍和干燥的藥物產(chǎn)品的瓶。工業(yè)中目前的做法是冷卻溶液到非常高的程度以便保證冷凍干燥機(jī)中所有瓶或容器中的溶液冷凍。但是，每個(gè)瓶或容器的內(nèi)含物在低于凝固點(diǎn)的溫度范圍內(nèi)隨機(jī)凍結(jié)，因?yàn)槌珊诉^程是不受控制的?，F(xiàn)在轉(zhuǎn)到圖，尤其是圖1,描繪了進(jìn)行常規(guī)隨機(jī)成核過程的水溶液的六個(gè)瓶的溫度對(duì)時(shí)間曲線，并顯示了瓶(ll，12,13,14,15和16)內(nèi)溶液的成核溫度典型范圍。如其中所看到，瓶?jī)?nèi)含物具有約0。C的熱力學(xué)凍結(jié)溫度，但每個(gè)瓶?jī)?nèi)的溶液在約-7。C至-2(TC或以上的寬溫度范圍內(nèi)自然成核，如區(qū)域18所標(biāo)記的。曲線19代表冷凍干燥室內(nèi)的架溫度。相反，圖2和圖3描繪了根據(jù)本發(fā)明方法利用減壓成核進(jìn)行冷凍過程的溶液的溫度對(duì)時(shí)間曲線。特別地，圖2顯示了利用室(21，22，23,24,25和26)減壓誘導(dǎo)的成核進(jìn)行平衡冷卻過程(見實(shí)施例2)的水溶液的六個(gè)瓶的溫度對(duì)時(shí)間曲線。瓶?jī)?nèi)含物具有約(TC的熱力學(xué)凍結(jié)溫度，但每個(gè)瓶?jī)?nèi)的溶液在減壓的同時(shí)在非常窄的溫度范圍(即-4。C至-5X:)內(nèi)成核，如區(qū)域28所示。曲線29代表冷凍干燥室內(nèi)的架溫度并描繪了平衡冷凍過程，一種在減壓前保持架溫度大致穩(wěn)定的過程。類似地，圖3顯示了利用室(31,32和33)減壓誘導(dǎo)的成核進(jìn)行動(dòng)態(tài)冷卻過程(見實(shí)施例7)的水溶液的三個(gè)瓶的溫度對(duì)時(shí)間曲線。同樣，瓶?jī)?nèi)含物具有約(TC的熱力學(xué)凍結(jié)溫度，但每個(gè)瓶?jī)?nèi)的溶液在減壓的同時(shí)在約-7。C至-1(TC的溫度范圍內(nèi)成核，如區(qū)域38所示。曲線39代表冷凍干燥室內(nèi)的架溫度并通常描繪了動(dòng)態(tài)冷卻過程，一種在減壓過程中或減壓前主動(dòng)降低架溫度的過程。如圖中所示，本發(fā)明的方法通過能使冷凍干燥機(jī)中藥物溶液的冷凍在較窄溫度范圍(例如約0。C至-10。C)內(nèi)發(fā)生和/或同時(shí)借此產(chǎn)生具有更大瓶與瓶之間均勻性的凍干產(chǎn)品來(lái)提供成核過程的改進(jìn)控制。盡管沒有證明，但可預(yù)測(cè)到誘導(dǎo)成核溫度范圍可甚至擴(kuò)展到稍微超過相變溫度并還可擴(kuò)展到過冷約40°C。與本發(fā)明方法有關(guān)的另一益處在于通過控制最低成核溫度和/或精確的成核時(shí)間，可影響冷凍的瓶或容器內(nèi)形成的冰晶結(jié)構(gòu)。冰晶結(jié)構(gòu)為能影響冰升華所需時(shí)間的變量。因此，通過控制冰晶結(jié)構(gòu)，可以大大加速整個(gè)冷凍干燥過程。在寬泛意義上，本文公開的誘導(dǎo)材料內(nèi)相變成核的方法包括步驟(i)冷卻材料到接近或低于材料相變溫度的溫度；和(ii)快速降低壓力以誘導(dǎo)材料成核。下面將更詳細(xì)地討論這些重要步驟的每一個(gè)。步驟1冷卻材料用在本發(fā)明方法中的示例性材料包括純物質(zhì)、氣體、懸浮液、凝膠、液體、溶液、混合物或溶液或混合物內(nèi)的組分。用于本發(fā)明方法的合適材料包括例如藥物材料、生物藥物材料、食品、化學(xué)材料，并可包括產(chǎn)品如傷口護(hù)理產(chǎn)品、化妝品、獸醫(yī)產(chǎn)品和體內(nèi)/體外診斷相關(guān)產(chǎn)品等。當(dāng)材料為液體時(shí)，可能需要將氣體溶解到液體內(nèi)。受控氣體環(huán)境中的液體通常使氣體溶解在它們中。用于本發(fā)明方法的其它示例性材料包括生物或生物藥物材料如組織、器官和多細(xì)胞結(jié)構(gòu)。對(duì)于某些生物和藥物應(yīng)用，材料可為包括以下的溶液或混合物活病毒或減毒病毒；核酸；單克隆抗體；多克隆抗體；生物分子；非肽類似物；肽，包括多肽、肽模擬物和改性肽；蛋白質(zhì)，包括融合蛋白和改性蛋白；RNA，DNA和它們的子類；寡核苷酸；病毒顆粒；和它們的類似這類材料或組分。用于冷凍干燥的瓶或容器中包含的藥物或生物藥物溶液將是能從本發(fā)明方法受益的材料的一個(gè)好例子。溶液主要是水，并且基本上不可壓縮。這類藥物或生物藥物溶液也非常純，通常沒有會(huì)形成成核部位的顆粒。均勾的成核溫度對(duì)于在瓶與瓶之間或容器與容器之間形成一致均勻的冰晶結(jié)構(gòu)很重要。形成的冰晶結(jié)構(gòu)還大大影響干燥所需的時(shí)間。當(dāng)應(yīng)用于冷凍干燥過程時(shí)，優(yōu)選將材料放置在室中，如冷凍干燥室中。優(yōu)選地，設(shè)計(jì)室以便允許控制室內(nèi)的溫度、壓力和氣體氛圍。氣體氛圍可包括但不限于氬氣、氮?dú)?、氦氣、空氣、水蒸氣、氧氣、二氧化碳、一氧化碳、一氧化二氮、氧化一氮、氖氣、氙氣、氪氣、曱烷、氫氣、丙烷、丁烷等，包括它們的可允許的混合物。優(yōu)選的氣體氛圍包括惰性氣體，如氬氣，壓力在約7至約50psig或以上之間。冷凍干燥器室內(nèi)的溫度通常由冷凍干燥過程規(guī)定，并可容易地通過使用能冷卻或加熱室內(nèi)架以推動(dòng)瓶或容器以及每個(gè)瓶或容器內(nèi)材料的溫度的傳熱流體來(lái)控制。根據(jù)本發(fā)明的方法，將材料冷卻到接近或低于其相變溫度的溫度。在進(jìn)行冷凍干燥過程的水基溶液的情況下，相變溫度為溶液的熱力學(xué)凝固點(diǎn)。在溶液達(dá)到低于溶液熱力學(xué)凝固點(diǎn)的溫度時(shí)，認(rèn)為是過冷。當(dāng)應(yīng)用于水基溶液的冷凍過程時(shí)，當(dāng)過冷程度從接近或低于相變溫度直到過冷約40。C時(shí)，更優(yōu)選在過冷約3X:和過冷l(TC之間時(shí)，本發(fā)明方法是有效的。在下面所述例子的一部分中，本發(fā)明的誘導(dǎo)成核的方法能理想地工作，即使溶液在其熱力學(xué)凝固點(diǎn)以下僅僅過冷約rc。在材料處于低于其相變溫度的溫度時(shí)，經(jīng)常被稱為處于亞穩(wěn)狀態(tài)。亞穩(wěn)狀態(tài)是化學(xué)或生物體系的不穩(wěn)定和短暫但相對(duì)長(zhǎng)命的狀態(tài)。亞穩(wěn)材料臨時(shí)以不是其平衡相或狀態(tài)的相或狀態(tài)存在。在材料或其環(huán)境沒有任何變化時(shí)，亞穩(wěn)材料將最終從其非平衡態(tài)轉(zhuǎn)變到其平衡態(tài)。示例性的亞穩(wěn)材料包括過飽和溶液和過冷液體。亞穩(wěn)材料的一個(gè)典型例子是處于大氣壓和-l(TC溫度下的液體水。由于(TC的正常凝固點(diǎn)，液體水不應(yīng)在這個(gè)溫度和壓力下熱力學(xué)存在，但它可以在沒有開始冰結(jié)晶過程的成核事件或結(jié)構(gòu)時(shí)存在。超純水可在大氣壓下被冷卻到非常低的溫度(-30。C至-40°C)并仍保持為液態(tài)。這種過冷水處于非平衡熱力學(xué)亞穩(wěn)狀態(tài)。只要缺少成核事件使它開始相變，它就會(huì)返回到平衡。各種冷卻曲線一起使用，包括例如平衡冷卻環(huán)境或動(dòng)態(tài)冷卻環(huán)境(見圖2和3)。歩驟2快速降低壓力當(dāng)材料達(dá)到接近或低于相變溫度的所需溫度時(shí)，對(duì)室迅速或快速減壓。這種減壓觸發(fā)瓶或容器內(nèi)溶液的成核和相變。在優(yōu)選實(shí)施方案中，通過打開或部分打開使高壓室與周圍環(huán)境或較低壓力室或環(huán)境分開的大控制閥實(shí)現(xiàn)室減壓。升高的壓力被離開室的氣體氛圍質(zhì)量流出快速降低。減壓需要相當(dāng)快以誘導(dǎo)成核。應(yīng)在幾秒或更少內(nèi)完成減壓，優(yōu)選40秒或以下，更優(yōu)選20秒或以下，最優(yōu)選10秒或以下。在典型的冷凍干燥應(yīng)用中，初始室壓力和減壓后最終室壓力之間的壓力差應(yīng)大于約7psi，盡管較小的壓降在一些情況下也可能誘導(dǎo)成核。大多數(shù)商業(yè)冷凍干燥機(jī)可容易地適應(yīng)控制成核需要的壓降范圍。許多冷凍干燥機(jī)被設(shè)計(jì)具有超過25psig的壓力定額以承受使用12rc的飽和蒸汽的常規(guī)殺菌過程。這種設(shè)備定額提供了足夠的窗口來(lái)按照從超過環(huán)境壓力或周圍環(huán)境壓力的起始?jí)毫p壓的規(guī)程誘導(dǎo)成核?？赏ㄟ^任何已知的手段(例如氣動(dòng)、水力或機(jī)械)實(shí)現(xiàn)升高的壓力和隨后的減壓。在優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明方法的工作壓力應(yīng)保持在任何施加氣體的超臨界壓力以下，并且在材料成核過程中應(yīng)避免對(duì)材并+施加才及低壓力(即約10mTorr或以下)。盡管不希望受任何特殊機(jī)理約束，但解釋本發(fā)明方法實(shí)施中觀察到的控制成核的一個(gè)可能機(jī)理是材料中溶液中的氣體在減壓時(shí)離開溶液并形成使材料成核的氣泡。初始的升高壓力增加了溶液中溶解氣體的濃度。冷卻后壓力的快速降低減少了氣體溶解度，并且氣體從過冷溶液中的隨后釋放觸發(fā)了相變成核。另一個(gè)可能的機(jī)理是減壓過程中材料周圍氣體的溫度降低造成引發(fā)成核的材料表面上的冷點(diǎn)。另一個(gè)可能的機(jī)理是減壓導(dǎo)致材料中部能的機(jī)理是材料附近的減壓冷氣體使減壓前與材料平衡或在減壓過程中通過蒸發(fā)從材料中釋放的部分蒸汽凍結(jié)；得到的固體顆粒重新進(jìn)入材料并用作引發(fā)成核的晶種或表面。這些機(jī)理中的一個(gè)或多個(gè)有助于引發(fā)凍結(jié)或凝固成核至不同程度，取決于材料性質(zhì)、其環(huán)境和正被成核的相變。過程可整個(gè)在大于環(huán)境壓力的壓力下或在跨越環(huán)境壓力的壓力范圍內(nèi)進(jìn)行。例如，初始室壓力可超過環(huán)境壓力，減壓后的最終室壓力可超過環(huán)境壓力但低于初始室壓力；初始室壓力可超過環(huán)境壓力，減壓后的最終室壓力可為大致環(huán)境壓力或稍微低于環(huán)境壓力。壓降的速度和大小也被認(rèn)為是本發(fā)明方法的重要方面。實(shí)驗(yàn)表明，在壓降(AP)大于約7psi時(shí)，將誘導(dǎo)成核?；蛘?，壓降的大小可表示為絕對(duì)壓力比R=Pi/Pr,其中Pi為初始絕對(duì)壓力，Pr為最終絕對(duì)壓力。在本發(fā)明方法的許多實(shí)際應(yīng)用中，認(rèn)為在絕對(duì)壓力比R大于約1.2時(shí)，減壓時(shí)可誘導(dǎo)成核。壓降速度也在本發(fā)明方法中起重要作用。表征壓降速度的一種方法是通過使用參數(shù)A，其中A-AP/At。同樣，推測(cè)對(duì)于大于指定值如約0.2psi/s的A值將誘導(dǎo)成核。通過實(shí)驗(yàn)的經(jīng)驗(yàn)數(shù)據(jù)應(yīng)幫助確定優(yōu)選的壓降和壓降速度。下面的實(shí)施例突出了本文公開的誘導(dǎo)材料成核的方法的各種方面和特征，并且不從限制意義上理解。相反，這些實(shí)施例僅僅是說明性的，本發(fā)明的范圍應(yīng)只相對(duì)于附加的權(quán)利要求來(lái)確定。實(shí)施例本文描述的所有實(shí)施例都在小規(guī)模VirTis51-SRC冷凍干燥機(jī)中進(jìn)行，其具有總架空間大約1.01112的四個(gè)架和內(nèi)部冷凝器。對(duì)這種裝置改型以保持不超過約15psig的正壓。還增加1.5'，直徑圓形開孔到冷凍干燥室的后壁上，穿過后壁絕緣體從孔中伸出的1.5，，直徑不銹鋼管從冷凍干燥機(jī)的后面出來(lái)。用衛(wèi)生設(shè)備配件將兩個(gè)1.5，，全口氣動(dòng)球閥連接到這個(gè)管上。一個(gè)球閥允許氣體流入到冷凍干燥室內(nèi)并借此提供不超過15psig的正壓。第二個(gè)球閥允許氣體流出冷凍干燥室并借此降低室壓力至大氣條件(Opsig)。通過使用PraxairNCoolTM-HX系統(tǒng)用液氮冷卻的DynaleneMV傳熱流體的循環(huán)實(shí)現(xiàn)冷凍干燥機(jī)架和冷凝器的全部制冷。所有溶液都在級(jí)別ioo清潔室中制備。定位冷凍干燥機(jī)，使得門、架和控制裝置全部可從清潔室出入，而其它部件(泵、加熱器等)位于非清潔室環(huán)境中。所有溶液都用HPLC級(jí)水(FisherScientific,通過0.10nm膜過濾)制備。在裝入到瓶或凍干容器前通過0.22|Lim膜過濾最終溶液。所有氣體經(jīng)氣瓶供應(yīng)并通過0.22jam過濾器過濾除去顆粒。從WheatonScienceProducts得到預(yù)清洗顆粒的玻璃容器(5mL瓶和60mL瓶)。適當(dāng)時(shí)使用藥學(xué)可接受載體。采取上述步驟以確保材料和方法滿足用作成核劑的顆粒的常規(guī)藥物制造標(biāo)準(zhǔn)。本文使用的"藥學(xué)可接受栽體"包括任意溶劑、分散介質(zhì)、抗氧化劑、鹽、涂料、表面活性劑、防腐劑(例如對(duì)羥基苯曱酸曱酯或丙酯、山梨酸、抗菌劑、抗真菌劑)、等滲劑、溶液緩凝劑(例如石蠟)、吸收劑(例如高嶺土、膨潤(rùn)土)、藥物穩(wěn)定劑(例如十二烷基硫酸鈉)、凝膠、粘合劑(例如糖漿、阿拉伯膠、明膠、山梨糖醇、黃蓍膠、聚乙烯基吡咯烷酮、羧基曱基纖維素、藻酸鹽)、賦形劑(例如乳糖、奶糖、聚乙二醇)、崩解劑(例如瓊脂、淀粉、乳糖、磷酸鈣、碳酸鈣、褐藻酸、山梨糖醇、甘氨酸)、潤(rùn)濕劑(例如鯨蠟醇、單硬脂酸甘油酯)、潤(rùn)滑劑、吸收促進(jìn)劑(例如季銨鹽)、食用油(例如杏仁油、椰子油、油脂或丙二醇)、甜味劑、風(fēng)味劑、著色劑、填充劑(例如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇)、壓片潤(rùn)滑劑(例如硬脂酸鎂、淀粉、葡萄糖、乳糖、大米花、白堊)、吸入用載體(例如烴推進(jìn)劑)、緩沖劑或此類材料和它們的組合，這是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所知的。對(duì)于本文描述的實(shí)驗(yàn)條件和研究的所有凍干配方，一般觀察到隨機(jī)成核在約-8。C和-2(TC之間的容器溫度下發(fā)生，有時(shí)在暖至-5。C下發(fā)生。通?？蓪⑷萜鞅３衷诒?8'C暖的溫度長(zhǎng)的時(shí)間而不成核。通過容器溫度響應(yīng)融合放熱潛熱快速增加的點(diǎn)的溫度測(cè)量確定成核開始和隨后的晶體生長(zhǎng)(即凍結(jié))。還可通過冷凍干燥機(jī)室門上的觀察鏡目視確定凍結(jié)的開始。實(shí)施例1控制成核溫度四個(gè)單獨(dú)的瓶裝有2.5mL5wt。/。的甘露醇溶液。5wt。/。的甘露醇溶液的預(yù)計(jì)熱力學(xué)凝固點(diǎn)為大約-0.5°C。將四個(gè)瓶彼此緊靠著放在冷凍干燥機(jī)架上。使用表面安裝的熱電偶監(jiān)測(cè)四個(gè)瓶的溫度。用氬氣對(duì)冷凍干燥機(jī)增壓到14psig。冷卻冷凍干燥機(jī)架得到在大約-1.3。C和約-2.3。C之間的瓶溫度(熱電偶的測(cè)量精度為+/-rc)。然后在少于5秒內(nèi)將冷凍干燥機(jī)從約14psig減壓到約大氣壓以誘導(dǎo)瓶?jī)?nèi)溶液的成核。全部四個(gè)瓶都在減壓后立即成核并開始凍結(jié)。結(jié)果匯總在下面表l中。從表l中看到，這個(gè)實(shí)施例中控制的成核溫度(即初始瓶溫度)相當(dāng)接近預(yù)測(cè)的溶液熱力學(xué)凝固點(diǎn)。因此，本方法允許控制成核在具核溫度下的溶液中發(fā)生。瓶#<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>實(shí)施例2控制成核溫度在這個(gè)實(shí)施例中，95個(gè)瓶裝有2.5mL5wt。/。的甘露醇溶液。5wt°/。的甘露醇溶液的熱力學(xué)凝固點(diǎn)為大約-O.5°C。將95個(gè)瓶彼此緊靠著放在冷凍干燥機(jī)架上。使用表面安裝的熱電偶連續(xù)監(jiān)測(cè)位于冷凍干燥機(jī)架上不同位置的六個(gè)瓶的溫度。在氬氣氣氛中對(duì)冷凍干燥機(jī)增壓到14psig。然后冷卻冷凍干燥機(jī)架得到接近-5。C的瓶溫度。然后在少于5秒內(nèi)將冷凍干燥機(jī)從約14psig減壓到約大氣壓以誘導(dǎo)瓶?jī)?nèi)溶液的成核。目視觀察到全部95個(gè)瓶都在減壓后立即成核并開始凍結(jié)。六個(gè)被監(jiān)測(cè)瓶的熱電偶數(shù)據(jù)證實(shí)視覺觀察。結(jié)果匯總在表2中。從其中看出，這個(gè)實(shí)施例中的控制成核溫度(即初始并瓦溫度)略微低于預(yù)測(cè)的溶液熱力學(xué)凝固點(diǎn)。因此，本發(fā)明的方法允許控制成核在具有中等過冷程度的溶液中發(fā)生。這個(gè)實(shí)施例還說明了本方法對(duì)多個(gè)^f瓦應(yīng)用的可擴(kuò)縮性。買施例3控制減壓大小在這個(gè)實(shí)施例中，多個(gè)瓶裝有2.5mL5wt。/。的甘露醇溶液。同樣，5wty。的甘露醇溶液的預(yù)計(jì)熱力學(xué)凝固點(diǎn)為大約-0.5°C。對(duì)于每次試驗(yàn)運(yùn)行，都將瓶彼此緊靠著放在冷凍干燥機(jī)架上。與前面描述的實(shí)施例一樣，使用表面安裝的熱電偶監(jiān)測(cè)瓶的溫度。將冷凍干燥機(jī)中的氬氣氣氛加壓到不同壓力并冷卻冷凍干燥機(jī)架得到約-5。C的瓶溫度。在每次試驗(yàn)運(yùn)行中，然后將冷凍干燥機(jī)從選定壓力快速減壓(即在少于5秒內(nèi))至大氣壓以誘導(dǎo)瓶?jī)?nèi)溶液的成核。結(jié)果匯總在表3中。從表3中看出，在壓降為約7psi或更大并且成核溫度(即初始瓶溫廑.)在約'-4.7。C和-5.8。C之間時(shí)發(fā)生控制成核。瓶#溶液氣體初始*瓦溫度壓降減壓結(jié)氛圍[。c][psi]果12.5mL5wty。的甘露醇?xì)鍤?4.77成核22.5mli5wt。/。的甘露醇?xì)鍤?5.17成核32.5mL5wt"/。的甘露醇?xì)鍤?5.37成核42.5mL5wty。的甘露醇?xì)鍤?5.67未成核2.5mL5wty。的甘露醇?xì)鍤?5.67成核62.5mL5wty。的甘露醇?xì)鍤?5.87成核2.5miL5wty。的甘露醇?xì)鍤?5.46未成核82.5mL5wty。的甘露醇?xì)鍤?5.76未成核92.5mL5wty。的甘露醇?xì)鍤?5.86未成核102,5mL5wty。的甘露醇?xì)鍤?5.15未成核112.5mL5wty。的甘露醇?xì)鍤?5.45未成核122.5mL5wty。的甘露醇?xì)鍤?5.55未成核132,5mL5wty。的甘露醇?xì)鍤?4.74未成核142.5mL5wty。的甘露醇?xì)鍤狻?.14未成核16初始瓶溫度rc]-4.2-4.4-4.6-4.4-4.6—5.1壓降[psi]141414141414瓶#溶液12.5mL5wt。/。的甘露醇22.5mL5wty。的甘露醇32.5mL5wt。/。的甘露醇42.5mL5wt。/。的甘露醇52.5mL5wty。的甘露醇62.5mL5wt。/。的甘露醇表2.控制成核溫度1!口纟壓果減.豕-豕，豕，豕.v^、豕木木木木木木成成成成成禮體圍氣氣氣氣氣氣氣氛氬氬氬氬氬氣152.5mL5wt。/。的甘露醇?xì)鍤?5.34未成核表3.減壓大小的影響實(shí)施例4控制減壓速度對(duì)于這個(gè)實(shí)施例，多個(gè)瓶裝有約2.5mL預(yù)計(jì)熱力學(xué)凝固點(diǎn)為大約-0.5。C的5wt。/。的甘露醇溶液。對(duì)于不同減壓時(shí)間的每次試驗(yàn)運(yùn)行，都將瓶彼此緊靠著放在冷凍干燥機(jī)架上。與前面描述的實(shí)施例一樣，使用表面安裝的熱電偶監(jiān)測(cè)瓶的溫度。類似上述實(shí)施例，將冷凍干燥機(jī)中的氬氣氣氛加壓到14psig并冷卻架得到約-5。C的瓶溫度。在每次試驗(yàn)運(yùn)行中，然后以不同的減壓速度將冷凍干燥機(jī)從14psig減壓到大氣壓以便誘導(dǎo)瓶?jī)?nèi)溶液的成核。為了研究減壓速度或減壓時(shí)間的影響，在冷凍干燥機(jī)后部的減壓控制閥出口上放置限制球閥。當(dāng)限制閥完全打開時(shí)，在大約2.5秒內(nèi)實(shí)現(xiàn)從約14psig到約0psig的減壓。通過4又<又部分關(guān)閉限制閥，可以變化地增加室減壓時(shí)間。使用限制球閥，以不同速度對(duì)冷凍干燥機(jī)室減壓來(lái)進(jìn)行幾次試驗(yàn)運(yùn)行以確認(rèn)或確定減壓速度對(duì)成核的影響。結(jié)果匯總在表4中。<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>從表4中看出，成核僅僅在減壓時(shí)間少于42秒、壓降為約14psi或更大并且成核溫度(即初始瓶溫度)在約-4.6'C和約-5.8。C之間時(shí)發(fā)生。這些結(jié)果表明，為了方法有效，減壓需要相對(duì)快地完成。172.5mL5wty。的甘露醇?xì)鍤?82.5mL5wty。的甘露醇?xì)鍤?92.5mL5wty。的甘露醇?xì)鍤?02.5mL5wty。的甘露醇?xì)鍤?12.5mL5wty。的甘露醇?xì)鍤?22.5mL5wty。的甘露醇?xì)鍤?32.5mL5wty。的甘露醇?xì)鍤?42.5mL5wty。的甘露醇?xì)鍤獗?.減壓時(shí)間的影響-5.51442-5.01442-5.11432-5.71432_5.61432-4.71413_5.31413_5.51413未成核未成核實(shí)施例5控制氣體氛圍同樣，多個(gè)瓶各自裝有約2.5mL5wt。/。的甘露醇溶液并彼此緊靠著被放在冷凍干燥機(jī)架上。與前述實(shí)施例相同，使用表面安裝的熱電偶監(jiān)測(cè)試驗(yàn)瓶的溫度。對(duì)于不同的試驗(yàn)運(yùn)行，改變冷凍干燥機(jī)中的氣體氛圍，但總是保持約14psig的正壓。在這個(gè)實(shí)施例中，冷卻冷凍干燥機(jī)架得到大約-5。C至-7。C的瓶溫度。在每次試驗(yàn)運(yùn)行中，然后將冷凍干燥機(jī)從約14psig快速減壓到大氣壓以便誘導(dǎo)瓶?jī)?nèi)溶液的成核。結(jié)果匯總在表5中。從其中看出，控制成核發(fā)生在除了氦氣氣氛的所有氣體氛圍中，其中壓降為約14psi和成核溫度(即初始瓶溫度)在約-4.7。C和約-7.4。C之間。盡管實(shí)施例中未示出，但認(rèn)為替代條件很可能使氦氣氣氛中的控制成核成為可能。瓶#溶液氣體初始瓶溫壓降氛圍度[。c][psi〗12.5mL5wt。/。的甘露醇?xì)鍤?4.91422.5mL5wty。的甘露醇?xì)鍤?5.21432.5mL5w"/。的甘露醇氮?dú)?4,71442.5mL5wty。的甘露醇氮?dú)?5,11452.5mL5w"/。的甘露醇氙氣-4.81462.5mL5w"/。的甘露醇氙氣-5,01472.5mL5wty。的甘露醇空氣—7,414減壓結(jié)果核核核核核核成成成成成成-豕.豕.豕.豕.豕.褒，豕木i木木木木木成成成禮禮禮成<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>表5.氣體氛圍組成的影響實(shí)施例6大體積溶液在這個(gè)實(shí)施例中，6個(gè)凍干瓶(60mL容量)裝有約30mL預(yù)計(jì)熱力學(xué)凝固點(diǎn)為大約-O.5'C的5wt。/。的甘露醇溶液。將6個(gè)凍干瓶彼此緊靠著放在冷凍干燥機(jī)上。使用表面安裝的熱電偶監(jiān)測(cè)位于冷凍干燥機(jī)架中不同位置處的6個(gè)瓶的溫度。在氬氣氣氛中將冷凍干燥機(jī)加壓到約14psig。然后冷卻冷凍干燥機(jī)架得到接近-5。C的瓶溫度。然后在少于5秒內(nèi)將冷凍干燥機(jī)從14psig減壓到約大氣壓以誘導(dǎo)瓶?jī)?nèi)溶液的成核。結(jié)果匯總在表6中。在另一實(shí)驗(yàn)中，塑料制大冷凍干燥盤(GoreLYOGUARD,1800mL容量)裝有約1000mL5wt。/。的甘露醇溶液。得到預(yù)先清潔的盤以滿足USP低顆粒物要求。將盤放在冷凍干燥機(jī)架上，通過安裝在靠近一側(cè)中心的盤外表面上的熱電偶監(jiān)測(cè)盤的溫度。然后冷卻冷凍干燥機(jī)架得到接近-7。C的盤溫度。然后將冷凍干燥機(jī)在少于5秒內(nèi)從14psig減壓到約大氣壓以誘導(dǎo)盤內(nèi)溶液的成核。結(jié)果也匯總在表6中。同上述實(shí)施例，所有容器都在減壓后立即成核并開始凍結(jié)。還是同上述實(shí)施例，這個(gè)實(shí)施例中的成核溫度(即容器溫度)非?？煽氐卦谝欢ǔ潭壬辖咏芤旱臒崃W(xué)凍結(jié)溫度。更重要地，這個(gè)實(shí)施例說明了本方法允許控制成核在較大體積溶液中和各種容器形式中發(fā)生。應(yīng)注意，能預(yù)料到當(dāng)配方體積增加時(shí)減壓方法的效率提高，因?yàn)楫?dāng)更多分子存在聚集并形成臨界核時(shí)成核事件更有可能發(fā)生。<image>imageseeoriginaldocumentpage19</image>表6.溶液體積核容器類型的影響實(shí)施例7動(dòng)態(tài)冷卻對(duì)平4軒冷卻可按各種方式利用本發(fā)明的控制成核的方法。上述實(shí)施例1-6各自說明了控制在低于熱力學(xué)凝固點(diǎn)的溫度下基本平衡(即非常緩慢地改變溫度)的凍干溶液的成核溫度的方面。這個(gè)實(shí)施例說明也可在動(dòng)態(tài)冷卻環(huán)境(即溶液經(jīng)歷快速溫度變化)中在低于熱力學(xué)凝固點(diǎn)的溫度下發(fā)生成核。在這個(gè)實(shí)施例中，瓶1至6代表上面關(guān)于實(shí)施例2描述的樣品。另外，三個(gè)單獨(dú)的瓶(瓶7-9)也裝有2.5mL5wt。/。的甘露醇溶液。在單獨(dú)的試驗(yàn)運(yùn)行中，將三個(gè)附加的瓶彼此緊靠著放在冷凍干燥機(jī)架上。向著-45。C的最終架溫度快速冷卻冷凍干燥機(jī)架。當(dāng)一個(gè)瓶達(dá)到約-5。C的溫度時(shí)，這通過表面安裝的熱電偶測(cè)量，將冷凍干燥機(jī)從約14psig快速減壓到0psig以便誘導(dǎo)成核。全部三個(gè)瓶都在減壓后立即成核并開始凍結(jié)。由于動(dòng)態(tài)冷卻環(huán)境，瓶溫度在成核前明顯下降到-6.8。C和-9.9。C之間。對(duì)比結(jié)果匯總在下面表7中。<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>減壓結(jié)表7.試驗(yàn)結(jié)果動(dòng)態(tài)冷卻對(duì)成核的影響本發(fā)明方法對(duì)控制在給定溫度范圍內(nèi)平衡的凍干溶液或正被急劇冷卻的凍干溶液中成核的效力為最終用戶提供了具有不同益處和權(quán)衡的兩種可能應(yīng)用方式。通過允許凍干溶液平衡，成核溫度范圍將窄或被最小至冷凍干燥機(jī)自身的性能極限。相對(duì)于其中室和瓶溫度在一個(gè)步驟中降低到小于約-40°C的常規(guī)或動(dòng)態(tài)規(guī)程，凍結(jié)平衡步驟需要核核核核核核核核核成成成成成成成成成額外時(shí)間來(lái)實(shí)現(xiàn)。但是，使用平衡步驟應(yīng)在所有瓶或容器上產(chǎn)生大大改善的成核均勻性以及實(shí)現(xiàn)與精確控制材料成核溫度有關(guān)的其它益處?；蛘?，如果不需要平衡材料或凍干溶液溫度，則可簡(jiǎn)單地在常規(guī))"i壓將i凍干容器內(nèi)產(chǎn)生材料成核2度;的較寬分布但i增加最少時(shí)間至，j冷凍規(guī)程并仍允許解決極度過冷的問題。實(shí)施例8不同賦形劑的影響本發(fā)明的控制或誘導(dǎo)材料成核的方法可用于控制包含不同凍干賦形劑的過冷溶液的成核溫度。這個(gè)實(shí)施例說明本發(fā)明的方法與以下賦形劑共同使用甘露醇；羥基乙基淀粉(HES);聚乙二醇(PEG);聚乙烯基吡咯烷酮(PVP);葡聚糖；甘氨酸；山梨糖醇；蔗糖；和海藻糖。對(duì)于每種賦形劑，用包含5wty。賦形劑的2.5mL溶液裝填2個(gè)瓶。將瓶彼此緊靠著放在冷凍干燥機(jī)架上。在氬氣氣氛中將冷凍干燥機(jī)加壓到約14psig。冷卻冷凍干燥機(jī)架得到接近-3。C的瓶溫度，然后快速減壓誘導(dǎo)成核。結(jié)果匯總在表8中。瓶#溶液氣體初始爿瓦溫度壓降減壓結(jié)氛圍[。c][psi]果12.5mL5wt。/。的甘露醇?xì)鍤?3.314成核22.5mL5wt。/。的甘露醇?xì)鍤?3.014成核32.5mL5wt。/。的HES氬氣-3.114成核42.5mL5wt。/。的HES氬氣-3.714成核2.5mL5w"/。的PEG氬氣-3.814成核62.5mL5wt。/。的PEG氬氣-3.414成核72.5mL5wt。/o的PVP氬氣-3.514成核82,5mL5wt。/。的PVP氬氣-3.314成核92.5mL5wt。/。的葡聚糖氬氣-4.014成核102.5mL5wt。/。的葡聚糖氬氣-3.114成核112.5mL5wty。的甘氨酸氬氣-3.814成核122.5mL5wt。/。的甘氨酸氬氣-3.914成核132.5tnL5wt。/。的山梨糖醇?xì)鍤?3.614成核142.5mL5wt。/。的山梨糖醇?xì)鍤?3.414成核152.5mL5wty。的蔗糖氬氣-3.314成核<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>表8.不同凍干賦形劑的影響實(shí)施例9控制蛋白質(zhì)溶液的成核本文公開的方法可用于控制過冷蛋白質(zhì)溶液的成核溫度而沒有對(duì)蛋白質(zhì)溶解性或酶活性的負(fù)面或反面影響。在這個(gè)實(shí)施例中使用兩種蛋白質(zhì)，即牛血清白蛋白(BSA)和乳酸鹽脫氫酶(LDH)。將BSA溶解在5wty。甘露醇中，濃度為10mg/mL。3個(gè)凍干瓶裝有2.5mLBSA-甘露醇溶液并被彼此緊靠著放在冷凍干燥機(jī)架上。在氬氣氣氛中將冷凍干燥機(jī)加壓到約14psig。冷卻冷凍干燥機(jī)架得到接近-5。C的瓶溫度。對(duì)冷凍干燥機(jī)快速減壓誘導(dǎo)成核。BSA溶液的全部瓶都在減壓后立即成核并開始凍結(jié)。解凍時(shí)沒有觀察到蛋白質(zhì)的沉淀。從兩個(gè)不同的供應(yīng)商得到LDH蛋白質(zhì)，并出于清楚目的被標(biāo)記為L(zhǎng)DH-1或LDH-2以區(qū)分兩種不同的批次。將LDH-1溶解在5wt。/。甘露醇中，濃度為1mg/mL。6個(gè)凍干瓶裝有2.5mLLDH-1/甘露醇溶液并被彼此緊靠著放在冷凍干燥機(jī)架上。在氬氣氣氛中將冷凍干燥機(jī)加壓到約14psig。從室溫開始冷卻冷凍干燥機(jī)架得到接近-4'C的瓶溫度。然后對(duì)冷凍干燥機(jī)快速減壓誘導(dǎo)成核。全部瓶都在減壓后立即成核并開始凍結(jié)。將瓶保持在這個(gè)狀態(tài)下約15分鐘。然后以大約rC/min的速度冷卻冷凍干燥機(jī)架得到接近-45。C的瓶溫度并再保持15分鐘以確保冷凍過程完成。在冷凍步驟后，然后以約rC/min的速度升溫冷凍干燥機(jī)架以提高瓶溫度到接近5"C。解凍時(shí)沒有觀察到蛋白質(zhì)的沉淀。分析瓶?jī)?nèi)含物的酶活性，將結(jié)果與未冷凍LDH-1/甘露醇溶液對(duì)照樣品比較。作為實(shí)施例9的一部分，將LDH-1/甘露醇溶液減壓成核的樣品與隨機(jī)成核的樣品比較。在LDH-1的隨機(jī)成核樣品中，沒有加壓和減壓并且沒有氬氣氣氛地重復(fù)冷凍過程。具體地說，將LDH-1溶解在5wt%甘露醇中，濃度為lmg/mL。6個(gè)凍干瓶裝有2.5mLLDH-1/甘露醇溶液并被彼此緊靠著放在冷凍干燥機(jī)架上。從室溫開始以大約rC/min的速度冷卻冷凍干燥機(jī)架得到接近-45。C的瓶溫度并保持15分鐘以確保冷凍過程完成。在冷凍步驟后，以約rC/min的速度升溫冷凍干燥機(jī)架以提高瓶溫度到接近5°C。解凍時(shí)沒有觀察到蛋白質(zhì)的沉淀。分析瓶?jī)?nèi)含物的酶活性，將結(jié)果與未冷凍LDH-1/甘露醇溶液的相同對(duì)照樣品比較。同樣作為實(shí)施例9的一部分，使用LDH-2重復(fù)上面為L(zhǎng)DH-1描述的實(shí)驗(yàn)。唯一的不同在于LDH-2的成核溫度接近-3°C,而不是LDH-1的-4。C。從表9中看出，相對(duì)于可比較的隨機(jī)成核和冷凍規(guī)程，通過減壓實(shí)現(xiàn)的控制成核和冷凍過程明顯沒有降低酶活性。事實(shí)上，通過減壓實(shí)現(xiàn)的控制成核過程似乎更好地保存了酶活性，與隨機(jī)成核后LDH-135.9%和LDH-241.3%的平均活性損失相比，LDH-1的平均活性損失只有17.8%,LDH-2只有26.5%。瓶#溶液氣氛12.5mLBSA溶液氬氣22.5mLBSA溶液氬氣32.5mLBSA溶液氬氣42.5mLLDH-1溶液氬氣52,5mLLDH-1溶液氬氣62.5mLLDH-1溶液氬氣72.5mLLDH-1溶液氬氣82.5mLLDH-1溶液氬氣92.5mLLDH-1溶液氬氣102.5mLLDH-1溶液空氣112.5mLLDH-1溶液空氣122.5mLLDH-1溶液空氣132.5mLLDH-1溶液空氣142.5mLLDH-1溶液空氣152.5mLLDH-1溶液空氣162.5mLLDH-2溶液氬氣172.5mLLDH-2溶液氬氣182.5mLLDH-2溶液氬氣192.5mLLDH-2溶液氬氣202.5mLLDH-2溶液氬氣212.5mLLDH-2溶液氬氣222.5mLLDH-2溶液空氣初始弁瓦溫壓降酶活性減壓結(jié)度rc][psi]損失[y。]果-4.914成核-4.314一成核-5.314—成核-3.8149.0成核-4.01416.2成核-3.71418.4成核-4.01423.4成核-3,91418,5成核-4.01421.2成核-10.4035.7成核-16.5035.4成核-15.5036.1成核-10.50".,9成核_9.8024.9成核-11.0039.2成核-3.11429.9成核-2.91418.9成核-3.11423.3成核-2.71419.6成核-3.11432,1成核-2.61435.2成核—5.0038.3成核<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>表9.控制過冷蛋白質(zhì)溶液的成核溫度應(yīng)注意，觀察到的LDH-2的隨機(jī)成核溫度比LDH-1的隨機(jī)成核溫度大很多。這種差異可能是由于LDH-2中用作成核劑的一些污染物。與LDH-1相比，LDH-2的隨才幾成核溫度相當(dāng)4妾近LDH-2的控制成核溫度，但通過LDH-1和LDH-2的控制成核得到的酶活性保留提高是類似的，分別為18.1%和14.8%。這種結(jié)果表明，酶活性保留的改善部分歸因于控制成核過程本身的特征，不僅僅是通過減壓得到的指定較高成核溫度。實(shí)施例10減少初步干燥時(shí)間通過混合約10.01克甘露醇與約190.07克水制備5wt。/。的甘露醇溶液。瓶裝入2.5mL5wt。/。的甘露醇溶液。稱量空弁瓦和有溶液的并瓦以確定加入到瓶的水質(zhì)量。將20個(gè)瓶彼此緊靠著放在冷凍干燥機(jī)架上的架中。使用表面安裝的熱電偶監(jiān)測(cè)6個(gè)瓶的溫度；所有被監(jiān)測(cè)的瓶都被其它瓶包圍以提高瓶行為的均勻性。在氬氣控制氣體氛圍中將冷凍干燥機(jī)加壓到約14psig。將冷凍干燥機(jī)架從室溫冷卻到約-6。C得到在大約-rc和-2。c之間的瓶溫度。然后在少于5秒內(nèi)將冷凍干燥機(jī)從約14psig減壓到約大氣壓以誘導(dǎo)瓶?jī)?nèi)溶液的成核。目視觀察或通過熱電偶監(jiān)測(cè)的所有瓶都在減壓后立即成核并開始凍結(jié)。然后快速降低架溫度到約-45。C以完成冷凍過程。一旦所有瓶溫度都為約-4(TC或以下，就抽空冷凍干燥室并開始初步干燥(即升華)過程。在這種干燥過程中，通過1小時(shí)勻變升溫冷凍干燥機(jī)架到約-14°C,并在該溫度下保持16小時(shí)。在整個(gè)干燥過程中都保持冷凝器在約-6(TC下。通過關(guān)閉真空泵并用氬氣回填室至大氣壓停止干燥過程。從冷凍干燥機(jī)中迅速取出瓶并稱量確定在初步干燥過程中失去多少水。在作為實(shí)施例IO—部分的另一實(shí)驗(yàn)中，其它瓶裝有2.5mL相同的5wt。/。的甘露醇溶液。稱量空瓶和有溶液的瓶以確定加入到瓶的水質(zhì)量。按與上述相同的方式將瓶裝載到冷凍干燥機(jī)內(nèi)，同樣使用表面安裝的熱電偶監(jiān)測(cè)6個(gè)瓶的溫度。將冷凍干燥機(jī)架從室溫快速冷卻到約-45。C以冷凍瓶。在冷卻步驟中，成核在約-15。C和約-18。C之間隨機(jī)發(fā)生。一旦所有瓶溫度都為約-4(TC或以下，就按與上述方法相同的方式干燥瓶。當(dāng)結(jié)束初步干燥時(shí)，從冷凍干燥機(jī)中迅速取出樣品并稱量確定在初步干燥過程中失去了多少水。瓶#溶液氣體氛圍初始瓶溫度[。c]壓降[psi]水損失[%]12.5mL5wt。/。的甘露醇?xì)鍤?l.31489.922.5mL5wty。的甘露醇?xì)鍤?l.91485.232.5mL5wty。的甘露醇?xì)鍤?l.31487.142.5mL5wt。/。的甘露醇?xì)鍤?2.31488.852.5mL5w"/。的甘露醇?xì)鍤?2.11485.062.5mL5wty。的甘露醇?xì)鍤?1.11480.772.5mL5wty。的甘露醇空氣-15.7065.782.5mL5wt。/。的甘露醇空氣-16.7066.992.5mL5wty。的甘露醇空氣-14.5064.6102.5mL5wty。的甘露醇空氣-15.6064.7112.5mL5wty。的甘露醇空氣-16.5064.1122.5mL5wty。的甘露醇空氣—17.9065.7表IO.提高成核溫度改善初步干燥利用控制成核和隨機(jī)成核的冷凍干燥過程的結(jié)果匯總在表10中。應(yīng)注意到，這兩個(gè)實(shí)驗(yàn)僅僅在增加通過減壓步驟的控制成核到一個(gè)實(shí)驗(yàn)方面不同。從表10中看出，通過減壓實(shí)現(xiàn)的控制成核過程允許成核在非常低的過冷程度下，在這個(gè)實(shí)施例中在約-1.rc和-2.3。C之間。與隨機(jī)成核情況相比，控制成核情況高得多的成核溫度產(chǎn)生干燥性質(zhì)大大提高的冰結(jié)構(gòu)和得到的凍干塊。對(duì)于相同量的干燥時(shí)間，使用公開的減壓方法在約-1.rc和-2.3。C之間成核的瓶失去它們水的平均86.1%，而在約-14.5X:和-17.9"C之間隨機(jī)成核的瓶只失去平均65.3%。因此，隨機(jī)成核的瓶需要多得多的初步干燥時(shí)間以獲得與按照本文公開的方法以控制方式成核的瓶相同程度的水損失。干燥時(shí)間的改善可能歸因于較暖成核溫度下較大冰晶的形成。這些較大的冰晶果.豕.豕.豕-豕.豕-豕木木木木木木在升華時(shí)留下較大的孔，較大的孔在進(jìn)一步升華過程中對(duì)水蒸氣流提供了較小的阻力。工業(yè)實(shí)用性本發(fā)明方法提供了控制過冷物質(zhì)即液體或溶液成核然后凍結(jié)的溫度和/或時(shí)間的改進(jìn)方法。盡管這種應(yīng)用部分集中在冷凍干燥上，但包括成核相變的任何材料處理步驟都會(huì)出現(xiàn)類似問題。這類過程的例子包括由熔體結(jié)晶聚合物和金屬、由過飽和溶液結(jié)晶材料、蛋白質(zhì)的結(jié)晶、人工造雪、食物冷凍、冷凍濃縮、分級(jí)結(jié)晶、超低溫保存或蒸汽凝結(jié)成液體?？刂埔后w或溶液成核溫度的最直接益處是控制相變產(chǎn)生的固體區(qū)域數(shù)量和大小的能力。例如，在冷凍水時(shí)，成核溫度直接控制形成的水晶的尺寸和數(shù)量。一般而言，當(dāng)成核溫度較暖時(shí)，冰晶在數(shù)量上較少，在尺寸上較大?？刂葡嘧儺a(chǎn)生的固體區(qū)域數(shù)量和尺寸的能力可提供額外的益處。例如，在冷凍干燥過程中，冰晶的數(shù)量和尺寸強(qiáng)烈影響凍干塊的干燥性質(zhì)。較暖成核溫度產(chǎn)生的較大冰晶在升華時(shí)留下較大的孔，較大的孔在隨后的升華過程中對(duì)水蒸氣流提供較少的阻力。因此，本發(fā)明的方法通過提高成核溫度提供了增加冷凍干燥過程中初步干燥(即升華)速度的手段。在通過冷凍方法保存(即超低溫保存)敏感材料的應(yīng)用中可實(shí)現(xiàn)另一可能的益處。例如，在水溶液中冷凍的生物材料包括但不限于哺乳動(dòng)物組織樣品(例如臍血、組織活檢、雞蛋和精子細(xì)胞等)、細(xì)胞系(例如哺乳動(dòng)物、酵母、原核的、真菌的等)和生物分子(例如蛋白質(zhì)、DNA、RNA和它們的子類)可在會(huì)損害材料功能或活性的冷凍過程中經(jīng)歷各種應(yīng)激。冰形成可在物理上破壞材料或在材料經(jīng)歷的界面結(jié)合、滲透力、溶質(zhì)濃度等方面產(chǎn)生劇烈變化。由于成核控制冰形成的結(jié)構(gòu)和動(dòng)力學(xué)，因此它可顯著影響這些應(yīng)激。本文公開的方法因此提供了減少與超低溫保存法有關(guān)的應(yīng)激并增強(qiáng)了從超低溫保存材料恢復(fù)功能或活性的獨(dú)特手段。本發(fā)明方法還提供了超過在為活細(xì)胞設(shè)計(jì)的兩步驟超低溫保存方法中用于引發(fā)細(xì)胞外形成的常規(guī)成核控制方法(例如接種或接觸冷表面)的改進(jìn)。本發(fā)明方法還適用于超低溫保存和凍干應(yīng)用中包含幾種成分的復(fù)雜溶液或混合物。這些配方經(jīng)常為具有水、有機(jī)或混合水-有機(jī)溶劑的溶液，其包含藥學(xué)活性成分(例如合成化學(xué)物質(zhì)、蛋白質(zhì)、肽或疫苗)，和任選地包含一種或多種援和成分，包括有助于防止干燥過程中活性成分有形損失的填充劑(例如右旋糖、葡萄糖、甘氨酸、乳糖、麥芽糖、甘露醇、聚乙烯基吡咯烷酮、氯化鈉和山梨糖醇)；有助于保持適宜環(huán)境pH或活性成分毒性的緩沖劑或毒性改良劑(例如，乙酸、苯甲酸、檸檬酸、鹽酸、乳酸、馬來(lái)酸、磷酸、酒石酸和上述酸的鈉鹽)；有助于保留處理過程中或其最終液體或干燥形式中活性成分結(jié)構(gòu)和功能的穩(wěn)定劑(例如，丙氨酸、二曱基亞砜、甘油、甘氨酸、人血清白蛋白、聚乙二醇、賴氨酸、聚山梨醇酯、山梨糖醇、蔗糖和海藻糖)；能改變配方玻璃轉(zhuǎn)變行為的試劑(例如，聚乙二醇和糖)，和保護(hù)活性成分免于降解的抗氧化劑(例如抗壞血酸鹽、亞硫酸氫鈉、甲醛鈉、焦亞硫酸鈉、亞硫酸鈉、次硫酸鹽和硫甘油)。由于成核一般為隨機(jī)過程，因此經(jīng)受相同處理?xiàng)l件的多種相同材料可能在不同溫度下成核。結(jié)果，盡管處理?xiàng)l件相同，但依賴于成核行為的這些材料的性質(zhì)將可能不同。公開的方法提供了同時(shí)控制多種材料的成核溫度的手段并因此提供了增加依賴于成核行為的這些產(chǎn)品性質(zhì)的均勻性的方式。在典型的冷凍干燥過程中，例如，不同瓶中的相同溶液可再寬的溫度范圍內(nèi)隨機(jī)成核，結(jié)果，最終的冷凍干燥產(chǎn)品在臨界性質(zhì)如殘余水分、活性和重構(gòu)時(shí)間方面具有顯著差異。通過利用本文公開的方法控制成核溫度，可大大提高冷凍干燥過程中產(chǎn)品性質(zhì)的瓶與瓶之間均勻性。控制材料成核行為的能力還可在減少開發(fā)由正常未控制成核事件決定的工業(yè)過程所需時(shí)間方面提供很大益處。例如，經(jīng)常需要數(shù)月來(lái)開發(fā)可在合理時(shí)間量?jī)?nèi)完成、產(chǎn)生在指定均勻性內(nèi)的所需產(chǎn)品性質(zhì)和保持活性藥物成分(API)足夠活性的成功冷凍干燥循環(huán)。通過提供控制成核并因此可能改善初步干燥時(shí)間、產(chǎn)品均勻性和API活性的手段，本發(fā)明的方法應(yīng)能大大減少開發(fā)成功冷凍干燥規(guī)程所需的時(shí)間。特別地，本發(fā)明成核方法的潛在益處在指定要被冷凍干燥的配方的組成方面提供提高的靈活性。由于控制成核可在冷凍步驟中更好地保存API,因此用戶應(yīng)能減少添加緩和成分(例如穩(wěn)定劑)到配方中活選擇配方成分的更簡(jiǎn)單組合以獲得組合的穩(wěn)定性和處理目標(biāo)。在控制成核減少使用本質(zhì)上延長(zhǎng)初步干燥時(shí)間的穩(wěn)定劑或其它緩和成分(例如通過降低水溶液的玻璃轉(zhuǎn)變溫度)的情況下，可能出現(xiàn)協(xié)同益處。公開的方法尤其很好地適用于大規(guī)模生產(chǎn)或制造操作；因?yàn)榭墒褂媚苋菀椎乇话幢壤{(diào)整或改變以制造各式各樣產(chǎn)品的相同設(shè)備和工藝參數(shù)來(lái)進(jìn)行。方法考慮使用其中全部操縱可在單個(gè)室(例如冷凍干燥機(jī))中進(jìn)行和其中過程不要求使用真空、添加劑的使用、振動(dòng)、電冷凍等誘導(dǎo)成核的方法使材料成核。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的方法不增加任何東西到凍干產(chǎn)品中。它只要求材料(例如瓶中的液體)開始時(shí)被保持在氣體環(huán)境中的指定壓力下和快速降低壓力至較低壓力。在凍干循環(huán)中，將從瓶中取出所有應(yīng)用的氣體。瓶或它們的內(nèi)含物不接觸或觸及除氣體外的任何東西。環(huán)境壓力和氣體環(huán)境的簡(jiǎn)單操縱本身足以達(dá)到該目標(biāo)。通過僅僅依靠環(huán)境壓力變化誘導(dǎo)成核，本文公開的方法均勻和同時(shí)地影響冷凍干燥機(jī)內(nèi)的所有瓶。與凍干應(yīng)用中影響材料成核的現(xiàn)有技術(shù)方法相比，本發(fā)明的實(shí)施方案還不太昂貴并且更容易實(shí)施和維護(hù)。本發(fā)明方法能明顯加快凍干過程中的初步千燥，從而減少冷凍干燥藥物的處理成本。與現(xiàn)有技術(shù)方法相比，本發(fā)明方法產(chǎn)生均勻得多的凍干產(chǎn)品，從而減少產(chǎn)品損失并為不能滿足更嚴(yán)格均勻性規(guī)范的加工者形成進(jìn)入市場(chǎng)壁壘。這種方法獲得這些益處而不污染凍干產(chǎn)品。更大的過程控制應(yīng)產(chǎn)生改善的產(chǎn)品和縮短的處理時(shí)間。從上文中應(yīng)認(rèn)識(shí)到，本發(fā)明因此提供了誘導(dǎo)材料成核的方法和/或冷凍材料的方法。本發(fā)明方法的各種改進(jìn)、變化和改變對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員將是顯而易見的，并要認(rèn)識(shí)到，這種改進(jìn)、變化和改變都將包括在本申請(qǐng)的界限以及權(quán)利要求的精神和范圍內(nèi)。權(quán)利要求1.一種誘導(dǎo)材料中相變成核的方法，包括步驟:使材料達(dá)到接近或低于相變溫度的溫度；和降低材料附近的壓力以誘導(dǎo)材料中相變成核。2.權(quán)利要求l的方法，其中材料被冷卻到亞穩(wěn)狀態(tài)。3.權(quán)利要求l的方法，還包括在減壓后繼續(xù)冷卻成核的材料到或低于確保材料完全相變的最終溫度的步驟。4.權(quán)利要求l的方法，其中當(dāng)材料達(dá)到所需的成核溫度時(shí)開始減壓。5.權(quán)利要求l的方法，其中在冷卻步驟開始后在所需的時(shí)間且當(dāng)材料溫度低于相變溫度時(shí)開始減壓。6.權(quán)利要求l的方法，還包括重構(gòu)材料的步驟。7.權(quán)利要求l的方法，其中所述材料選自氣體、液體、溶液、懸浮液、混合物或懸浮液、溶液或混合物內(nèi)的組分。8.權(quán)利要求l的方法，其中所述材料為溶液并且相變溫度為溶液的熱力學(xué)凝固點(diǎn)。9.權(quán)利要求l的方法，其中所述材料為具有一種或多種溶解的物質(zhì)的溶液，相變溫度為溶解的物質(zhì)從溶液中沉淀或結(jié)晶出來(lái)的飽和溫度。10.權(quán)利要求7的方法，其中所述材料還包括生物藥物材料、藥物材料、化學(xué)材料、生物材料、食品或它們的組合。11.權(quán)利要求l的方法，其中在氣體氛圍存在時(shí)限制材料。12.權(quán)利要求ll的方法，其中氣體氛圍包括氬氣、氮?dú)狻⒑?、空氣、水蒸氣、氧氣、二氧化碳、氖氣、氙氣、氪氣、氫氣或它們的混合物?3.權(quán)利要求ll的方法，還包括對(duì)材料附近的氣體氛圍加壓的步驟。14.權(quán)利要求1的方法，其中在減壓前在開始時(shí)將材料冷卻到從相變溫度到低于相變溫度2(TC的溫度。15.權(quán)利要求l的方法，其中在減壓前在開始時(shí)將材料冷卻到從相變溫度到低于相變溫度約5。C的溫度。16.權(quán)利要求l的方法，其中壓力被降低等于或大于約14psi的數(shù)量。17.權(quán)利要求l的方法，其中壓力被降低大于約7psi的數(shù)量。18.權(quán)利要求l的方法，其中降低壓力使得絕對(duì)壓力比Pi/Pr為約1.2或更大。19.權(quán)利要求l的方法，其中以大于約0.2psi每秒的壓降速度AP/At降低壓力。20.權(quán)利要求l的方法，其中在40秒或以下內(nèi)降低壓力。21.權(quán)利要求6的方法，其中所述材料包含包括活病毒或減毒病毒、核酸、單克隆或多克隆抗體、生物分子、非肽類似物、肽和蛋白質(zhì)的組分。22.權(quán)利要求21的方法，其中重構(gòu)材料的組分表現(xiàn)出與起始材料組分的有關(guān)功能或活性相類似的功能或活性。23.權(quán)利要求21的方法，其中重構(gòu)材料的組分表現(xiàn)出與隨機(jī)成核材料組分的有關(guān)功能或活性相比提高的功能或活性。24.權(quán)利要求21的方法，其中重構(gòu)材料的組分表現(xiàn)出與起始材料組分的有關(guān)結(jié)構(gòu)相類似的結(jié)構(gòu)。25.權(quán)利要求21的方法，其中所述材料被容納在多個(gè)容器中并且來(lái)自所有容器的重構(gòu)材料表現(xiàn)出一致的性質(zhì)。26.—種控制材料冷凍過程的方法，包括步驟以指定的冷卻速度冷卻材料；快速降低壓力使材料成核；和繼續(xù)冷卻成核的材料到指定最終溫度以完全冷凍材料。27.權(quán)利要求26的方法，其中當(dāng)所述材料達(dá)到所需的成核溫度時(shí)開始減壓。28.權(quán)利要求26的方法，其中在冷卻步驟開始后在所需的時(shí)間并且當(dāng)材料溫度低于相變溫度時(shí)開始減壓。29.—種凝固方法，包括步驟冷卻材料到接近或低于相變溫度的溫度；降低材料附近的壓力以誘導(dǎo)材料成核；和繼續(xù)冷卻成核的材料到指定最終溫度以促進(jìn)材料凝固。30.權(quán)利要求29的凝固方法，其中所述材料為具有一種或多種溶解的物質(zhì)的溶液，和其中降低材料周圍壓力的步驟還包括降低溶液附近的壓力以誘導(dǎo)溶液中一種或多種物質(zhì)的相變成核。31.—種控制氣體冷凝過程的方法，包括步驟冷卻氣體到接近或低于相變溫度的溫度；降低壓力以誘導(dǎo)氣體內(nèi)的相變成核；和繼續(xù)冷卻成核的氣體到指定最終溫度以冷凝氣體。32.—種誘導(dǎo)材料相變的方法，包括步驟將材料升溫到接近或高于相變溫度的溫度；和降低材料附近的壓力誘導(dǎo)材料相變。33.材料相變方法，包括步驟在加壓氣體氛圍中使材料達(dá)到接近相變溫度的溫度；和降低壓力以誘導(dǎo)材料相變。全文摘要提供了誘導(dǎo)材料成核的方法。公開的方法包括使材料達(dá)到接近或低于相變溫度的溫度和改變壓力誘導(dǎo)材料成核的步驟。公開的方法用于冷凍干燥過程，尤其是藥物冷凍干燥過程。文檔編號(hào)F26B5/06GK101379356SQ200780004628公開日2009年3月4日申請(qǐng)日期2007年2月7日優(yōu)先權(quán)日2006年2月10日發(fā)明者B·哈內(nèi)克,M·L·維爾東,N·格林特,R·R·塞弗,T·H·加斯泰爾三世申請(qǐng)人:普萊克斯技術(shù)有限公司