專利名稱：海膽棘殼色素的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于以天然海產(chǎn)廢棄料為原料制備的色素的技術(shù)領(lǐng)域，同時涉及食品上色 的色素。特別是以一種超臨界萃取提取及純化的方法來制取色素。
背景技術(shù)：
隨著人們生活水平提高，對食品色、香、味的要求越來越高。因此，人工合成色素遍廣泛添加在食品中，以改變食品的顏色，提高人們的食欲感。然而，由于人工合成色素的食 用安全性越來越受到人們的關(guān)注，不少人工合成色素也相繼被禁止用于食品加工。因此，從 動植物中提取天然色素逐漸引起了人們的興趣，其開發(fā)和利用成為一大研究熱點，主要原 因是天然色素直接來源于動植物和微生物，不僅可作為食品、藥品、化妝品等的著色劑，而 且自身還含有多種生理活性成分，有的甚至對某些疾病有很好的治療作用，對人體有保健 功能。海膽屬棘皮動物門海膽綱，是一種重要的海洋經(jīng)濟動物。其主要供食部分為海膽 的生殖腺，營養(yǎng)豐富味道鮮美，國內(nèi)外沿海國家歷來有生吃海膽生殖腺的習(xí)慣，不但鮮食， 而且加工成各種制品，如海膽醬、海膽糜、酒精海膽等高檔食品，由于人們生活水平的提高， 生活品質(zhì)的提升，海膽年消費量逐年增大，但是占海膽總重近60%的海膽棘殼在海膽的加 工過程中往往當(dāng)作廢棄物丟棄，并沒有進行進一步的加工，不僅造成了極度的浪費，同時也 給周邊環(huán)境造成了很大的壓力。近年來，研究者發(fā)現(xiàn)海膽棘殼色素具有明顯的抗腫瘤、抗氧 化、抗菌及保護心血管等生理活性，俄羅斯甚至將海膽棘殼色素做為治療心血管疾病的藥 物進入臨床應(yīng)用，這使得海膽棘殼色素越來越受到人們的關(guān)注。目前國內(nèi)外對海膽棘殼色 素的提取研究中，大都采用鹽酸溶解棘殼，再用乙醚、氯仿、丙酮等有機溶劑直接萃取，此方 法繁瑣費時、效率低，并不適用于海膽棘殼色素的大規(guī)模生產(chǎn)提取。因此，開發(fā)出一種成熟 的適用于大規(guī)模生產(chǎn)的海膽棘殼色素提取方法，無論是對推動海膽的綜合加工利用，還是 對整個海產(chǎn)品加工行業(yè)的發(fā)展，都是非常重要的。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種將廢棄海膽棘殼制備海膽棘殼色素的方法，制得的產(chǎn) 品最大程度的保留了海膽棘殼色素的生理活性，同時也使純化效率和產(chǎn)品純度大大提高。本發(fā)明的技術(shù)方案是經(jīng)研磨后的海膽棘殼粉以酸性溶劑浸提，得到的提取物經(jīng)二 氧化碳超臨界提取而得到粉狀的海膽棘殼色素粗品。再經(jīng)柱層析分離而得海膽棘殼色素純
P
ΡΠ O本發(fā)明的具體操作方法如下(一 )原料的預(yù)處去除性腺的海膽棘殼，用清水沖洗，單獨取下棘刺部分或殼部分或整個棘殼部分 真空冷凍干燥或常壓烘干后，用超微粉碎機粉碎至粒度達(dá)到20 200目備用。( 二 )研磨
選取檸檬酸或磷酸二氫鈉作為研磨助劑，助劑用量為0. 5 10% (w/w)，將助劑與 上述粉碎后的海膽棘殼混勻后采用研磨機研磨，研磨時間為10 120分鐘。(三)海膽棘殼色素的提取與純化1.浸提上述研磨后的海膽棘殼用5 30倍體積的酸性浸提溶液浸提，浸提溫度 10 60°C，浸提時間為0. 1 10h，所述酸性浸提液為含有酸、有機溶劑的水溶液，其體積百 分比為酸5 20
有機溶劑25 30/K50 65所述酸為甲酸、乙酸或鹽酸；所述有機溶劑為甲醇、乙醇或丙酮；浸提物經(jīng)過濾除去不溶顆粒雜質(zhì)后真空濃縮(溫度10 60°C )，得膏狀母液。2.超臨界萃取將夾帶劑無水乙醇和上述膏狀母液按質(zhì)量比1 100 100 1 的比例均勻混合后加入萃取釜，CO2經(jīng)冷凝升壓后進入萃取釜，控制萃取溫度30 60°C， 壓力20 50MPa，萃取時間0. 5 8小時，萃取后的溶劑進入分離釜，一級分離溫度30 600C，分離壓力8 20MPa，二級分離溫度30 40°C，分離壓力2 7MPa，得到含有海膽棘 殼色素的溶劑，減壓濃縮后冷凍干燥得紫紅色海膽棘殼色素粗品粉末。3、大孔樹脂吸附將上述所得棘殼色素粉末用0. 2% (w/v)的鹽酸溶液稀釋至吸 光值為2后用大孔樹脂進行吸附洗脫。本發(fā)明對大孔樹脂的種類和型號進行了靜態(tài)吸附實 驗篩選，對比不同型號樹脂的吸附率和解析率，優(yōu)選采用NKA-9、NKA-II、D101或D4020型號 樹脂進行吸附洗脫。吸附洗脫條件及步驟為(1)裝柱徑高比為1 5 1 20，吸附溫度為10 60°C，樹脂吸附溶液的pH為 1 5，吸附流速1 20VB/h，(2)用1 3倍柱床體積的純水或含有1 30% (ν/ν)甲醇、乙醇、丙酮或乙腈的 水溶液洗脫，此洗脫液棄去，以除去無機鹽、糖、蛋白等雜質(zhì)，(3)用含有0 5% (w/v)鹽酸、甲酸、乙酸或三氟乙酸的30% 100% (ν/ν)甲 醇、乙醇、丙酮或乙腈的水溶液洗脫2 5個柱床體積，洗脫流速1 20VB/h，收集洗脫部 分，10 60°C減壓濃縮至無乙醇味后冷凍干燥得紫紅色海膽棘殼色素純品粉末。本發(fā)明還可以將在步驟(三)海膽棘殼色素的提取與純化的1步中浸提所得到的 膏狀色素母液用0. 2% (w/v)的鹽酸溶液稀釋至吸光值為2后用大孔樹脂進行如上述(1)、 (2)和(3)同樣的方法，吸附和洗脫后制得紫紅色海膽棘殼色素粗品粉末。上述2 (超臨界萃取)、3 (大孔樹脂吸附)中所得海膽棘殼色素粉末既可作為產(chǎn)品 直接應(yīng)用醫(yī)藥、食品、保健品和化妝品領(lǐng)域，也可以用如下的反相柱吸附分離進一步純化后 得到海膽棘殼色素精品，其純度> 95%。(四)海膽棘殼色素的二次分離純化本發(fā)明采用反相柱層析的方法，將以硅膠為基質(zhì)的反相介質(zhì)裝柱，粗品或經(jīng)提純 的海膽棘殼色素粉末用甲醇溶解至飽和后，上C18或C8反相柱吸附，用含有0 5% (w/v) 鹽酸、甲酸、乙酸或三氟乙酸的5% 100% (ν/ν)甲醇、乙醇、丙酮或乙腈的水溶液洗脫，分 別收集不同海膽棘殼色素所在洗脫峰的洗脫液，經(jīng)濃縮結(jié)晶即得海膽棘殼色素純品。其純度> 95%。其中以硅膠為基質(zhì)的反相介質(zhì)為市售的C8和C18反相介質(zhì)。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有以下優(yōu)點1.本發(fā)明采用廢棄的海膽棘殼為原料，產(chǎn)品無毒，可直接應(yīng)用于醫(yī)藥、食品、保健 品和化妝品等領(lǐng)域。提取過程操作簡單，效率高，所用資源可再生利用，大大降低了生產(chǎn)成 本和社會成本。
2.本發(fā)明將微切助互作技術(shù)用于海膽棘殼色素的提取，高強度研磨在粉碎棘殼碳 酸鹽骨架的同時能促進其暴露出棘殼色素與助劑接觸和反應(yīng)，從而改變棘殼色素溶解性， 有效提高提取得率。3.本發(fā)明利用超臨界二氧化碳萃取和大孔樹脂來對海膽棘殼中的棘殼色素進行 提取和純化，效果與有機溶劑萃取法相似，但耗時短，所用溶劑毒性小、用量少且產(chǎn)物得率 高，二氧化碳、大孔樹脂和反相層析介質(zhì)均可再生后重復(fù)使用；所用有機溶劑均可蒸發(fā)回 收，從而降低生產(chǎn)成本且方法的純化效果好，所獲海膽棘殼色素的純度高。4.本發(fā)明采用酸化乙醇溶液浸提海膽棘殼中的色素，既解決了單獨采用乙醇浸提 無法有效破壞棘殼的碳酸鹽骨架，導(dǎo)致色素被包裹在碳酸鹽骨架中不能釋放的問題，又解 決了單獨采用鹽酸浸提所導(dǎo)致的浸提液中的不溶性蛋白等雜質(zhì)很難通過離心或過濾去除 的問題。5.對于海膽棘殼色素的進一步分離純化，本工藝采用的是反相柱層析，可以用紫 外在線檢測，經(jīng)超臨界二氧化碳萃取或大孔樹脂吸附的初分離產(chǎn)物經(jīng)此一步層析可將絕大 部分雜質(zhì)除去，得到單一的棘殼色素組分結(jié)晶。
具體實施例方式實例一海膽棘殼色素粉末的制備稱取去除性腺的大連紫海膽棘殼200g，用清水沖洗，50°C干燥后，超微粉碎機粉碎 物料達(dá)到粒度50目，粉碎后的海膽棘殼中加入3% (w/w)的檸檬酸混勻，使用振動研磨機研 磨30分鐘，用5L酸性乙醇溶液(其體積比為甲酸乙醇水=10 30 60)室溫浸提 30min。海膽棘殼色素的浸提液經(jīng)減壓過濾后，55°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至無醇味，得膏狀色素母 液。加入50ml無水乙醇和上述膏狀色素母液均勻混合后放入萃取釜，CO2經(jīng)冷凝升壓 后進入萃取釜，控制萃取溫度50°C，壓力30MPa，萃取時間4小時，萃取后的溶劑進入分離 釜，一級分離溫度55°C，分離壓力16MPa，二級分離溫度30°C，分離壓力5MPa，得到含有海膽 棘殼色素的溶劑，減壓濃縮后冷凍干燥得1. 145g紫紅色海膽棘殼色素粉末。色素粉末溶于0. 4moL/L鹽酸后，在可見光區(qū)470 480nm處有最大吸收，色價> 10。實例二海膽棘殼色素粉末的制備稱取去除性腺的大連紫海膽棘殼200g，用清水沖洗，50°C干燥后，超微粉碎機粉碎 物料達(dá)到粒度50目，粉碎后的海膽棘殼中加入3% (w/w)的檸檬酸混勻，使用振動研磨機研 磨30分鐘。用IOL酸性乙醇溶液(甲酸乙醇水=5 30 65)室溫浸提30min。海 膽棘殼色素的浸提液經(jīng)減壓過濾后，55°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至無醇味，得膏狀色素母液。加入50ml無水乙醇和上述膏狀色素均勻混合后放入萃取釜，CO2經(jīng)冷凝升壓后進入萃取釜，控制萃取溫度50°C，壓力30MPa，萃取時間4小時，萃取后的溶劑進入分離釜，一 級分離溫度55°C，分離壓力16MPa，二級分離溫度35°C，分離壓力5MPa，得到含有海膽棘殼 色素的溶劑，減壓濃縮后干燥得0. 881紫紅色海膽棘殼色素粉末。色素粉末溶于0. 4moL/L鹽酸后，在可見光區(qū)470 480nm處有最大吸收峰，色價 > 10。實例三海膽棘殼色素粉末的制備稱取去除性腺的大連紫海膽棘殼200g，用清水沖洗，50°C干燥后，超微粉碎機粉碎物料達(dá)到粒度50目，粉碎后的海膽棘殼中加入3% (w/w)的檸檬酸混勻，使用振動研磨機研 磨30分鐘，用4L酸性乙醇溶液(甲酸乙醇水=15 25 60)室溫浸提30min。海膽 棘殼色素的浸提液經(jīng)減壓過濾后，55°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至無醇味，得膏狀色素母液。加入50ml無水乙醇和膏狀色素母液均勻混合后放入萃取釜，CO2經(jīng)冷凝升壓后進 入萃取釜，控制萃取溫度50°C，壓力30MPa，萃取時間4小時，萃取后的溶劑進入分離釜，一 級分離溫度55°C，分離壓力16MPa，二級分離溫度30°C，分離壓力5MPa，得到含有海膽棘殼 色素的溶劑，減壓濃縮后冷凍干燥得1. 145g紫紅色海膽棘殼色素粉末。上述色素母液粉末用0.2% (w/v)的鹽酸溶液稀釋至吸光值為2后用型號為 NKA-9的大孔樹脂進行吸附，吸附溫度20°C，吸附流速2VB/h，吸附飽和后用3倍柱床體積的 去離子水洗脫，流速4VB/h，棄去洗脫液，再用4倍柱床體積含0.5% (w/v)甲酸的95% (ν/ ν)乙醇溶液以4VB/h洗脫，收集洗脫液，55°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至無醇味后冷凍干燥得0. 834g 紫紅色海膽棘殼色素粉末。色素粉末溶于0. 4moL/L鹽酸后，在可見光區(qū)470 480nm處有最大吸收峰，色價 > 12。實例四海膽棘殼色素粉末的制備稱取去除性腺的大連紫海膽棘殼200g，用清水沖洗，50°C干燥后，超微粉碎機粉碎 物料達(dá)到粒度80目，粉碎后的海膽棘殼中加入4% (w/w)的檸檬酸混勻，使用振動研磨機研 磨20分鐘，用3L酸性乙醇溶液(甲酸乙醇水=20 30 50)室溫浸提30min。上述 海膽棘殼色素的浸提液經(jīng)減壓過濾后，55°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至無醇味，得膏狀色素母液。加入50ml無水乙醇和膏狀色素母液均勻混合后放入萃取釜，CO2經(jīng)冷凝升壓后進 入萃取釜，控制萃取溫度50°C，壓力30MPa，萃取時間4小時，萃取后的溶劑進入分離釜，一 級分離溫度55°C，分離壓力16MPa，二級分離溫度30°C，分離壓力5MPa，得到含有海膽棘殼 色素的溶劑，減壓濃縮后冷凍干燥得1. 145g紫紅色海膽棘殼色素粉末。上述色素母液粉末用0.2% (w/v)的鹽酸溶液稀釋至吸光值為2后用型號為 NKA-II的大孔樹脂進行吸附，吸附溫度20°C，吸附流速2VB/h，吸附飽和后用3倍柱床體積 的去離子水洗脫，流速4VB/h，棄去洗脫液，再用4倍柱床體積95% (ν/ν)乙醇溶液以4VB/h 洗脫，收集洗脫液，55°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至無醇味后冷凍干燥得0. 918g紫紅色海膽棘殼色素 粉末。色素粉末溶于0. 4moL/L鹽酸后，在可見光區(qū)470 480nm處有最大吸收峰，色價 > 12。實例五海膽棘殼色素粉末的制備稱取去除性腺的大連紫海膽棘殼200g，用清水沖洗，50°C干燥后，超微粉碎機粉碎物料達(dá)到粒度80目，粉碎后的海膽棘殼中加入4% (w/w)的檸檬酸混勻，使用振動研磨機研 磨20分鐘，用5L酸性乙醇溶液(乙酸乙醇水=10 30 60)室溫浸提30min。浸提 液經(jīng)減壓過濾后，55°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至無醇味，得膏狀色素母液。色素母液用0.2% (w/v)的鹽酸溶液稀釋至吸光值為2后用型號為DlOl的大孔樹 脂進行吸附，吸附溫度20°C，吸附流速1.5VB/h，吸附飽和后用3倍柱床體積的5% (ν/ν)乙 醇溶液洗脫，流速3VB/h，棄去洗脫液，再用3倍柱床體積95% (ν/ν)乙醇溶液以3VB/h洗 脫，收集洗脫液，55°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至無醇味后冷凍干燥得0. 878g紫紅色海膽棘殼色素粉末。此色素粉末溶于0. 4moL/L鹽酸后，在可見光區(qū)470 480nm處有最大吸收峰，色 價> 12。實例六海膽棘殼色素粉末的制備稱取去除性腺的大連紫海膽棘殼200g，用清水沖洗，50°C干燥后，超微粉碎機粉碎 物料達(dá)到粒度80目，粉碎后的海膽棘殼中加入4% (w/w)的檸檬酸混勻，使用振動研磨機研 磨20分鐘，用5L酸性乙醇溶液(鹽酸乙醇水=10 30 60)室溫浸提30min。浸提 液經(jīng)減壓過濾后，55°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至無醇味，得膏狀色素母液。色素母液用0. 2% (w/v)的鹽酸溶液稀釋至吸光值為2后用型號為D4020的大孔 樹脂進行吸附，吸附溫度20°C，吸附流速2VB/h，吸附飽和后用3倍柱床體積的5% (ν/ν)甲 醇溶液洗脫，流速3VB/h，棄去洗脫液，再用2倍柱床體積甲醇以4VB/h洗脫，收集洗脫液， 55°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至無醇味后冷凍干燥得0. 928g紫紅色海膽棘殼色素粉末。色素粉末溶于0. 4moL/L鹽酸后，在可見光區(qū)470 480nm處有最大吸收峰，色價 > 12。實例七海膽棘殼色素粉末的制備稱取去除性腺的大連紫海膽棘殼200g，用清水沖洗，50°C干燥后，超微粉碎機粉碎 物料達(dá)到粒度80目，粉碎后的海膽棘殼中加入4% (w/w)的檸檬酸混勻，使用振動研磨機研 磨20分鐘，用5L酸性乙醇溶液(鹽酸乙醇水=10 30 60)室溫浸提30min。浸提 液經(jīng)減壓過濾后，55°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至無醇味，得膏狀色素母液。色素母液用0. 2% (w/v)的鹽酸溶液稀釋至吸光值為2后用型號為D4020的大孔 樹脂進行吸附，吸附溫度20°C，吸附流速2VB/h，吸附飽和后用3倍柱床體積的去離子水洗 脫，流速3VB/h，棄去洗脫液，再用2倍柱床體積甲醇以4VB/h洗脫，收集洗脫液，55°C旋轉(zhuǎn)蒸 發(fā)濃縮至無醇味后冷凍干燥得0. 928g紫紅色海膽棘殼色素粉末。色素粉末溶于0. 4moL/L鹽酸后，在可見光區(qū)470 480nm處有最大吸收峰，色價 > 12。實例八海膽棘殼色素粉末的制備稱取去除性腺的大連紫海膽棘殼200g，用清水沖洗，50°C干燥后，超微粉碎機粉碎 物料達(dá)到粒度50目，粉碎后的海膽棘殼中加入3% (w/w)的檸檬酸混勻，使用振動研磨機研 磨30分鐘，用5L酸性乙醇溶液(甲酸乙醇水=10 30 60)室溫浸提30min。色素 的浸提液經(jīng)減壓過濾后，55°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至無醇味，得膏狀色素母液。加入50ml無水乙醇和膏狀色素母液均勻混合后放入萃取釜，CO2經(jīng)冷凝升壓后進 入萃取釜，控制萃取溫度50°C，壓力30MPa，萃取時間4小時，萃取后的溶劑進入分離釜，一級分離溫度55°C，分離壓力16MPa，二級分離溫度30°C，分離壓力5MPa，得到含有海膽棘殼 色素的溶劑，減壓濃縮后冷凍干燥得1. 145g紫紅色海膽棘殼色素粉末。色素母液粉末用0. 2% (w/v)的鹽酸溶液稀釋至吸光值為2后用型號為NKA-9的 大孔樹脂進行吸附，吸附溫度20°C，吸附流速2VB/h，吸附飽和后用3倍柱床體積的去離子 水洗脫，流速4VB/h，棄去洗脫液，再用4倍柱床體積含0.5% (w/v)甲酸的95% (ν/ν)乙醇 溶液以4VB/h洗脫，收集洗脫液，55°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至無醇味后冷凍干燥得0. 834g紫紅色 海膽棘殼色素粉末。將上述色素粉末用甲醇溶解至飽和后上C18反相制備柱(20 X 150mm)分離純化， 流動相為10-100% (ν/ν)的甲醇線性洗脫，收集對應(yīng)洗脫峰，經(jīng)濃縮結(jié)晶即得海膽棘殼色 素純品，其純度> 95%。實例九海膽棘殼色素粉末的制備稱取去除性腺的大連紫海膽棘殼200g，用清水沖洗，50°C干燥后，超微粉碎機粉碎 物料達(dá)到粒度80目，粉碎后的海膽棘殼中加入4%的檸檬酸混勻，使用振動研磨機研磨20 分鐘，用5L酸性乙醇溶液(鹽酸乙醇水=10 30 60)室溫浸提30min。色素的浸 提液經(jīng)減壓過濾后，55°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至無醇味，得膏狀色素母液。色素母液用0. 2% (w/v)的鹽酸溶液稀釋至吸光值為2后用型號為NKA-9的大孔 樹脂進行吸附，吸附溫度20°C，吸附流速2VB/h，吸附飽和后用3倍柱床體積的去離子水洗 脫，流速3VB/h，棄去洗脫液，再用2倍柱床體積甲醇溶液以4VB/h洗脫，收集洗脫液，55°C旋 轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至無醇味后冷凍干燥得0. 915g紫紅色海膽棘殼色素粉末。將上述色素粉末用甲醇溶解至飽和后上C8反相制備柱(20 X 150mm)分離純化，流 動相為10-100% (ν/ν)的乙腈線性洗脫，收集對應(yīng)洗脫峰，經(jīng)濃縮結(jié)晶即得海膽棘殼色素 純品，其純度> 95%。
權(quán)利要求
海膽棘殼色素的制備方法，其特征在于操作步驟為(一)原料的預(yù)處去除性腺的海膽棘殼，用清水沖洗，烘干后，粉碎至粒度達(dá)到20～200目備用；(二)研磨用0.5～10％(w/w)研磨助劑和上述粉碎后的海膽棘殼粉混勻后采用研磨機研磨10～120分鐘；所述研磨助劑為檸檬酸或磷酸二氫鈉；(三)海膽棘殼色素的提取與純化(1)研磨后的海膽棘殼與研磨助劑混合物用5～30倍體積的酸性溶液浸提，浸提溫度10～60℃，浸提時間為0.1～10h，浸提液經(jīng)過濾除去不溶顆粒雜質(zhì)后于10～60℃真空濃縮，得膏狀母液；所述酸性浸提液為含有酸、有機溶劑的水溶液，其體積百分比為酸 5～20有機溶劑25～30水 50～65所述酸為甲酸、乙酸或鹽酸；所述有機溶劑為甲醇、乙醇或丙酮；(2)將夾帶劑無水乙醇和上述膏狀母液按質(zhì)量比1∶100～100∶1的比例均勻混合后加入萃取釜，CO2經(jīng)冷凝升壓后進入萃取釜，控制萃取溫度30～60℃，壓力20～50MPa，萃取時間0.5～8小時，萃取后的溶劑進入分離釜，一級分離溫度30～60℃，分離壓力8～20MPa，二級分離溫度30～40℃，分離壓力2～7MPa，得到含有海膽棘殼色素的溶液，減壓濃縮后經(jīng)冷凍干燥得紫紅色海膽棘殼色素粗品粉末。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的海膽棘殼色素的制備方法，其特征在于在操作步驟(三)海 膽棘殼色素的提取與純化中的(1)中所得到的膏狀母液用大孔樹脂進行提取海膽棘殼色 素粗品，吸附洗脫條件及步驟為(1)大孔樹脂裝柱徑高比為1 5 1 20，膏狀色素母液用濃度為0.2% (w/v)的 鹽酸溶液稀釋至吸光值為2后進行吸附，吸附溫度為10 60°C，樹脂吸附溶液的pH為1 5，吸附流速1 20VB/h ；所述大孔樹脂為NKA-9、NKA-II、DlOl或D4020型號樹脂；(2)用1 3倍柱床體積的純水或含有1 30%(ν/ν)甲醇、乙醇、丙酮或乙腈的水溶 液洗脫，此洗脫液棄去，以除去無機鹽、糖、蛋白雜質(zhì)；(3)用含有0 5%(w/v)鹽酸、甲酸、乙酸或三氟乙酸的30% 100% (ν/ν)甲醇、乙 醇、丙酮或乙腈的水溶液洗脫2 5個柱床體積，洗脫流速1 20VB/h，收集洗脫部分，10 60°C減壓濃縮至無乙醇味后經(jīng)冷凍干燥得紫紅色海膽棘殼色素粗品粉末。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的海膽棘殼色素的制備方法，其特征在于在操作步驟(三)海 膽棘殼色素的提取與純化中的(2)中所得到的紫紅色海膽棘殼色素粗品粉末用大孔樹脂 進行再次提純，吸附洗脫條件及步驟為(1)大孔樹脂裝柱徑高比為1 5 1 20，海膽棘殼色素粗品粉末用0.2% (w/v)的 鹽酸溶液稀釋至吸光值為2后吸附，吸附溫度為10 60°C，樹脂吸附溶液的pH為1 5， 吸附流速1 20VB/h ；所述大孔樹脂為NKA-9、NKA-II、DlOl或D4020型號樹脂；(2)用1 3倍柱床體積的純水或含有1 30%(ν/ν)甲醇、乙醇、丙酮或乙腈的水溶 液洗脫，以除去無機鹽、糖、蛋白雜質(zhì)；(3)用含有0 5%(w/v)鹽酸、甲酸、乙酸或三氟乙酸的30 100% (ν/ν)甲醇、乙 醇、丙酮或乙腈的水溶液洗脫2 5個柱床體積，洗脫流速1 20VB/h，收集洗脫部分，10 60°C減壓濃縮至無乙醇味后冷凍干燥得紫紅色海膽棘殼色素純品粉末。
4.根據(jù)權(quán)利要求1、2或3所述的海膽棘殼色素的制備方法，其特征在于精制海膽棘殼 色素，其操作步驟為將海膽棘殼色素粉末用甲醇溶解至飽和后上C18或C8反相柱分離純化，用含有0 5% (w/v)鹽酸、甲酸、乙酸或三氟乙酸的5 100% (ν/ν)甲醇、乙醇、丙酮或乙腈的水溶液 洗脫，分別收集不同海膽棘殼色素所在洗脫峰的洗脫液，經(jīng)濃縮結(jié)晶即得海膽棘殼色素純 品，其純度> 95%。
全文摘要
海膽棘殼色素的制備方法，用去除性腺的海膽棘殼，洗凈烘干后粉碎至粒度達(dá)到20～200目；用0.5～10％(w/w)檸檬酸或磷酸二氫鈉和粉碎后的海膽棘殼粉研磨10～120分鐘；再用酸性溶液浸提，經(jīng)過濾后真空濃縮，得膏狀母液；將無水乙醇和膏狀母液混合后加入萃取釜，CO2經(jīng)冷凝升壓后進入，30～60℃，20～50MPa進行分離后經(jīng)減壓濃縮、冷凍干燥得粗品。進一步精制采用大孔樹脂柱和反相柱進行吸附、分離，精品純度大于95％。發(fā)明采用廢棄的海膽棘殼為原料，產(chǎn)品無毒，可直接應(yīng)用于醫(yī)藥、食品、保健品和化妝品等領(lǐng)域。提取過程操作簡單，效率高，所用資源可再生利用，大大降低了生產(chǎn)成本和社會成本。
文檔編號C09B67/54GK101812242SQ20101012326
公開日2010年8月25日 申請日期2010年3月11日 優(yōu)先權(quán)日2010年3月11日
發(fā)明者呂艷紅, 周大勇, 張彥杰, 朱蓓薇, 李冬梅, 王曉東, 秦磊, 董秀萍, 譚慧, 鄭杰 申請人:大連工業(yè)大學(xué)