一種具有抗氧化、抗疲勞活性的海馬多肽及其制備工藝的制作方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種具有抗氧化、抗疲勞活性的海馬多肽及其制備方法，是以干海馬為原料，經(jīng)粉碎、電子束輻照?超聲波處理、復(fù)合酶解、超濾、冷凍干燥，制得所述海馬多肽。本發(fā)明將電子束輻照技術(shù)與超聲波處理結(jié)合應(yīng)用于海馬多肽的制備，能有效提高對(duì)海馬的酶解速度，加快目標(biāo)肽段的釋放，并提高酶解產(chǎn)物的抗氧化活性。另一方面，利用可控酶解酶技術(shù)，通過(guò)控制水解條件和水解度，能獲得盡可能多的目標(biāo)分子量分布的肽類(lèi)產(chǎn)物，同時(shí)在比較溫和的酶解條件下能夠很好地保存酶解產(chǎn)物的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，安全性極高。此外，本發(fā)明利用濾膜包對(duì)酶解產(chǎn)物進(jìn)行過(guò)濾，最終獲得的海馬多肽分子量在5000Da以下，純度較高，并且具有明顯的抗疲勞功效。
【專(zhuān)利說(shuō)明】
-種具有抗氧化、抗疲勞活性的海馬多化及其制備工藝
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于食品加工技術(shù)領(lǐng)域，具體設(shè)及一種具有抗氧化、抗疲勞活性的海馬多 膚及其制備工藝。
【背景技術(shù)】
[0002] 海馬是海龍科動(dòng)物，性溫、味甘，是傳統(tǒng)補(bǔ)益中藥，具有溫腎壯陽(yáng)、散結(jié)消腫的作 用。中國(guó)藥典2005年版規(guī)定可入藥的海馬種類(lèi)有海龍科動(dòng)物線紋海馬（仇 kelloggi Jordan e t Snyder)、京A海馬（Hlppo-campus his trix Kaup)、大海馬 {Hippocampus kuda Bleeker)、三澈海馬{Hippocampus trimaculatus Leach)帶小海馬 (海姐）（化Japonict/s Jaw)的干燥體。海馬藥用歷史悠久，早在梁代陶弘景 《本草經(jīng)集注》中已有記載，時(shí)稱(chēng)"水馬"。公元739年陳藏器在《本草拾遺》中首次使用海馬之 名。歐洲從18世紀(jì)開(kāi)始將海馬入藥。《本草綱目》記載:海馬，主難產(chǎn)及血?dú)馔?暖水臟，壯陽(yáng) 道;消瘤塊，治療瘡腫毒。故有溫腎壯陽(yáng)，散結(jié)消腫之功效;主治陽(yáng)瘦、腎虛作喘、癥瘤積聚、 療巧疲核、跌打損傷，外治癡腫療瘡。近年來(lái)的藥理研究表明海馬不僅有激素樣作用，增強(qiáng) 造血功能，還顯示了抗癌、抗衰老、抗疲勞和化阻斷等作用。目前，關(guān)于海馬的研究主要集 中在養(yǎng)殖技術(shù)、化學(xué)成分的研究，對(duì)藥理功效方面的研究也比較淺顯。
[0003] 近幾年，海洋生物活性膚是食品領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。海馬含有豐富的蛋白和必須氨 基酸，是制備蛋白質(zhì)及生物活性膚的優(yōu)質(zhì)蛋白原料，具有潛在的巨大商業(yè)價(jià)值。而目前關(guān)于 海馬生物活性膚的研究只限于對(duì)酶解液化海馬蛋白的抗氧化活性研究。因此，有必要對(duì)海 馬多膚的制備及其生物活性進(jìn)行深入研究。
[0004] 生物活性膚的來(lái)源主要有兩個(gè):一是天然存在于生物體內(nèi)的活性膚，主要包括膚 類(lèi)激素、組織肌膚、神經(jīng)多膚等，此類(lèi)活性膚被稱(chēng)為內(nèi)源性生物活性膚;二是通過(guò)水解海洋 蛋白質(zhì)資源所獲得的具有各種生理功能的活性膚，此類(lèi)活性膚被稱(chēng)為外源性海洋生物活性 膚。內(nèi)源性生物活性膚的制備方法主要是溶劑萃取法，在提取過(guò)程中需要使用大量的有機(jī) 溶劑(多為丙酬和乙醇等），因此會(huì)對(duì)環(huán)境造成污染并且存在有機(jī)溶劑殘留給活性膚帶來(lái)毒 性的問(wèn)題；同時(shí)，由于內(nèi)源性活性膚在生物體內(nèi)含量很少，對(duì)下游技術(shù)(特別是分離純化技 術(shù))要求苛刻并且要獲得純度較高的、足量的產(chǎn)物會(huì)造成極大地資源浪費(fèi)，并不適合大規(guī)模 工業(yè)化生產(chǎn)。外源性生物活性膚的制備方法主要是可控酶解法，蛋白質(zhì)的可控酶解是采用 內(nèi)切膚酶對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行水解，并通過(guò)控制水解條件和水解度，W獲得盡可能多的目標(biāo)分子 量分布的膚類(lèi)產(chǎn)物。在營(yíng)養(yǎng)蛋白的多膚鏈內(nèi)部可能普遍存在著功能區(qū)，通過(guò)可控酶解技術(shù)， 就有可能把蛋白質(zhì)中所蘊(yùn)藏的功能區(qū)膚片段釋放出來(lái)，制備出具有各種各樣生理活性的生 物活性膚。
[0005] 蛋白酶的選擇是酶解法制備海洋生物活性膚的關(guān)鍵，每種蛋白酶都有特定的酶切 位點(diǎn)，使用不同的蛋白酶酶解同種蛋白所產(chǎn)生的水解產(chǎn)物的理化和功能性質(zhì)不盡相同。目 前海馬的酶解工藝均采用單酶酶解，用此法得到多膚結(jié)構(gòu)往往較為單一且生物活性也相對(duì) 有限。復(fù)合酶解是利用多種蛋白酶W此對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行切割，因此能夠獲得更加豐富的目標(biāo) 膚段，提高其生物活性，同時(shí)獲得的多膚分子量也更為短小，將更有利于被人體吸收利用。
[0006] 干海馬質(zhì)地堅(jiān)硬，傳統(tǒng)的酶法提取需要較長(zhǎng)的酶解時(shí)間，同時(shí)在酸、堿、有機(jī)溶劑 等反應(yīng)介質(zhì)中易使蛋白質(zhì)變性失活，因此酶解效率較低。已授權(quán)的發(fā)明專(zhuān)利"一種海馬多膚 酶解液的制備方法"（申請(qǐng)?zhí)枺篊N 201310196742.1)和已公布的發(fā)明專(zhuān)利"一種海馬血管緊 張素轉(zhuǎn)化酶抑制膚的制備方法"（申請(qǐng)?zhí)?CN 201510100963.3)、"一種從海馬提取短膚的方 法申請(qǐng)?zhí)朇N 201310180051.2)均采用傳統(tǒng)的酶解方法，因而酶解時(shí)間較長(zhǎng)(7-9h)，效 率低下，且W上專(zhuān)利的加工工藝與本專(zhuān)利有本質(zhì)不同。采用電子束福照處理蛋白質(zhì)，可W改 變蛋白的結(jié)構(gòu)特征，輔助增強(qiáng)蛋白質(zhì)中的膚鍵斷裂，使海馬蛋白結(jié)構(gòu)變得松散，從而提高蛋 白的水解度;超聲波對(duì)酶解反應(yīng)的影響主要是空化效應(yīng)，即超聲波可在液體介質(zhì)中形成微 泡，其破裂伴隨能量的釋放，使海馬蛋白結(jié)構(gòu)變得軟爛，W此提高許多化學(xué)反應(yīng)的速度。如 果將電子福照、微波或者超聲波等物理手段與酶解法相結(jié)合應(yīng)用于海馬生物活性膚的制 備，不僅可W縮短酶解時(shí)間，提高酶解效率，還可W獲得更加豐富的目標(biāo)膚段。已公布的發(fā) 明專(zhuān)利"一種從魚(yú)鱗中提取膠原蛋白的方法"（申請(qǐng)?zhí)?CN 201510603711.2)應(yīng)用了電子福 照技術(shù)來(lái)提高魚(yú)鱗膠原蛋白的提取速率，但其酶解處理仍然需要較長(zhǎng)的時(shí)間（3-地），此發(fā) 明也應(yīng)用了超聲波處理進(jìn)行脫灰，但并沒(méi)有將電子福射與超聲波技術(shù)結(jié)合應(yīng)用于酶解處 理，W此進(jìn)一步縮短酶解時(shí)間，提高酶解效率，且W上專(zhuān)利的加工工藝與本專(zhuān)利有本質(zhì)不 同。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的目的在于針對(duì)現(xiàn)有加工技術(shù)上的不足和存在的問(wèn)題，提供一種具有抗氧 化、抗疲勞活性的海馬多膚及其制備方法，解決了傳統(tǒng)酶解工藝存在的耗時(shí)長(zhǎng)、效率低、產(chǎn) 物生物活性不高等問(wèn)題，提供了一種高活性海馬多膚的制備工藝。
[0008] 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案： 一種具有抗氧化、抗疲勞活性的海馬多膚及其制備工藝，其特征在于:本法有利于高 效、快速地制備具有最強(qiáng)抗氧化活性的目標(biāo)膚段，制得的海馬多膚分子量在5000化W下，具 有較好的抗疲勞功效。
[0009] 所述具有抗氧化、抗疲勞活性的海馬多膚的制作工藝，是W干海馬為原料，經(jīng)粉 碎、電子束福照-超聲波處理、復(fù)合酶解、超濾、冷凍干燥制得成品，其具體包括W下步驟： 1) 粉碎:選取未吸潮變質(zhì)、味道清淡無(wú)異味的干燥海馬，將其剪成0.5~1cm的小段，并用 中草藥粉碎機(jī)進(jìn)行粉碎； 2) 電子束福照-超聲波處理:將步驟1)得到的海馬粉末置于電子直線加速器中進(jìn)行福 照處理(2.5~3KGy，），之后W料液比1:15~1:20的比例，將海馬粉末溶于去離子水中，磁力攬 拌20~30分鐘，最后進(jìn)行超聲處理(400~600W，50~60 °C，20~30min); 3) 復(fù)合酶解:調(diào)節(jié)步驟2)得到的海馬溶液pH至6.5~7.0，W3000~4000U/gi媽的比例加入 適量的木瓜蛋白酶，在60~65°C的條件下水浴酶解30~40分鐘;冷卻至室溫后再次調(diào)節(jié)溶液 的抑至7.5~8.0，W3000~4000U/gi媽的比例加入適量的膜蛋白酶，在40~45°C的條件下水浴 酶解30~40分鐘，最后在沸水浴中滅酶10~15分鐘后離屯、取上清液，得到海馬酶解液； 4) 過(guò)濾:依次用截留分子量為10000Da、5000化的超濾膜對(duì)海馬酶解液進(jìn)行超濾，得到 分子量小于5000化的海馬多膚液； 5)干燥:將步驟4)處理后的濾液進(jìn)行濃縮，將濃縮液冷凍結(jié)冰后進(jìn)行真空冷凍干 燥，得到海馬多膚粉末。
[0010] 本發(fā)明的顯著優(yōu)點(diǎn)在于： (1)本發(fā)明采用復(fù)合酶解技術(shù)制備海馬多膚，能夠獲得更加豐富的目標(biāo)膚段，提高其生 物活性，同時(shí)獲得的多膚分子量也更為短小，將更有利于被人體吸收利用;酶解條件比較溫 和，可W很好地保存酶解產(chǎn)物的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，安全性極高，無(wú)任何對(duì)人體有害的副產(chǎn)物產(chǎn)生； 另外酶解切除了蛋白中非功能區(qū)的膚段，可W有效地避免免疫排斥反應(yīng)的困擾。
[0011] (2)干海馬質(zhì)地堅(jiān)硬，傳統(tǒng)酶解工藝需要較長(zhǎng)的酶解時(shí)間才能釋放出目標(biāo)膚段的 活性膚，因此會(huì)導(dǎo)致產(chǎn)物的活性降低。本發(fā)明將電子束福照-超聲波處理與酶解法相結(jié)合應(yīng) 用于海馬多膚的制備，不僅可W縮短酶解時(shí)間，提高酶解效率，還可W獲得更加豐富的目標(biāo) 膚段，提高其生物活性。采用電子束福照處理蛋白質(zhì)，可W改變蛋白的結(jié)構(gòu)特征，輔助增強(qiáng) 蛋白質(zhì)中的膚鍵斷裂，使海馬蛋白結(jié)構(gòu)變得松散，從而提高蛋白的水解度;超聲波對(duì)酶解反 應(yīng)的影響主要是空化效應(yīng)，即超聲波可在液體介質(zhì)中形成微泡，其破裂伴隨能量的釋放，使 海馬蛋白結(jié)構(gòu)變得軟爛，W此提高許多化學(xué)反應(yīng)的速度。傳統(tǒng)的酶解時(shí)間為7-9小時(shí)，本發(fā) 明所需的酶解時(shí)間為1-2小時(shí)，效率提高了大約85-88%。
[0012] (3)本發(fā)明所制得的海馬多膚分子量較小，均在5000DaW下，將更有利于被人體吸 收利用。
[0013] (4)本發(fā)明應(yīng)用冷凍干燥技術(shù)，能夠盡量減少海馬多膚在干燥過(guò)程中生物活性的 損失，同時(shí)獲得存儲(chǔ)性能良好的海馬多膚粉末。
[0014] 巧)本發(fā)明所制得海馬多膚粉末，不僅有良好的抗氧化功效，同時(shí)具有較強(qiáng)的抗疲 勞活性。
【附圖說(shuō)明】
[0015] 圖1小鼠力竭游泳實(shí)驗(yàn)結(jié)果； 圖2小鼠體內(nèi)抗疲勞活性指標(biāo)測(cè)定結(jié)果； 圖3不同酶制劑酶解效果的比較。
【具體實(shí)施方式】
[0016] 為了使本發(fā)明所述的內(nèi)容更加便于理解，下面結(jié)合【具體實(shí)施方式】對(duì)本發(fā)明所述的 技術(shù)方案做進(jìn)一步的說(shuō)明，但是本發(fā)明不僅限于此。
[0017]實(shí)施例1 所述具有抗氧化、抗疲勞活性的海馬多膚的制作方法具體包括W下步驟： 1) 粉碎:選取未吸潮變質(zhì)、味道清淡無(wú)異味的干燥海馬，將其剪成0.5cm的小段，并用中 草藥粉碎機(jī)進(jìn)行粉碎； 2) 電子束福照-超聲波處理:將步驟1)得到的海馬粉末置于電子直線加速器中進(jìn)行福 照處理(2.5KGy，），之后W料液比1:15的比例，將海馬粉末溶于去離子水中，磁力攬拌25分 鐘，最后進(jìn)行超聲處理(600W，50°C，30min); 3) 可控酶解:調(diào)節(jié)步驟2)得到的海馬溶液抑至6.5，W4000U/gi媽的比例加入適量的木 瓜蛋白酶，在60°C的條件下水浴酶解40分鐘；冷卻至室溫后再次調(diào)節(jié)溶液的pH至7.5, W 3000U/gi媽的比例加入適量的膜蛋白酶，在40°C的條件下水浴酶解30分鐘，最后在沸水浴中 滅酶15分鐘后離屯、取上清液，得到海馬酶解液； 4) 過(guò)濾:依次用截留分子量為10000Da、5000化的超濾膜對(duì)海馬酶解液進(jìn)行超濾，得到 分子量小于5000化的海馬多膚液； 5) 干燥:將步驟4)處理后的濾液進(jìn)行濃縮，將濃縮液冷凍結(jié)冰后進(jìn)行真空冷凍干 燥，得到海馬多膚粉末。
[001引實(shí)施例2 所述具有抗氧化、抗疲勞活性的海馬多膚的制作方法具體包括W下步驟： 1) 粉碎:選取未吸潮變質(zhì)、味道清淡無(wú)異味的干燥海馬，將其剪成1cm的小段，并用中草 藥粉碎機(jī)進(jìn)行粉碎； 2) 電子束福照-超聲波處理:將步驟1)得到的海馬粉末置于電子直線加速器中進(jìn)行福 照處理(3.OKGy，），之后W料液比1:20的比例，將海馬粉末溶于去離子水中，磁力攬拌20分 鐘，最后進(jìn)行超聲處理(400W，50°C，25min); 3) 可控酶解:調(diào)節(jié)步驟2)得到的海馬溶液抑至7.0，W3000U/gi媽的比例加入適量的木 瓜蛋白酶，在60°C的條件下水浴酶解30分鐘；冷卻至室溫后再次調(diào)節(jié)溶液的pH至8.0, W 4000U/gi媽的比例加入適量的膜蛋白酶，在45°C的條件下水浴酶解40分鐘，最后在沸水浴中 滅酶15分鐘后離屯、取上清液，得到海馬酶解液； 4) 過(guò)濾:依次用截留分子量為10000Da、5000化的超濾膜對(duì)海馬酶解液進(jìn)行超濾，得到 分子量小于5000化的海馬多膚液； 5) 干燥:將步驟4)處理后的濾液進(jìn)行濃縮，將濃縮液冷凍結(jié)冰后進(jìn)行真空冷凍干 燥，得到海馬多膚粉末。
[0019] 抗疲勞活性實(shí)驗(yàn) W實(shí)施例1所得海馬多膚為原料進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，驗(yàn)證其抗疲勞活性。
[0020] 一、分組 將100只ICR小鼠分成5大組，一組20只；一個(gè)大組再分成兩個(gè)亞組，一組10只；第一個(gè)亞 組用于游泳力竭實(shí)驗(yàn)，第二個(gè)亞組用于測(cè)定游泳30min后小鼠體內(nèi)各生理生化指標(biāo)的變 化。
[0021] 一組2 X 10(空白）：不作任何處理，自由進(jìn)食。
[00剖二組2 X 10(陽(yáng)性對(duì)照）：灌胃0.5mg/g. d谷脫甘膚，自由進(jìn)食。
[002；3];組2 X 10(低）：灌胃0.15mg/g. d海馬多膚，自由進(jìn)食。
[0024] 四組2 X 10(中）：灌胃0.5mg/g. d海馬多膚，自由進(jìn)食。
[0025] 五組2X10(高）：灌胃1.5mg/g.d海馬多膚，自由進(jìn)食。
[0026] 二、喂養(yǎng) 正式實(shí)驗(yàn)前，小鼠需飼養(yǎng)一周適應(yīng)實(shí)驗(yàn)環(huán)境，每籠5只小鼠，自由飲食，喂養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)飼料， 飲水瓶隨時(shí)更換，鼠籠每周換洗2次。
[0027] 正式實(shí)驗(yàn)開(kāi)始，按"分組"中的要求對(duì)小鼠進(jìn)行灌胃，給藥頻率為1次/日，給藥時(shí)間 為4周。
[002引 S、小鼠力竭游泳時(shí)間測(cè)定 第一個(gè)亞組的5組小鼠在末次給藥30 min后，小鼠尾根部負(fù)荷5 %體重鉛皮，置于游 泳箱中（水溫25±rc，水深不少于30 cm)游泳，至小鼠沉入水底后10 s不再浮起作為力竭 死亡標(biāo)準(zhǔn)，記錄自游泳開(kāi)始至死亡時(shí)間，作為小鼠力竭游泳時(shí)間。
[0029] 四、海馬多膚體內(nèi)抗疲勞活性研究 第二個(gè)亞組的5組小鼠在末次給藥30 min后，游泳30min后處死，采血后取肝臟，測(cè)定 血糖、血尿素氮、肝糖原含量。
[0030] 五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果 由圖1、圖2可知，相比于空白組，陽(yáng)性對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組都能增加小鼠的力竭游泳時(shí)間，說(shuō) 明海馬多膚和谷脫甘膚均有一定的抗疲勞活性，其原因是海馬多膚和谷脫甘膚能夠有效地 穩(wěn)定小鼠體內(nèi)血糖的含量，同時(shí)能明顯降低其血尿素氮含量，有助于小鼠體內(nèi)糖原的合成 代謝，提高其肝糖原膽備量，使肌體對(duì)負(fù)荷的適應(yīng)性增強(qiáng)，顯示出較強(qiáng)的抗疲勞作用，提高 了肌體的耐力。另外，比較陽(yáng)性對(duì)照組和中劑量組的實(shí)驗(yàn)結(jié)果可W發(fā)現(xiàn)，海馬多膚的抗疲勞 效果要優(yōu)于谷脫甘膚。
[0031] 對(duì)比例1 重復(fù)實(shí)施例1，不同之處在于用單一的木瓜蛋白酶、膜蛋白酶、中性蛋白酶、復(fù)合蛋白 酶、風(fēng)味蛋白酶、堿性蛋白酶取代步驟(3)的復(fù)合酶處理，幾種不同酶制劑的酶解效果、單酶 酶解與復(fù)合酶解效果的比較分別如圖3、表1所示。
[0032] 由圖3可知，比較六種酶的酶解效果，它們?cè)谒舛?、膚得率上差異并不顯著，木瓜 蛋白酶酶解卻有最強(qiáng)的DPPH?自由基清除率（71.89%)同時(shí)具有較強(qiáng)的徑自由基清除率 (66.9%)，膜蛋白酶酶解液具有最大的膚得率(33.65%)和較強(qiáng)的徑自由基清除率(75.15%)， 說(shuō)明木瓜蛋白酶、膜蛋白酶更有利于剪切出具有較強(qiáng)抗氧化活性的海馬多膚，因而選用木 瓜蛋白酶、膜蛋白酶作為制備海馬多膚的復(fù)合酶制劑。
[0033] 表1單酶酶解與復(fù)合酶解對(duì)酶解效果影響的對(duì)比
由表1可知，相比于單酶酶解，復(fù)合酶解能夠提高海馬蛋白的水解度，獲得更多的海馬 多膚，同時(shí)有效提高產(chǎn)物的DPPH?自由基和徑自由基清除率，說(shuō)明膜蛋白酶和木瓜蛋白酶具 有協(xié)同增效的作用。
[0034] 對(duì)比例2 重復(fù)實(shí)施例1，不同之處在于用單一的電子束福照處理工藝取代步驟（2)的電子束福 照-超聲波處理工藝。
[0035] 對(duì)比例3 重復(fù)實(shí)施例1，不同之處在于用單一的超聲波處理工藝取代(2)的電子束福照-超聲波 處理工藝。
[0036] 對(duì)比例4 重復(fù)實(shí)施例1，不同之處在于去除步驟(2)的電子束福照-超聲波處理工藝。
[0037] 五種處理方式對(duì)酶解效果的影響如表2所示： 表2電子束福照-超聲波處理對(duì)酶解效果影響的對(duì)比
對(duì)比實(shí)施例1、實(shí)施例2和對(duì)比例2、對(duì)比例3、對(duì)比例4的酶解效果，可W看出電子束福 照-超聲波處理工藝能夠縮短酶解時(shí)間，提高酶解效率，傳統(tǒng)的酶解時(shí)間為7-9小時(shí)，本發(fā)明 所需的酶解時(shí)間為1-2小時(shí)，效率提高了大約85-88%。此外，酶解液具有更強(qiáng)的DPPH?自由基 清除、徑自由基清除效果。
[003引對(duì)比例5 重復(fù)實(shí)施例1，不同之處在于步驟3)的酶解時(shí)間，W木瓜蛋白酶解20min、膜蛋白酶酶解 lOmin替代實(shí)施例1的可控酶解工藝。
[0039] 對(duì)比例6 重復(fù)實(shí)施例1，不同之處在于步驟3)的酶解時(shí)間，W木瓜蛋白酶解80min、膜蛋白酶酶解 60min替代實(shí)施例1的可控酶解工藝。
[0040] 表3酶解時(shí)間對(duì)酶解效果影響的對(duì)比
對(duì)比實(shí)施例1、實(shí)施例2和對(duì)比例5、對(duì)比例6的酶解效果，可W看出酶解時(shí)間過(guò)短或過(guò)長(zhǎng) 都不利于制備高活性的海馬多膚，因此通過(guò)可控酶解技術(shù)，能夠把蛋白質(zhì)中所蘊(yùn)藏的功能 區(qū)膚片段充分釋放出來(lái)，制備出具有高生理活性的生物活性膚，同時(shí)保證較高的多膚得率。
[0041] 綜上所述，采用本發(fā)明工藝制備海馬多膚可W高效、快速地制備具有最強(qiáng)抗氧化 活性的目標(biāo)膚段，并且最終制得的海馬多膚具有較好的抗氧化、抗疲勞功效。
[0042] W上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例，凡依本發(fā)明申請(qǐng)專(zhuān)利范圍所做的均等變化與 修飾，皆應(yīng)屬本發(fā)明的涵蓋范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種具有抗氧化、抗疲勞活性的海馬多肽的制備工藝，其特征在于:將干海馬進(jìn)行粉 碎、電子束輻照-超聲波處理、復(fù)合酶解、超濾、冷凍干燥制得成品。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述具有抗氧化、抗疲勞活性的海馬多肽的制備工藝，其特征在于： 具體包括以下步驟： 1) 粉碎:選取未吸潮變質(zhì)、味道清淡無(wú)異味的干燥海馬，將其剪成0.5~lcm的小段，并用 中草藥粉碎機(jī)進(jìn)行粉碎； 2) 電子束輻照-超聲波處理:將步驟1)得到的海馬粉末置于電子直線加速器中進(jìn)行輻 照處理，電子束劑量為2.5~3KGy，之后以料液重量比1:15~1: 20的比例，將海馬粉末溶于去 離子水中，磁力攪拌20~30分鐘，最后進(jìn)行超聲處理，超聲功率400~600W，超聲溫度50~60°C， 超聲時(shí)間20~30min; 3) 復(fù)合酶解:調(diào)節(jié)步驟2)得到的海馬溶液pH至6.5~7.0，以3000~4000U/g網(wǎng)的比例加入 適量的木瓜蛋白酶，在60~65 °C的條件下水浴酶解30~40分鐘；冷卻至室溫后再次調(diào)節(jié)溶液 的pH至7.5~8.0，以3000~4000U/g鹓的比例加入適量的胰蛋白酶，在40~45°C的條件下水浴 酶解30~40分鐘，最后在沸水浴中滅酶10~15分鐘后離心取上清液，得到海馬酶解液； 4) 過(guò)濾：依次用截留分子量為10000Da、5000Da的超濾膜對(duì)海馬酶解液進(jìn)行超濾，得到 分子量小于5000Da的海馬多肽液； 5) 干燥:將步驟4)得到的海馬多肽液進(jìn)行濃縮，將濃縮液冷凍結(jié)冰后進(jìn)行真空冷凍干 燥，得到海馬多肽粉末。3. -種如權(quán)利要求1或2所述制備工藝制得的具有抗氧化、抗疲勞活性的海馬多肽。
【文檔編號(hào)】C07K1/34GK106047974SQ201610644683
【公開(kāi)日】2016年10月26日
【申請(qǐng)日】2016年8月9日 公開(kāi)號(hào)201610644683.3, CN 106047974 A, CN 106047974A, CN 201610644683, CN-A-106047974, CN106047974 A, CN106047974A, CN201610644683, CN201610644683.3
【發(fā)明人】郭澤鑌, 林端權(quán), 賈祥澤, 王健一, 鄭寶東, 張怡
【申請(qǐng)人】福建農(nóng)林大學(xué)