蜱核糖體蛋白p0基因、其雙鏈rna及殺蜱生物制劑的應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種蜱核糖體蛋白基因，該基因為鐮形扇頭蜱的核糖體蛋白P0基因，其包含編碼SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的核苷酸序列。本發(fā)明還公開了一種能夠抑制上述蜱核糖體蛋白P0基因表達(dá)的雙鏈RNA。本發(fā)明基于蜱核糖體蛋白P0基因的雙鏈RNA，適用于制備新型殺蜱生物制劑，該殺蜱生物制劑不僅有效、安全，而且廣譜、穩(wěn)定，具有廣闊的應(yīng)用前景。
【專利說明】
蜱核糖體蛋白P0基因、其雙鏈RNA及殺蜱生物制劑的應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及生物工程技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種蜱核糖體蛋白P0基因、其雙鏈 RNA(dsRNA)、及該dsRNA用于殺蜱生物制劑的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 作為專性體表寄生蟲，蜱主要侵襲哺乳類、鳥類、爬行類以及兩棲類等，其危害不 僅僅在于蜱攝食人和宿主動物的血液，而是通過吸血可傳播病毒、細(xì)菌和原蟲等病原，引起 人和動物的蜱傳病。到目前為止，已經(jīng)有超過900種蜱被鑒定，大致分為硬蜱和軟蜱兩大 類?；瘜W(xué)藥物防治是目前蜱防控的主要方法，但由于化學(xué)藥物的長期使用而出現(xiàn)的食品安 全、環(huán)境污染以及蜱的抗藥性問題，迫切需要研究新型防治技術(shù)。
[0003] RNA 干擾（RNA interference, RNAi)是一種由雙鏈 RNA (double-stranded RNA， dsRNA)誘發(fā)的同源mRNA高效特異性降解的現(xiàn)象。它是在研究秀麗新小桿線蟲（C. elegans) 反義RNA (antisense RNA)的過程中發(fā)現(xiàn)的。此后dsRNA介導(dǎo)的RNAi現(xiàn)象陸續(xù)發(fā)現(xiàn)于真 菌、果蠅、擬南芥、錐蟲、水螅、渦蟲、斑馬魚等多種真核生物中，并逐漸證實植物中的轉(zhuǎn)錄后 基因沉默（posttranscriptional gene silencing，PTGS)、共抑制（cosuppression)及 RNA 介導(dǎo)的病毒抗性、真菌抑制（quelling)現(xiàn)象均屬于RNAi在不同物種的表現(xiàn)形式。由于使用 RNAi技術(shù)可以特異性剔除或關(guān)閉特定基因的表達(dá)，所以該技術(shù)已被廣泛用于探索基因功能 和傳染性疾病及惡性腫瘤的基因治療領(lǐng)域。2003年，Aljamali等發(fā)表了第一篇應(yīng)用RNAi 技術(shù)研究蜱的功能基因的論文。之后，RNAi技術(shù)在鑒定蜱基因功能、疫苗抗原篩選以及蜱 與蜱傳病原體的相互作用研究上都不斷有報道。但是，至今尚無用雙鏈RNA(dsRNA)制備新 型殺蜱生物制劑的公開報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明要解決目前缺乏安全、有效防控蜱的生物制劑的技術(shù)問題，提供一種蜱核 糖體蛋白P0基因及其dsRNA，該dsRNA可用于制備新型殺蜱生物制劑。
[0005] 為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)：
[0006] 在本發(fā)明的一個方面，提供了一種蜱核糖體蛋白基因，所述基因為鐮形扇頭蜱的 核糖體蛋白P0基因，該P(yáng)0基因包含：編碼SEQ ID NO. 1所示氨基酸序列的核苷酸序列。
[0007] 優(yōu)選的，所述蜱核糖體蛋白P0基因具有SEQ ID N0. 2所示的核苷酸序列。
[0008] 在本發(fā)明的另一方面，提供了一種蜱核糖體蛋白，所述核糖體蛋白為鐮形扇頭蜱 的核糖體蛋白P0,具有SEQ ID NO. 1所示的氨基酸序列。
[0009] 在本發(fā)明的另一方面，還提供了一種雙鏈RNA，該雙鏈RNA能夠抑制上述蜱核糖體 蛋白P0基因的表達(dá)。
[0010] 優(yōu)選的，所述雙鏈RNA包含SEQ ID N0. 3所示核苷酸序列或其互補(bǔ)序列。
[0011] 在本發(fā)明的另一方面，還提供了一種殺蜱生物制劑，包含上述雙鏈RNA及透皮劑。
[0012] 在本發(fā)明中，透皮劑可介導(dǎo)雙鏈RNA有效導(dǎo)入蜱體內(nèi)，發(fā)揮基因沉默效果，通過影 響蜱的吸血、蛻皮或生殖發(fā)揮殺蜱作用。
[0013] 所述透皮劑包括脂質(zhì)體。
[0014] 在本發(fā)明的另一方面，還提供了一種上述蜱核糖體蛋白基因在制備殺蜱生物制劑 中的應(yīng)用。
[0015] 在本發(fā)明的另一方面，還提供了一種上述雙鏈RNA在制備殺蜱生物制劑中的應(yīng) 用。
[0016] 本發(fā)明基于蜱核糖體蛋白P0基因的雙鏈RNA(dsRNA)，用作殺蜱生物制劑，具有以 下優(yōu)點(diǎn)：一是有效，在蜱體，注射長鏈dsRNA干擾效果明顯。二是安全，哺乳動物細(xì)胞不吸收 長鏈dsRNA，對畜禽安全，另外，特異基因 P0的dsRNA不傷害其他生物，環(huán)境安全。三是廣 譜，由于P0基因是蜱不同種間的保守基因，因此針對蜱P0基因的dsRNA，可廣譜殺蜱。四是 穩(wěn)定，雙鏈RNA十分穩(wěn)定，易于儲存運(yùn)輸。
【附圖說明】
[0017] 下面結(jié)合附圖和【具體實施方式】對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說明。
[0018] 圖1是本發(fā)明實施例1鐮形扇頭蜱P0基因全長序列及推測的氨基酸序列示意圖；
[0019] 圖2是本發(fā)明實施例1鐮形扇頭蜱P0分子（Rh-ΡΟ)與其他蜱種P0分子的同源性 比較圖；
[0020] 圖3是本發(fā)明實施例2合成的dsRNA的電泳圖；
[0021] 圖4是本發(fā)明實施例2不同脂質(zhì)體介導(dǎo)dsRNA吸收干擾效果的比較圖；
[0022] 圖5是本發(fā)明實施例2不同濃度雙鏈RNA的脂質(zhì)體制劑對干擾效果影響的比較 圖；
[0023] 圖6是本發(fā)明實施例2不同浸泡時間（小時）對dsRNA透皮吸收干擾的影響比較 圖。
【具體實施方式】
[0024] 下列實施例中，未注明具體條件的實驗方法，通常按常規(guī)條件，如《分子克隆實驗 指南》（J.薩姆布魯克，D.W.拉塞爾著，黃培堂，汪嘉璽，朱厚礎(chǔ)，等譯.第3版，北京：科學(xué) 出版社，2002)中所述的方法進(jìn)行。
[0025] 本發(fā)明從鐮形扇頭蜱克隆到一個核糖體蛋白P0的全長編碼基因，該基因全長為 1142bp，具有一個編碼318個氨基酸的開放閱讀框，沒有信號肽序列。鐮形扇頭蜱P0基因 與其他蜱種具有很高的同源性，為保守的管家基因。根據(jù)P0基因序列，設(shè)計合成雙鏈RNA， 在透皮脂質(zhì)體介導(dǎo)下，雙鏈RNA可有效導(dǎo)入蜱體內(nèi)，發(fā)揮基因沉默效果，影響蜱的吸血、蛻 皮或生殖，顯示了很好的殺蜱作用。因此，基于蜱的特定靶基因序列合成雙鏈RNA與適合透 皮劑可制備新型殺蜱生物制劑，應(yīng)用于蜱的防治工作。
[0026] 實施例1鐮形扇頭蜱P0分子的基因克隆和序列分析
[0027] 1.材料與方法
[0028] 1. 1試驗動物：鐮形扇頭蜱來自本實驗室經(jīng)兔體人工飼血繁殖傳代。昆明小鼠購 自上海斯萊克實驗動物有限公司。
[0029] 1. 2材料：Trizol試劑，購于Invitrogen公司；Taq DNA聚合酶，DNA膠回收試劑 盒，反轉(zhuǎn)錄試劑盒，PMD18T載體、Premix Taq?、低分子量蛋白Marker、限制性內(nèi)切酶BamHI 以及Xhol購于TaKaRa公司；PCR膠回收試劑盒購自Axygen ;質(zhì)粒純化試劑盒購于OMEGA公 司。
[0030] 1.3基因 3'端克隆
[0031] 從本實驗室已構(gòu)建鐮形扇頭蜱cDNA文庫中挑出P0基因部分序列，根據(jù)保守區(qū)所 得的基因片段，設(shè)計 3'RACE 的引物：GSP(Gene specific primer) :5'-CTCGCCCTTCTCGTATG GTCTGA-3'（SEQ ID NO. 4) ;Nested GSP:5'-CATTGCCATTGCGGTGGAGACAG-3'（SEQ ID NO. 5)。 根據(jù)3' RACE試劑盒說明書擴(kuò)增P0基因的3'端，膠回收目的條帶，連入pMD-18T載體，轉(zhuǎn)化 到E. coliDH5 α細(xì)胞中，挑選5-10個單菌落，經(jīng)菌液PCR鑒定為陽性的樣品，送英?。ㄉ?海）貿(mào)易有限公司進(jìn)行測序。
[0032] 1.4基因 5'端克隆
[0033] 根據(jù)所得的保守區(qū)及3' RACE測序結(jié)果，設(shè)計5' RACE所用的引物：GSP1 : 5'-AACACCCTCAACGAAT-3'（SEQ ID N0.6)，GSP2:5'-ACGAGAAGGGCGAGATGTT-3'（SEQ ID N0·7);NestedGSP:5'-CGTTGCCCTTGATGTGCGG-3'（SEQIDN0·8)。根據(jù)5'RACE試劑盒說明 書擴(kuò)增P〇基因的5'端，膠回收目的條帶，連入pMD-18T載體，轉(zhuǎn)化到E. coliDH5 α細(xì)胞中， 經(jīng)菌液PCR鑒定后送英俊（上海）貿(mào)易有限公司進(jìn)行測序。
[0034] 1.5全長基因的克隆
[0035] 根據(jù)兩次RACE結(jié)果及保守區(qū)拼接后所得的全長引物序列，設(shè)計全長 引物：上游引物：5'-CTTCAACTTCCTTTCATACGG-3'（SEQ ID N0.9);下游引物： 5'-GCAACTTTATTGGGCGGTA-3'（SEQ ID NO. 10)。以 cDNA 為模板，擴(kuò)增 P0 基因全長序列，擴(kuò) 增條件為：94°C預(yù)變性5min ;94°C 30s，55°C 45s，72°C lmin，，35個循環(huán)；最后于72°C延伸 10min，同樣進(jìn)行膠回收、連接、轉(zhuǎn)化，經(jīng)PCR鑒定后進(jìn)行序列測定，同時保存陽性菌種，提取 含全長基因的重組質(zhì)粒。
[0036] 1.6序列分析
[0037] 通過 Blastx 對該基因進(jìn)行同源性分析；用 http://www. ncbi. nlm. nih. gov/gorf/ gorf. html 尋找該基因 0RF ;用 http://www. cbs. dtu. dk/services/SignalP/ 預(yù)測信號肽。
[0038] 2.結(jié)果與分析
[0039] 通過拼接Y RACE、保守區(qū)和:V RACE克隆結(jié)果設(shè)計全長引物，以cDNA為模板， 通過PCR擴(kuò)增得到全長為1118bp的P0基因 （SEQ ID N0. 2,如圖1所示，為終止密碼 子）。通過對P0全長基因序列進(jìn)行分析，可以得知：P0全長基因具有一個編碼318個氨基 酸的開放閱讀框（氨基酸序列如SEQ ID NO. 1所示），沒有信號肽序列。推測P0的蛋白大 小約為35kDa。鐮形扇頭蜱P0基因與其他蜱種具有很高的同源性，與微小扇頭蜱（登錄號： KC845304)、長角血蜱（登錄號：EU048401)和間突硬蜱（登錄號XM002399569)的P0基因 的同源性分別為94%、87%和85%(見圖2，在圖2中，他-?0是鐮形扇頭蜱？0，伽-?0是微 小扇頭蜱P〇, H1-P0是長角血蜱P0, Is-PO是間突硬蜱P0)。
[0040] 實施例2蜱P0基因 dsRNA的合成及其透皮吸收干擾效果評估
[0041] 1.材料與方法
[0042] 1. 1基于P0基因的dsRNA合成
[0043] 根據(jù)鐮形扇頭蜱的P0基因序列分別設(shè)計含T7 RNA聚合酶啟動子序列的兩套引物 P0-U1，P0-D1和P0-U2, P0-D2 ;以及依據(jù)對照Luciferase基因序列設(shè)計含T7 RNA聚合酶 啟動子序列的兩套引物L(fēng)uci-Ul，Luci-Dl and Luci-U2，Luci-D2(表1)。以實驗室已構(gòu)建 的含P0全長基因的重組質(zhì)粒為模板，用各自兩套引物分別進(jìn)行常規(guī)PCR引入T7啟動子序 列，擴(kuò)增P0全長基因1-736區(qū)間的基因序列。將PCR產(chǎn)物經(jīng)DNA膠回收后作為RNA合成的 模板，利用 T7 RiboMAXTM Express RNAi system kit (Promega, Madison, WI, USA)合成單鏈 RNA (ssRNA)，再經(jīng)互補(bǔ)后獲得dsRNA (SEQ ID NO. 3)，最后經(jīng)純化去除剩余ssRNA等雜質(zhì)，得 到高純度高濃度的目的dsRNA，電泳鑒定。對照Luciferase基因按同樣方法合成dsRNA。
[0044] 1. 2基因沉默的Real-time PCR分析
[0045] 根據(jù)鐮形扇頭蜱的P0基因序列設(shè)計Real-time PCR的引物，P0-L1和P0-R1 (表 1)，所設(shè)計下游引物為位于合成的dsRNA序列之外，擴(kuò)增628-783基因片段，避免蜱體浸泡 后未洗凈的dsRNA作為模板進(jìn)行擴(kuò)增。以鐮形扇頭蜱看家基因 Actin為內(nèi)參基因，設(shè)計引物 Actin-F 和 Actin-R (表 1)。將樣本蜱液氮研磨提取 RNA。根據(jù) SYBR PrimeScript RT-PCR Kit的說明書進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，得到總cDNA。以逆轉(zhuǎn)錄得到的總cDNA為模板，利用非特異 性SYBR Green I染料法進(jìn)行兩步法real-time PCR，根據(jù)與對照組的2 ΔΔε?計算沉默效 果。
[0046] 表1雙鏈RNA合成和定量PCR分析的引物設(shè)計
[0047]
[0048] 1. 3不同脂質(zhì)體介導(dǎo)雙鏈RNA的吸收干擾效果比較
[0049] 脂質(zhì)體 Lipofectamine2000(Invitrogen)，Cellfectin II (Invitrogen)和 DMRIE-C(Invitrogen)用于雙鏈RNA介導(dǎo)吸收實驗。P0基因 dsRNA溶解于超純水，濃度為 2 μ g/ μ L，分別與三種不同脂質(zhì)體按體積比1 :1混合。對照為P0基因 dsRNA與等體積超純 水混合。未吸血的鐮形扇頭蜱20只成蜱，50只若蜱，100只幼蜱分別浸泡在不同脂質(zhì)體混 合的dsRNA液體內(nèi)，保持12小時濕潤，然后蜱用水清洗，紙巾干燥，放置在25°C .，92%濕度 條件下24小時，收集活蜱樣本，液氮下磨碎，提取RNA，作為Real-PCR檢測模板，進(jìn)行基因表 達(dá)相對定量分析。每組實驗重復(fù)三次。
[0050] 1. 4不同濃度的雙鏈RNA的脂質(zhì)體制劑對透皮吸收干擾效果的影響
[0051] P0基因 dsRNA溶解于超純水，濃度為2yg/yL，分別與脂質(zhì)體DMRIE-C按1 :2, 1:1 和2:1的體積比混合，對照為無 dsRNA的DMRIE-C。20只成蜱，50只若蜱，100只幼蜱分別 按1. 3方案進(jìn)行試驗采樣，然后提取RNA，進(jìn)行基因表達(dá)分析。
[0052] 1. 5不同浸泡時間對雙鏈RNA透皮吸收干擾效果的影響
[0053] P0基因 dsRNA溶解于超純水，濃度為2 μ g/ μ L，分別與脂質(zhì)體DMRIE-C按體積比 1 :1混合，20只成蜱，50只若蜱，100只幼蜱分別在浸泡0, 3h，6h，12h，18h和24h后，按1. 3 方案進(jìn)行試驗，提取RNA，進(jìn)行基因表達(dá)分析。
[0054] 2.結(jié)果與分析
[0055] 2. 1基因的雙鏈RNA合成
[0056] 合成的雙鏈RNA電泳后如圖3所示，大小與預(yù)期736bp -致，無雜帶，表明合成的 P0基因 dsRNA和對照Luciferase基因 dsRNA符合要求。在圖3中，M,分子量Marker ;1， P0 基因 dsRNA ;2,對照 Luc if erase 基因 dsRNA。
[0057] 2. 2不同脂質(zhì)體介導(dǎo)dsRNA吸收干擾效果的比較
[0058] 與對照相比，Lipofectamine2000, Cellfectin II和DMRIE-C三種不同商品化脂質(zhì) 體，均顯示了明顯的協(xié)助雙鏈RNA透皮吸收干擾效果作用（圖4)。在成蜱和若蜱，DMRIE-C 效果均優(yōu)于其他二者，在幼蜱居中。綜合三個脂質(zhì)體協(xié)助雙鏈RNA的效果，選擇對不同發(fā)育 階段均表現(xiàn)較好的DMRIE-C作為進(jìn)一步研究的脂質(zhì)體。在圖4中，縱坐標(biāo)是幼蜱（larvae)、 若蜱（nymph)和成蜱（adult)PO基因的相對表達(dá)量。
[0059] 2. 3不同濃度的雙鏈RNA的脂質(zhì)體制劑對透皮吸收干擾的影響
[0060] 不同濃度雙鏈RNA的脂質(zhì)體制劑對干擾效果影響如圖5所示，高、中、低三種濃度 中，低濃度的制劑（〇.5ug/ul)對幼蜱影響顯著減少，若蜱和成蜱階段無差別，根據(jù)成本考 慮，將選擇中濃度（lug/ul)進(jìn)行進(jìn)一步實驗。
[0061] 2. 4不同浸泡時間對dsRNA透皮吸收干擾的影響
[0062] 以未浸泡（Oh)為對照，幼蜱，若蜱和成蜱分別浸泡3h, 6h, 12h, 24h,可以發(fā)現(xiàn)P0 基因干擾效果隨時間延長，效果更佳，但總體差別不明顯（圖6)，綜合考慮應(yīng)用時間成本， 選擇浸泡6小時作為應(yīng)用時間。
[0063] 實施例3雙鏈RNA制劑對蜱的吸血、發(fā)育和繁殖的影響
[0064] 1.材料和方法
[0065] 1. 1蜱及實驗動物
[0066] 鐮形扇頭蜱來自上海獸醫(yī)研究所繁殖蜱群，在實驗室經(jīng)人工兔體飼血和恒溫孵 育，幼蜱來自飽血雌蜱產(chǎn)卵孵化，若蜱來自飽血后蛻皮的幼蜱，成蜱來自飽血后蛻皮的若 蜱，實驗所用蜱無特別說明均來自同一批次。新西蘭大白兔和昆明系小白鼠，均購自上海斯 萊克實驗動物有限公司。
[0067] 1. 2雙鏈RNA與脂質(zhì)體制劑的制備
[0068] 根據(jù)前期研究結(jié)果，制備基于P0基因的雙鏈RNA新型殺蜱制劑，具體配方是：溶于 水的雙鏈RNA 2ug/ul與等體積脂質(zhì)體DMRIE-C混合用于成蜱和若蜱。對照組用蜱體無關(guān) 的Luciferase基因的雙鏈RNA按同樣方法制備。
[0069] 1. 3雙鏈RNA制劑對蜱吸血、發(fā)育和繁殖的影響
[0070] 成蜱，雙鏈RNA制劑浸泡6小時后，存活的蜱接種到新西蘭大白兔耳朵上進(jìn)行吸血 實驗，記錄24小時蜱吸附率，飽血率，飽血重量和飽血雌蜱產(chǎn)卵率。若蜱，雙鏈RNA制劑浸 泡6小時后，存活的蜱接種到昆明鼠背部進(jìn)行吸血實驗，記錄24小時蜱吸附率，飽血率，蛻 皮率。對照組為蜱不相關(guān)的基因 Luciferase的dsRNA。實驗組和對照組分別分為三組，每 組成蜱30只，若蜱100只左右。結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計分析。
[0071] 2.結(jié)果和分析
[0072] 2. 1成蜱浸泡后吸血和生殖的影響
[0073] 成蜱浸泡6小時后，接種到新西蘭大白兔耳朵上進(jìn)行吸血和生殖生物學(xué)特征觀 察，結(jié)果統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)，24小時吸附率無顯著差異，但飽血重量實驗組顯著低于對照組，飽血率 和飽血雌蜱產(chǎn)卵率也顯著低于對照組（見表2)，表明殺蜱制劑降低了成蜱吸血能力，并且 導(dǎo)致生殖能力顯著下降，具有較顯著的控蜱作用。
[0074] 表2雙鏈RNA制劑處理成蜱后對蜱的吸血和生殖的影響
[0075]
[0076] 2. 2若蜱浸泡后吸血和發(fā)育的影響
[0077] 若蜱浸泡6小時后，接種到昆明鼠背上進(jìn)行吸血和發(fā)育蛻皮的生物學(xué)特征觀察， 結(jié)果統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)，24小時吸附率和飽血率無顯著差異，但實驗組蛻皮率為零，顯著低于對照組 (見表3)，表明殺蜱制劑破壞了若蜱發(fā)育蛻皮能力，具有較顯著的控蜱作用。
[0078] 表3雙鏈RNA制劑處理若蜱后對蜱的吸血和蛻皮的影響
[0079]
[0080] 以上所述實施例僅表達(dá)了本發(fā)明的實施方式，其描述較為具體和詳細(xì)，但并不能 因此而理解為對本發(fā)明專利范圍的限制。應(yīng)當(dāng)指出的是，對于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說， 在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進(jìn)，這些都屬于本發(fā)明的保護(hù)范 圍。因此，本發(fā)明專利的保護(hù)范圍應(yīng)以所附權(quán)利要求為準(zhǔn)。
【主權(quán)項】
1. 一種蛛核糖體蛋白基因，其特征在于，所述基因為鏡形扇頭蛛的核糖體蛋白PO基 因，該P(yáng)O基因包含：編碼SEQ ID NO. 1所示氨基酸序列的核苷酸序列。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的蜱核糖體蛋白基因，其特征在于，所述基因具有SEQ ID N0.2 所示的核苷酸序列。3. -種蜱核糖體蛋白，其特征在于，所述核糖體蛋白為鐮形扇頭蜱的核糖體蛋白P0， 具有SEQ ID NO. 1所示的氨基酸序列。4. 一種雙鏈RNA，其特征在于，所述雙鏈RNA能夠抑制權(quán)利要求1或2所述蜱核糖體蛋 白PO基因的表達(dá)。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的雙鏈RNA，其特征在于，所述雙鏈RNA包含SEQ ID NO. 3所示 核苷酸序列或其互補(bǔ)序列。6. -種殺蜱生物制劑，其特征在于，包含權(quán)利要求4所述雙鏈RNA及透皮劑。7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的殺蜱生物制劑，其特征在于，所述透皮劑包括脂質(zhì)體。8. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的殺蜱生物制劑，其特征在于，所述生物制劑適用于廣譜殺蜱。9. 權(quán)利要求1所述蜱核糖體蛋白基因在制備殺蜱生物制劑中的應(yīng)用。10. 權(quán)利要求4所述雙鏈RNA在制備殺蜱生物制劑中的應(yīng)用。
【文檔編號】A01P7/04GK105886514SQ201510038124
【公開日】2016年8月24日
【申請日】2015年1月26日
【發(fā)明人】周金林, 張玉婷, 崔杰, 周勇志, 曹杰, 張厚雙, 龔海燕
【申請人】中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所